医院病原微生物实验室操作程序规程.pdf

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1、医院病原微生物实验室操作程序规程 一、生物安全柜的使用 以安全为目的，态度可以被定义为是知识和经验的积累物，它可以引导一个个体特定的操作。人为因素和态度可导致一种倾向，即部分个体对环境、人和物起到一个正面或负面的影响。实验室工作人员应明白自身的态度和人为因素对控制实验室生物安全影响的重要性。下面列出一些对管理人员有帮助的观测内容：（1）在实验室事故中缺乏事故感知能力是一个重要因素。（2）以反常的速率工作是一个重要的引发因素。（3）故意违反规章是引发事故的常见原因，期间存在很多危险因素。（4）执行常规操作例如进行稀释和培养等是实验室事故发生时最常见的作业。（5）疲劳作业极有可能引发事故的发生。（

2、6）在有组织、宽敞的实验室里工作有助于防止事故的发生。每一位在存有生物危害环境里工作的人员必需时刻意识到为了预防实验室事故的发生，正确的态度是十分重要的。1、一级生物安全 （1）在实验期间实验室门保持关闭状态。（2）按照操作规程使气溶胶的产生降到最小。（3）在一级生物安全区域内不许吸烟、进食、喝饮料及贮存食物。（4）穿实验服。（5）不许用嘴吸吸液管，应使用机械的吸液设备。（6）避免使用皮下注射针。（7）完成实验操作离开实验室前要洗手。（8）定期消毒工作台面，有液体飞溅应立即消毒。（9）生物废弃物丢弃前需消毒。其它污染的原料在清洗、再利用或丢弃前也需消毒。（10）污染物应被封口，被耐用的、防漏的

3、容器袋包裹，高压消毒后送到指定销毁点。（11）控制昆虫和啮齿动物的出没。（12）保持工作区清洁。2、二级生物安全 （1）实验室门保持关闭状态。（2）在使用或贮存有传染性物品的设备上贴上通用的生物危害标识。（3）只允许实验人员进入二级生物安全区域。（4）二级生物安全区域内的试验动物不允许带出实验室外。（5）在二级生物安全区域内不许抽烟、进食、喝饮料及穿戴首饰。（6）必要时穿着个体保护装置（实验工作服，手套以及面部保护装置）；不能将保护装置穿到实验室外。（7）卸下防护服离开实验室前要洗手。（8）弄脏或污染了的防护服需更换。（9）不许用嘴吸吸液管。应使用机械的吸液设备。（10）按照操作规程使气溶胶的

4、产生降到最小。（11）避免使用皮下注射针。（12）尽可能使用塑料品替代玻璃品。（13）使用生物安全柜容纳产生气溶胶的设备。（14）完成实验操作离开实验室前要洗手。（15）定期消毒工作台面，有液体飞溅应立即消毒。（16）实验室内应有生物学飞溅物处理工具。（17）向生物安全负责人汇报与实验室获得性感染相关的飞溅物、事故、有关过错和疾病症状。（18）所有容纳生物废弃物的容器上应贴有生物危害的标识。（19）所有生物废弃物丢弃前需消毒。其它污染的原料在清洗、再利用或丢弃前也需消毒。（20）污染物应被封口，被耐用的、防漏的容器袋包裹，高压消毒后送到指定销毁点。（21）控制昆虫和啮齿动物的出没。（22）保持

5、工作区清洁。3、生物安全柜的使用 1、应参考国家标准和相关文献，对所有可能的使用者都介绍生物安全柜的使用方法和局限性。应当发给工作人员书面的规章、安全手册或操作手册。特别需要明确的是，当出现溢出破损或不良操作时，安全柜就不再能保护操作者。2、生物安全柜运行正常时才能使用。3、生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。4、安全柜内应尽量少放置器材或标本，不能影响后部压力排风系统的气流循环。5、安全柜内不能使用酒精灯，否则燃烧产生的热量会干扰气流并可能损坏过滤器。允许使用微型电加热器，但最好使用一次性无菌接种环。6、所有工作必须在工作台面的中后部进行，并能够通过玻璃观察挡板看到。7、尽量减少操作者身

6、后的人员活动。8、操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流。9、不要使实验记录本移液管以及其他物品阻挡空气格栅，因为这将干扰气体流动，引起物品的潜在污染和操作者的暴露。10、工作完成后以及每天下班前，应使用适当的消毒剂对生物安全柜的表面进行擦拭。11、在安全柜内的工作开始前和结束后，安全柜的风机应至少运行5min。12、在生物安全柜内操作时，不能进行文字工作。二、生物危害物的运输（实验室间或物体间）1、需使用两层防漏容器，包括下列各项：密封的里层容器 密封的外层容器 在里层和外层容器间放入吸收剂（纸巾）适合于含有大量液体生物危害物的传送。外层容器上应贴有生物危害物名称。外层容器上应有实验室地址

7、和电话号码。2、尽可能使用塑料容器物，避免使用玻璃的。3、密封的塑料（非玻璃）原装小瓶可以用密封的、有标识的塑料袋进行传送。4、如果使用的内层容器必需是玻璃，传送时应放置在装有吸收剂的、密封的、坚韧的塑料容器内，用软垫填充。5、内层容器外表消毒后再放入外层容器内。6、外层容器消毒后才能送离实验室。三、基础生物安全操作 实验室标本的收集、运输和处理不当，会带来使相关人员感染的危险。标本容器：标本容器可以是玻璃的，但最好使用塑料制品。标本容器应当坚固，正确地将盖子或塞子盖好后应无泄漏。在容器外部不能有残留物。容器上应当正确地粘贴标签以便于识别。标本的要求或说明书不能够卷在容器外面，而是要分开放置，

8、最好放置在防水的袋子里。标本的收集、接收和标记：需要接收大量标本的实验室应当安排专门的房间或空间并：1始终遵循标准防护方法，所有操作均要戴手套。2应当由受过培训的人员来采集病人或动物的血样。3在静脉抽血时，应当使用一次性的安全真空采血管取代传统的针头和注射器，用完后自动废弃针头。4对每个标本作唯一性标识。5装有标本的试管应置于适当容器中运至实验室，在实验室内部转运也应这样。检验申请单应当分开放置在防水袋或信封内。6接收人员不应打开这些袋子。标本在设施内的传递：为了避免意外泄漏或溢出，应当使用盒子等二级容器，并将其固定在架子上使装有标本的容器保持直立。二级容器可以是金属或塑料制品，应该可以耐高压

9、灭菌或耐受化学消毒剂的作用。密封口最好有一个垫圈，要定期清除污染。打开标本及处理：接收和打开标本的人员应当了解标本对身体健康的潜在危害，并接受过如何采用标准防护方法的培训，尤其是处理破碎或泄漏的容器时更应如此。标本打开处理时：1推荐在生物安全柜内打开标本管。2必须戴手套，并建议对眼睛和黏膜进行保护（护目镜或面罩）。3打开标本管时，应用纸或纱布抓住塞子以防止喷溅。避免传染性物质的注入 1通过认真练习和仔细操作，可以避免破损玻璃器皿的刺伤所引起的接种感染。应尽可能用塑料制品代替玻璃制品。2锐器损伤（如通过皮下注射针头、巴斯德玻璃吸管以及破碎的玻璃）可能引起意外注入感染性物质。3以下两点可以减少针刺

10、损伤：（a）减少注射器和针头的使用（可用一些简单的工具来打开瓶塞，然后使用吸管取样而不用注射器和针头）；（b）在必须使 用注射器和针头时，采取锐器安全装置。4 不要重新给用过的注射器针头戴护套。一次性物品应丢弃在防/耐穿透的带盖容器中。血清的分离 1只有经过严格培训的人员才能进行这项工作。2操作时应戴手套以及眼睛和黏膜的保护装置。3规范的实验操作技术可以避免或尽量减少喷溅和气溶胶的产生。血液和血清应当小心吸取，而不能倾倒。严禁用口吸液。4移液管使用后应完全浸入消毒液中。移液管应在消毒液中浸泡适当的时间，然后再丢弃或灭菌清洗后重复使用。5带有血凝块的废弃标本管，在加盖后应放在适当的防漏容器内高压

11、灭菌和/或焚烧。6应备有适当的消毒剂来清洗喷溅和溢出标本。对血液和其他体液、组织及排泄物的标准防护方法 设计标准防护方法（其中包括“常规预防措施”）以降低已知或未知感染源的微生物传播危险。玻璃器皿和“锐器”1尽可能用塑料制品代替玻璃制品。只能用实验室级别（硼硅酸盐）的玻璃，任何破碎或有裂痕的玻璃制品均应丢弃。2不能将皮下注射针作为移液管使用。用于显微镜观察的盖玻片和涂片 用于显微镜观察的血液、唾液和粪便标本在固定和染色时，不必杀死涂片上的所有微生物和病毒。应当用镊子拿取这些东西，妥善储存，并经清除污染和/或高压灭菌后再丢弃。清除污染 建议使用次氯酸盐和高级别的消毒剂来清除污染。一般情况可使用新

12、鲜配制的含有效氯 1 g/L 的次氯酸盐溶液，处理溢出的血液时，有效氯浓度应达到 5 g/L。戊二醛可以用于清除表面污染。培养皿、试管和试剂瓶 由于没有明确的事故发生及明显的溢出物，因此不能确定打开的平板、试管及试剂瓶里的一些微生物体是否会引起实验室感染。这些很高的传染因子中很有可能有一些传染病会发生。当打开存在真菌类的平板、试管及瓶子时需格外小心，因为在操作中可能会释放出大量孢子。一些培养物应该在生物安全柜内进行操作。在吸取液体培养物前，为确保它成为均一的悬液，应给予振动混匀。剧烈的摇动将产生大量的气溶胶。轻微的打旋可以成为均一的悬液，但仍伴有微量的气溶胶产生。当液体培养物恢复原状停留片刻后

13、再打开容器时，气溶胶产生减少。将消毒后热的金属接种环或针插入液体或斜面培养物会产生飞溅并产生气溶胶。为减少气溶胶的产生，金属接种环应在空气中冷却，或在容器内壁，或在繁殖物培养的琼脂表面没有物体生长的地方接触一下进行冷却。在粗糙不平整的培养基上用接种环或针划线接种培养物会导致气溶胶的产生。如果培养基表面光滑整洁，通常是不会产生气溶胶的。丢弃粗糙不平整的培养基是好的方法。有盖培养皿内的培养物脱出的水里通常存在活的细小微生物，并且在倒转平板的盖子和边缘之间形成一层膜。当打开平板时这层膜破裂，释放出气溶胶。对于盖子与边缘只有三个接触点的塑料有盖培养皿可能减少危害物。使用完全干燥的平板也能减少这种风险。

14、如果平板明显潮湿，则应在生物安全柜内打开。打开有螺旋帽的瓶子和带塞的试管时会产生看不见的气溶胶。这是因为在打开塞子或盖时，感染性液体在塞子边缘处形成的那层膜被破坏，产生了气溶胶。振动或离心后立即取下长颈瓶、瓶子、离心管的棉花塞子或塞盖，产生气溶胶导致环境污染。长颈瓶或离心管不处于垂直状态，去除湿的瓶塞也会产生危害。此外，离心时会产生微量的泡沫，瓶塞很可能会被少许弄湿。由于这些可能性，因此应在生物安全柜内打开液体感染性培养物及危害物质，同时穿戴手套、长袖实验室工作服，这是很好的安全措施。干缩的、有感染性的培养物可聚集在盖子边 缘或培养管/长颈瓶的壁上，当受到干扰时会扩散到空气里。装有干粉状危害物

15、 的容器应在生物安全柜内打开。四、消毒和灭菌 定义 关于消毒和灭菌有许多不同的术语，下面是生物安全中较常用的：抗菌剂（antimicrobial）能够杀死微生物或抑制它们生长和繁殖的制剂。防腐剂（antiseptic）能够抑制微生物生长和繁殖但不足将其杀灭的物质。防腐剂常应用于体表。生物杀灭剂（biocide）所有能够杀死生物体的制剂的统称。化学杀菌剂（chemical germcide）用于杀死微生物的化学品或化学混合物。清除污染去除和或杀死微生物的任何过程。消毒剂（disinfectant）用于杀死微生物的化学品或化学混合物，但不一定杀死其孢 子。消毒剂常用于非生命物体或其表面。消毒（di

16、sinfection）杀死微生物的物理或化学手段，但不一定杀死其孢子。灭菌剂（microbicide）能够杀死微生物的化学品或化学混合物。该词常常可以代替“生物杀灭剂”、“化学杀菌剂”或“抗菌剂”。杀孢子剂（sporocide）用于杀死微生物和孢子的化学品或化学混合物。灭菌（sterilization）杀死和或去除所有微生物及其孢子的过程。实验室材料的清洁 清洁是指去除污垢、有机物和污渍。清洁方法包括刷、吸、干擦、洗涤或用浸泡肥皂水或清洁剂的湿布拖擦。尘土、污物以及有机物是微生物的栖身之所，并可能影响除污染剂（抗菌剂、化学杀菌剂以及消毒剂）的作用。必须通过预清洁才能实现洗涤和灭菌的目的。许多杀

17、菌剂只对经过预清洁的物品才具有杀菌活性。预清洁时必须小心，以避免暴露于感染性物质中。预清洁时必须使用与以后使用的杀菌剂化学性质上相容的物质。普遍采用的是相同的化学杀菌剂进行预清洁和消毒。消除局部环境的污染 可以联合使用液体和气体消毒剂来清除实验室空间、用具和设备的污染。清除表面污染时可以使用次氯酸钠（NaClO）溶液；含有 0.1有效氯的溶液用于普通的环境卫生设备，当处理高危环境时，建议使用高浓度（5g/L）的溶液。在清除环境污染时，含有 3过氧化氢溶液也可以作为漂白剂的代用品。可以通过加热多聚甲醛或煮沸福尔马林所产生的甲醛蒸汽熏蒸来清除房间和仪器的污染。这是一项需要由专门培训的专业人员来进行

18、的、非常危险的操作。产生甲醛熏蒸前，房间的所有开口（如门窗等）都应用密封带或类似物加以密封。熏蒸应当在室温不低于 21 且相对湿度高于 70的条件下进行。清除污染时气体需要与物体表面至少接触 8 小时。熏蒸后，该区域必须彻底通风后才能允许人员进入。在通风之前需要进入房间时，必须带适当的防毒面具。可以采用气态的碳酸氢铵来中和甲醛。采用过氧化氢溶液对小空间进行气雾熏蒸同样有效，但需要专门的蒸汽发生设备。清除生物安全柜的污染 清除 I 级和 II 级生物安全柜的污染时，要使用能让甲醛气体独立发生、循环和中和的设备。应当将适量的多聚甲醛（空气中的终浓度达到 0.8）放在电热板上的长柄平锅中（在生物安全

19、柜外进行控制）。然后将含有比多聚甲醛多10的碳酸氢铵置于另一个长柄平锅中（在生物安全柜外进行控制）。在柜外将该平锅放置到第二个加热板上，在安全柜外将电热板接上插头通电，以便需要时在柜外通过开关电源插头控制盘子的操作。如果相对湿度低于 70，在使用强力胶带（如管道胶带）密封前部封密板前，还要在安全柜内部放置一个开口的盛有热水的容器。如果前部没有封密板，则可以用大块塑料布粘帖覆盖在前部开口和排气口以保证气体不会泄漏进入房间。将放有多聚甲醛平锅的加热板插上插头接通电源。在多聚甲醛完全蒸发时拔掉插头以断电。熏蒸的生物安全柜至少静置 6 小时，然后给放有第二个平锅的加热板插上插头通电，使碳酸氢铵蒸发。然

20、后拔掉电源插头，接通生物安全柜电源两次，每次启动约 2 秒钟来让碳酸氢铵气体循环。在移去前封密板（或塑料布）和排气口罩单前，应使生物安全柜静置 30 分钟。使用前应擦掉生物安全柜表面上的残渣。洗手/清除手部污染 处理生物危害性材料时，只要可能均应戴合适的手套。同时，实验室工作人员仍然需要经常地、彻底地洗手。处理完生物危害性材料和动物后以及离开实验室前必须洗手。大多数情况下，可使用普通的肥皂和水彻底冲洗手部。在高危情况下，应使用杀菌皂液；手要完全抹上杀菌皂液，搓洗至少 10 秒种，用干净水冲洗后再用干净的纸巾或毛巾擦干（如果有条件，可以使用暖风干手机）。应使用肘控或感应的水龙头洗手。如没有安装，

21、应使用纸巾或毛巾来关上水龙头，以防止再度污染干净的手。如果没有以上推荐的洗手方法或洗手不方便，应该用酒精擦手来清除双手的轻度污染。消毒和灭菌方法 物理和化学的去污染方法包含三个方面：加热、液体去污剂、蒸气和气体。加热 湿热和干热被推荐为杀菌最有效的方法.在一般环境下，高压灭菌器加热到 121快速产生蒸汽是最方便的方法。干热160-170，2-4 小时在不具有渗透性、非有机体的物质（如玻璃）是可行的净化方法,但是甚至在有机体或非有机体的浅层也不能被绝缘。焚烧是另一种净化方法。焚烧对人和动物的病理性废物是一个有效的方法。实验室工作人员应对加热的固体和液体有害物的处理相当熟悉，并要注意如果滥用设备那

22、在高压下水蒸气将会喷射出来，因此只能在允许范围内使用。在高压蒸汽下被处理过的液体是非常热的，如果要从灭菌器中取出必须等处理后过段时间再取出；如果立即 取出，会引起容器内的液体产生暴沸，并飞溅到处理容器的人员身上。液体去污剂 在通常情况下,足够浓度的液体去污剂常用于表面去污染，而液体废物的去污剂最终的处理是进入污水管道系统。液体去污剂的去污效果不佳，常常是因为有些因素（如应用场所的温度、接触时间、pH、当时情况、播散状况、穿透能力、有机物的反应）没有被适当地考虑。这些因素中的一些很小的变化可能会造成去污剂的效力上大的不同。因此甚至在很有利的情况下，当最终要求必须无菌时，液体去污剂也不是完全可信赖

23、的去污方法。有许多可用的液体去污剂在商品名上有很大的变化。在通常情况下,这些去污剂能被分类为：卤素、酸和碱、重金属盐、四铵化合物、苯酚、乙醛类、酮类、酒精和铵。但是去污剂的作用越大，它的危害性可能也越大（如腐蚀性）。对于所有传染性的情况没有一种（去污剂）是具有同等作用和效力的。使用普通原料的消毒剂处理中必须特别小心。从原料到制成可用的溶液对工作人员的操作必须考虑到有潜在的危险，要进行安全培训以及合适的个人防护设备保证毒性不接触眼睛、皮肤和呼吸系统。蒸气和气体 蒸汽和气体的种类决定了去污剂的性质，其中最常用的是甲醛和乙烯氧化物。当在一个密闭的系统中，在一定的温度、湿度控制下，它们能发挥很好的去污

24、作用。蒸汽和气体去污剂最初被用于生物安全柜和与之相关的空气处理系统和空气过滤系统、抵抗液体表面去污剂渗透的大容积或固定的设备、或用其他去污方法会受到损害的仪器和光学（设备）和门、建筑物和与之相关的空气处理系统等。为了避免甲醛和乙烯氧化物蒸汽的吸入，（贮存）这些化学品的容器的材料应尽可能地限制这些蒸汽（的溢出）和应放置在适当通风的化学品贮存区。当准备进行稀释和取用这些化学品时，操作者应按操作规程严格操作以防止（这些化学品）的暴露，必要时应穿戴呼吸防护装置。乙烯氧化物已归入（对人体具有）潜在危害的诱变剂；甲醛也（对人体）具有毒性和超敏性反应。高压灭菌器程序 湿热引起蛋白质的变性比干热所需要的温度低

25、且时间短。最主要的物理去污控制作用之一是在一个密闭的小室（空间）里高压灭菌器产生湿热和高压。大多数情况，下列组合可以确保高压灭菌器的灭菌效果。a.134、3 分钟 b.126、10 分钟 c.121、15 分钟 d.115、25 分钟 应使用生物指示剂验证高压灭菌操作是否达到效果。当操作高压灭菌器时必须穿戴个人防护设备（简称 PPE）如橡胶围裙和抗热防水的手套。高压灭菌器里物品的放置应保证蒸汽能穿透至需消毒的所有部分，所以物品间不能靠得太紧或互相阻塞，否则不能保证灭菌效果，而且当从灭菌器中移出物品时由于受压严重可能引起（人身）伤害的危险。含有如酚类和氯仿等化学品的消毒物品不允许放入高压灭菌器内

26、灭菌。化学去污剂 具有去污特性的最主要的化学品有粉剂、晶体或浓缩液体。这些化学品可以加水作为表面去污剂，其中有些去污剂加到足够量时可用于大量废液的去污消毒。在室温下气态的化学去污剂可以作为空气去污剂，另一些在温度升高时变成气体的（化学品）能作为水表面或空气去污剂。化学去污剂在灭活微生物时可能会产生一种或多种副作用，如：蛋白凝固和变性、溶血、酶的粘合或酶实质被酶底物氧化、或毁坏而灭活。化学去污剂的作用可能会因下列因素而改变：主要成分的浓度、接触时间、pH、温度、湿度和外界有机物的存在。这些因素对化学去污剂如何成功去污的处理依赖于化学去污剂对靶微生物的最小灭活和分析系统敏感度限定范围的杀菌显示效果

27、。去污剂使用无效的主要原因是对微生物的最初接触后作用无效。液体去污剂对某一成分去污时，如果这一成分表面有一些微小的气泡，因气泡下的区域是干燥的，其中的微生物就不能被杀灭。如果在这一成分上有油脂斑点，铁锈或污垢样，那么去污剂将不能接触到这些保护层下的微生物。将这一成分浸入去污剂进行净化是有效果的。去污剂应对物体整体表 面主要成分去污。一些常用去污剂的性质 乙醇 乙醇的水溶液最有效的使用浓度约为70（V/V）；但是，浓度低于 50%和高于 90%则无效。乙醇在杀菌作用的同时对蛋白质有缓慢轻微的变性作用。乙醇对含脂类病毒是有效的消毒剂。在消毒剂的功效试验中接触十分钟是常用的指标。因为乙醇具有高挥发性

28、，去污剂的接触时间为十分钟是必须的。因为这个原因，血液耐受病原体标准（文件）不认为乙醇对表面具有有效的消毒作用。一般来说异丙醇对细菌消毒作用更有效；乙醇对病毒的消毒作用更有效。甲醛 甲醛作为市售消毒剂通常是浓度为37%的福尔马林液，或是被称为多聚甲醛的固体聚合物。当主要成分中甲醛含量在 5%时为有效的液体消毒剂。甲醛在冷藏温度下的大量失活，在实验室中甲醛溶液由于气味的刺激性而难于使用。从甲醛溶液中产生的蒸汽对建筑物或门等空间环境是有效的消毒剂，但是甲醛蒸汽遇水可在其表面聚合成多聚甲醛，多聚甲醛性质稳定但令人不快。多聚甲醛加热再聚合能释放甲醛气体。当（周围）空气中湿度较低时，甲醛气态释放少于表面

29、残余物的聚合和熏蒸时间短于气态情况。苯酚 苯酚自身通常不以一种消毒剂而存在。它的气味稍有些令人不快和粘稠感，粘的成分会残留在被处理物的表面。在蒸汽杀菌中这个现象特别明显。尽管苯酚自身的用途不是很广，但苯酚的类似物和苯的化合物是常用消毒剂的基础。苯化合物对一些病毒、真 菌、植物细菌，包括立克次氏体是有效的消毒剂。一般来说苯的化合物对细菌孢子无效。氯 卤素对许多微生物有广泛的杀灭作用，包括细菌孢子。氯和蛋白质结合能快速降低溶液中现存的蛋白质浓度。自由氯是作用的有效因子，它是一个强氧化剂且对金属有腐蚀性。氯溶液必须现配现用。氯消毒剂中次氯酸钠是常用的基本物质。碘酒 碘酒和氯的性质是相同的。用于实验室

30、的最常用的消毒剂组合之一是碘结合物，与 Wescodyne 结合可能是最常用的。制造商推荐的 Wescodyne 稀释范围是1.54.5 克/升水（即有效碘为 2575ppm）。在这个范围内的少量自由有效碘能被存在着的无关蛋白迅速吸收。含 75 ppm 有效碘的（化合物）对表面和水的清洁处理是有效的，但是假如一些相 关蛋白存在则较为困难。对于碘结合物如Wescodyne,按照制造商的说明是危险品。碘结 合物的浓度越高则实际作用越低，正如结合了分子后碘就被束缚了一样。用于洗手和杀孢子剂时，被推荐稀释成Wescodyne 110于 50%乙醇中（一种相当好的自身去污剂）。有效碘为1,600 ppm

31、，在这个浓度下所有微生物中与之相关的部分都会被迅速灭活。可选择的化学消毒剂 没有一个单一的化学消毒剂或方法对所有的情况都是有效和实用的。在选择化学消毒剂和消毒程序之前必须考虑消毒的目的和（消毒剂）间的互相影响因素及最终要达到的目的。消毒程序的选择将从以下问题的答案中得到信息：靶有机体是什么？用什么消毒剂，什么形式能灭活靶有机体？要求灭活到什么程度？将靶有机体悬浮在什么溶剂中？（如：单一或混合液，固体多孔渗水的表面，和/或 空气介质）？什么是有机体预期的最高浓度？作为液体，蒸汽，或气体的消毒剂接触有机体时发生作用的持续时间？要考虑物质的兼容性受什么限制？可使用什么浓度消毒剂，消毒剂的即刻实用性预

32、试验，或在预试验前有充足的时间来配置至可用工作浓度的消毒剂的稳定性？实验室的消毒剂的最初目标是研究状态下的有机体。实验准备的或培养的通常有超过在自然界中那些正常观察物的滴定量。这些物质的灭活提出了其他如琼脂、蛋白质的营养、细胞成分能有效地阻碍或化学连接化学消毒剂的部分活性的问题。诸如真正要达到消毒剂的预想活性也许比在试管里做灭活试验时所需要的浓度更高，接触作用的时间 更长。同样,接触时间的主要部分要求达到灭活的水平也许要消耗大量抵抗部分中的小部分相对灭活的部分。现在的技术状态几乎不能提供信息来预测对更多抵抗细胞可能的 毒性。然而，这些一般是针对所有潜在的致病因素和必须通常在选择消毒剂和消毒过程

33、时被考虑的问题。生物体显示了一个抵抗化学消毒剂的范围。根据消毒剂的实际情况，大多数蔬菜细菌，真菌和含脂病毒对化学消毒剂相当敏感。不含脂病毒有光滑表面的细菌,如杆菌小结节,（对去污剂）有中等的抵抗力。孢子形式和慢病毒（对去污剂）抵抗力最强。选择消毒剂基于它对生物体在低抵抗范围内的效力。因此，如果为了实验室常规去污而选择对孢子形式有效的消毒剂，假定它能在实验室操作中产生其他的生物体，甚至在高浓度时也能被灭活。实际使用浓度和接触时间也许与产品制造商说明书上推荐的有相当大的不同。它被假定微生物将被有机溶剂提供一个高度的潜在保护。它不是假定一个消过 毒的的使用浓度和接触时间。必须强调的是这些数据仅仅是在

34、人工实验的情况下的效力显示。最终将有个体调查者的实验来确定一些消毒剂的效力。显然每种消毒剂都有优点 和缺陷，正入不同微生物的灭活范围不同一样，同样明显是为作为一种维持消毒剂“药 库”选择的折衷需要。五、废弃物处理 废弃物是指将要丢弃的所有物品。实验器材和废弃物处置应由专人负责，按生物废弃物处理办法实施。实验室污水须经无害化处理后排放。实验用一次性个人防护用品和实验器材、弃置的菌（毒）种、生物样本、培养物和被污染的废弃物应在实验室同一建筑内消毒灭菌，达到生物安全后再按感染性废弃物收集处理。实验用非一次性个人防护用品和实验器材，应放置在有生物安全标记的防漏袋中送至指定地点消毒灭菌后方可清洗。运送过

35、程中应防止有害生物因子的扩散。经生物无害化处理后的 废弃物包装必须符合要求，并有中文标签，标签内容包括产生部门、日期、类别等。实验废弃物最终处置必须交由经市环保部门资质认定的医疗废物处置单位集中处置。在实验室内，废弃物最终的处理方式与其污染被清除的情况是密切相关的。对于日常用品而言，很少有污染材料需要真正清除出实验室或销毁。大多数的玻璃器皿、仪器以及实验服都可以重复或再使用。废弃物处理的首要原则是所有感染材料必须在实验室内清除污染、高压灭菌或焚烧。用以处理潜在感染性微生物的所有实验室物品，在被丢弃前应考虑的主要问题有：1是否已采取规定程序对这些物品进行了有效的清除污染或焚烧？2如果没有，他们是

36、否以规定的方式包裹，以便就地焚烧或运送到其他有焚烧设施的地方进行处理？3丢弃已清除污染的物品时，是否会对直接参与丢弃的人员，或在设施外对接触到丢弃物的人员造成任何潜在的生物学或其他方面的危害？清除污染 高压蒸汽灭菌是清除污染的首选方法，需要清除污染并丢弃的物品应装在容器中（如根据内容物是否需要进行高压灭菌和/或焚烧而采用不同颜色标记的可高压灭菌的塑料袋）。也可采用其他可以除去和/或杀灭微生物的替代方法。污染性材料和废弃物的处理和丢弃程序 要对感染性物质及其包装物进行鉴别并分别进行处理，相关工作要遵守国家相关规定。废弃物可以分成以下几类：1可重复或再使用，或按普通“家庭”废弃物丢弃的非污染（非感

37、染性）废弃物。2污染（感染性）锐器-皮下注射用针头、手术刀、刀子及破碎玻璃；这些废弃物应收集在带盖的不易刺破的容器内，并按感染性物质处理。3通过高压灭菌和清洗来清除污染后重复或再使用的污染材料。4高压灭菌后丢弃的污染材料。5直接焚烧的污染材料。锐器 皮下注射针头用过后不应再重复使用，包括不能从注射器上取下、回套针头护套、截断等，应将其完整地置于盛放锐器的一次性锐器中。单独使用或带针头使用的一次性注射器应放在盛放锐器的一次性容器内焚烧，如需要可先高压灭菌。盛放容器的一次性容器必须是不易刺破的，而且不能将容器装得过满。当达到容器的四分之三时，应将其放入“感染性废弃物”的容器中进行焚烧，如果实验室规

38、程需要，可以先进行高压灭菌处理。盛放锐器的一次性容器绝对不能丢弃于垃圾场。高压灭菌后重复使用的污染（有潜在感染性）材料 任何高压灭菌后重复使用的污染（有潜在感染性）材料不应事先清洗，任何的清洗、修复必须在灭菌和消毒后进行。废弃的污染（有潜在感染性）材料 除了锐器按上面的方法进行处理意外，所有其他污染（有潜在感染性）材料在丢弃前应放置在防渗漏的容器（如有颜色标记的可高压灭菌的塑料袋）中高压灭菌。高压灭菌后，物品可以放在运输容器中运送至焚烧炉。可重复使用的运输容器应是防渗漏的，有密封的盖子。这些容器在送回实验室再次使用前，应进行消毒清洁。应在每个工作台上放置盛放废弃物的容器、盘子或广口瓶，最好是不

39、易破碎的容器（如塑料制品）。当使用消毒剂时，应使废弃物充分接触消毒剂（即不能有气泡阻隔），并根据所使用消毒剂的不同保持接触时间。盛放废弃物的容器盛在重新使用前应高压灭菌并清洗。污染材料的焚烧必须得到公共卫生、环保部门以及实验室生物安全的批准。六、运送 1、传染性物质的包装和运送 传染性物质的病因学因素分为两方面：一方面是诊断样品和生物产品，另一方面是 原料中含有明确的传染性物质。传染性物质 是指有生命（有活力）的微生物或它能自身产生毒性，或可能引起人类疾病。国际运输规定 传染性物质运输规定以联合国“危险性货物运输”的规章范本为基础。联合国的这些推荐意见是由危险性货物运输的联合国专家委员会（Un

40、ited Nations Committee of Exports on the Dangerous Goods，UNCETDG）制定的。要成为法律上的规章合法的一部分，必须由有资格的权威机构将联合国规章范本应用到国家规定和国际规定规章范本中例如国际民 用航空组织（International Civil Aviation Organization，ICAO）针对危险性货物运输制定的危险性货物安全空运和技术说明（Technical Instructions for the Safe Transport of Dangerous Goods by Air）和国际危险性货物陆运欧洲协议（the Eu

41、ropean Agreement concerning the International Carriage of Dangerous Goods by Road（ADR）。国际空运协会（International Air Transport Association，IATA）每年发布传染性物质运输指南（Infectious Substances Shipping Guidelines）。IATA 指南必须以遵守 ICAO 的技术说明作为最低标准，但可以增加其他要求。如果 IATA 成员运输上述物品，则必须遵守 IATA 指南。由于联合国关于危险性货物运输的规章范本每两年修订一次，应参照国家和

42、国际规章范本的最新版本。世界卫生组织为 UNCETDG 提供咨询。联合国关于传染性物质运输规章范本第 13 版（2003）采纳了运输规定中的主要变化。可以从 WHO 得到关于修正案采纳的背景的有关说 明。国际规章范本并非要取代各地方或国家要求。但是在有些还没有国家要求的情况下，就应遵守国际规章范本。注意以下一点非常重要：传染性物质的国际运输还必须依据并遵守国家进/出口的规定。2、诊断产品和生物产品的包装 这种物品必须“包装时要考虑能经受内容物的泄漏、震动、压力的改变，和在平时运输时可能发生的其他情况”。这应该被解释说明即使在运输过程中物品的内层包装容器有破损时，其内容物也应该无泄漏，除非这个内

43、层包装容器有严重的损坏，等等。另一方面，这些包装应该能经受住野蛮处理和通过机械消除、物品分捡人、搬运工,等等。3、传染性物质的包装 A.这个物品包装有两种说明，依赖于运送的体积。1.体积不超过 50ml：a)这物品应该被放在一个安全封闭的地方，防水管、小瓶、安瓿放在运送的内层包装容器中。b)内层包装容器应被放在防水容器内。c)几种内层包装容器能被放在一个单一的外层容器中，内层包装容器的总量不超过 50ml。d)在内层包装容器和外层容器之间的顶部，底部和四周放入能吸收的物品。必须有足够多能吸收的物品去吸收内层包装容器内的全部内容物（假使打碎或泄漏）。e)每一套内层和外层容器被放在一个硬质容器内，

44、纸板、木头、或有同样承受力的其他物品。2.体积大于 50 ml：这些大体积物品的打包必须遵守所有前述的要求，但有例外：a)震动能吸收的物质,至少与在内层和外层容器中的能吸收物品的体积相同，应被放在内层容器和外层容器的顶部、底部和四周。b)单一的内层容器不应含有超过 1,000 ml 的物品。但两个或更多的内层容器，若它们的体积不超过 1,000 ml，可以被放在一个单一的中层次要容器中。c)最大数量的物品可以被附在一个不超过4,000 ml的单一外部运送容器中。B.如果用干冰，则它必须被放在外层容器和外部硬质包装容器之间和震动能吸收物品处以使外层容器不可能因为干冰易升华而在外部硬质包装容器上松

45、开。C.在外部硬质包装容器上，应有一个特殊标志。这个标志应显示了这个包装含有病理成分和任何人要留意包装如有损坏或内容物泄漏必须电话告知有关部门。4、传染性物质的出口和准入 传染性物质的出口和准入可以从卫生部申请。七、移液管和移液辅助器的使用 1、应使用移液辅助器，严禁用口吸取。2、所有移液管应带有棉塞以减少移液器具的污染。3、不能向含有感染性物质的溶液中吹入气体。4、感染性物质不能使用移液管反复吹吸混合。5、不能将液体从移液管内用力吹出。6、刻度对应（Mark-to-mark）移液管不需要排出最后一滴液体，因此最好使用这种移液管。7、污染的移液管应该完全浸泡在盛有适当消毒液的防碎容器中。移液管

46、应当在消毒剂中浸泡适当时间后再进行处理。8、盛放废弃移液管的容器不能放在外面，应当放在生物安全柜内。9、有固定皮下注射针头的注射器不能够用于移液。10、在打开隔膜封口的瓶子时，应使用可以使用移液管的工具，而避免使用皮下注射针头注射器。11、为了避免感染性物质从移液管中滴出而扩散，在工作台面应当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，使用后将其按感染性废弃物处理。八、员工避免感染 1、避免感染性物质的扩散 1、为了避免被接种物洒落，微生物接种环的直径应为 23mm 并完全封闭，柄的长度应小于 6cm 以减小抖动。2、使用封闭式微型电加热器消毒接种环，能够避免在酒精灯的明火上加热所引起的感染性物质

47、爆溅。最好使用不需要再进行消毒的一次性接种环。3、干燥痰液标本时要注意避免生成气溶胶。4、准备高压灭菌和或将被处理的废弃标本和培养物应当放置在防漏的容器内（如实验室废弃物袋）。在丢弃到废弃物盛器中以前，顶部要固定好（如采用高压灭菌胶带）。5、在每一阶段工作结束后，必须采用适当的消毒剂清除工作区的污染。2、避免感染性物质的食入以及与皮肤和眼睛的接触 1、微生物操作中释放的较大粒子和液滴（直径大于 5m）会迅速沉降到工作台面和操作者的手上。实验室人员在操作时应戴一次性手套，并避免触摸口、眼及面部。2、不能在实验室内饮食和储存食品。3、在实验室里时，嘴里不应有东西钢笔、铅笔、口香糖。4、不应在实验室

48、化妆。5、在所有可能产生潜在感染性物质喷溅的操作过程中，操作人员应将面部、口和眼遮住或采取其他防护措施。3、避免感染性物质的注入 1、通过认真练习和仔细操作，可以避免破损玻璃器皿的刺伤所引起的接种感染。应尽可能用塑料制品代替玻璃制品。2、锐器损伤（如通过皮下注射针头、巴斯德玻璃吸管以及破碎的玻璃）可能引起意外注入感染性物质。3、以下两点可以减少针刺损伤：（a）减少使用注射器和针头（可用一些简单的工具来打开瓶塞，然后使用吸管取样而不用注射器和针头）；（b）在必须使用注射器和针头时，采用锐器安全装置。4、不要重新给用过的注射器针头戴护套。一次性物品应丢弃在防耐穿透的带盖容器中。5、应当用巴斯德塑料

49、吸管代替玻璃吸管。九、血清的分离 1、只有经过严格培训的人员才能进行这项工作。2、操作时应戴手套以及眼睛和黏膜的保护装置。3、规范的实验操作技术可以避免或尽量减少喷溅和气溶胶的产生。血液和血清应当小心吸取，而不能倾倒。严禁用口吸液。4、移液管使用后应完全浸入适当的消毒液中。移液管应在消毒液中浸泡适当的时间，然后再丢弃或灭菌清洗后重复使用。5、带有血凝块等的废弃标本管，在加盖后应当放在适当的防漏容器内高压灭菌和或焚烧。6、应备有适当的消毒剂来清洗喷溅和溢出标本。十、离心机的使用 1、在使用实验室离心机时，仪器良好的机械性能是保障微生物安全的前提条件。2、应按照操作手册来操作离心机。3、离心机放置

50、的高度应当使小个子工作人员也能够看到离心机内部，以正确放置十字轴和离心桶。4、离心管和盛放离心标本的容器应当由厚壁玻璃制成，或最好为塑料制品，并且在使用前应检查是否破损。5、用于离心的试管和标本容器应当始终牢固盖紧（最好使用螺旋盖）。6、离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。7、离心桶和十字轴应按重量配对，并在装载离心管后正确平衡。8、操作指南中应给出液面距离心管管口需要留出的空间大小。9、空离心桶应当用蒸馏水或乙醇（异丙醇，70）来平衡。盐溶液或次氯酸盐溶液对金属具有腐蚀作用，因此不能使用。10、对于危险度 3 级和 4 级的微生物，必须使用可封口的离心桶（安全杯）。11、当