饮用水微生物限度检查操作规程.pdf

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1、 饮用水微生物限度检查操作规程 Jenny was compiled in January 2021 题目 饮用水微生物限度检查法操作规程 编号 DY10SA00705 制 订 人 审 核 人 批 准 人 日期：日期：日期：颁发部门 生效日期：复制备份 3 分发部门(份数)1目的：使生活饮用水检查操作规范化、标准化。2范围：生活饮用水微生物限度检查 3职责：生活饮用水微生物限度检查操作人员 4.引用标准：GB5749-2006 中国药典 2015 年版四部 5内容 5.1 主要设备、仪器及用具 5.1.1 生化培养箱、恒温水浴锅、0.45m 滤膜及薄膜过滤器、灭菌柜、乙醇灯等。用前应洗涤干净。

2、吸管口上端距 0.5cm 处塞入约 2cm 适宜疏松的棉花，置不锈钢盒内。锥形瓶、量筒、试管均应加硅胶塞，再用牛皮纸包扎。玻璃器皿，均于高压蒸汽 121灭菌30min，备用。5.2 操作步骤：5.2.1 需氧菌总数：采用薄膜过滤法处理。5.2.2 用 10ml 无菌水，润湿滤膜，取供试液 10ml2 份，分别过滤；取出滤膜，菌面朝上，贴于 R2A 琼脂培养基上；5.2.3 用 10ml 无菌水，照上述薄膜过滤法操作，作为阴性对照；5.2.4 将上述计数平板倒置于 30-35培养箱中培养 5 天，逐日观察菌落生长情况，点计菌落数并报告；标准规定：每 1ml 需氧菌总数不得过 100cfu。5.2

3、.5 菌数报告规则以 1ml 供试液的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以1 报告菌数（每张滤膜过滤 1ml 供试液）。5.3 耐胆盐革兰氏阴性菌标准规定：不得检出。5.3.1 菌种试验用菌株的传代次数不得超过 5 代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第 0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。大肠埃希菌CMCC（B）44102 铜绿假单胞菌CMCC（B）10104 5.3.2 菌液制备接种大肠埃希菌和铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨琼脂培养基中，30 一 35培养 18 一 24 小时；上述培养物用 0.9%无菌氯化钠溶液制成含菌数不大于100cfu

4、的菌悬液。菌悬液在室温下放置应在 2 小时内使用，若保存在 2-8可在 24 小时内使用。5.3.3 操作步骤 5.3.3.1 供试液制备和预培养取供试品 10ml3 份，分别接种至 100ml 胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，制成 1:10 的供试液。一份作为供试品，一份加入不大于 100cfu 的大肠埃希菌菌悬液 1ml，一份加入不大于 100cfu 的铜绿假单胞菌菌悬液 1ml，作为阳性对照。取10ml 灭菌水同法操作，作为阴性对照在 20-25培养，培养约 2 小时。5.3.3.2 定性试验分别取上述 10ml 供试品的预培养物接种至 100ml 肠道菌增菌液体培养基中，30-35培养

5、48 小时，划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上 30-35培养 24小时。如果平板上无菌落生长，判供试品未检出耐胆盐革兰氏阴性菌；阳性对照应生长良好。54 大肠埃希菌 5.4.1 操作步骤 5.4.1.1 供试液的制备和增菌培养：取供试液 100ml2 份，分别接种至 1000ml 的胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，一份加入不大于 100cfu 的试验菌做为阳性对照，在 30-35培养18-24 小时，5.4.1.2 选择和分离培养：取上述培养物 1mL 接种至 100mL 麦康凯液体培养基中，4244培养 24-48 小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，3035培养 18-72 小时，阳性对照应检出相应的控制菌。5.4.1.3 阴性对照试验取试验用的稀释剂，同法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。5.4.1.4 结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上，有菌落生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验，验证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基平板上，没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性、判供试品未检出大肠埃希菌。6.变更历史