专题1基因工程复习课件课件 高二生物人教版选修三.pptx
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1、2023/2/11不育不育设想设想一一一一能否让禾本科的能否让禾本科的植物植物也能够也能够固固定空定空气中的气中的氮氮?能否让能否让细菌细菌“吐出吐出”蚕丝蚕丝?设想设想二二二二能否让能否让微生物产生微生物产生出出人的胰岛素、人的胰岛素、干扰素等干扰素等珍贵的珍贵的药物药物?设想三设想三 经过多年的努力,科学家于经过多年的努力,科学家于2020世纪世纪7070年年代创立了可以定向改造生物的新技术代创立了可以定向改造生物的新技术 基因工程基因工程。异想天开?异想天开?基因工程 按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外DNA重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新
2、的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,因此又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。基因工程的基因工程的别名别名操作环境操作环境操作对象操作对象操作水平操作水平基本过程基本过程结果结果基因拼接技术或基因拼接技术或DNA重组技术重组技术生物体外生物体外基因(基因(DNA)DNA分子水平分子水平剪切剪切拼接拼接导入导入表达表达得到人类需要的基因产物,得到人类需要的基因产物,克服远缘杂交克服远缘杂交不亲和的障碍,定向改造生物的遗传性状不亲和的障碍,定向改造生物的遗传性状基基因因操操作作的的基基本本步步骤骤示示意意图图提取目的基因提取目的基因目的基因与载体目的基因与载体结合
3、结合将目的基因导入将目的基因导入受体细胞受体细胞目的基因的检测目的基因的检测与鉴定与鉴定实现DNA重组技术需要的基本工具1、准确切割、准确切割DNA的的“手术刀手术刀”2、将、将DNA片段再连接起来的片段再连接起来的“缝合针缝合针”3、将体外重组好的、将体外重组好的DNA导入受体细胞的导入受体细胞的“运输工具运输工具”苏云金芽孢杆菌(有抗虫特性)苏云金芽孢杆菌(有抗虫特性)抗虫基因抗虫基因普通棉花(无抗虫特性)普通棉花(无抗虫特性)棉花细胞(含抗虫基因)棉花细胞(含抗虫基因)导入导入与运载体与运载体DNA拼接拼接棉花植株(有抗虫特性)棉花植株(有抗虫特性)关键步骤一:关键步骤一:抗虫基因从苏云
4、金芽孢杆菌细胞内提取抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取关键步骤一的工具:关键步骤一的工具:基因的剪刀基因的剪刀限制性内切酶限制性内切酶一、基因操作的工具一、基因操作的工具苏云金芽孢杆菌(有抗虫特性)苏云金芽孢杆菌(有抗虫特性)抗虫基因抗虫基因普通棉花(无抗虫特性)普通棉花(无抗虫特性)棉花细胞(含抗虫基因)棉花细胞(含抗虫基因)导入导入与运载体与运载体DNA拼接拼接棉花植株(有抗虫特性)棉花植株(有抗虫特性)关键步骤二:关键步骤二:抗虫基因与运载体抗虫基因与运载体DNA连接连接关键步骤二的工具:关键步骤二的工具:基因的针线基因的针线DNA连接酶连接酶一、基因操作的工具一、基因操作的工具一、基因
5、操作的工具一、基因操作的工具苏云金芽孢杆菌(有抗虫特性)苏云金芽孢杆菌(有抗虫特性)抗虫基因抗虫基因普通棉花(无抗虫特性)普通棉花(无抗虫特性)棉花细胞(含抗虫基因)棉花细胞(含抗虫基因)导入导入与运载体与运载体DNA拼接拼接棉花植株(有抗虫特性)棉花植株(有抗虫特性)关键步骤三:关键步骤三:抗虫基因进入棉细胞抗虫基因进入棉细胞关键步骤三的工具:关键步骤三的工具:基因的运输工具基因的运输工具运载体运载体1 1.“基因剪刀基因剪刀”一、基因操作的工具一、基因操作的工具指指限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶,只能识别,只能识别DNADNA分分子中子中特定的核苷酸序列特定的核苷酸序列,且只能在每,且只
6、能在每一条链中特定的部位进行切割。一条链中特定的部位进行切割。由于这种切割作用是在由于这种切割作用是在DNADNA分子内分子内部进行的,故名限制性核酸内切酶部进行的,故名限制性核酸内切酶(简简称称限制酶限制酶)。来源:主要从原核细胞中分离纯化而来。特异性,即识别特定核苷酸序列,切割特定切点。特异性,即识别特定核苷酸序列,切割特定切点。作用:使特定DNA分子,特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。结果:产生黏性末端或平末端。结果:产生黏性末端或平末端。(1)黏性末端:错位切,切下后的两端形成一种回文式的单链末端(回文序列),就是在切割部位,一条链正向读的碱基顺序,与另一条链反向读的顺序完全一
7、致(2)平末端:平切,在两条链的特定序列的相同部位切割,形成一个无黏性末端的平口;CTTAAG AATTCG黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端分布与举例:分布与举例:主要在微生物中主要在微生物中。例如:大肠杆菌的一种限制酶能识别例如:大肠杆菌的一种限制酶能识别GAATTC序列,序列,并在并在G和和A之间切开。之间切开。被同一种限制酶切断的被同一种限制酶切断的DNADNA具有相同的具有相同的黏性末端黏性末端ACGTGCTTAAAATTCCCATTGGGTAAGGCATCTTAAAATTCCGTAGGGCATCTTAAAATTCCGTAG 被同一种限制酶切断的几个被同一种限制酶切断的几个DNADNA
8、是否具有是否具有相同的黏性末端?相同的黏性末端?思考思考:CTTCATGGAAGTACTTAAGGGATTAATTCCCTAAACGTGCTTAAAATTCCCATTGGGTAAGGCATCTTAAAATTCCGTAGGGCATCTTAAAATTCCGTAG目的基因目的基因思考思考:要想要想获得某个目的基因必须要获得某个目的基因必须要用限制酶切几个切口用限制酶切几个切口?可产生几个黏性?可产生几个黏性末端?一个目的基因有几个黏性末端?末端?一个目的基因有几个黏性末端?要切两个切口,产生四个黏性末端,两个。要切两个切口,产生四个黏性末端,两个。思考思考:含有某种限制酶的细胞,会不会含有某种限制酶
9、的细胞,会不会切割自身的切割自身的DNADNA呢?呢?含有某种限制酶的细胞,其含有某种限制酶的细胞,其DNADNA分子中或者分子中或者不具备这种限制酶的识别序列,或者该序列不具备这种限制酶的识别序列,或者该序列被甲基化被甲基化思考思考:这类酶存在于原核生物中的作用是什么?原核生物容易受到自然界外源原核生物容易受到自然界外源DNADNA入侵,入侵,但是在长期的进化过程中形成了一套完但是在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制,善的防御机制,当外源当外源DNADNA侵入时,会侵入时,会利用限制酶将外源利用限制酶将外源DNADNA切割掉,以保证切割掉,以保证自身安全。自身安全。被同一种限制酶切断的
10、几个被同一种限制酶切断的几个DNADNA具有具有相同相同的黏的黏性末端,碱基能够通过互补进行配对。性末端,碱基能够通过互补进行配对。CTTCATGGAAGTACTTAAGGGATTAATTCCCTAAACGTGCTTAAAATTCCCATTGGGTAAGGCATCTTAAAATTCCGTAGGGCATCTTAAAATTCCGTAG目的基因目的基因 黏性末端的碱基之间形成氢键,这黏性末端的碱基之间形成氢键,这样就真的合成重组的样就真的合成重组的DNADNA分子了分子了?运载体的基因运载体的基因2 2.“基因针线基因针线”DNADNA连接酶连接酶作用:将双链DNA片段连接起来,恢复被限制酶切开的两
11、个核苷酸之间的磷酸二酯键。CTTCATGGAAGTACTTAAGGGATTAATTCCCTAAGGCATCTTAAAATTCCGTAG连连接接酶酶连接的部位:连接的部位:生成磷酸二酯键生成磷酸二酯键一、基因操作的工具一、基因操作的工具分类:按来源分为EcoliDNA连接酶和T4DNA连接酶。a.EcoliDNA连接酶:从大肠杆菌中分离得到的,只能连接互补的黏性末端,不能连接平末端。b.T4DNA连接酶:从T4噬菌体中分离出来的,既能连接互补的黏性末端,又能连接平末端,但连接平末端的效率比较低。思考思考:用用DNADNA连接酶连接两个相同的连接酶连接两个相同的黏性未端要连接几个磷酸二酯键?黏性未
12、端要连接几个磷酸二酯键?2 2个个思考思考:DNADNA连接酶和连接酶和DNADNA聚合酶有什么聚合酶有什么联系与区别联系与区别?3.3.基因的运输工具基因的运输工具运载体运载体(1)(1)作用:作用:将外源基因送入受体将外源基因送入受体细胞细胞(2)(2)种类:种类:质粒质粒、噬菌体和动、噬菌体和动、植物病毒等植物病毒等一、基因操作的工具一、基因操作的工具要将外源基因送入受体细胞,还需要有专门的运输工具,就是运载体。质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物中,是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子。注意:质粒的存在与否对宿主细胞注意:质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性的作用。生存没有
13、决定性的作用。思考思考:运载体具备的条件载体具备的条件?对受体细胞无害,不影响受体细胞正常的生命活动。对受体细胞无害,不影响受体细胞正常的生命活动。注意:天然质粒等需要经人工改造后再使用。注意:天然质粒等需要经人工改造后再使用。能在受体细胞中复制并稳定保存,否则可能会使重组能在受体细胞中复制并稳定保存,否则可能会使重组DNA丢失。丢失。具有标记基因,供重组具有标记基因,供重组DNA进行筛选和鉴别。进行筛选和鉴别。一个或多个限制酶切点,供外源基因插入其中。这些一个或多个限制酶切点,供外源基因插入其中。这些供目的基因插入的限制酶切点所处位置必须是在质粒本供目的基因插入的限制酶切点所处位置必须是在质
14、粒本身需要的基因之外,这样才不至于因目的基因身需要的基因之外,这样才不至于因目的基因(外源基因外源基因)插入而失活。插入而失活。大小适合,便于操作大小适合,便于操作二、基因工程的基本程序二、基因工程的基本程序质粒质粒:环状:环状DNADNA分子,它的分子量较小,可以自由地进入细菌分子,它的分子量较小,可以自由地进入细菌细胞,还能独立自主地复制,具有一套与细胞核染色体相对独细胞,还能独立自主地复制,具有一套与细胞核染色体相对独立的遗传信息。立的遗传信息。基因工程的基本程序是基因工程的基本程序是:(:(1 1)获得目的基因(外源)获得目的基因(外源DNADNA片段)片段)(2 2)将目的基因连接到
15、载体上,得杂化载体;()将目的基因连接到载体上,得杂化载体;(3 3)将杂化载体)将杂化载体(环状的(环状的DNADNA)引入宿主细胞(受体细胞),使目的基因及载体上)引入宿主细胞(受体细胞),使目的基因及载体上其它基因得以转录和翻译。其它基因得以转录和翻译。载体质粒载体质粒外源外源DNADNA片段片段外源外源DNADNA插入插入剪切剪切引入宿引入宿主细胞主细胞选出含有重选出含有重组组DNADNA的细的细胞扩增胞扩增abbAAb从供体细胞的从供体细胞的DNA中中直接分离基因直接分离基因方法:鸟枪法方法:鸟枪法(1)鸟枪法的过程:)鸟枪法的过程:(一)提取目的基因的途径(一)提取目的基因的途径反
16、转录法反转录法(2)反转录法的过程:)反转录法的过程:根据已知氨基酸序列根据已知氨基酸序列合成合成DNA人工合成基因(真核细胞)人工合成基因(真核细胞)运载体运载体供体细胞中供体细胞中DNA许多许多DNA片段片段限制酶限制酶载入载入导入导入受体细胞受体细胞产生特定性状产生特定性状目的基因目的基因分离分离外源外源DNA 扩增扩增目的基因的目的基因的mRNA单链单链DNA反转录反转录双链双链DNA(即目的基因)(即目的基因)合成合成(3)根据已知氨基酸序列合成)根据已知氨基酸序列合成DNA的过程的过程蛋白质的氨基酸序列蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列结构基因的
17、核苷酸序列目的基因目的基因推测推测化学合成化学合成推测推测DNA合成仪合成仪另一条途径是另一条途径是根据已知的蛋白质的氨基酸序列,推根据已知的蛋白质的氨基酸序列,推测出相应的信使测出相应的信使RNARNA序列序列,然后,然后按照碱基互补配对按照碱基互补配对原则,推测出它的结构基因的核苷酸序列原则,推测出它的结构基因的核苷酸序列,再通过再通过化学方法,以单核苷酸为原料合成目的基因化学方法,以单核苷酸为原料合成目的基因。如人。如人的血红蛋白基因,胰岛素基因等就可以通过人工合的血红蛋白基因,胰岛素基因等就可以通过人工合成基因的方法获得。成基因的方法获得。目前人工合成基因的方法目前人工合成基因的方法主
18、要有两条途径。一条途主要有两条途径。一条途径是径是以目的基因转录成的以目的基因转录成的信使信使RNARNA为模板为模板,反转录反转录成互补的单链成互补的单链DNADNA,然后,然后在酶的作用下合成双链在酶的作用下合成双链DNADNA,从而获得所需要的从而获得所需要的基因。基因。基因的运输工具基因的运输工具运载体运载体1.作用:作用:2.具备的条件具备的条件能在宿主细胞内复制并稳定地保存能在宿主细胞内复制并稳定地保存具有多个限制酶切点具有多个限制酶切点具有某些标记基因具有某些标记基因3.种类种类:4.质粒质粒的特点的特点细胞染色体外能自主复制的小型环状细胞染色体外能自主复制的小型环状DNA分子分
19、子质粒是基因工程中最常用的运载体质粒是基因工程中最常用的运载体最常用的质粒是大肠杆菌的质粒最常用的质粒是大肠杆菌的质粒存在于许多细菌及酵母菌等生物中存在于许多细菌及酵母菌等生物中质粒的存在对宿主细胞无影响质粒的存在对宿主细胞无影响质粒的复制只能在宿主细胞内完成质粒的复制只能在宿主细胞内完成质粒、噬菌体和动植物病毒质粒、噬菌体和动植物病毒将外源基因送入受体细胞将外源基因送入受体细胞基基因因操操作作的的基基本本步步骤骤示示意意图图 例题解析例题解析1 1、农业上大量使用化肥存在许多负面影响,农业上大量使用化肥存在许多负面影响,“生物固氮生物固氮”已已成为一项重要研究课题,实验证明,生物固氮是某些微
20、生物(如成为一项重要研究课题,实验证明,生物固氮是某些微生物(如根瘤菌、蓝藻等)将空气中的根瘤菌、蓝藻等)将空气中的N N2 2固定为固定为NHNH3 3的过程。的过程。(1 1)与人工合成)与人工合成NHNH3 3所需的高温、高压条件相比,生物固氮的顺所需的高温、高压条件相比,生物固氮的顺利进行是因为根瘤菌、蓝藻体内含有特定的利进行是因为根瘤菌、蓝藻体内含有特定的 ,这类物质,这类物质的化学本质是的化学本质是 。(2 2)人们正在着力研究转基因固氮植物(如固氮水稻、固氮小)人们正在着力研究转基因固氮植物(如固氮水稻、固氮小麦等),某科学家将根瘤菌、细胞中的固氮基因,通过基因工程麦等),某科学
21、家将根瘤菌、细胞中的固氮基因,通过基因工程方法转移到水稻植株细胞中,经检测,转基因水稻具备了固氮功方法转移到水稻植株细胞中,经检测,转基因水稻具备了固氮功能。据上述材料分析:能。据上述材料分析:固氮基因已经整合到水稻细胞的固氮基因已经整合到水稻细胞的 中。中。写出水稻细胞中固氮基因得到表达的反应式。写出水稻细胞中固氮基因得到表达的反应式。酶酶蛋白质蛋白质DNADNA 转录转录 翻译翻译 DNADNA(固氮基因)固氮基因)RNA RNA 蛋白质蛋白质2 2、干扰素是治疗癌症的重要物质,人血液中每升、干扰素是治疗癌症的重要物质,人血液中每升只能提取只能提取0.05g0.05g干扰素,因而其价格昂贵
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