乙肝HIV梅毒检测技术ppt课件.pptx

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1、第 1 页乙肝、乙肝、HIV、梅毒、梅毒实验室室检验技技术甘肃省妇幼保健院 临床检验中心：赵翠生第 2 页综合合产前前检查服服务+检测孕产妇参加产前检查服务检测前信息HBV 检测梅毒检测HIV检测全血细胞计数和其它检测取血样2.第 3 页 梅毒的梅毒的实验室室检测3.第 4 页梅毒梅毒病原体为梅毒螺旋体，属于密螺旋体属，苍白密螺旋体苍白亚种(Treponema pallidum subspecies pallidum)苍白亚种 梅毒 苍白螺旋体 地方亚种 地方性梅毒 极细亚种 雅司病密螺旋体属 品他螺旋体 品他病.第 5 页梅毒血清学梅毒血清学试验基本基本实验室室设备检方法方法检测样本本类型型

2、必要必要设备血清血清血血浆全血全血RPR/TRUSTRPR/TRUST水平旋转仪TPPATPPA震荡仪ELISAELISA酶标仪、洗板机POCTPOCT检测无需特殊设备5.第 6 页筛查时间梅毒梅毒检测方法方法非梅毒螺旋体抗原血清学非梅毒螺旋体抗原血清学试验（RPRRPR或TRUSTTRUST检测）梅毒螺旋体抗原血清学梅毒螺旋体抗原血清学试验（TPPATPPA、ELISAELISA或梅毒快速或梅毒快速检测）检测时间第一次第一次产检（孕早期）（孕早期）或下一次产检时如有必要，孕晚期再次检测此前无检测结果，则在分娩时检测6.第 7 页梅毒的梅毒的实验室室检测方法方法显微微镜检测法（法（诊断技断技术

3、）：）：（1）暗视野显微镜检查 （2）镀银染色检查血清学血清学检测法法（筛查技技术）非梅毒螺旋体抗原血清试验：检测非特异性抗体非特异性抗体：抗心磷脂抗体、即非特异 性抗体、反应素 梅毒螺旋体抗原血清试验：检测特异性梅毒螺旋体抗体特异性梅毒螺旋体抗体 .第 8 页l 梅毒早期诊断的依据之一断的依据之一是病原学检测，即在组织或分泌物中检测到苍白螺旋体白螺旋体：暗视野显微镜 镀银染色镜检 梅毒梅毒检测技技术8.第 9 页u 非梅毒螺旋体抗原血清学非梅毒螺旋体抗原血清学试验 RPR（快速血浆反应素环状卡片试验）TRUST（甲苯胺红不加热血清试验）VDRL（性病研究实验室试验）u梅毒螺旋体抗原血清学梅毒

4、螺旋体抗原血清学试验 TPPA（梅毒螺旋体颗粒凝集试验）ELISA（酶联免疫吸附试验）POCT（胶体金技术，快速检测、一站式检测）梅毒梅毒检测技技术9.第 10 页围产期梅毒期梅毒检测方法特点方法特点l 用于诊断产检、临产及分娩的孕产妇是否感染梅毒l梅毒血清学检测筛查试验应具有的特点具有的特点具有较高的灵敏度高的灵敏度和特异度特异度操作简单、容易获得、便宜尽可能在“当日”获得结果10.第 11 页非梅毒螺旋体抗原血清学非梅毒螺旋体抗原血清学试验 梅毒螺旋体感染可产生非特异性抗体非特异性抗体（非梅毒螺旋体抗体）非梅毒螺旋体抗体又称之为反应素，是抗心磷脂等抗原的抗体 随菌体和宿主细胞的类脂质抗原量

5、升高 除梅毒外，其他医学情况会造成非梅毒螺旋体抗原血清学试验假阳性假阳性结果，包括结核、疟疾、妊娠和风湿关节炎、狼疮及硬皮病等自体免疫性疾病自体免疫性疾病11.第 12 页非梅毒螺旋体抗原血清学非梅毒螺旋体抗原血清学试验的特点的特点非梅毒螺旋体抗原血清学非梅毒螺旋体抗原血清学试验：快速、简便、便宜 敏感性和特异性较高 硬下疳后1-2周变为阳性 可用于 筛查样本 评估估对治治疗的反的反应 鉴别复燃复燃还是再次感染是再次感染12.第 13 页确保非梅毒螺旋体抗原血清学确保非梅毒螺旋体抗原血清学试验质量的关量的关键点点1.按照标准操作程序（SOPs）进行操作2.2.推荐使用推荐使用评价特性价特性较好

6、的好的试剂*3.按照统一的标准报告结果4.4.开展开展实验室室质控（控（QCQC）和参加室）和参加室间能力能力验证（PTPT）*由中国疾病预防控制中心性病中心国家参比实验室提供13.第 14 页非梅毒螺旋体抗原血清学非梅毒螺旋体抗原血清学试验抗体滴度通常与疾病活抗体滴度通常与疾病活动度有关度有关治疗后（可能几个月）非梅毒螺旋体抗原血清学试验通常转变为不反不反应如果用同一种实验，相同试验滴度4 4倍倍变化化（如从1:16下降到1:4或从1:8上升到1:32）为临床床显著著变化化有些病人，抗体滴度可始终处于较低水平，有时可持续终生（血清固定血清固定）注意：注意：病人血清学监测应在同一个实验室使用同

7、一种检测方法（RPR、TRUST）进行连续多次检测；RPRRPR和和TRUSTTRUST方法均有效，但方法均有效，但检测的滴度的滴度结果不能直接果不能直接进行比行比较14.第 15 页治治疗后非梅毒螺旋体抗原血清学后非梅毒螺旋体抗原血清学试验抗体滴度抗体滴度变化的化的临床意床意义一期梅毒和二期梅毒：成功治疗，抗体滴度应3个月后下降2倍6个月后下降4倍 一期梅毒：1年后抗体滴度转阴 二期梅毒：2年后抗体滴度转阴晚期梅毒：治疗后抗体滴度缓慢下降 50%的病人2年后抗体滴度仍为阳性15.第 16 页梅毒螺旋体抗原血清学梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学梅毒螺旋体抗原血清学试验 检测梅毒螺旋

8、体抗原特异性抗体 可用于确确认非梅毒螺旋体抗原血清学非梅毒螺旋体抗原血清学试验的阳性的阳性结果果，排除其假阳性，排除其假阳性 阳性阳性结果可持果可持续存在，即使治存在，即使治疗后仍可后仍可为阳性阳性。*梅毒螺旋体抗原血清学试验与疾病的活与疾病的活动度无关度无关，不能不能用于用于鉴别现症感染症感染还是既往感染，也不能用于是既往感染，也不能用于判断判断疗效效*一期梅毒治一期梅毒治疗病人中，病人中，15%-25%15%-25%可在可在2-32-3年后年后转为血清学阴性血清学阴性16.第 17 页妊娠期梅毒妊娠期梅毒检测p 所有孕所有孕产妇应进行梅毒筛查检测：孕期尽早孕期尽早（如果可能，在孕早期时）以

9、及 如果在分娩前/临产时没有筛查检测结果，在分娩时检测p 筛查检测可应用以下任何一类方法：非梅毒螺旋体抗原血清学试验（滴度）或 梅毒螺旋体抗原血清学试验p 所有所有筛查检测结果阳性的孕果阳性的孕产妇都都应用另一用另一类检测方法方法进行复行复检确确认是否是否为现症症 梅毒梅毒p 所有产妇及所生婴儿出院前，产妇梅毒检测结果都应记录在病历中，以确保需要时给予治疗17.第 18 页孕孕产妇梅毒梅毒检测流程流程非梅毒螺旋体抗原血清学非梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学梅毒螺旋体抗原血清学试验孕孕产妇治治疗后，随后，随访监测非梅毒螺旋非梅毒螺旋体抗原血清学体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学非

10、梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学梅毒螺旋体抗原血清学试验每3个月个月进行非梅毒螺旋体抗原血清行非梅毒螺旋体抗原血清学学试验如果需要如果需要进行治行治疗报告：告：非梅毒螺旋体抗原血清学非梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性阴性报告：两种两种检测均阳性均阳性治治疗病人病人报告：告：梅毒螺旋体抗原血清梅毒螺旋体抗原血清学学试验阴性阴性报告：告：非梅毒螺旋体抗原血清学非梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性阳性梅毒螺旋体抗原血清学梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性阴性报告：告：梅毒螺旋体抗原血清学梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性阳性非梅毒螺旋体抗原血清学非梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性阴性阳性反应阴性反应阴性反应阳性反

11、应阳性反应或阴性反应阳性反应阴性反应阳性反应.第 19 页HIVHIV感染病人的梅毒血清学感染病人的梅毒血清学试验一些HIV感染病人，其梅毒血清学试验结果不典型，包括滴度超常高或超常低滴度不断变动如果临床表现提示早期梅毒，而血清学试验结果与此不一致，考虑病灶活检 或暗视野显微镜检查注意：注意：对于大多数HIV感染病人而言，梅毒血清学试验是诊断梅毒感染、随访观察疗效准确、可靠的检测方法19.第 20 页梅毒血清学梅毒血清学检测结果的解果的解释非梅毒螺旋体非梅毒螺旋体试验梅毒螺旋体梅毒螺旋体试验临床参考意床参考意义+-RPR假阳性 考虑其他医学状况*+现症梅毒症梅毒-+既往感染既往感染或极早期梅毒

12、极早期梅毒-排除梅毒感染由于免疫缺陷，也可发生于艾滋病晚期*包括结核、疟疾、风湿性关节炎或妊娠。20.第 21 页 暴露暴露婴儿的梅毒儿的梅毒检测21.第 22 页梅毒暴露梅毒暴露婴儿先天梅毒儿先天梅毒检测 母体非梅毒螺旋体和梅毒螺旋体IgGIgG抗体可通抗体可通过胎胎盘，所以，所以应谨慎地慎地对婴儿梅毒血儿梅毒血清学清学试验结果果进行解行解释 婴儿需要接受预防性治疗还是规范的抗梅毒治疗应根据：母亲确诊梅毒感染母亲治疗情况婴儿梅毒感染的临床表现、实验室或放射线检查结果母亲及婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验滴度水平的比较（尽可能在同一个实验室使用相同的试验方法）22.第 23 页先天梅毒的先天梅毒

13、的诊断断先天梅毒的先天梅毒的诊断断标准：准：梅毒暴露梅毒暴露婴儿具有以下条件之一：儿具有以下条件之一：任何先天梅毒临床表现暗视野显微镜检梅毒螺旋体阳性（+）梅毒螺旋体IgM抗体阳性*RPR/TRUST检测阳性，滴度比母亲分娩前最近一次滴度高4倍及以上RPR/TRUST监测随访中，任何一次滴度不下降或反而上升满1818月月龄后，后，TPPATPPA检测阳性阳性*IgM抗体反映近期感染，可帮助鉴别婴儿先天梅毒，但我国尚不能广泛开展23.第 24 页梅毒暴露梅毒暴露婴儿的儿的评估估梅毒暴露婴儿：l婴儿RPR检测 婴儿RPR检测不能使用脐带血，因其易被母体血液 污染，从而出现假阳性结果l检查先天梅毒临

14、床表现：非免疫性水肿、黄疸、肝脾大、鼻炎、皮疹、末端肢体假性麻痹l对可疑病灶或体液进行暗视野显微镜检查24.第 25 页先天梅毒先天梅毒检测流程流程 婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验定量检测梅毒暴露婴儿母亲、婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验定量检测（应同时进行梅毒螺旋体抗原血清学试验，用于随访诊断）组织或分泌物暗视野显微镜检，有条件进行IgM抗体检测报告母亲、婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验检测滴度水平滴度水平报告婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验检测滴度水滴度水平平报告暗视野显微镜检或IgM抗体检测结果阳性阴性没有梅毒感染的症状有梅毒感染的症状25.第 26 页梅毒梅毒检测小小结p早期梅毒早期梅毒诊断

15、可根据在断可根据在组织或或分泌物分泌物样本中通本中通过显微微检测到到苍白螺旋体而白螺旋体而诊断断p应用梅毒血清学用梅毒血清学试验进行梅毒行梅毒筛查非梅毒螺旋体抗原血清学非梅毒螺旋体抗原血清学试验检测梅毒感染过程中产生的非特异抗体。滴度通常与滴度通常与疾病的活疾病的活动度有关，因此可用于度有关，因此可用于监测对治治疗的反的反应梅毒螺旋体抗原血清学梅毒螺旋体抗原血清学试验检测对抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体，可用于确确认临床床诊断或非梅毒螺旋体抗原血清学断或非梅毒螺旋体抗原血清学试验的阳性的阳性结果，可反映任何果，可反映任何阶段的梅毒暴露段的梅毒暴露p先天梅毒的先天梅毒的诊断复断复杂，应根据：根据：

16、1.母亲梅毒感染状态2.母亲梅毒治疗情况3.婴儿梅毒感染的临床表现、实验室或X线检查结果4.母亲、婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验滴度水平的比较5.随访26.第 27 页HIVHIV和和HBVHBV的的实验室室检测27第 28 页HIVHIV和和HBVHBV筛查检测p筛查检测n 用于诊断产检、临产及分娩的孕产妇是否感染HIV和HBVHIV抗体检测乙肝表面抗原（HBsAg）检测n 筛查检测应具有较高的灵敏度和特异度操作简单、容易获得、便宜尽可能在“当日”获得结果28.第 29 页何何时使用何种使用何种检测？HIVHBV检测方法方法 HIV HIV快速快速检测 和/或 ELISA HBsAg HBs

17、Ag检测 如果有条件，其他乙肝 标记物检测检测时间第一次第一次产检（孕早期）（孕早期）或下一次产检时此前未检测，分娩时应检测第一次第一次产检（孕早期）（孕早期）或下一次产检时此前未检测，分娩时应检测29.第 30 页 HIVHIV试验和和检测30.第 31 页HIVHIV检测：抗体：抗体检测p 一个人感染了HIV病毒后，体内将产生特异性抗体 对抗HIV病毒*p HIV抗体通常在感染后4 6周出现，但也有时也会 在感染后3个月才出现p 从感染HIV病毒到出现特异的HIV抗体的一段时期 称为“窗口期”标准的准的HIVHIV诊断断检测是是识别HIVHIV抗体抗体*注意：注意：*与其他大多数疾病不同，

18、与其他大多数疾病不同，HIVHIV抗体没有保抗体没有保护性作用。性作用。31.第 32 页HIVHIV抗体抗体检测类型型快速快速检测ELISAELISA免疫印迹（免疫印迹（WBWB）准确性准确性灵敏度灵敏度特异度特异度非常高非常高几乎几乎100%100%99%99%非常高非常高几乎几乎100%100%99%99%因因为特异度极高，用于特异度极高，用于检测结果不确定果不确定样本的本的确确认试验成本成本+结果果报告告时间11小小时33天天1010天天需要需要专门实验室室设备否否是是是是对检验人人员技技术要求要求高高否否是是是是32.第 33 页HIVHIV检测：病毒核酸：病毒核酸检测这些些检测检测

19、HIV感染者血液或血浆中的病毒必须由经过专门培训的实验室人员操作实验室需有资质，并配备专门设备昂贵，不是针对所有人进行的常规检测方法PCRPCR（多聚（多聚酶连反反应法）法）检测HIV DNAHIV DNA定性检测血液中是否含有病毒，用于诊断断1818月月龄内内婴儿是否感染儿是否感染HIVHIVHIV RNAHIV RNA定量检测病毒病毒载量量，用于监测对抗病毒治抗病毒治疗的反的反应33.第 34 页HIVHIV筛查检测结果的含果的含义HIV筛查检测结果“阴性阴性(-)(-)”：受受检者没有者没有 感染HIV或者或者受检者已经感染了HIV，但处于窗口期：3个月后再次进行检测HIV筛查检测结果“

20、阳性阳性(+)(+)”：病人可能可能已经感染HIV,但应再次重复检测、另一种方法复检或确诊检测34.第 35 页HIVHIV确确认试验结果的含果的含义l 如果筛查检测结果阳性阳性，两次重复检测中1次或2次检测结果为阳性阳性，需要进行确认试验l 免疫印迹法（WB）确认试验结果：-阳性，阳性，病人确确认感染HIV阴性，阴性，受受检者没有者没有感染HIV不确定，不确定，结果为“不确定”，受检者必须在4周后再次采血，重复前述所有步骤进行检测35.第 36 页中国中国预防艾滋病、梅毒和乙肝母防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播播HIVHIV检测流程流程在在产前前检查服服务中开展整合的中开展整合的检测咨咨询所采用

21、的所采用的HIVHIV检测流程流程36.第 37 页产时HIVHIV抗体抗体检测流程流程中国中国预防艾滋病、梅毒和乙肝母防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播播HIVHIV检测流程流程37.第 38 页儿童儿童HIV HIV 检测38.第 39 页HIVHIV暴露暴露婴儿和儿童的儿和儿童的HIVHIV抗体抗体检测 不是所有不是所有HIVHIV感染母感染母亲所生儿童都会感染所生儿童都会感染HIVHIV，但是如果，但是如果对12-1812-18个月以内个月以内的的婴儿儿进行行HIVHIV抗体抗体检测，所有，所有HIVHIV感染母感染母亲所生所生婴儿都有可能是儿都有可能是HIVHIV检测结果阳性。果阳性。即使

22、即使婴儿并没有感染儿并没有感染HIVHIV 由于母体自身抗体可通由于母体自身抗体可通过胎胎盘进入胎儿体内入胎儿体内母体传入的抗体可在婴儿体内持续18个月，所以所以12-1812-18月月龄以内的以内的婴儿不能儿不能应用抗体用抗体检测方法方法进行行诊断断。39.第 40 页婴儿感染早期儿感染早期诊断（断（EIDEID）HIVHIV病毒病毒检测（DNA-PCRDNA-PCR）HIVHIV病毒病毒检测（DNA-PCRDNA-PCR）检测细胞内的HIV病毒，能够检测低至110 拷贝前病毒DNA，以及 可在HIV暴露婴儿出生后出生后6 6周内周内诊断断HIVHIV感染感染 用于HIV暴露婴儿HIV感染早

23、期诊断（EID）40.第 41 页应用用DNA-PCRDNA-PCR方法方法进行行婴儿感染早期儿感染早期诊断（断（EIDEID）（）（1 1）如果可以开展HIV DNA-PCR检测，应用干血斑（DBS）在婴儿6 6周周龄时进行PCR检测如果PCR检测结果阳性阳性尽快再次采血再次进行DNA-PCR检测如果第二次PCR检测结果阳性阳性，婴儿确定感染HIV如果PCR检测结果阴性阴性婴儿出生后3个月再次进行PCR检测41.第 42 页应用用DNA-PCRDNA-PCR方法方法进行行婴儿感染早期儿感染早期诊断（断（EIDEID）（）（2 2）出生后出生后3 3个月个月再次进行HIV DNA-PCR检测如

24、果PCR检测结果阳性阳性尽快再次采血再次进行DNA-PCR检测如果第二次PCR检测结果阳性阳性，婴儿确定感染HIV如果PCR检测结果阴性，阴性，婴儿视为未感染HIV考虑在婴儿满12月龄时进行HIVHIV抗体抗体检测（如有必要，在18月龄时再次进行检测）检测结果阴性的果阴性的婴儿儿接受接受母乳喂养母乳喂养，必必须在停止母乳喂养后在停止母乳喂养后6 6周再次周再次进行行PCRPCR检测，以确保，以确保婴儿没有在母乳喂养期儿没有在母乳喂养期间感染感染HIVHIV。42.第 43 页婴儿儿HIVHIV感染早期感染早期诊断流程断流程43.第 44 页HIVHIV暴露暴露婴儿儿/儿童的儿童的HIVHIV抗

25、体抗体检测所有HIV感染母亲所生儿童，在出生后6周或3个月未接受早期感染检测者，应进行HIVHIV抗体抗体检测。检测时间：满1212月月龄 和满1818月月龄（必要时，见HIV抗体检测流程）出生后3个月（接受早期感染检测者）检测结果为阴性的儿童也应接受HIV抗体检测满18月龄HIV抗体检测阳性，可确认儿童HIV感染。44.第 45 页HIVHIV暴露儿童暴露儿童HIVHIV抗体抗体检测流程流程45.第 46 页HIVHIV感染的感染的实验室室监测46.第 47 页HIVHIV感染的感染的实验室室监测p实验室监测主要用于：决定开始抗病毒治疗还是预防性应用抗病毒药物是否有抗病毒治治疗指征指征？效果

26、监测抗病毒治治疗有效有效吗？毒性监测抗病毒抗病毒药物是否引起了其他物是否引起了其他问题？47.第 48 页CD4+TCD4+T淋巴淋巴细胞是胞是HIVHIV病毒攻病毒攻击的靶的靶细胞胞p CD4+T CD4+T淋巴淋巴细胞胞检测用于：用于：决定开始抗病毒治疗还是预防性应用抗病毒药物 为判断抗病毒治疗成功或失败提供定量依据 对调整抗病毒治疗方案提供指导p 孕期每孕期每3 3个月及个月及产后后4 64 6周周应进行行CD4+TCD4+T淋巴淋巴细胞胞检测 急性感染时可适当推迟检测，(因为在急性感染期，CD4+T淋巴细胞通常会下降）CD4+TCD4+T淋巴淋巴细胞胞检测48.第 49 页病毒病毒载量

27、量测量血量血浆中的病毒数量中的病毒数量p 病毒载量检测可用于：是抗病毒治抗病毒治疗失失败早期、最可靠的早期、最可靠的标记物物p 监测对抗病毒治疗的反应 诊断HIV感染后和孕晚期各进行一次病毒载量检测病毒病毒载量（量（RNA-PCRRNA-PCR）检测49.第 50 页检测检测对象象原因原因临床指床指导CD4+T淋巴细胞计数所有HIV感染孕产妇基线评估是否需要抗病毒治疗抗病毒治疗：CD4 350个细胞/mm3预防应用抗病毒药物：CD4 350个细胞/mm3全血细胞计数（CBC）所有HIV感染孕产妇AZT(叠氮胸苷）可引起贫血或白细胞计数降低如果Hb1000IU/ml），婴儿有免疫保护l 如果HB

28、sAg阴性和抗HBs抗体 1000IU/ml，婴儿应再次接受3剂乙肝疫苗接种55.第 56 页要点要点-HIVHIVp 使用快速筛查试验诊断HIV感染。筛查检测结果阳性进行确认试验以保证结果的准确性。p HIV感染抗病毒治疗应根据：CD4+T淋巴细胞计数检测结果，反映HIV对免疫系统的影响 HIV病毒载量检测结果，反映血液中HIV病毒的数量p 如果有条件，应用 PCR方法检测HIV-DNA诊断婴儿是否HIV感染p 儿童满12-18月龄，HIV抗体检测方可确认儿童是否感染56.第 57 页要点要点-HBVHBVp 通过筛查HBsAg诊断HBV感染p 如有条件，筛查HBsAg结果阳性，可进一步检测

29、其他 HBV标记物p HBsAg阳性母亲所生婴儿，出生时接受乙肝疫苗接种，应在出生后12个月接受HBsAg和抗HBs抗体检测57.第 58 页婴儿艾滋病感染早期儿艾滋病感染早期诊断断检测标本采集、运本采集、运输及保存的要求及保存的要求临床检验中心：赵翠生第 59 页 内内 容容u 干血斑干血斑标本的采集本的采集u 干血斑干血斑标本的制作本的制作u 干血斑干血斑标本的保存本的保存u 干血斑干血斑标本的运本的运输u 合格和不合格的干血斑合格和不合格的干血斑u 注意事注意事项u 送送样单的的规范填写范填写.第 60 页什么是干血斑（什么是干血斑（DBSDBS）？）？l干血斑是干血斑是直接用滤纸收集一

30、滴全血进行干燥用于血样本的长时间储存l DBS DBS是用是用HIV DNA-PCRHIV DNA-PCR方法方法进行行婴儿儿HIVHIV感染早期感染早期诊断断检测的最佳采的最佳采血方法血方法l HIV DNA HIV DNA和和HIVHIV抗体可抗体可稳定地保存在干血斑中定地保存在干血斑中l 转运方便：无需冷藏运方便：无需冷藏60.第 61 页 干血斑（干血斑（Dried Blood Spot DBSDried Blood Spot DBS）l 使用Whatman903滤纸片，患者的全血制备l 末梢血直接用于DBS的制作 l 采集用EDTA抗凝的静脉血混匀滴在滤纸片上制备DBS；.第 62

31、页采集采集样本所需要的本所需要的设备l末梢采血针或静脉采血l酒精棉l血样本采集卡片(滤纸片l可密封的塑料袋l湿度指示卡l干燥剂（1-2g/袋）第 63 页采集末梢血采集末梢血DBSDBS采集部位：足弓（幼儿采血点）采集部位：足弓（幼儿采血点）第 64 页采集末梢血采集末梢血DBSDBSl成人或成人或1 1岁以上儿童手指采血点以上儿童手指采血点l中指或无名指中指或无名指l手掌面，非指尖或手掌面，非指尖或侧面面第 65 页采集末梢血采集末梢血DBSDBSl用用70 70 乙醇或酒精棉消毒采乙醇或酒精棉消毒采血部位血部位l用消用消过毒的毒的针头小心刺破皮肤小心刺破皮肤65.第 66 页采集末梢血采集

32、末梢血DBSDBSl弃去第一滴弃去第一滴 末梢血末梢血66.第 67 页采集末梢血采集末梢血DBSDBSl将第二滴血直接点在将第二滴血直接点在滤纸片片中央的中央的圆圈圈l而不是用毛而不是用毛细管管转移血液移血液67.第 68 页采集末梢血采集末梢血DBSDBSl大大约每孔需要每孔需要60-80ul60-80ul全血全血l保保证圆圈滴圈滴满l每个每个样品品应点点满一一张滤纸片的每个片的每个孔孔 68.第 69 页采集抗凝静脉血采集抗凝静脉血DBSDBSl 静脉血充分与静脉血充分与EDTAEDTA混合混合l采集后立即制采集后立即制备DBDBl血血浆与血与血细胞分胞分层的全血在制的全血在制备干干血斑

33、前，血斑前，应轻柔地上下柔地上下颠倒采血管倒采血管（避免血（避免血细胞破裂），血液混匀后胞破裂），血液混匀后制制备第 70 页l用移液用移液枪加代加代滤芯芯枪头移取移取50-80ul50-80ul血液血液l枪头对准印圈的中心准印圈的中心缓慢将血液滴于慢将血液滴于滤纸上上l避免有气泡避免有气泡l应滴滴满一一张滤纸片的每个孔片的每个孔 采集抗凝静脉血采集抗凝静脉血DBSDBS第 71 页制作及干燥制作及干燥DBSDBSl 避免触摸或涂抹血斑避免触摸或涂抹血斑l 室温空气中水平干燥至少室温空气中水平干燥至少4 4个小个小时，（在潮湿，（在潮湿 气候下至少气候下至少2424小小时）l 避免阳光直晒避免

34、阳光直晒l 在干燥在干燥过程中不允程中不允许加加热、叠加或将、叠加或将DBSDBS接触其他物体表面接触其他物体表面l DBS DBS上上标记受受检者者编号、姓名和收集日期号、姓名和收集日期第 72 页制作及干燥制作及干燥DBSDBS第 73 页DBSDBS的保存方法的保存方法l 最好一个最好一个样本一个包装，多个本一个包装，多个样本一个包本一个包装装时，样本本间用称量用称量纸隔开隔开l 放入可密封塑料袋中放入可密封塑料袋中l 加加2 2包干燥包干燥剂l 加加1 1片湿度指示卡片湿度指示卡l 标记包装中的内容物并密封包装中的内容物并密封73.第 74 页DBSDBS的保存方法的保存方法l 避免阳

35、关暴晒和加避免阳关暴晒和加热l 完整包装的完整包装的DBSDBS样品可在室温下避光品可在室温下避光储存存2 2周周l 2 2周后的周后的DBSDBS样品必品必须存放在存放在-20-20 或以下或以下 第 75 页NBSNBS的包装及运的包装及运输1.1.第一第一层包装好的包装好的DBSDBS放入放入结实的的纸袋袋中中2.2.放入放入对应的送的送样单3.3.将上述两将上述两样放入放入邮寄信封中并密封寄信封中并密封第 76 页NBSNBS的包装及运的包装及运输u 包装运包装运输时避免折避免折压滤纸片干血斑片干血斑样品品u 如果如果DBSDBS样品收集后存放在室温并在品收集后存放在室温并在2 2周内

36、运送，可常温下用特快周内运送，可常温下用特快专递运送运送u 已已经保存在保存在-20-20 或以下的或以下的样品，品，应在冷在冷冻条件下运送条件下运送.第 77 页血液充分吸收透血液充分吸收透过滤纸，填，填满印圈，不要在一个圈上重复采血，避印圈，不要在一个圈上重复采血，避免触摸或涂抹血斑免触摸或涂抹血斑合格的合格的DBSDBS第 78 页 合格的合格的DBSDBS第 79 页原因：原因：1.1.血液未渗透血液未渗透滤纸或未填或未填满圆圈前将圈前将滤纸移走移走2.2.用毛用毛细管管转移血液移血液3.3.在取在取样前或后用戴手套或不戴手套的手触摸前或后用戴手套或不戴手套的手触摸滤纸，滤纸上粘有洗手

37、液上粘有洗手液 原因：毛原因：毛细管或其他管或其他锐器移取血液器移取血液不合格不合格DBSDBS.第 80 页样本在干燥小于本在干燥小于4 4小小时前即寄出前即寄出1.1.吸附血液吸附血液过多多2.2.双面双面贴第 81 页1.1.用力用力挤压针刺点周刺点周围2.2.采血前或后采血前或后滤纸面沾染洗手液、滑石粉、酒精、化学面沾染洗手液、滑石粉、酒精、化学试剂、杀毒毒剂、水等、水等3.3.将血斑直接加将血斑直接加热1.1.在在针刺之前未将采血刺之前未将采血处酒精擦干酒精擦干 4.4.用毛用毛细管管转移血液移血液2.2.滤纸沾染酒精，洗手液沾染酒精，洗手液 5.5.过分分挤压采血采血处3.3.不正

38、确地干燥不正确地干燥滤纸第 82 页1.1.同一采血圈多次滴血同一采血圈多次滴血2.2.双面双面贴第 83 页不合格不合格DBS DBS 幻灯片83.第 84 页注意事注意事项l 仅在在滤纸的一面采血的一面采血l 在一个印圈上不可追加滴血在一个印圈上不可追加滴血l 采末梢血采末梢血时不要将不要将滤纸片片压迫迫针刺部位采血刺部位采血l 2 2个充分吸附的血液的印圈要比个充分吸附的血液的印圈要比5 5个不完全吸附的印圈要好个不完全吸附的印圈要好.第 85 页早期早期诊断断检测标本送本送样单p此此处由由标本采集机构填写本采集机构填写l 标本采集机构名称：省(直辖市、自治区)地(市、州)县(市、区)婴

39、儿儿编号：号：（同个案登（同个案登记卡卡编号）号）l 婴儿母亲姓名：婴儿姓名：性别：l 出生日期：年月日l 采样情况：第 次采血 采血时月龄 l 采血日期：年月采血人：标本制备人：送样人联系电话：送样人签字l 标本送出日期（指标本送至辖区妇幼保健机构的日期）：年月日.第 86 页送送样单的填写的填写标本采集机构：本采集机构：婴儿儿编号号共共计1717位（个案登位（个案登记卡卡编号）号）ABCDEA A：地区行政：地区行政编码，共，共6 6位位 B B：单位机构代位机构代码，共，共3 3位位C C：年份，共：年份，共4 4位位D:D:个人个人编码，共，共3 3位位E E：婴儿儿单双胎，双胎，1

40、1位（位（单胎胎为1 1，双胎，双胎为2 2）.第 87 页早期早期诊断断检测标本送本送样单p此此处由送由送检妇幼保健机构填写幼保健机构填写l 标本送检机构名称：省(直辖市、自治区)地(市、州)县(市、区)妇幼保健院(所、中心)l 标本序号（前四位本序号（前四位为年份，后三位年份，后三位为顺序序编号）：号）：l单位地址与邮编：省(直辖市、自治区)地(市州)县(市、区)(具体地址、邮编)l 送检人联系电话：传真：送检人签字：l标本寄出日期（指标本寄往区域实验室的日期）：年月日.第 88 页送送样单的填写的填写妇幼保健机构：幼保健机构：标本序号本序号：前四位：前四位为年份，后三位年份，后三位为顺序

41、序标号号 假如是假如是辖区区妇幼保健机构幼保健机构20142014年第一份年第一份标本，本，则标本序号本序号为20140012014001送送检人手人手签字并盖章字并盖章.第 89 页早期早期诊断断检测标本送本送样单p此此处由区域由区域实验室填写室填写l 标本接收日期（指区域实验室收到标本的日期）：年月日l 标本验收：外包装：完好、不完好 内包装：完好、不完好湿度指示卡：有、无 干燥剂：有、无血斑质量：好、不好 其他 收收样人人对标本是否可以本是否可以进行行试验的的评价（用价（用“”“”号号标记)：可以可以 不可以不可以,原因是原因是l实验室对不合格标本的建议：收样人联系电话：收样人签字：结果

42、反馈日期（指将检测结果反馈给送检妇幼保健机构的日期）：年月日.第 90 页送送样单的填写的填写p区域区域实验室室:根据接收到的根据接收到的标本本进行行严格格验收和送收和送样单的核的核对，对标本是否合格，本是否合格，是否可以是否可以进行行试验进行行评价，并手价，并手签字。字。.第 91 页注意事注意事项l送送样单所有信息必所有信息必须填写完整，字迹工整，填写完整，字迹工整，须用用签字笔或字笔或钢笔正楷笔正楷书写，不可用写，不可用圆珠笔或者珠笔或者铅笔笔l姓名要求按照身份姓名要求按照身份证填写，少数名族写明本名加上父名的形式，并与填写，少数名族写明本名加上父名的形式，并与干血斑的姓名与干血斑的姓名

43、与编码完全一致完全一致l所有所有编码及序号及序号严格按照送格按照送样单的位数填写，少填或多填都会的位数填写，少填或多填都会视为不不合格合格.第 92 页注意事注意事项l所有送所有送样人、送人、送检人、收人、收样人都需要手人都需要手签字字;l送送样单一式两份，送一式两份，送检妇幼保健机构填写完整后将两份送幼保健机构填写完整后将两份送样单邮寄寄至区域至区域实验室，一份由区域室，一份由区域实验室留存，另一份区域室留存，另一份区域实验室室连同同结果果报告告单一并反一并反馈给送送检妇幼保健机构幼保健机构;l标本与送本与送样单必必须以一一以一一对应;.第 93 页注意事注意事项 l合格合格标本将在每周三本将在每周三进行一次行一次检测，周四，周四对检测结果及果及时反反馈给送送检的的辖区区妇幼保健机构幼保健机构l不合格不合格标本将及本将及时反反馈，要求重新采集并，要求重新采集并转送送l前三个月的前三个月的标本需每月底本需每月底邮寄寄给疾控中心疾控中心进行二次复行二次复检，结果一果一致再向送致再向送检辖区区妇幼机构反幼机构反馈结果果第 94 页谢 谢！94.