食品农药残留快速检测ppt课件.ppt

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1、L/O/G/O在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 农药残留快速检测技术农药残留快速检测技术在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么学习目标掌握掌握速测卡法和分光光度法快速检测食品中有速测卡法和分光光度法快速检测食品中有机磷及氨基甲酸酯类农药的基本原理及基本技

2、机磷及氨基甲酸酯类农药的基本原理及基本技能；能；熟悉熟悉有机磷及氨基甲酸酯类农药的免疫分析检有机磷及氨基甲酸酯类农药的免疫分析检测方法；测方法；了解了解熏蒸剂的检测意义及方法。熏蒸剂的检测意义及方法。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么农药概况：农药是指用于农业、林业中各种药剂的统称。农药是指用于农业、林业中各种药剂的统称。特点：特点：高效、快速和使用简便高效、快速和使用简便 危害：本身的毒性危害危害：本身的毒性危害 农药残

3、留所引起的食品安全问题农药残留所引起的食品安全问题 农药残留所引起的抗药性问题农药残留所引起的抗药性问题 农药残留所引起的环境污染农药残留所引起的环境污染 按化学结构分类：按化学结构分类：有机氯类有机氯类 有机磷类有机磷类 氨基甲酸酯类氨基甲酸酯类 拟除虫菊酯类拟除虫菊酯类在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么农药检测现状：农药检测现状：随着食品中农药残留最高限量标准不断降低，随着食品中农药残留最高限量标准不断降低，检测难度越

4、来越大，对检测技术的要求也越检测难度越来越大，对检测技术的要求也越来越高。这就需要有相应的检测技术与之相来越高。这就需要有相应的检测技术与之相匹配，尤其是快速检测技术。匹配，尤其是快速检测技术。与日本严格的农药残留标准相比，中国的标与日本严格的农药残留标准相比，中国的标准相对较少。农残检查超标前准相对较少。农残检查超标前5名农药，中名农药，中国都未作农残限量规定；国都未作农残限量规定；与欧、美等都相差甚远，欧盟农残限量指标与欧、美等都相差甚远，欧盟农残限量指标28689个，美国农残限量指标个，美国农残限量指标7400个。因此，个。因此，必须适应国际新形势，制定合理的残留新标必须适应国际新形势，

5、制定合理的残留新标准。准。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么常用农药的分类及性质常用农药的分类及性质有机磷农药特点：药效高、毒性大、易降解、广谱，成为目前农药生产中吨位最大，也是世界上生产和使用最多的农药品种。图图3-1 有机磷农药结构通式有机磷农药结构通式有机磷农药是典型的酶毒剂，可以通过消化道、皮肤、有机磷农药是典型的酶毒剂，可以通过消化道、皮肤、粘膜、呼吸道吸收。粘膜、呼吸道吸收。毒理：对神经突触后膜上的乙酰胆碱酯酶

6、活性的抑制，使毒理：对神经突触后膜上的乙酰胆碱酯酶活性的抑制，使酶不能催化乙酰胆碱水解，导致组织中乙酰胆碱过量蓄积。酶不能催化乙酰胆碱水解，导致组织中乙酰胆碱过量蓄积。乙酰胆碱传导介质代谢紊乱，可导致迟发性神经毒性，引乙酰胆碱传导介质代谢紊乱，可导致迟发性神经毒性，引起运动失调、昏迷、呼吸中枢麻痹、瘫痪甚至死亡。起运动失调、昏迷、呼吸中枢麻痹、瘫痪甚至死亡。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么常用农药的分类及性质常用农药的分

7、类及性质氨基甲酸酯类农药(NMCs)是继有机磷之后出现的一类农药。NMCs的结构特性是含有一个N-甲基基团，为白色晶体，难溶于水，易溶于丙酮、二氯甲烷、氯仿、乙腈等，碱性和高温条件下很易被水解。具有杀虫效力强、作用迅速等特点。它的最大优点是在植物中只短暂停留，施用后很短的时间内就可被降解成相应的代谢产物，这些代谢产物通常具有与母体化合物相同或更强的活性。20世纪70年代以来，由于有机氯农药受到禁用或限用，以及抗有机磷杀虫剂的昆虫品种日益增多，因而NMCs的用量逐年增加，这就使得NMCs的残留情况倍受关注。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一

8、点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么食品安全快速检测食品安全快速检测 超临界萃取（超临界萃取（SCFE）常用农残快检方法常用农残快检方法1、酶抑制法、酶抑制法 2、免疫分析法、免疫分析法 3、生物传感器法、生物传感器法 要求：快速、灵敏、便捷要求：快速、灵敏、便捷意义：作为实验室检测的辅助方法，对大量样品加意义：作为实验室检测的辅助方法，对大量样品加以定性筛选，以减少送实验室定量检测的压力。以定性筛选，以减少送实验室定量检测的压力。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为

9、浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么农药残留快速检测方法：农药残留快速检测方法：1、酶抑制法：利用农药对胆碱酯酶的抑制作用，、酶抑制法：利用农药对胆碱酯酶的抑制作用，加入特定的显色剂，通过颜色深浅的变化确定是否加入特定的显色剂，通过颜色深浅的变化确定是否有农药残留或农药残留相对量的快速检测方法。有农药残留或农药残留相对量的快速检测方法。特点：造价不高，试剂生产已成规模，稳定性好，特点：造价不高，试剂生产已成规模，稳定性好，操作简便、速度快，特别适宜现场检测或对大批量操作简便、速度快，特别适宜现场检测或对大

10、批量样品的筛查，目前普遍使用。样品的筛查，目前普遍使用。关键：如何选择酶源关键：如何选择酶源酶源：酶源：来自动物的胆碱酯酶来自动物的胆碱酯酶 从植物中提取的植物酯酶从植物中提取的植物酯酶在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么动物酶原：动物酶原：超临界萃取（超临界萃取（SCFE）胆碱酯酶广泛存在于动物的组织中。目前主要集中胆碱酯酶广泛存在于动物的组织中。目前主要集中在动物肝脏和血液，如猪肝，鸡血等在动物肝脏和血液，如猪肝，鸡血等

11、也有利用蚯蚓以及海洋鱼类，甲壳类动物的神经组织、也有利用蚯蚓以及海洋鱼类，甲壳类动物的神经组织、脑组织分离乙酰胆碱酯酶。脑组织分离乙酰胆碱酯酶。1953年年stedman等首先从马血清中分离出乙酰胆碱酯酶等首先从马血清中分离出乙酰胆碱酯酶在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么动物酶原：动物酶原：从昆虫提取，如：家蝇、麦二叉蚜、黄猩猩果蝇、烟从昆虫提取，如：家蝇、麦二叉蚜、黄猩猩果蝇、烟草天蛾、光叶库蚊、黄粉甲、美洲淤夜蛾、豆荚

12、草盲草天蛾、光叶库蚊、黄粉甲、美洲淤夜蛾、豆荚草盲蝽、马铃薯叶甲、骚扰角蝇及棉铃虫等。蝽、马铃薯叶甲、骚扰角蝇及棉铃虫等。超临界萃取（超临界萃取（SCFE）以从敏感家蝇中提取的乙酰胆碱酯酶效果最佳，研究以从敏感家蝇中提取的乙酰胆碱酯酶效果最佳，研究表明，家蝇羽化后表明，家蝇羽化后2-3天时其头部的乙酰胆碱酯酶敏天时其头部的乙酰胆碱酯酶敏感性最高。感性最高。不足：保持期短，需冷冻低温保存。不足：保持期短，需冷冻低温保存。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也

13、许你认为浪费这一点点算不了什么动物酶原：动物酶原：超临界萃取（超临界萃取（SCFE）原理：原理：乙酰胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶 乙酰胆碱乙酰胆碱 乙酸乙酸 +胆碱胆碱 5，5-二硫代二硫代-双双-2-硝基苯甲酸硝基苯甲酸 5，5-二硫代二硫代-双双-2-硝基苯甲酸（黄色）硝基苯甲酸（黄色）在在410 nm处有最大吸收，测定其在单位时间内的处有最大吸收，测定其在单位时间内的生成量，即可测得乙酰胆碱酯酶的活性。通过测定生成量，即可测得乙酰胆碱酯酶的活性。通过测定乙酰胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶(AChE)受抑制的程度来检测有机磷受抑制的程度来检测有机磷或氨基甲酸酯类农药。或氨基甲酸酯类农药。在日常生活中，随处都

14、可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么植物酶原：植物酶原：超临界萃取（超临界萃取（SCFE）植物酯酶特点：酶源丰富，提取和保存较为方便，植物酯酶特点：酶源丰富，提取和保存较为方便，只需以一定比例的水或缓冲液混合离心获得的上清只需以一定比例的水或缓冲液混合离心获得的上清液即可作为粗酶液，并在液即可作为粗酶液，并在-4保存即可。测量准确保存即可。测量准确度和精密度均不逊色度和精密度均不逊色。原理：原理：植物酯酶植物酯酶乙酸萘酯 乙酸乙酸 +萘酚萘酚

15、显色剂固蓝显色剂固蓝B 偶氮化合物（紫红色）偶氮化合物（紫红色）在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么酶抑制法酶抑制法 肉眼观察法肉眼观察法目视比色法目视比色法速测卡法速测卡法酸碱指示剂法酸碱指示剂法酶片法酶片法试剂盒法试剂盒法检测箱法检测箱法pH计测量法计测量法分光光度法分光光度法在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象

16、。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么农药残留快检方法：农药残留快检方法：2、免疫分析法、免疫分析法：高等动物都有免疫功能，当细菌、高等动物都有免疫功能，当细菌、病毒和有害物等病原入侵时，能产生抵御外来物的病毒和有害物等病原入侵时，能产生抵御外来物的抗体，这就是动物的免疫反应。抗体，这就是动物的免疫反应。致病的外来物被称为抗原。免疫是机体识别和排除致病的外来物被称为抗原。免疫是机体识别和排除进入体内的抗原性异物的保护性反应。进入体内的抗原性异物的保护性反应。免疫反应，即抗原抗体反应，不仅发生在生物体内，免疫反应，即抗原抗体反应，不仅发生在生物体内，在体外亦能进行，而且反

17、应是高度特异在体外亦能进行，而且反应是高度特异(即对特定结即对特定结构的农药具选择性构的农药具选择性)，高度灵敏，高度灵敏(可达可达pg/kg-mg/kg水水平平)。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么超临界萃取（超临界萃取（SCFE）农药免疫分析始于农药免疫分析始于1968年，年，Centeno E.R等人制等人制备了抗滴滴涕和马拉硫磷抗体，应用放射免疫法备了抗滴滴涕和马拉硫磷抗体，应用放射免疫法测定。测定。随后随后Ser

18、nberger.L.等人先后开发出狄氏剂、艾等人先后开发出狄氏剂、艾氏剂、苯菌灵、百草枯等农药的免疫分析法。氏剂、苯菌灵、百草枯等农药的免疫分析法。1981年，年，Ercegovich.R.等研制出对硫磷及等研制出对硫磷及2,4滴和滴和2,4,5涕的放射免疫分析法涕的放射免疫分析法(RIA)分析方法，分析方法，检测限可达检测限可达0.1 g/kg。方法溯源：方法溯源：在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么超临界萃取（超临界萃取

19、（SCFE）局限性：大部分农药的残留量都可以使用气相色局限性：大部分农药的残留量都可以使用气相色谱法等测定，该法并未比气相法更优越谱法等测定，该法并未比气相法更优越人工合成抗原以及制备抗体的困难人工合成抗原以及制备抗体的困难免疫分析技术未被普遍重视。免疫分析技术未被普遍重视。方法溯源：方法溯源：免疫分析中的酶免疫分析法以其高度特异性和灵免疫分析中的酶免疫分析法以其高度特异性和灵敏度，特别适合农药残留分析，故在敏度，特别适合农药残留分析，故在80年代得到年代得到了快速发展。了快速发展。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生

20、活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么超临界萃取（超临界萃取（SCFE）酶联免疫具有专一性强、灵敏度高、快速、操作酶联免疫具有专一性强、灵敏度高、快速、操作简单等优点，试剂盒可广泛用于现场样品和大量简单等优点，试剂盒可广泛用于现场样品和大量样品的快速检测，可准确定性、定量。样品的快速检测，可准确定性、定量。方法溯源：方法溯源：但由于受到农药种类多，抗体制备难度大、在不但由于受到农药种类多，抗体制备难度大、在不能肯定样本中的农药残留种类时检测有一定的盲能肯定样本中的农药残留种类时检测有一定的盲目性以及抗体依赖国外进口等影响，酶联免疫法目性

21、以及抗体依赖国外进口等影响，酶联免疫法的应用范围受到较大的限制的应用范围受到较大的限制。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么超临界萃取（超临界萃取（SCFE）目前国外已研制出几十种农药的酶联免疫试剂盒，目前国外已研制出几十种农药的酶联免疫试剂盒，对于免疫分析技术在农药快速检测中的应用研究对于免疫分析技术在农药快速检测中的应用研究十分活跃，包括有机磷类、拟除虫菊酯类、有机十分活跃，包括有机磷类、拟除虫菊酯类、有机氯类、三嗪类、

22、氨基甲酸酯类等。某些有机磷农氯类、三嗪类、氨基甲酸酯类等。某些有机磷农药的检测限可达到药的检测限可达到ng甚至甚至pg级，一些试剂盒已级，一些试剂盒已经商品化，广泛用于现场样品和大量样品的快速经商品化，广泛用于现场样品和大量样品的快速监测。监测。农药的酶联免疫试剂盒介绍：目前用于现场快速筛选的有目前用于现场快速筛选的有酶联免疫吸附测定法酶联免疫吸附测定法(ELISA试剂盒试剂盒)和和有机磷农药免疫胶体金有机磷农药免疫胶体金快速检快速检测试剂板。测试剂板。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的

23、现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么3 生物传感器法生物传感器法原理：对特定种类化学物质或生物活性物质具有选择性和可反应的分原理：对特定种类化学物质或生物活性物质具有选择性和可反应的分析装置。析装置。传感器中传感器中 复杂样品中复杂样品中 +识别反应识别反应 如：酶与底物、如：酶与底物、如：光热、如：光热、抗体与抗原、抗体与抗原、声音、声音、（如：光敏管压电装置）（如：光敏管压电装置）外源凝集素与糖、外源凝集素与糖、颜色、颜色、光极光敏电阻、光极光敏电阻、核酸与互补片段、核酸与互补片段、电化学电化学 离子选择性电极离子选择性电极 显示或记录显示或记录特定的特定的目

24、标分析物目标分析物 物理化学物理化学信号信号生物生物敏感层敏感层 转转化化器器转换成第二信号转换成第二信号(通常为电信号通常为电信号)放放大大在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么生物传感器分类：优点：测定方法多样化、提高测量灵敏度、缩短反优点：测定方法多样化、提高测量灵敏度、缩短反应时间、提高仪器自动化程度和适应现场检测应时间、提高仪器自动化程度和适应现场检测 超临界萃取（超临界萃取（SCFE）生物传感器生物传感器（根据信号

25、转换器不同）分为：光学传感器光学传感器电化学传感器电化学传感器测热型传感器测热型传感器半导体传感器半导体传感器在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么电化学生物传感器以电化学电极为信号转换器，和酶、微生物、动植物组以电化学电极为信号转换器，和酶、微生物、动植物组织等其他生物识别元件结合组成。织等其他生物识别元件结合组成。传感器中传感器中 复杂样品中复杂样品中 +酶促反应酶促反应 显示或记录显示或记录特定的特定的目标分析物目标分析

26、物 电活性物质电活性物质（化学信号）（化学信号）酶电极酶电极 电电极极电信号电信号放放大大在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么光学生物传感器主要由光纤和生物敏感膜组成。主要由光纤和生物敏感膜组成。传感器中传感器中 复杂样品中复杂样品中 +分子识别分子识别 显示或记录显示或记录待测组分待测组分 生物量生物量（生物学信号）（生物学信号）敏感膜中敏感膜中生物活生物活性成分性成分 换换能能反反应应光信号（荧光、磷光等）光信号（荧光、

27、磷光等）放放大大在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么其他生物传感器其他生物传感器超临界萃取（超临界萃取（SCFE）农药残留检测的还有电晶体、半导体生物传感器等。压电石英晶体传感器利用石英晶体对质量变化的敏感性，结合生物识别系统(抗原抗体特异性结合)而形成一种自动化分析检测系统。具有灵敏度高、特异性好、响应快、小型简便等特点，可对多种抗原或抗体进行实时快速、在线连续的定量测定及反应动力学研究，克服了ELISA、RIA、荧光免疫

28、分析法(FIA)等免疫检测方法费时、昂贵、标记及操作繁琐的缺点，具有极广泛的发展前景 石英晶体微量天平(QCM)半导体生物传感器，检测到低于1mg/L的西维因和敌敌畏。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么实验室快速实验室快速检测方法检测方法色谱法色谱法荧光光谱法荧光光谱法气相色谱法（气相色谱法（GC)紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法红外光谱法红外光谱法毛细管电泳（毛细管电泳（CE）光谱法光谱法实验室快速检测实验室快速检

29、测高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLC)薄层色谱法（薄层色谱法（TLC）色谱色谱-质谱联用法质谱联用法在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么农药快速检测技术的现状：农药快速检测技术的现状：超临界萃取（超临界萃取（SCFE）各种不同仪器技术的应用，大大提高了农药残留检各种不同仪器技术的应用，大大提高了农药残留检测能力和检测的灵敏度、检测限和检测覆盖范围测能力和检测的灵敏度、检测限和检测覆盖范围 采用现场快速初筛检测和实验室验

30、证性检测结合，采用现场快速初筛检测和实验室验证性检测结合，对结果阳性的样品用准确、可靠的方法进行验证，对结果阳性的样品用准确、可靠的方法进行验证，可大大减少分析工作量，提高分析效率，有利于加可大大减少分析工作量，提高分析效率，有利于加强农药残留监控的力度。强农药残留监控的力度。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么农药快速检测技术现状：农药快速检测技术现状：快速检测方法在应用过程中仍存在不少问题：快速检测方法在应用过程中仍存在

31、不少问题：如：如：1、酶抑制法容易出现假阳性、假阴性，、酶抑制法容易出现假阳性、假阴性，2、植物内含物对酶反应干扰严重，、植物内含物对酶反应干扰严重，3、不同批次酶的质量、反应温度、处理时间等对、不同批次酶的质量、反应温度、处理时间等对检测结果影响较大，导致检测的专一性、可比性等检测结果影响较大，导致检测的专一性、可比性等下降；下降；4、酶联免疫法在分析过程中出现交叉反应，导致、酶联免疫法在分析过程中出现交叉反应，导致检测的可靠性和灵敏度降低，方法难以标准化；检测的可靠性和灵敏度降低，方法难以标准化；5、生物传感测定存在选择性不高、生物传感测定存在选择性不高 超临界萃取（超临界萃取（SCFE）

32、在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么3-1-1、酶抑制法、酶抑制法1、速测卡法、速测卡法可单独使用也可与便携式农药残留速测仪配套使用。可单独使用也可与便携式农药残留速测仪配套使用。原理：原理：利用速测卡中的胆碱酯酶利用速测卡中的胆碱酯酶(白色药片白色药片)可催化靛酚乙酸酯（红色药片）水解为可催化靛酚乙酸酯（红色药片）水解为乙酸和靛酚乙酸和靛酚(蓝色），由于有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶的活性蓝色），由于有机磷和氨基甲酸酯

33、类农药对胆碱酯酶的活性有强烈的抑制作用，因此，根据显色的不同，即可判断样品中含有机磷有强烈的抑制作用，因此，根据显色的不同，即可判断样品中含有机磷或氨基甲酸酯类农药的残留情况。或氨基甲酸酯类农药的残留情况。样品处理样品处理分为整体测定法（浸提法）和表面测定法（粗筛法）分为整体测定法（浸提法）和表面测定法（粗筛法）超临界萃取（超临界萃取（SCFE）模块模块3-1 有机磷、氨基甲酸酯类农药快检有机磷、氨基甲酸酯类农药快检在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许

34、你认为浪费这一点点算不了什么便便携携式式农农药药残残留留速速测测仪仪 目的要求目的要求 对照仪器操作说明书，能够熟练操作，对照仪器操作说明书，能够熟练操作，并能举一反三应用类似的快速检测仪。并能举一反三应用类似的快速检测仪。检测原理检测原理 便携式农药残留速测仪是根据国家标准方法便携式农药残留速测仪是根据国家标准方法GB/T5009.199-2003速测卡法（纸片法）而专门设计的仪器。速测卡法（纸片法）而专门设计的仪器。农药速测仪是利用速测卡中的胆碱酯酶（白色药片）催化靛酚农药速测仪是利用速测卡中的胆碱酯酶（白色药片）催化靛酚乙酸酯（红色药片）水解为乙酸和靛酚（蓝色），由于有机磷乙酸酯（红色药

35、片）水解为乙酸和靛酚（蓝色），由于有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶的活性有强烈的抑制作用，因和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶的活性有强烈的抑制作用，因此，根据显色的不同，即可判断样品中含有机磷或氨基甲酸酯此，根据显色的不同，即可判断样品中含有机磷或氨基甲酸酯类农药的残留情况。类农药的残留情况。器材：器材：便携式农药残留速测仪、配套农药残留速测卡便携式农药残留速测仪、配套农药残留速测卡在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么操作步骤

36、（操作步骤（P22-23)1、开机、开机 2、装片、装片 3、取样、取样 4、测试、测试在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么结结果果判判定定 与空白对照卡比较与空白对照卡比较与空白对照卡比较与空白对照卡比较阳性结果：阳性结果：阳性结果：阳性结果：白色药片不变色或略有浅蓝色白色药片不变色或略有浅蓝色白色药片不变色或略有浅蓝色白色药片不变色或略有浅蓝色不变蓝为强阳性结果不变蓝为强阳性结果不变蓝为强阳性结果不变蓝为强阳性结果农药残

37、留量较高农药残留量较高农药残留量较高农药残留量较高浅蓝色为弱阳性结果浅蓝色为弱阳性结果浅蓝色为弱阳性结果浅蓝色为弱阳性结果农药残留量相对较低农药残留量相对较低农药残留量相对较低农药残留量相对较低阴性结果：阴性结果：阴性结果：阴性结果：白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么3-1-1、酶

38、抑制法、酶抑制法2、分光光度法、分光光度法原理：在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药原理：在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶有抑制作用，抑制率与农药的浓度呈正对胆碱酯酶有抑制作用，抑制率与农药的浓度呈正比。本法利用酶催化乙酰胆碱水解，水解产物与显比。本法利用酶催化乙酰胆碱水解，水解产物与显色剂反应生生黄色物质，该物质在色剂反应生生黄色物质，该物质在412nm处有吸收，处有吸收，测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸酯类农抑制率可以判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量的情况。药残留量的情

39、况。超临界萃取（超临界萃取（SCFE）模块模块3-1 有机磷、氨基甲酸酯类农药快检有机磷、氨基甲酸酯类农药快检在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么3-1-2、分光光度法、分光光度法仪器：农药残留快速检测仪，仪器：农药残留快速检测仪，电子天平，电子天平，移液枪及配套管嘴，移液枪及配套管嘴，超声波提取仪，超声波提取仪，冰箱，冰箱，恒温水浴。恒温水浴。超临界萃取（超临界萃取（SCFE）模块模块3-1 有机磷、氨基甲酸酯类农药快检有

40、机磷、氨基甲酸酯类农药快检在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么3-1-2、分光光度法、分光光度法试剂：试剂：pH8.0缓冲溶液缓冲溶液(提取液提取液)：分别称取：分别称取11.9g无水磷酸氢无水磷酸氢二钾和二钾和3.2g磷酸二氢钾，溶解于磷酸二氢钾，溶解于1000mL 蒸馏水中。蒸馏水中。显色剂：分别称取显色剂：分别称取160mg 二硫代二硝基苯甲酸二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和和15.6mg 碳酸氢钠，溶解于碳酸氢钠，溶

41、解于20mL缓冲溶液中，缓冲溶液中，4冰箱中保冰箱中保存。存。底物：称取底物：称取125mg 碘化硫代丁酰胆碱，溶解于碘化硫代丁酰胆碱，溶解于15mL缓冲缓冲液中，摇匀后置液中，摇匀后置4冰箱中保存备用。保存期不超过两周。冰箱中保存备用。保存期不超过两周。丁丁(或乙或乙)酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲液溶解，酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲液溶解，3min内的吸光度变化控制在内的吸光度变化控制在0.4-0.8。摇匀后置。摇匀后置4冰箱中保冰箱中保存备用。存备用。超临界萃取（超临界萃取（SCFE）模块模块3-1 有机磷、氨基甲酸酯类农药快检有机磷、氨基甲酸酯类农药快检在日常生活中，随处

42、都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么步骤：步骤：样品处理样品处理样品样品擦去表面泥土擦去表面泥土剪成剪成1cm见方碎片见方碎片取样品取样品1g，(非叶菜类取非叶菜类取2g)加入加入10mL缓冲溶液缓冲溶液手摇手摇振荡振荡1-2min（或超声波振荡（或超声波振荡30s）静置静置3-5min，待用。待用。对照溶液测试对照溶液测试试管中加入试管中加入100 L酶液酶液100 L显色剂显色剂加入加入2.5mL缓冲溶液缓冲溶液摇匀于摇匀于37放置放置1

43、0min加入加入100 L底物摇匀（反应并显色）底物摇匀（反应并显色）要立即放入比色要立即放入比色池池记录反应记录反应3min时的吸光值时的吸光值 A0。超临界萃取（超临界萃取（SCFE）模块模块3-1 有机磷、氨基甲酸酯类农药快检有机磷、氨基甲酸酯类农药快检在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么样品溶液测试样品溶液测试试管中加入试管中加入100 L酶液和酶液和100 L显色剂，再加入显色剂，再加入2.5mL样品提取液，其它操

44、作与对照溶液测试相同，样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，记录反应记录反应3min的吸光度变化值的吸光度变化值 At。结果计算及判定结果计算及判定结果以酶被抑制的程度结果以酶被抑制的程度(抑制率抑制率)表示。表示。抑制率抑制率(%)=(A0-At)/A0100 当蔬菜样品提取液对酶的抑制率当蔬菜样品提取液对酶的抑制率50%时，表示蔬时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，需菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，需要重复检验要重复检验2次以上确定结果。同时可在实验室进次以上确定结果。同时可在实验室进一步确定具体农药品种和含量。一步确定具体农药品种和含量。超临界萃取（超临界萃取

45、（SCFE）模块模块3-1 有机磷、氨基甲酸酯类农药快检有机磷、氨基甲酸酯类农药快检在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么注意事项：注意事项：1、灵敏度高于速测卡法。现在市场上使用的该类、灵敏度高于速测卡法。现在市场上使用的该类仪器品种各式各样，有仪器品种各式各样，有4通道、通道、5通道、通道、8通道、通道、12通道的，大多是由分光光度计在结果计算功能上进通道的，大多是由分光光度计在结果计算功能上进行改进的专用农药残留快速检测

46、仪。该类仪器使用行改进的专用农药残留快速检测仪。该类仪器使用简单方便，直接显现检测结果，配有数据管理软件，简单方便，直接显现检测结果，配有数据管理软件，检测数据可上传，是目前省市一级对农药残留监督检测数据可上传，是目前省市一级对农药残留监督和县区一级日常检测的主要仪器。和县区一级日常检测的主要仪器。2、一个合格的试剂来说，它应适合于任意一款的、一个合格的试剂来说，它应适合于任意一款的检测仪器检测仪器超临界萃取（超临界萃取（SCFE）模块模块3-1 有机磷、氨基甲酸酯类农药快检有机磷、氨基甲酸酯类农药快检在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点

47、点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么3、试剂质量判别法：试剂质量判别法：取玻璃试管，按试剂的加入取玻璃试管，按试剂的加入顺序和加入量，加入底物，立刻观察溶液颜色变化顺序和加入量，加入底物，立刻观察溶液颜色变化情况。情况。超临界萃取（超临界萃取（SCFE）模块模块3-1 有机磷、氨基甲酸酯类农药快检有机磷、氨基甲酸酯类农药快检在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一

48、点点算不了什么注意事项：注意事项：具体是否能用，需待使用仪器测其空白样的活性才具体是否能用，需待使用仪器测其空白样的活性才能确定。能确定。一般空白样一般空白样3 min的变化值为的变化值为0.4-0.8较为合适。较为合适。如果空白差值小于如果空白差值小于0.2，最好不用。，最好不用。空白差值在空白差值在0.20.4，说明酶的活性较低，应当适当，说明酶的活性较低，应当适当加大酶的用量，加大到加大酶的用量，加大到200 L，将空白差值调到，将空白差值调到0.40.6之间。同时有条件的可使用酶标仪来测定酶之间。同时有条件的可使用酶标仪来测定酶的活性，结果更准确。的活性，结果更准确。超临界萃取（超临界

49、萃取（SCFE）模块模块3-1 有机磷、氨基甲酸酯类农药快检有机磷、氨基甲酸酯类农药快检在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么注意事项：注意事项：试剂的配制和保存：试剂的配制和保存：酶和底物的粉剂必须存放在冰箱的冷冻室酶和底物的粉剂必须存放在冰箱的冷冻室(约约-18)溶溶解解后后的的酶酶溶溶液液如如暂暂时时不不用用，要要放放在在冷冷冻冻室室内内保保存存，用后的酶液放在冷藏室用后的酶液放在冷藏室(05内内)，7d内用完内用完酶酶

50、液液做做好好不不要要反反复复冷冷冻冻，最最多多不不超超过过2次次，否否则则会会影响酶的活性影响酶的活性显色剂和底物液均保存在冷藏室显色剂和底物液均保存在冷藏室(05)内内提取液在常温下保存。提取液在常温下保存。超临界萃取（超临界萃取（SCFE）模块模块3-1 有机磷、氨基甲酸酯类农药快检有机磷、氨基甲酸酯类农药快检在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么注意事项：注意事项：叶菜类去烂叶、枯叶，并切成宽度为叶菜类去烂叶、枯叶，并切