细菌学检验-总结.pdf

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1、细菌学检验重点（选择 20 个 20 分，填空 52 个 26 分，名词解释 6 个 18 分，简答 6 个 24 分，论述 1 个 12 分）注：以下内容主要是老师的红字部分，可能看的过程有些吃力，大家结合课件和书本看哈，帮助理解，不过老师说过考点重点在红字部分的 第一章 细菌学实验的基本要求 1、实验室生物安全(Laboratory biosafety):实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平，可避免实验室人员、来访人员、社区及环境受到不可接受的损害，符合相差法规、标准等对实验室生物安全责任的要求。2、生物安全防护基本要求 实验室生物安全防护（biosafety protection f

2、or laboratories）实验对象：致病的微生物及其毒素 综合措施：实验室设计建造、个体防护设施、工作及操作程序和规程等 确保：实验室工作人员不受实验对象侵染，周围环境的生物安全。实验室生物安全通用原则 积极防止操作者在污染的环境中接触生物危害物；主动封闭生物危害材料产生之源，防止从操作部位向周围环境释放；尽量减少生物危害材料向周围环境意外释放所造成的后果。3、实验室必须设有专职的生物安全负责人 实验室负责人为实验室生物安全的第一责任人。*生物安全等级 生物安全防护实验室根据所处理的微生物及其毒素的危害程度分为四级。实验室生物安全防护要求：一级最低，四级最高。4、在主实验室合理设置清洁区

3、、半污染区和污染区 5、各级生物防护实验室特点 一级生物安全防护实验室（BSL-1/P1）：适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。二级生物安全防护实验室（BSL-2/P2）实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。:在处理危险度 2 级或更高危险度级别的微生物时，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志。三级生物安全防护实验室（BSL-3/P3）：适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有预防传染的疫苗。四级生物安全防护实验室（BSL-4/P4）：适用于对人体具有高度的危险性

4、，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素。6、控制措施 安全设备和个体防护是实验室工作人员与致病微生物及其毒素直接接触的一级屏障。所有可能使致病微生物及其毒素溅出或产生气溶胶的操作，都必须在生物安全柜内进行。7、生物安全柜（BSC）biosafety cabinet(概念、分级及特点)具备气流控制及高效空气过滤装置的操作柜，可有效降低实验过程中产生的有害气溶胶对操作者和环境的危害。(净化排气)根据生物安全防护水平的差异，生物安全柜可分为 I、级 3 种类型。实验室应按要求分别配备 I、级生物安全柜。级生物安全柜：外部空气 保证工作人员不受侵害，但不保

5、证实验对象不受污染。级生物安全柜：经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气 既保证工作人员不受侵害，也保证实验对象不受污染；级生物安全柜：经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气 8、生物安全柜和超净工作台的区别；超净工作台：保护样品，不保护操作者和环境 生物安全柜：保护操作者、环境以及实验材料 正压、简单 负压、复杂 不能以净化工作台代替生物安全柜，反之则可以。9、标准的细菌等微生物操作要求 实验室负责人.工作人员洗手、工作区域不允许吃/喝/抽.戴护目镜或面罩、食物储存 禁止口吸吸管、减少飞溅物/气溶胶、工作台表面的去污/灭活、废物去污后处理 10、注：高压蒸汽灭菌：负责消毒者不准离开消毒室。制备培

6、养基.无菌操作.、使用酒精灯、灭菌吸管.10 倍递增稀释.无菌操作；）三三制：稀释三级，每一稀释度用三个平行平板；取供试液加注于平皿时，供试液须充分混匀。培养基倾注于平皿：451、整个操作过程应在 lh 内完成、无菌检验.第二章、细菌学检验基本技术 临床样本的采集与送检 1、食品样本采集原则 根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、微生物的危害程度等确定采样方案。随机采样代表性 无菌操作，防污染。（外源性污染、样本变质和细菌生长）食物中毒时，采集可疑食物样本。2、食品样本采集种类 大样、中样、小样。、大样：一整批样本。中样：从样本各部分所取得的混合样本，一般为 200g。小样：分析用，检样，2

7、5g。注：检验结果报告后，剩余样品或同批样品不进行微生物项目的复检 3、细菌的形态结构检查法 借助显微镜，对细菌形态、大小、排列、结构进行直接观察。在细菌检验中极其重要，是细菌分类和鉴定不可缺少的组成部分。样本中有无细菌及其大致的数量。样本 采样时间 采样方法 注意事项 血骨髓 发病早期、急性期或 症状典型时 成人 10ml，儿童 35ml；骨髓 12ml。样本切勿冰箱存放；无菌操作；废弃物高压灭菌。尿液#晨起 中段尿 防杂菌污染，无菌操作。尽快送检，不得加防腐剂或消毒剂。粪便 急性期 脓血、黏液的粪便；絮状物；直肠拭子 无菌采样；新鲜；立即送检。）痰 上呼吸道样本 晨间 无限制 自然咳痰、支

8、气管镜、胃内采痰法等；鼻咽拭子 漱口；立即送检或 4保存。(细菌的形态、大小、排列、结构和染色反应性。培养物是否为纯种。普通光学显微镜（m 1000）细菌染色样本；弱光下用于不染色样本活菌的运动情况 暗视野显微镜（m：50 倍）不染色样本活菌的形态 相差显微镜：活体细胞的外形和运动方式；细胞内部某些细微结构及这些结构的数量 4、不染色检查：主要用于观察细菌的动力 有鞭毛的细菌为真正运动 无鞭毛的细菌则为布朗运动(即分子运动)染色检查 细菌染色显微镜观察。常用的细菌染料：人工合成带苯环的染料，色基+助色基 单纯染料：苏丹染料 酸性染料：伊红、酸性品红、刚果红等 碱性染料：美蓝、孔雀绿、甲紫和碱性

9、复红等 复合染料：姬姆萨染料、瑞氏染料等/5、单染色法：用一种染料染色，使各种细菌均染成同一颜色。操作简单，易于使用。只能显示细菌的形态及大小。如用美蓝或稀释石炭酸复红等 6、复染色法：用两种以上染料染色细菌，显示细菌形态大小，鉴别细菌种类 鉴别染色法:革兰染色法、抗酸染色法 Grams 染色操作步骤：初染、媒染、脱色、复染 抗酸染色法：抗酸菌：分枝杆菌/分枝菌酸。一般不易着色，一旦染上色后又不易被盐酸酒精脱色。经过加热和延长染色时间来促使抗酸菌着色。步骤：初染、脱色、复染 7、负染色法：背景着色而细菌本身不着色。;细菌荚膜常用墨汁负染色法配合单染色法(如美蓝)，背景呈黑色，菌体染成蓝色，荚膜

10、不着色，包绕在菌体周围成为一层透明的空圈。该法具有快速、经济、简便易行、高度反差、分辨率高的特点。8、培养基的种类按物理性状分 液体培养基：增菌、作生化试验等 半固体培养基：观察细菌的动力、分类鉴定、保存菌种及噬菌体效价滴定等。琼脂用量为%1%固体培养基：主要用于分离培养；平板、斜面、高层及高层斜面；琼脂用量为%2%9、培养基的种类按用途分 基础培养基(basic medium)营养培养基(nutrient medium)增菌培养基(enrichment medium)：选择性培养基(selective medium)鉴别培养基(differential medium)专用培养基(dedica

11、ted medium)10、增菌培养基：多为液体。目的菌，杂菌。营养成分抑制物质 选择性增菌培养基；非选择性增菌培养基%NaCl 肉汤：金葡増菌 11、鉴别培养基：几种细菌由于对培养基中某一成分的分解能力不同，其菌落的生长特征(颜色、形状等)不同而被区分开。某些特定的化学物质 鉴别和区分不同细菌 12、制备培养基的一般程序 1 调配溶化；2 矫正 pH；3 过滤澄清；4 分装；5 灭菌；6 检定 13、平板划线接种法 平板划线接种法是常用的细菌分离培养方法。使样本或培养物中混杂的多种细菌分开成长为单个菌落，并根据菌落的形态和特征，挑选所需的单个菌落，经移种获得纯种细菌。不同的细菌在平板上所形成

12、的菌落有其固有的形态特征，可以作为细菌鉴定的依据之一。14、平板划线方法 分区划线接种法；曲线/连续划线接种法；棋盘格划线接种法；放射法；四格法；平板涂布接种法 15、分区划线接种法：多用于含菌数量较多样本的细菌分离 16、半固体培养基：可用于观察细菌动力和保存菌种。,17、菌落：细菌经一定时间培养后，在固体培养基表面所形成的，肉眼可见的物体(群落)。18、菌落特征 菌落形状；大小：mm；表面性状；边缘情况；颜色；透明度；质地；粘度；乳化性.等 19、细菌在鉴定培养基上的特征 溶血特征；卵黄；蛋白；色素；气味 在血平板上的溶血特征 溶血：狭窄的草绿色的半透明区域 溶血：完全透明清楚的宽带 。溶

13、血：看不到溶血带的溶血 卵黄琼脂中的反应：检查细菌是否产生卵磷脂酶和脂酶 卵磷脂酶：降解卵黄，菌落周围出现沉淀环 脂酶：出现“珍珠包膜”蛋白水解作用：在菌落周围出现清晰的环。色素 水溶性色素溶在培养基中，使培养基着色。绿脓色素、荧光色素等；脂溶性色素则使细菌菌落着色。金黄色葡萄球菌的金黄色菌落。）气味 假单胞菌属细菌葡萄汁气味；变形杆菌巧克力烧焦的臭味；链球菌地窖里的霉臭；梭菌粪臭、腐败味；产黑色素类杆菌属细菌辛辣味 20、细菌的生化反应试验 不同的细菌不同的酶系统不同的新陈代谢产物产物不同的生化特性鉴别细菌的类别 21、糖发酵试验结果判断 反应现象 结果描述|酸性变色、有气泡 分解糖产酸、产

14、气 酸性变色、无气泡 分解糖产酸、不产气 培养基不变色 不分解糖 22、甲基红(MR)试验：检查细菌发酵葡萄糖产生并保持稳定的酸性终末产物和克服体系缓冲作用的能力。分解葡萄糖丙酮酸乳酸、乙酸、甲酸等培养基的 pH甲基红指示剂红色：阳性；|分解葡萄糖产酸少培养基 pH 较高甲基红指示剂黄色：阴性。23、-半乳糖苷酶试验：预测细菌发酵乳糖的能力。-半乳糖苷酶：一种能把乳糖水解成葡萄糖和半乳糖的酶。发酵乳糖的大肠菌类能产生-半乳糖苷酶-渗透酶(P)和-半乳糖苷酶(G)24、靛基质(吲哚)试验 分解：蛋白胨中的色氨酸吲哚 吲哚二甲氨基苯甲醛玫瑰吲哚(红色)25、硫化氢试验 （分解：含硫氨基酸H2S H

15、2S铅或铁离子黑色硫化物。26、触酶试验 过氧化氢酶又称触酶，可使细菌代谢过程中的过氧化氢分解为水和氧。27、血浆凝固酶试验 金黄色葡萄球菌可产生凝固酶,使血浆中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白,附着于细菌表面,产生凝固。玻片法：与细胞壁结合的凝固酶 试管法：菌体生成后释放于培养基中的游离凝固酶 。28、血清学鉴定 serological identity：确定致病菌的种或型 未知纯种细菌已知特异性抗体 常用方法：玻片凝集试验、免疫荧光、协同凝集、对流免疫电泳、酶免疫、间接血凝、乳胶凝集 29、血清学诊断 辅助诊断：抗原性较强的病原菌和病程较长的传染病。抗体有无及其抗体效价变化 已知的细菌/特异性抗

16、原特异抗体 常用方法：试管凝集试验。直接凝集试验、显微镜凝集试验、沉淀试验、乳胶凝集试验、ELISA、免疫荧光试验等。|急性期和恢复期双份血清样本，恢复期的抗体效价比急性期升高 4 倍或 4 倍以上。30、细菌毒素的检测方法 外毒素 细菌外毒素的免疫血清(抗体)被检细菌培养物滤液(抗原)细菌外毒素(抗原)被检患者血清 动物试验 内毒素 家兔热原试验,鲎试验,免疫学方法、生物学方法、化学发光法、流式细胞术、高效液相色谱:31、鲎试验(limulus test，LT)：定量及半定量检测细菌内毒素；血液中含有一种独特的有核变形红细胞，红细胞裂解物内毒素凝胶 32、细菌数量的测定：物理计数法；生物计数

17、法 物理计数法 细菌总数计数法：利用工具和仪器对样本中的细菌进行计数，其结果表示样本中的所有细菌(活菌死菌)。Breed 计数法：Direct microscopic count 比浊管计数法：细菌悬液的浊度与菌数成正比 .分光光度计测定法：吸光度同细菌总数成正比 生物计数法 活菌计数法：利用各种培养方法检测样本中细菌的数目,计数培养基上生长的菌落数样本中活菌数。半定量计数法；倾注平板法；旋管计数法；滴液计数法；琼脂表面计数法；膜滤过计数法；微菌落快速计数法；最可能数(MPN)的估计 33、L-型细菌检查 L forms bacterium：一种细菌通过变异而产生的细胞壁缺陷型。必须在高渗溶液

18、中方能存活，并失去原有形态而变成圆球形或多形性。致病 第四章、细菌的分型及其检验技术 1、细菌分型“传统方法”仅进行病原的菌种鉴定是不够的，需要进一步的分型诊断。血清学分型；生物化学分型；噬菌体分型；细菌素分型；耐药谱分型；质粒图谱分型;PCR 技术；染色体酶切物脉冲场凝胶电泳分型 2、噬菌体的作用具有高度特异性（种、型）一种噬菌体只能裂解一种或与该种相近的细菌，故可用于细菌的分类鉴定。用己知型噬菌体鉴定细菌，可对细菌进行分型。.3、毒性噬菌体：Virulent Phage：能在宿主菌细胞内复制、增殖，产生许多子代噬菌体，最终裂解细菌。4、温和噬菌体：Temperate Phage：与宿主菌的

19、染色体整合，随细菌 DNA 的复制而复制，随细菌的分裂而传代，不产生子代噬菌体。5、噬菌斑(plaque)在液体培养基中，噬菌体可使浑浊的菌液变为澄清；在固体培养基上，噬菌体对宿主菌细胞的裂解作用可使菌落溶解，导致在带菌琼脂平板上产生空斑，易于观察，称噬菌斑(plaque)。6、噬菌体的效价测定 噬斑形成单位(pfu)的测定：若将噬菌体按一定倍数稀释，通过噬斑计数，可测定一定体积内的 噬斑形成单位(plaque forming units,pfu)数目，即噬菌体的数目。7、细菌素分型技术 细菌素(bactericin)：某些细菌产生的蛋白质类抗菌物质，这种物质只对产生菌亲缘关系近的细菌有抗菌作

20、用，而对产生菌本身不敏感。细菌素是蛋白质，质粒控制，多处于抑制状态。细菌素的应用主要是细菌的分型和流行病学调查，是血清学分型的补充。8、药敏试验(drug susceptibility test)在体外测定抗菌药物抑制或杀死细菌能力的试验。抗菌药物：具有杀菌或抑菌活性的抗生素和化学合成药物。9、药敏试验方法 纸片法：测定抑菌环大小，其结果以敏感、中度敏感、中介度、耐药表示。,稀释法：找出能抑制细菌生长的最小抑菌浓度(MIC)或最小杀菌浓度(MBC)表示。E 试验(E-test)：最小抑菌浓度 MIC：在特定环境下孵育 24 小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度。最小杀菌浓度 MBC

21、：杀死%（降低 3 个数量级）的供试微生物所需的最低药物浓度 10、纸片扩散法 是国际上推荐使用的标准实验方法；细菌耐药谱分析中最常用的方法。原理：将含定量抗菌药物纸片贴在已接种待测细菌的琼脂平板表面，培养后，形成一个透明抑菌环。抑菌环的大小反映待测菌对该药物的敏感程度，与 MIC 成反比。%麦氏比浊度=1108cfu/ml 结果判断：针对抑菌环直径测量值报告敏感、中介或耐药。敏感(S)：被测细菌所引起的感染可以用常用剂量的该抗菌药物治愈。中介(I)耐药(R)：被测细菌不能被常用剂量抗菌药物抑制,或具有特定耐药机理，临床治疗效果不佳。11、肉汤稀释法 原理：将药物按一定规律用 M-H 肉汤稀释

22、成一系列浓度后，与一定量的细菌作用，经培养后定量测定其 MIC，反映细菌的药物敏感性。校正麦氏比浊标准，1200 稀释（110120）。（5105 cfu/ml）(结果判定：无肉眼可见细菌生长的药物最低浓度即为该待测菌 MIC。12、琼脂稀释法 原理：将待测菌接种于含不同浓度药物的琼脂平板上，经培养后观察菌落的生长情况，以能抑制细胞生长的最低药物浓度为该菌的 MIC。第五章、细菌的分类与命名 P91 1、细菌分类等级 种是细菌分类的基本单位，将生物学性基本相同的细菌群体归成一个菌种；性状相近、关系密切的若干菌种组成一个菌属；：2、细菌 DNA 中 GC mol/%测定 细菌 DNA 中 GC

23、mol%含量不同是细菌的一个重要遗传特征。单一菌种中许多不同菌株的 GC mol%平均值极为接近或者是一致的。3、细菌命名 细菌的科学名称(学名)为生物双名式。属名种名(人名、地名)。斜体 属名在前，名词，首字母大写 种名在后，形容词，小写 属名可用第一个字母代表 M.tuberculosis(结核分枝杆菌)、S.typhi(伤寒沙门菌)常见的细菌也可用习惯通用俗名 tuberculosis(结核杆菌)、typhoid bacillus(伤寒杆菌)泛指某一属细菌：属名sp(菌种 species)Mycobacterium sp，Salmonella sp 亚种的名称：属名种名亚种 Klesbs

24、iella penumoniae subspecies pneumoniae 中文译名则种名在前，属名在后。4、细菌分类系统：伯杰氏鉴定细菌学手册 第七章、消毒学试验技术 1、消毒学试验 原理：将试验微生物暴露于消毒因子(物理、化学、生物学)，作用预定的时间之后，检查试验的微生物是否被杀灭或抑制。主要目的：检查一种消毒剂或消毒方法是否能达到杀灭或消除病原微生物的要求。2、消毒 disinfection：杀灭或清除传播媒介上病原微生物，使其达到无害化的处理。,灭菌：杀灭或清除传播媒介上一切微生物（包括病原体和非病原体的繁殖体和芽胞）的处理。3、微生物学检验：中和试验、定性/量杀菌试验、病毒灭活试

25、验、能量试验、现场试验等 4、消毒药械鉴定测试的项目 消毒剂 消毒器械 理化性能检验 有效成分含量；pH；金属腐蚀性【杀菌因子强度或浓度；金属腐蚀性 微生物学检验 微生物杀灭 实验室杀灭微生物 模拟现场试验与现场试验 模拟现场和现场试验 其他 稳定性试验(安全性试验(电器、毒理)5、菌片：用于测定各种消毒剂、消毒器械与方法对不同物品上微生物的杀灭作用。6、残留消毒剂的去除方法：化学中和法（称中和剂法）、过滤冲洗法、稀释法等 中和剂法：在消毒剂与微生物作用到达规定时间的终点时，取样加于适宜种类和浓度的中和剂中，将残留消毒剂迅速中和，使其不再持续抑制或杀灭微生物的方法。中和剂：能及时中止消毒剂的杀

26、微生物作用 本身及其与消毒剂的反应产物对微生物无抑制或杀灭作用，对培养基无不良影响。7、中和试验 操作方法 触酶试验阳性。致病株分解甘露醇。金黄色葡萄球菌耐热核酸酶试验阳性。金葡菌血浆凝固酶阳性。3）抗原构造 葡萄球菌 A 蛋白(SPA)多糖抗原：具有群特异性，是存在于细胞壁上的一种半抗原。荚膜多糖（4）致病物质 毒素：葡萄球菌溶血素，肠毒素，杀白细胞素，表皮剥脱毒素，毒性休克综合征毒素-1 酶类：脂酶，触酶，凝固酶，葡激酶，耐热核酸酶，透明质酸酶 超抗原 5）免疫性 人对金黄色葡萄球菌有一定的天然免疫力。当皮肤粘膜发生损伤或机体免疫力降低时才易引起感染。病后能获得一定的免疫力，但作用不强，一

27、般认为不足以预防再次感染。6）抵抗力 耐干燥；对外界因素的抵抗力强于其他无芽胞菌；&对青霉素耐药株高达 90%以上；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）已经成为医院内感染最常见的致病菌之一。7.简述葡萄球菌和链球菌的检验程序和检验方法。（重点掌握葡萄球菌）葡萄球菌检验程序：检验方法：直接涂片检查-可作初步报告，革兰染色阳性，呈葡萄状排列的球菌，即可作初步报告。培 养：1.增菌培养%NaCl 肉汤，胰酪大豆肉汤 2.分离培养普通平板、血平板、Baird-Parker 平板、高盐甘露醇平板、卵磷脂高盐平板等 金葡球菌鉴定培养基 S.aureus ID：灰绿色菌落为金葡球菌 法国科玛嘉金黄色葡萄球菌

28、显色培养基（CHROMagar Staph aureus）：金黄色葡萄球菌：紫色；其他：蓝色、无色。链球菌检验程序：检验方法：脓汁、咽拭、痰液和渗出物可直接涂片检查。增菌培养接种肉浸液葡萄糖肉汤或匹克肉汤。分离培养接种血平板做需氧和厌氧培养，观察菌落形态。鉴定试验 溶血者做杆菌肽敏感试验，敏感者为 A 群链球菌，耐药者做胆汁-七叶苷试验（阳性为黑色反应），阳性者为 B 群链球菌，同时做 CAMP 试验也应为阳性；阴性者为 A、B、C 群以外的其他链球菌；溶血者做 Optochin 试验，敏感者为肺炎链球菌，耐药者做胆汁-七叶苷试验，阴性者为草绿色链球菌；不溶血者做%氯化钠试验，阴性者为其他链球

29、菌。链激酶试验：取草酸钠血浆，用生理盐水稀释，再加入链球菌培养物和%氯化钙溶液混合，放 37水浴，观察血浆凝固。从血浆凝固起记录溶化时间，溶化时间越短，链激酶越多。马尿酸钠水解试验：B 群链球菌阳性。阳性产紫色或深紫色。第十章 肠科杆菌 1、简述肠道杆菌共同特点，怎样初步区别肠道致病菌与非致病菌 肠杆菌科共同特性 相似的形态染色 中等大小，G 杆菌，无芽胞，多数有动力，致病性菌株多有菌毛，具有质粒。简单的培养条件。活泼的生化反应 抗原构造:包括菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面抗原 3 种。O 抗原和 H 抗原是分群和分型的依据。抵抗力:不强，不耐干燥，对一般的化学消毒剂均敏感。变异性:（1

30、）S-R 变异：新鲜分离的细菌菌落为光滑性，反复传代或保存过久，菌落变成粗糙型。（2）H-O 变异：鞭毛从有到无。（3）质粒、转座子、结合子等的转移改变菌株遗传信息，如耐药菌株的出现。乳糖发酵试验-初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌 肠道致病菌-不发酵乳糖 !肠道非致病菌-发酵乳糖 2、何谓肥达试验肥达试验结果判断须注意哪些要点 肥达试验(Widal test):用已知伤寒沙门菌的 O、H 抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌的 H 抗原(称为 PA、PB)作为诊断菌液，与受检血清做试管或微孔板凝集试验，检测受检血清中有无相应的抗体及其效价的一种半定量试验。可辅助诊断肠热症 结果分

31、析及临床意义：1）正常值：首先应考虑当地人群的正常效价。伤寒沙门菌 O 凝集价 1：80，伤寒沙门菌 H 凝集价 1：160 甲型副伤寒 H 凝集价 1：80，肖氏沙门菌 H 凝集价 1：80 或在疾病早期及中后期分别采集两次血清，若第二份血清比第一份的效价增高 4 倍或以上具有诊断的参考价值。2）O 与 H 抗体的诊断意义：O 抗体出现较早，为 IgM，持续时间短（约半年），消退后不易受非特异性病原刺激而重现。H 抗体出现较晚，为 IgG，持续时间长达数年，消退后易受非特异性病原刺激而重现。O、H 凝集价均超过正常值，则肠热症的可能性大；若两者均低，肠热症的可能性小；若 O 不高 H 高，可

32、能为疾病的晚期，是预防接种或非特异性反应；若 O 高 H 不高，则可能为感染早期，或与其他沙门菌有交叉反应，或 H-O 变异的沙门菌引起的感染等，建议一周后复查，如一周后 H 也有升高，可证实为肠热症。3）注意事项：确诊为伤寒的患者中约有 10%肥达反应始终为阴性，故阴性结果不能排除伤寒的确诊。其原因可能由于早期使用抗生素治疗，患者免疫功能低下或与肥达反应诊断菌液等有关。采血的时间不同，肥达反应的阳性率也不同。发病第一周阳性率为 50%，第二周为 80%，第四周 90%，恢复期凝集价最高。以后逐渐下降以至转阴。临床上一般以双份血清（早期和恢复期）的凝集价有 4 倍增高作为新近感染的指标。3、疑

33、似伤寒病人在病程不同阶段应采取何种标本 不同疾病、不同病程采集不同标本 伤寒、副伤寒：第 1、2 周采血；第 2、3 周采粪、尿；全程可采骨髓。血清学检查：第二周起即可采血清。败血症：采血。肠炎：粪便、呕吐物、可疑食物 4、SS 培养基中有哪些成分，各有何作用 用途:用于志贺菌和沙门菌分离 成分（g/L）牛肉浸粉 5；眎胨或多价蛋白胨 5；乳糖 10；胆盐；枸橼酸钠；硫代硫酸钠；枸橼酸铁 1；琼脂；中性红水溶液；煌绿水溶液；蒸馏水（25）原理:SS 琼脂为强选择性培养基。其成分除了有必要的胨、牛肉膏等氮、碳源外，其他则为选择性抑制剂和缓冲剂。枸橼酸钠、胆盐、硫代硫酸钠的协同作用与煌绿共同来抑制

34、肠道非病原性细菌及部分大肠埃希菌的生长；对志贺菌属及沙门菌属相对抑制性较弱。硫代硫酸钠有助于大肠菌的菌落着色，枸橼酸铁能缓解某些药物对病原菌的毒性作用，同时与细菌产物起反应呈黑色菌落。中性红可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌鉴别开，前者为红色菌落，后者为无色菌落 琼脂是培养基的凝固剂【观察结果】沙门菌其菌落呈无色半透明，产生 H2S 者菌落中心呈黑色，部分菌株如亚利桑那亚属有分解乳糖的菌落呈红色、中心黑色，志贺菌属的菌落呈无色透明。大肠埃希菌呈红色混浊。宋内志贺菌能延缓发酵乳糖，培养24h 厚可以出现红色菌落。肠道致病菌的菌落均可达以上。5.名词解释：1）KIA:克氏双糖铁琼脂,常用于观察微生物发

35、酵葡萄糖和乳糖的能力，可以把肠杆菌科细菌和其他科细菌区别出来以及区别肠道内的致病菌和大肠埃希菌。KIA成分中含有葡萄糖和乳糖，二者比例为 1：10；指示剂为酚红，其在 PH时变为黄色，而 KIA 的 PH 为(红色)，产少量的酸就可导致颜色变化。2）MIU：动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验 【原理】：培养基为含尿素、蛋白胨的半固体培养基，指示剂为酚红。具色氨酸酶的细菌能分解色氨酸产生吲哚，加入吲哚试剂后，培养基上层的吲哚会变红；具脲酶的细菌能分解尿素产氨，使整个培养基变碱呈红色；有动力的细菌沿穿刺线扩散生长。【方法】：将大肠埃希菌和普通变形杆菌穿刺线接种于 MIU 培养基，35ºC

36、，18-24h，观察动力和脲酶反应后，再滴加吲哚试剂。【结果】：扩散生长为动力阳性；滴加吲哚试剂后呈玫瑰红色为阳性；培养基变红脲酶阳性。用途：生化培养基，用于细菌脲酶检测（GB、SN 标准）3）IMViC：用来测定菌的生理生化特征的 4 个实验.主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水的细菌学检查。I:吲哚试验；M:甲基红试验；V:试验；C:柠檬酸实验 4）V-W 变异:异：指沙门菌失去 Vi 抗原的变异。初次分离得到的具有 Vi 抗原、O 不凝集的沙门菌称为 V 型菌；Vi 抗原部分丧失，既可与 O 抗血清发生凝集又可与 Vi 抗血清凝集者称 VW 型菌；Vi 抗原完全消失，与 O

37、抗血清发生凝集而与 Vi 抗血清不凝集者称 W 型菌。V-W 变异的过程是 V 型菌经人工培养，逐渐丧失部分 Vi 抗原而称为 VW 型菌，进而成为 W 型菌 5）Vi 抗原:由聚-N-乙酰-D-半乳糖胺糖醛酸组成。不稳定，新从患者标本中分离出的伤寒杆菌、丙型副伤寒杆菌等有此抗原。Vi 抗原存在于细菌表面，具有微荚膜功能，能抵抗吞噬细胞的杀伤和吞噬，并阻挡抗体、补体等破坏菌体作用。测定 Vi 抗体有助于对伤寒带菌者的检出。6）外斐反应：变形杆菌属的 X19,菌株的菌体 O 抗原与斑疹伤寒立克次体和恙虫病立克次体有共同抗原，故可用 OX19，OX2，OXk 代替立克次体作为抗原与相应患者血清进行

38、交叉凝集反应，此称外斐试验，辅助诊断立克次体病 第十二章 革兰阳性杆菌 1.名词解释：1）串珠试验：接种待检菌于含有青霉素的普通营养琼脂培养基；37，6h 后，炭疽杆菌可发生形态 变化；镜下观察，抑菌和生长临界处，菌体膨隆相连似串珠状菌链，而类炭疽杆菌无此现象。2）异染颗粒：常见于白喉棒状杆菌等，在细胞内呈颗粒状，主要成分为 RNA 及嗜碱性的多偏磷酸盐，用美蓝或奈瑟染色（Neisser stain）后，这些颗粒与菌体颜色不同，两端或一端可见着色较深的异染颗粒（metachromatic granules）；异染颗粒有时仅位于菌体两端，常称为极体。3）纯蛋白衍化物(purified prote

39、in derivative，PPD)PPD 有两种，由人结核分枝杆菌来源的 PPD-C 和卡介苗制成的BCG-PPD。目前主要用 PPD，每含 5 单位。4）抗酸杆菌：(acid-fastbacilli)又称分歧菌。该菌属无鞭毛、无芽胞、不产生内、外毒素，其致病性和菌体成分有关。引起的疾病都呈慢性，并伴有肉芽肿。分歧杆菌种类较多，可分为结核分歧杆菌复合群、非结核分歧杆菌和麻风分歧杆菌三类。一般不易着色，染色时需要加温或延长时间，着色后能抵抗酸酒精的脱色，故称抗酸杆菌。5）结核菌（OT）素试验：用于诊断结核菌感染所致 IV 型超敏反应的皮肤试验。对诊断活动性结核病和测定机体细胞免疫功能有参考意义

40、。机体受结核杆菌感染 48 周后，即可产生免疫变态反应。6）卡介苗：即将有毒力的牛型结核分枝杆菌在甘油胆汁马铃薯培养基上长期培养传代，得到减毒菌株，可用于预防结核菌感染。2简述结核分枝杆菌的形态及培养特性 形态：结核分枝杆菌细长略弯，有时呈分枝状，大小约 14mm，无芽胞、鞭毛和荚膜。抗酸染色阳性：由于结核分枝杆菌细胞壁中含有大量的脂质，不易着色，一般不用革兰染色法染色。用齐尼氏抗酸染色法（Ziehl-Neelsen acid-fast stain），以 5%石炭酸复红加温染色后能抵抗 3%盐酸酒精的脱色作用，结核分枝杆菌被染成红色，而其他非抗酸菌及背景则被美篮复染呈蓝色。此外，结核分枝杆菌在

41、药物如异烟肼的影响下，亦可变为抗酸染色阴性。菌落特征：表面干燥、粗糙、隆起、呈颗粒、结节或“花菜状”，乳白色或淡黄色，不透明 培养特性：专性需氧 最适生长温度为 37，低于 30不生长。最适酸碱度为 营养要求高，生长缓慢，必须在含有血清、卵黄、马铃薯、甘油以及某些无机盐类的特殊培养基上才能良好生长。常用罗-琴(Lowenstein-Jensen,L-J)固体培养基，内含蛋黄(含脂质生长因子，能刺激生长)、马铃薯、甘油(甘油对人型菌生长有促进作用。一定浓度对牛型及鼠型菌有抑制作用)、无机盐和孔雀绿(抑制杂菌，利于分离和长期保存)等。本菌生长缓慢，一般 2-4 周才能长出菌落。3.简述结核菌素试验

42、原理、结果判断及意义 原理：结核菌素皮肤反应是迟发型细胞超敏反应。它是抗原(结核菌或卡介苗)进入机体使机体的免疫T淋巴细胞致敏，并大量分化增殖。当已致敏的机体再次遭受到抗原入侵时，致敏淋巴细胞就会与之结合，引起变态反应性炎症。表现在结核菌素注射部位形成硬结甚至发生水泡、坏死。结素试验阳性表明机体曾经受到结核菌感染或接种过卡介苗，也表示机体对结核菌有一定免疫力。方法：取两种 PPD 5 单位注入两前臂皮内，4872 小时后观察红肿直径 结果：阴性：5mm；阳性：5mm；强阳性：15mm 结核菌素试验应用 选择卡介苗接种对象、测定卡介苗接种后的免疫效果 了解人群自然感染率 作为婴幼儿结核病的辅助诊

43、断 测定肿瘤患者的细胞免疫功能 4.简述炭疽芽孢杆菌的抗原构造 细菌性抗原：菌体多糖、荚膜抗原、芽孢抗原 炭疽毒素：水肿因子、致死因子、保护性抗原三种蛋白质组成的外毒素复合物。1 菌体多糖：由 D-葡萄糖胺，D-半乳糖及乙酸组成，与毒力无关。能耐热、耐腐败。环状沉淀反应（Ascoli 热沉淀反应），对炭疽病诊断有一定价值。不仅有抗原性，而且是多种植物凝集素受体。如大豆凝集素、相思豆凝集素等，故可用植物凝集素来鉴定菌。2 荚膜:非保护性抗原；有抗吞噬作用，与毒力有关，是重要的毒力因子和特异性抗原，有鉴别诊断价值。3.芽孢抗原:芽孢外膜含有抗原决定簇，具有免疫性和血清学诊断价值 炭疽毒素：水肿因子（EF）、致死因子（LF）、保护性抗原（PA）EF 和 LF 的作用，都需 PA 的协同