微生物及无菌知识培训课件.pptx
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1、2018-07-23微生物及无菌微生物及无菌基基础础知知识识培培训训2023/1/41简单的的说,微生物就是微小的生物。是一群,微生物就是微小的生物。是一群个体微小个体微小、结构构简单、肉眼不能肉眼不能直接看到,必直接看到,必须借助光借助光学学显微微镜或或电子子显微微镜放在几百倍、几千甚至几万倍才能看到的放在几百倍、几千甚至几万倍才能看到的微小生物微小生物。微生物的概念微生物的概念微小微小生物生物个体个体微小微小结构构简单肉眼不肉眼不能看到能看到借助借助显微微镜2023/1/42微生物的分微生物的分类病毒病毒立克次体立克次体支原体支原体细菌菌放放线菌菌螺旋体螺旋体真菌真菌2023/1/43微生
2、物的五大共性微生物的五大共性分布广分布广种种类多多体体积小小面面积大大吸收多吸收多转化快化快生生产旺旺繁殖快繁殖快适适应强易易变异异2023/1/442023/1/45微生物生微生物生长所需所需营养物养物质水分水分碳源碳源氮源氮源无机无机盐类生生长因子因子2023/1/46影响微生物生影响微生物生长的因素的因素1营养物养物质2温度温度3PH值4渗透渗透压5氧气氧气2023/1/47微生物的生微生物的生长繁殖周期繁殖周期延延迟期期对数期数期稳定期定期衰亡期衰亡期2023/1/48菌落的概念菌落的概念单个或少数个或少数细菌菌细胞生胞生长繁殖后,会形成以母繁殖后,会形成以母细胞胞为中心的一堆肉眼可中
3、心的一堆肉眼可见、有一定形有一定形态构造的子构造的子细胞集胞集团,这就是菌落就是菌落生生长繁殖繁殖形形态构造构造母母细胞胞为中心中心子子细胞胞集集团肉眼肉眼可可见2023/1/49芽芽孢某些某些细菌菌(杆菌)(杆菌),在其,在其生活的某一生活的某一阶段可于段可于细胞胞浆内形成内形成圆形或卵形或卵圆形的形的特殊特殊结构称构称为芽芽孢。芽。芽孢对干燥、干燥、热和化学和化学药品的品的抵抗力抵抗力较强。2023/1/410灭菌的概念菌的概念用物理或化学方法用物理或化学方法杀灭传播媒介上所有的微生物,播媒介上所有的微生物,使其达到无菌。通常是指使其达到无菌。通常是指杀灭或除去全部活的微生或除去全部活的微
4、生物(包括繁殖体和芽物(包括繁殖体和芽孢)2023/1/411无菌的概念无菌的概念是指物体或任一介是指物体或任一介质中没有活的微生物的中没有活的微生物的存在,即无存在,即无论用何种用何种方法,方法,检不出活的微不出活的微生物生物2023/1/412灭菌保菌保证水平水平灭菌保菌保证水平水平(SAL)灭菌菌处理后理后单位位产品上存在活微生物品上存在活微生物的概率,通常表示的概率,通常表示为 10-n,本,本规范范规定定为 10-6,即,即经灭菌菌处理后,每件物理后,每件物品中有菌生品中有菌生长的概率是的概率是 1/106。F0=8为残存概率法残存概率法F0=12为过度度杀灭2023/1/413举例
5、例说明明例如例如:1,000,000个个细菌菌 死亡率死亡率为90%每分每分钟1stmin.-900,000/100,0002ndmin.-90,000/10,0003rdmin.-9,000/1,0004thmin.-900/1005thmin.-90/106thmin.-9/17thmin.-02023/1/414无菌无菌药品的概念品的概念是指法定是指法定药品品标准准中列有无菌中列有无菌检查项目的制目的制剂和原料和原料药,包括无菌制包括无菌制剂和无和无菌原料菌原料药。2023/1/415按生产工艺按生产工艺非最终灭菌非最终灭菌非最终灭菌非最终灭菌最终灭菌最终灭菌最终灭菌最终灭菌无菌无菌药品
6、分品分类1.采用最采用最终灭菌工菌工艺的的为最最终灭菌菌产品品。2.部分或全部工序采用无菌生部分或全部工序采用无菌生产工工艺的的为非最非最终灭菌菌产品。品。2023/1/416两种两种灭菌方式比菌方式比较最最终灭菌菌非最终灭菌非最终灭菌通通过物理、化学方法物理、化学方法杀死微死微生物生物 安全安全 更易于法更易于法规部部门接受接受 最好的最好的选择 需考需考虑药物降解物降解 工工艺过程程稳定定 相相对容易容易进行行验证 不是所有不是所有药品都适合品都适合通通过无菌技无菌技术避免微生避免微生物物污染染 风险高高 法法规部部门仔仔细审查 应用普遍用普遍 药物物稳定性不受影响定性不受影响 工工艺过程
7、多程多变 相相对较难进行控制行控制 适合所有适合所有药品品2023/1/417无菌操作的概念无菌操作的概念指在操作中,采用或控制一指在操作中,采用或控制一定条件,尽量避免定条件,尽量避免产品品污染染微生物的一种操作方法程序。微生物的一种操作方法程序。为此目的,所用的一切物品、此目的,所用的一切物品、环境,均境,均应事先事先灭菌,操作菌,操作也也应在无菌操作室中在无菌操作室中进行行2023/1/418无菌意无菌意识2023/1/419常用的常用的灭菌方法菌方法干干热灭菌菌湿湿热灭菌菌化学化学灭菌菌过滤灭菌菌辐射射灭菌菌2023/1/4201、干、干热灭菌菌干燥干燥条件条件16017024小小时;
8、1802000.51小小时;2501小小时。13514535小小时;2023/1/4212、湿、湿热灭菌菌高高压蒸汽蒸汽(纯蒸汽)蒸汽)灭菌菌法是最法是最为可靠的可靠的灭菌方法,菌方法,一般一般为121,20分分钟或或115,60分分钟,使用,使用时需将空气排尽需将空气排尽。2023/1/422气体气体灭菌法菌法利用利用环氧乙氧乙烷或或甲甲醛杀微生物的微生物的一种方法。一种方法。液体液体灭菌法菌法是用是用药液液杀灭微生物的方微生物的方法。通常使用的有乙醇法。通常使用的有乙醇(酒精)、甲酚、(酒精)、甲酚、苯酚苯酚水水或福或福尔马林水等。常用于林水等。常用于气体、气体、热不不稳定的定的药品溶品溶
9、液或原料的除菌。液或原料的除菌。化学化学灭菌菌2023/1/4234、过滤灭菌菌过滤灭菌法菌法,即用即用筛除或除或滤材吸附材吸附等物理方式除去微生物等物理方式除去微生物,是一种常是一种常用的用的灭菌方法。菌方法。对不耐不耐热液体液体,过滤是唯一是唯一实用的用的灭菌方法菌方法。过滤过滤法法不是将微生物不是将微生物杀死,而是把死,而是把它它们排除出去。排除出去。过滤过滤法法的最大缺点是不能的最大缺点是不能滤除病毒。除病毒。2023/1/4245、辐射射灭菌菌紫外紫外线灭菌法菌法是利用照射紫外是利用照射紫外线杀灭微生物微生物的一种方法。的一种方法。波波长:200300nm;高度:高度:1M;使用寿命
10、;使用寿命;2000h;2023/1/425消毒的概念消毒的概念用物理或化学方法用物理或化学方法杀灭或清或清除除传播媒介上的病原微生物,播媒介上的病原微生物,使其达到无害化。通常是指使其达到无害化。通常是指杀死病原微生物的繁殖体,死病原微生物的繁殖体,但不能破坏其芽但不能破坏其芽孢。所以消。所以消毒是不毒是不彻底的,不能代替底的,不能代替灭菌菌。2023/1/426防腐的概念防腐的概念防止或抑制体外防止或抑制体外细菌生菌生长繁殖的方法繁殖的方法2023/1/427污染染污染的定染的定义:当一个当一个产品存在有不品存在有不需要的物需要的物质时,它即受到,它即受到污染。染。污染的形式:染的形式:尘
11、粒粒污染、微生物染、微生物污染染传播媒介:空气、水、表面、物料、播媒介:空气、水、表面、物料、人人。2023/1/42803衣着衣着02水滴水滴01人的人的头发和皮肤和皮肤途径途径途径途径04化化妆品和品和珠宝手珠宝手饰途径途径途径途径途径途径途径途径途径途径途径途径2023/1/4290101人及其活人及其活动产生大量的生大量的尘埃粒子埃粒子污染染洁净室。室。020203030404人身上携人身上携带的各种微生的各种微生物物污染染洁净室。室。手是一个重要的手是一个重要的污染源。染源。口腔、鼻腔、口腔、鼻腔、头发也是也是污染源。染源。2023/1/4308003500个/m3空气中107个/m
12、l污染水140万个/cm2头皮上440万个两手上38亿个/g指甲垢2023/1/431臭男人臭男人1000个以上/min男性750个以上/min女性不穿洁净服2023/1/432穿洁净服10300个/min静止1501000个/min稍动9002500个/min行走70700个/次咳嗽40006万个/次喷嚏2023/1/433人人是是洁净室室最大最大的的污染源,占染源,占90%左左右。右。洁净厂房厂房设计规范范GB50073-2013所以在所以在洁净室中,人的室中,人的数量数量和和活活动应有特有特别严格的限制。格的限制。2023/1/434行行为规范范1、不要将个人的手机手表首、不要将个人的手
13、机手表首饰佩佩饰带入入洁净区区2、不要化、不要化妆或者使用容易造成或者使用容易造成洁净区区污染的染的护理用品理用品3、工作服(手套、工作服(手套/头罩罩/眼罩眼罩/鞋套)必鞋套)必须有效阻有效阻挡人体人体污染物染物4、不得用手开关、不得用手开关门,要用背部或者肘部,最好是非接触式,要用背部或者肘部,最好是非接触式5、任何操作、任何操作应尽可能尽可能轻缓,幅度要小,避免,幅度要小,避免对气流的气流的扰动6、手指接触培养皿取、手指接触培养皿取样,手消毒,手消毒7、生、生产操作操作时候,不得落手接触候,不得落手接触药品,身体任何部位品,身体任何部位应尽可能尽可能绕开开产品上空品上空8、打开或者盖上培
14、养皿是不得使身体任何部位、打开或者盖上培养皿是不得使身体任何部位经过上空上空9、触摸屏操作或者按、触摸屏操作或者按键操作操作应使用手指背部使用手指背部10、物品洒落地上不要、物品洒落地上不要拣起来使用起来使用11、工作服尽量不接触、工作服尽量不接触墙面、面、设备,任何,任何时候不得接触地面候不得接触地面12、接触、接触药品前必品前必须手消毒手消毒13、尽可能不要、尽可能不要讲话14、站姿、坐姿、操作、站姿、坐姿、操作动作一定要作一定要轻柔柔缓慢慢2023/1/435尘粒粒需要需要对环境中境中尘粒粒及及微微生物生物数量数量进行控制的房行控制的房间(区域),其建筑(区域),其建筑结构、装构、装备及
15、其使用及其使用应当当能能够减少减少该区域内区域内污染染物的物的引入引入、产生生和和滞留滞留微生物微生物控制控制数量数量2023/1/436悬浮粒子浮粒子2023/1/437微生物微生物2023/1/438控制控制原原则391 24 3如用高效滤器、电子自净气、臭氧如用高效滤器、电子自净气、臭氧发生器等发生器等对进入洁净室的空气对进入洁净室的空气充分地进行除菌或灭菌充分地进行除菌或灭菌换气次数及最佳的进风口与回风口换气次数及最佳的进风口与回风口的设计的设计使室内微生物颗粒迅速而使室内微生物颗粒迅速而有效地吸收并被排出室外有效地吸收并被排出室外如不能防止,则应尽量限制其扩散如不能防止,则应尽量限制
16、其扩散防止进入室内的人员防止进入室内的人员或物品散发细菌或物品散发细菌气流组织形式及合格的净化装修气流组织形式及合格的净化装修不让室内的微生物不让室内的微生物粒子积聚和衍生粒子积聚和衍生2023/1/4控制控制尘粒及微生物粒及微生物的意的意义微生物种微生物种类繁多,有的繁多,有的对人有益,人有益,有的有害,有的无益也无害。但在有的有害,有的无益也无害。但在药品生品生产过程中,不可能程中,不可能对环境中境中的各种微生物加以区的各种微生物加以区别对待,待,为保保证药品的安全有效,需要品的安全有效,需要对其其进行行控制。空气中的微生物多数控制。空气中的微生物多数附着附着在在灰灰尘上,或以芽上,或以芽
17、孢形式形式悬浮于空气浮于空气中,中,1m以下者以下者处于于悬浮浮状状态,10m以上者会逐以上者会逐渐沉下来沉下来而形成而形成菌菌尘。所以也要。所以也要对尘粒粒进行控制。行控制。2023/1/440控制控制尘粒及微生物粒及微生物的意的意义自自100多年前出多年前出现注射用注射用药至今,至今,非非肠道所用医用制品中的道所用医用制品中的热原原对人体的危害即人体的危害即热原反原反应已已经人所人所共知共知;大量大量临床床资料表明,注射料表明,注射剂(尤其是静脉注射(尤其是静脉注射剂)如)如污染了染了712m的的尘粒,可粒,可导致致热原反原反应、肺肺动脉炎、微血栓或异物肉芽脉炎、微血栓或异物肉芽肿等,等,
18、严重的重的还会致人死命。而如会致人死命。而如果果污染了染了细菌,菌,轻则局部局部红肿化化脓,重,重则引起全身引起全身细菌性感染。菌性感染。2023/1/441控制控制尘粒及微生物粒及微生物的意的意义注入人体的注射注入人体的注射剂中含有中含有热原量达原量达1g/kg就可引起不良反就可引起不良反应,发热反反应通常在注入通常在注入1小小时后出后出现,可使人体,可使人体产生生发冷、寒冷、寒颤、发热、出汗、出汗、恶心、心、呕吐等症状,有呕吐等症状,有时体温可升至体温可升至40以以上,上,严重者甚至昏迷、虚脱,如不及重者甚至昏迷、虚脱,如不及时抢救,可危及生命。救,可危及生命。该现象称象称为“热原反原反应
19、”。2023/1/442败血症流血症流行事件行事件山山东欣弗欣弗注射注射剂黑黑龙江刺五江刺五加注射加注射剂国内外染菌注射国内外染菌注射剂致死事件致死事件200820082006200619701970历史史药害事件回害事件回顾2023/1/443什么是热原2023/1/444发展展历程程1876年年1921年年1876年从腐肉年从腐肉中分离出一种中分离出一种不不带活菌活菌而而能能致致热的物的物质,当当时称之称之为热原。原。1921年以后年以后,逐逐渐认识到到这些些药液之所以液之所以引致引致发热,系系因被因被微生物微生物污染染因微生物代因微生物代谢产物所致。物所致。1942年年1942年美国年美
20、国把把热原家兔原家兔试验法收法收载入入药典后典后,发现霉霉菌菌,立克次氏立克次氏休、病毒、酵休、病毒、酵母菌也能母菌也能产生生热原。原。2023/1/445国内国内GMP可可以接受的以接受的观点点是:不存在是:不存在细菌内毒素意味菌内毒素意味着不存在着不存在热原。原。国内国内欧洲欧洲药典委典委员会副主席会副主席业内内医医药工工业普遍普遍接受控制内毒接受控制内毒素等于控制素等于控制热原。原。严格地格地讲,不是,不是每一种每一种热原都具原都具有脂多糖的有脂多糖的结构,构,但所有已知的但所有已知的细菌内毒素脂多糖菌内毒素脂多糖都有都有热原活性原活性”。2023/1/446目前国内外仍未有目前国内外仍
21、未有统一的一的认识,但从国内,但从国内外文献外文献报道中,一个道中,一个共同的意共同的意见,都普遍,都普遍认为:它是指:它是指细菌菌内内毒素毒素的的脂多糖脂多糖。2023/1/447热原的概念原的概念系指能引起恒温系指能引起恒温动物体温异常升高的物体温异常升高的致致热物物质,是微生,是微生物在生物在生长繁殖繁殖过程程中中产生的一种能引生的一种能引起恒温起恒温动物体温异物体温异常升高的常升高的内在的毒内在的毒素素。2023/1/448细菌毒素分菌毒素分类一一类为外毒素外毒素:它是一种毒性蛋白:它是一种毒性蛋白质,是,是细菌在生菌在生长过程中分泌到菌体外的毒性物程中分泌到菌体外的毒性物质。产生外毒
22、素的生外毒素的细菌主要是菌主要是革革兰氏阳性氏阳性菌菌。一一类为内毒素内毒素:是:是革革兰氏阴性菌氏阴性菌的的细胞壁胞壁的一种脂多糖和微量蛋白的一种脂多糖和微量蛋白结合的复合物。合的复合物。它的特殊性不是它的特殊性不是细菌或菌或细菌的代菌的代谢产物,物,而是而是细菌死亡或解体后才菌死亡或解体后才释放出来的一种放出来的一种具有内毒素生物活性的物具有内毒素生物活性的物质。内毒素主要。内毒素主要的化学成分是的化学成分是脂多糖脂多糖中的中的类脂脂A成分成分。2023/1/449革革兰氏染色反氏染色反应是是细菌菌分分类和和鉴定的重要定的重要性状。它是性状。它是1884年由年由丹麦丹麦医医师Gram创立的
23、。立的。细菌菌对革革兰氏染色的不同反氏染色的不同反应,是由于它,是由于它们细胞壁的成分和胞壁的成分和结构不同而造成的。构不同而造成的。常常见的革的革兰氏阳性菌有:氏阳性菌有:葡萄球菌葡萄球菌、链球球菌菌、肺炎肺炎双球菌双球菌、炭疽杆菌炭疽杆菌、白喉杆菌白喉杆菌、破破伤风杆菌杆菌等;等;-对青霉素青霉素敏感。敏感。常常见的革的革兰氏阴性菌有:氏阴性菌有:大大肠杆菌杆菌、痢疾痢疾杆菌杆菌、肺炎肺炎杆菌杆菌、霍乱弧菌霍乱弧菌、百日咳杆菌。百日咳杆菌。革革兰氏染色反氏染色反应2023/1/4502023/1/451致致热能力能力最最强:革革兰氏氏阴阴性性杆杆菌的菌的产物物;其次其次:革革兰阳阳性性杆杆
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