药物分析：维生素类药物的分析ppt课件.ppt

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1、维生素类药物的分析本章要求v掌握不同维生素的结构特点和主要性质掌握不同维生素的结构特点和主要性质v掌握维生素掌握维生素A、B、C、E的主要分析方法的主要分析方法v了解维生素类药物分析方法的操作要点了解维生素类药物分析方法的操作要点2023/3/212 VitA、D2、D3、E、K1 等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性 VitB族族(B1、B2、B6、B12、泛酸、叶酸泛酸、叶酸)VitC、烟酸、烟酰胺、烟酸、烟酰胺维生素：维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质 人体不能合成维生素人体不能合成维生素-H 维生素维生素A醇醇-COCH3 维生素维生

2、素A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 维生素维生素A棕榈酸酯棕榈酸酯R:维生素维生素A（维生素（维生素A1、视黄醇）、视黄醇）环己烯环己烯共轭多共轭多烯侧链烯侧链UV多异构体多异构体易被氧化易被氧化结构分析结构分析维生素维生素A 325.5 100%新维生素新维生素Aa 328 75%新维生素新维生素Ab 320.5 24%新维生素新维生素Ac 310.5 15%异维生素异维生素Aa 323 21%异维生素异维生素Ab 324 24%相对生物效价相对生物效价环氧化物环氧化物VitA醛醛VitA酸酸三氯化锑反应三氯化锑反应UVUVTLCTLC 鉴别试验鉴别试验1.1.三氯化锑反应三氯化锑反应条件条

3、件 无水（使得三氯化锑水解）无水（使得三氯化锑水解）无醇（使得碳正离子电荷消失）无醇（使得碳正离子电荷消失）CHCl3紫红紫红蓝色蓝色3SbClVitA不稳定碳正离子不稳定碳正离子5个共轭双键个共轭双键max为为326nm一个吸收峰一个吸收峰2.UV2.UV法法6个共轭双键个共轭双键max为为350390nm三个吸收峰三个吸收峰溶剂：无水乙醇溶剂：无水乙醇-盐酸（盐酸（100:1）紫外分光光度法紫外分光光度法三氯化锑比色法三氯化锑比色法 HPLC HPLC法法 含量测定含量测定u“三点校正法三点校正法”由来由来 UVUV法法（三点校正法）（三点校正法）测定依据：分子结构中测定依据：分子结构中共

4、轭多烯体系共轭多烯体系，具有紫外吸，具有紫外吸 收特性，在收特性，在325-328nm呈现选择性吸收呈现选择性吸收 但是混有多种杂质（异构体、氧化产物等杂质）（异构体、氧化产物等杂质）在在310340nm波长范围内有吸收干扰紫外测定波长范围内有吸收干扰紫外测定故采用故采用“三点校正法三点校正法”消除干扰消除干扰 1、杂质的吸收在、杂质的吸收在310340nm范围内呈一条直线范围内呈一条直线 随波长的增大而吸收度变小随波长的增大而吸收度变小 2、物质对光的吸收具有加和性、物质对光的吸收具有加和性 即样品各波长的吸收度是维生素即样品各波长的吸收度是维生素A与杂质与杂质 吸收度的代数和吸收度的代数和

5、 u 测定原理测定原理选择在选择在三个波长三个波长处测定吸光度，处测定吸光度，结合校正公式计算结合校正公式计算A校正，再计算含量校正，再计算含量u 波长（三点）选择波长（三点）选择（1 1）1 1 VitA VitA的的 maxmax（328nm328nm）（2 2）2 2 3 3 分别在分别在 1 1的两侧各选一点的两侧各选一点 第一法第一法 第二法第二法测定对象测定对象:VitA醋酸酯醋酸酯 第一法第一法 等波长差法等波长差法1=328nm2=316nm3=340nm测定波长测定波长 300、316、328、340、360等波长差法等波长差法 校正公式校正公式 测定对象测定对象:VitA醇

6、醇 第二法第二法 等吸收度法等吸收度法(皂化法皂化法)1=325nm2=310nm3=334nm等吸收度法等吸收度法（6/7吸收度法）校正公式吸收度法）校正公式 测定波长测定波长 300、310、325、334第一法无法消除杂质干扰时用此法第一法无法消除杂质干扰时用此法维生素维生素A含量是用生物效价表示含量是用生物效价表示 单位单位 IU/g（国际单位）（国际单位）换算因数换算因数u 计算要求计算要求1g维生素维生素A醋酸酯相当的国际单位数为醋酸酯相当的国际单位数为 1g维生素维生素A醇相当的国际单位数为醇相当的国际单位数为(VitA酯酯)(VitA醇醇)换算因数换算因数第一法测定维生素第一法

7、测定维生素A醋酸酯时，换算因素为醋酸酯时，换算因素为1900第二法测定维生素第二法测定维生素A醇时，换算因素为醇时，换算因素为1830 换算因数由纯品计算而得换算因数由纯品计算而得应用：维生素应用：维生素A胶丸的测定，求标示量胶丸的测定，求标示量A328或A 328校正 03%15%3%第二法第二法第二法第二法 维生素维生素E E生育酚生育酚*R1、R2均为均为CH3R1、R2为为H和和CH3R1、R2均为均为H生物效价生物效价 右旋体右旋体 ：消旋体消旋体 =1.4：10（天然品）（天然品）（合成品）（合成品）乙酰化（生育酚醋酸酯）乙酰化（生育酚醋酸酯）结构：结构：dl生育酚醋酸酯生育酚醋酸

8、酯游离生育酚游离生育酚还原性还原性水解水解维生素维生素E 硝酸反应硝酸反应 鉴别试验鉴别试验水水 解解橙红色橙红色HNO3强氧化强氧化剂剂邻醌结构邻醌结构75157515 三氯化铁联吡啶反应三氯化铁联吡啶反应O弱氧化剂弱氧化剂原理利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈 杂质检查杂质检查 铈量法检查游离生育酚铈量法检查游离生育酚1 :2 反应摩尔比反应摩尔比硫酸铈滴定液（硫酸铈滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黄二苯胺（亮黄灰紫）灰紫）药典规定药典规定取本品取本品0.10g0.10g，加无水乙醇，加无水乙醇5ml5ml溶解后，溶解后，用（

9、用（0.010.01mol/Lmol/L）硫酸铈液滴定，消耗）硫酸铈液滴定，消耗硫酸铈液硫酸铈液1.0ml1.0ml，限量，限量2.152.15 含量测定含量测定 GC法法特特特特 点点点点选择性好选择性好灵敏度高灵敏度高速度快速度快分离效能好分离效能好挥发性低、不稳定、极挥发性低、不稳定、极性强性强衍生化易受样品衍生化易受样品蒸气压限制蒸气压限制ChP 维生素维生素E原料及其制剂原料及其制剂 气相色谱法气相色谱法 ChP 内标法加校正因子内标法加校正因子 内标物内标物 正三十二烷正三十二烷 固定相固定相 硅酮（硅酮（OV17）检测器检测器 氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器 供试液（样品供

10、试液（样品+内标）内标）对照液（对照对照液（对照+内标）内标）内标法加校正因子内标法加校正因子校正因子：校正因子：含量计算：含量计算：BP GC 内标内标 正三十二烷正三十二烷 R1.4USP GC 内标内标 十六酸十六醇酯十六酸十六醇酯 R1.0JP HPLC 外标外标 dl生育酚生育酚 R1.4氨基嘧啶环氨基嘧啶环CHCH2 2噻唑环噻唑环(季铵碱季铵碱)HClCl-维生素维生素B1盐酸硫胺盐酸硫胺UV还原性还原性碱性碱性与生物碱与生物碱非水碱量法非水碱量法ChP 鉴别试验鉴别试验 硫色素反应硫色素反应荧光消失荧光消失正丁醇正丁醇蓝色荧光蓝色荧光H+OH-碱性碱性VitB1H+H+H+H+

11、沉淀反应沉淀反应非水溶液滴定法非水溶液滴定法UV法法硫色素荧光法硫色素荧光法 含量测定含量测定 非水溶液滴定法非水溶液滴定法滴定前需加入过量醋酸汞溶液滴定前需加入过量醋酸汞溶液(为什么？为什么？)噻唑环上的季铵和嘧啶环上氨基，反应摩尔比噻唑环上的季铵和嘧啶环上氨基，反应摩尔比1 1：2 2 ChP 原料药原料药 UV法法共轭双键结构，共轭双键结构，UVUV特征特征紫外吸收峰随紫外吸收峰随pHpH变化而变化变化而变化 溶剂溶剂 pH max 水水 7 232-3 345 盐酸盐酸 2 246 421ChP 片剂、注射剂片剂、注射剂含量计算含量计算（每片）相当于标示量的（每片）相当于标示量的%=规

12、格规格g/片片g（每（每ml）相当于标示量的）相当于标示量的%=规格规格g/mlml手性手性CUV己糖结构己糖结构-内酯内酯 维生素维生素CL抗坏血酸抗坏血酸烯二醇烯二醇强还原性强还原性酸性酸性 鉴别试验鉴别试验与氧化剂的反应与氧化剂的反应糖类的反应糖类的反应UV 与氧化剂的反应与氧化剂的反应与与2,6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应ChP（2010）氧化型氧化型玫瑰红色玫瑰红色还原型还原型蓝色蓝色OH与碱性酒石酸铜反应与碱性酒石酸铜反应与与KMnO4反应反应与与AgNO3反应反应ChP（2010）UVBP0.01mol/L HCl碘量法碘量法2,6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法HPLC 含量测定含

13、量测定淀粉指示液，终点至蓝色不消失淀粉指示液，终点至蓝色不消失原理原理 碘量法碘量法具有较强还原性，可被氧化具有较强还原性，可被氧化H+反应摩尔比反应摩尔比1 1（原料、片剂、注射液）（原料、片剂、注射液）方法方法Vc+新沸放冷新沸放冷H2O+稀稀HAc 溶解溶解 立即立即用标准用标准I2滴定至滴定至Blue淀粉指示液淀粉指示液讨论讨论新沸放冷新沸放冷H2O减少水中减少水中O2对测定的影响对测定的影响减慢减慢VitC被被O2氧化速度氧化速度稀稀HAc,立即滴定立即滴定附加剂干扰的排除附加剂干扰的排除 片剂片剂 滑石粉滑石粉 过滤过滤丙酮丙酮甲醛甲醛注射剂注射剂 抗氧剂抗氧剂 焦亚硫酸钠焦亚硫酸

14、钠计算计算 W标示量标示量V注射剂注射剂原料药、片剂、注射剂原料药、片剂、注射剂？1例：维生素C注射液（规格2ml：0.1g）的含量测定：精密量取本品2ml，加水15ml与丙酮2ml，摇匀，放置5分钟，加 稀 醋 酸 4ml与 淀 粉 指 示 液 1ml，用 碘 滴 定 液（0.1003mol/L）滴定，至溶液显兰色并持续30秒钟不褪，消耗10.56ml。每1ml碘滴定液（0.1mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6。计算维生素C注射液的标示量%。W标示量标示量V注射剂注射剂1 2,6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法USPJP原理原理方法方法自身指示终点法自身指示终点法 溶液显玫瑰红色时

15、，即为终点溶液显玫瑰红色时，即为终点玫瑰红玫瑰红 无色无色还原还原快速滴定快速滴定 2min内内 酸性环境酸性环境 HPO3-HAc 稳定稳定VitC防止其他还原性物质干扰防止其他还原性物质干扰并非维生素并非维生素C的专一反应的专一反应讨论讨论例例多种维生素片中多种维生素片中VitA、VitB1、VitB2、VitB6、烟酰胺、烟酰胺、VitC、VitE的含量测定的含量测定色谱柱色谱柱 ODS流动相流动相 A、水、水-甲醇（甲醇（4 ：1）B、甲醇、甲醇检测波长检测波长 272nm 280nm HPLC法法对象对象 制剂、生物样品、果汁制剂、生物样品、果汁 梯度洗脱梯度洗脱一、维生素一、维生素

16、A A（共轭多烯侧链）的三氯化锑鉴别反应和三（共轭多烯侧链）的三氯化锑鉴别反应和三点校正法测定含量的原理、波长选择方法、生物效价点校正法测定含量的原理、波长选择方法、生物效价二、维生素二、维生素E E（水解还原性）的鉴别试验，游离生育酚（水解还原性）的鉴别试验，游离生育酚的检查，的检查，GCGC的应用的应用三、维生素三、维生素B1B1（杂环、碱性、还原性）的硫色素鉴别反应，（杂环、碱性、还原性）的硫色素鉴别反应，非水滴定、紫外法测定含量的应用非水滴定、紫外法测定含量的应用四、维生素四、维生素C C（烯二醇、还原性、酸性）的（烯二醇、还原性、酸性）的2,6-2,6-二氯二氯靛酚、硝酸银鉴别反应靛酚、硝酸银鉴别反应,碘量法的原理与注意事项、与碘量法的原理与注意事项、与二氯靛酚法的比较二氯靛酚法的比较 知识点回顾知识点回顾