实验室质量控制课件.ppt

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1、1结合遗传科实验室分析相关“质量管理”2质量管理Quality control临床实验室为了保证检验结果实事求是的反映客观存在而建立的操作程序体系分析前分析前分析后分析后分析中分析中影响因素影响因素3标本检验结果的误差我们往往过分紧盯检验人员“实验过程”（分析中）的质量情况！检验前期误差 68%检验中期误差 13%检验后期误差 19%10104 43 3.4实验前期过程复杂、涉及面广，不受控制分析前分析前疾病诊断及检验疾病诊断及检验项目选择正确性项目选择正确性1.1.检验项目检验项目选择选择2.2.采集采集标本标本采血容器用错、内各种抗凝剂、促凝剂、表面活性剂及一些微量金属采血容器用错、内各种

2、抗凝剂、促凝剂、表面活性剂及一些微量金属压脉带绑扎过久、采血量、采血器材选择压脉带绑扎过久、采血量、采血器材选择除非生产商另有说明，否则无论何种采血管应缓慢倒转所有含添加剂的除非生产商另有说明，否则无论何种采血管应缓慢倒转所有含添加剂的采血管（枸橼酸钠除外）至少采血管（枸橼酸钠除外）至少5-105-10次，含枸橼酸钠的采血管应倒转次，含枸橼酸钠的采血管应倒转3-43-4次次离心前样品应凝固，不建议挑除血凝块。若凝固时间不够长，纤维蛋白形成离心前样品应凝固，不建议挑除血凝块。若凝固时间不够长，纤维蛋白形成可影响多个仪器系统，导致结果偏差，可选用含促凝剂的采血管加快凝血。可影响多个仪器系统，导致结

3、果偏差，可选用含促凝剂的采血管加快凝血。【普通管室温（普通管室温（20-2520-25）30-6030-60分完全凝血，温度低或冷藏则时间延长分完全凝血，温度低或冷藏则时间延长】除非文献中建议，否则不冷藏全血样品，因为冷藏样品抑制血细胞代谢，除非文献中建议，否则不冷藏全血样品，因为冷藏样品抑制血细胞代谢，稳定了某些热不稳定性组分。稳定了某些热不稳定性组分。除非有确凿证据说明长时间接触不会导致结果偏差，否则应尽快用物除非有确凿证据说明长时间接触不会导致结果偏差，否则应尽快用物理方法分离血清或血浆与细胞。理方法分离血清或血浆与细胞。分离的血浆分离的血浆/血清血清室温下保存时间不可超过室温下保存时间

4、不可超过8 8小时小时若在若在8 8小时内无法完成检测，则应（小时内无法完成检测，则应（2-82-8摄氏度）冷藏血清摄氏度）冷藏血清/血浆血浆 48 48小时内无法完成检测则血清小时内无法完成检测则血清/血浆应血浆应-20-20摄氏度下冷冻保存摄氏度下冷冻保存送检标本质量缺送检标本质量缺陷的隐蔽性陷的隐蔽性4.4.标本标本运送运送血血液液尿尿液液护士是否按前护士是否按前述规则操作？述规则操作？前段、中段、前段、中段、末段有区别末段有区别3 3小时前与小时前与3 3小小时后结果有变化时后结果有变化3.3.标本标本处理处理除非有经验证明的文除非有经验证明的文献指出偏离标准不会献指出偏离标准不会影响

5、结果，否则应严影响结果，否则应严格遵守生产商的指南格遵守生产商的指南5综上我想到的 采采好好血血的的管管最最好好不不要要放放置置到到最最后后统统一一离离心心处处理理。除除非非有有要要求求，否否则不冷藏，更不可过夜！则不冷藏，更不可过夜！用正确的容器；用正确的容器；恰当且及时的分离血清恰当且及时的分离血清/血浆；血浆；放放到到冰冰箱箱里里的的应应该该是是：血血清清/血血浆浆，是是该该冷冷藏藏还还是是冷冷冻冻，要做出相应处理；要做出相应处理；！我想如果有一个我想如果有一个小型便捷的离心机小型便捷的离心机，放在采血口旁边，能很好的完成这些。，放在采血口旁边，能很好的完成这些。！优生五项、不孕抗体优生

6、五项、不孕抗体一周检测一次，不应冷藏保存，一周检测一次，不应冷藏保存，同样应像产前筛查一样，同样应像产前筛查一样，-20-20储储 存，存，避免反复冻融。试剂盒说明书也有提到。避免反复冻融。试剂盒说明书也有提到。血清血清/血浆完成检测的期限：血浆完成检测的期限：室温放置应在室温放置应在8 8小时小时以内。以内。冷藏放置应在冷藏放置应在4848小时小时内。内。而而4848小时以外需小时以外需-20-20冷冻保存。冷冻保存。我们九联检的标本有的需要过夜保存的，应及时分离血清，冷藏保存！我们九联检的标本有的需要过夜保存的，应及时分离血清，冷藏保存！而染色体冷藏时间越长肯定会越难培养。而染色体冷藏时间

7、越长肯定会越难培养。巨细胞尿液、乳汁标本；手足口、巨细胞尿液、乳汁标本；手足口、STDSTD、HPVHPV分泌物标本因为有细胞保存液，可冷分泌物标本因为有细胞保存液，可冷 藏保存较长时间。藏保存较长时间。6分析中-1硬件设备和技术对实验室未来关系重大（不进则退）RT-PCRRT-PCR（实时荧光聚合（实时荧光聚合酶链式反应）酶链式反应）针对病原体针对病原体DNADNA特异保守核酸序列特异保守核酸序列进行扩增进行扩增实时荧光核酸实时荧光核酸恒温恒温扩增检扩增检测技术（测技术（SATSAT技术技术 上海仁度上海仁度）上海仁度由美籍华裔科学家与国内企业家共同创建，上海仁度由美籍华裔科学家与国内企业家

8、共同创建，拥有核酸诊断技术自主知识产权拥有核酸诊断技术自主知识产权RNARNA扩增技术扩增技术（针对单链（针对单链RNARNA目目标序列）标序列）转录介导的扩增技术转录介导的扩增技术（TMATMA技术）技术）【美国美国 HOLOGIC Gen-Probe公司】基于核算序列扩增检测技术基于核算序列扩增检测技术（NASBANASBA技术）技术）法国法国BIOMERIEUXBIOMERIEUX公司公司国内外类似技术国内外类似技术7扩增检测技术国外，已超过技术成为病原体诊断主流国外，已超过技术成为病原体诊断主流uu美美国国85%85%顶顶级级医医院院使使用用RNARNA扩扩增增技技术术检检测测优优生生

9、系系列列的的CT/NGCT/NG（定性检测定性检测）。uHOLOGIC Gen-Probe公司的TMA(APTIMA Combo2),是目前市场上最好的CT/NG检测产品，无竞争对手。uTMA用于CT/NG的检测是目前行业公认的“金标准”。u新方法学CT/NG的产品临床试验都必须选择TMA做参比试剂。在国内，由于价格昂贵开展使用的医院少，还未发展起来在国内，由于价格昂贵开展使用的医院少，还未发展起来uu北京北京北京协和医院北大三院北大医院北京儿童医院。北京协和医院北大三院北大医院北京儿童医院。uu上海上海上海瑞金医院上海长征医院上海复旦妇产科医院上海儿童医学中心。上海瑞金医院上海长征医院上海复

10、旦妇产科医院上海儿童医学中心。uu广州广州中山大学附属第一医院中山大学附属三院南方医院广州市妇女儿童中心广州军区总院。中山大学附属第一医院中山大学附属三院南方医院广州市妇女儿童中心广州军区总院。8示意图示意图欠准确欠准确9PCR90以上解以上解链链变性变性（解螺旋单（解螺旋单链）链）55退退火火（复性）（复性）引物引物延伸延伸用带荧光的探针与产物结合，机器读荧光值，计算产物浓度10PCR温度曲线图变变性性延延伸伸退退火火111条链40次循环扩增数量（理论值）循环次数循环次数目标链数量（目标链数量（2 2-1-1）10 0条条21 1 两条两条32 2 4 4条条43 3 8 8条条201919

11、524288524288 5.25.210105 5条条302929536870912536870912 5.45.410108 8条条403939549755813888549755813888 5.55.510101111条条（百亿）（百亿）如果扩增系统提取到如果扩增系统提取到5条条DNA链，链，则则40循环后为循环后为2.8 10101212条条（千亿）（千亿）公式：公式：x x条条2 2-1-1 （n n为循环数）为循环数）DNADNA扩增数量以扩增数量以2 2n-1n-1递增递增（n n40）整个扩增过程约需整个扩增过程约需2 2小时小时12SAT的优势（RNA扩增）一个一个细胞内胞

12、内有有一个或几个一个或几个DNAcopy/cell，而有核糖体而有核糖体RNA约104copy/cell，其中，其中蕴含的含的目目标RNA远大远大于于DNADNA的含量，灵敏度极高。的含量，灵敏度极高。恒定恒定42下，下，仅一条靶一条靶标RNA核酸短核酸短链首先逆首先逆转录产生一条生一条单链cDNAcDNA转录生成生成一个双一个双链DNA利用利用T7RNA多聚多聚酶该双双链DNA能能产生生1001000个个RNA拷拷贝每一条每一条RNA再从反再从反转录开始开始进入下一个循入下一个循环；RNA数量是按数量是按1-100-10000-1000000即即1 110102 210103 3递增，递增，

13、DNADNA以以2 2n-1n-1递增，可见递增，可见RNARNA扩增效率极高扩增效率极高,整个扩增需整个扩增需10-1510-15分钟。分钟。带有有荧光光标记的探的探针和和这些些RNA拷拷贝特特异异结合，合，产生生荧光；机器光；机器读取取荧光光值计算算产物物浓度。度。恒温扩增原理图恒温扩增原理图恒温恒温424213SAT技术优势一、先进的恒温扩增技术一、先进的恒温扩增技术 扩增在一个温度下进行（42），无需热循环。二、领先的二、领先的RNARNA检测技术检测技术 SAT技术直接以病原体特异性病原体特异性RNARNA为扩增靶标，以扩增产物RNARNA为检测靶标，因 RNA的存在时间短，病原体死

14、亡RNA就很快降解，对活动性进行性感染有诊断意义，与临床相关性好，=实验室的“培养培养”三、更高的检测灵敏度和准确性三、更高的检测灵敏度和准确性 SAT技术的扩增效率极高，检测灵敏度和准确性远高于其他核酸检测技术。四、有效减少假阴性结果四、有效减少假阴性结果 SAT技术采用M-MLV逆转录酶和T7RNA多聚酶进行核酸扩增，相对于其它核酸扩 增技术，反应抑制物更少，有效减少假阴性结果。五、有效的解决了扩增产物的污染问题五、有效的解决了扩增产物的污染问题 扩增产物的污染污染是核酸检测的控制难点。SAT技术采用实时荧光闭管检测实时荧光闭管检测，使污 染得到有效控制；即使污染产生，由于扩增产物为RNA

15、，环境中极易降解，从而大幅度 提高检测结果的可靠性。六、大大降低了核酸扩增实验室的要求六、大大降低了核酸扩增实验室的要求14一、实践经验告诉我们，实验室要高效、准确的完成各种繁重的工作任务，一、实践经验告诉我们，实验室要高效、准确的完成各种繁重的工作任务，仅仅依靠领导和共产党员的模范带头作用是不够的，仅仅依靠领导和共产党员的模范带头作用是不够的，必须依靠科学管理，必须依靠科学管理，将人力资源进行科学分配，实施全员岗位责任制，科主任起领导、管理将人力资源进行科学分配，实施全员岗位责任制，科主任起领导、管理的作用，而不是忙于日常事务，忙于每天替班、接班。的作用，而不是忙于日常事务，忙于每天替班、接

16、班。二、临床实验室现在面临一个矛盾：二、临床实验室现在面临一个矛盾：“检验质量检验质量”和和“经济支出经济支出”，若单，若单纯追求经济效益使用价廉质差的试剂、材料、质控品、标准品，必然造纯追求经济效益使用价廉质差的试剂、材料、质控品、标准品，必然造成检验质量的下降，肯定是不对。成检验质量的下降，肯定是不对。经济支出管理的原则是经济支出管理的原则是以保证以保证检验质量为前提，其次是经济效益。检验质量为前提，其次是经济效益。三、三、质控品和标准品质控品和标准品的选择是影响检验质量核心和关键，不能以次充好，的选择是影响检验质量核心和关键，不能以次充好，做做“室内质控室内质控”和和“室间质评室间质评”

17、无论做多少次，也不得巧立名目乱收费。无论做多少次，也不得巧立名目乱收费。分析中-2在实验室中人的重要性-人力资源管理15正态分布 在医学领域中有许多变量的頻数分布是中间（靠近平均数）的頻数多，两边的頻数少，越靠近平均数，越符合正常的机率高，而且左右对称，此种分布叫做正态分布。那么医学卫生工作中又有许多指标近似服从正态分布，相应的我们实验室中所测样本数据中的随机误差等也服从正态分布（这是实验室做质量控制，将随机误差控制在均数加减N倍标准差范围内的理论基础）还有一些数据虽不服从正态分布，但可以通过转换，如求对数log值转换后服从正态分布，被称为对数正态分布，实验室所测样品不论单位是IU/ml或Co

18、pies/ml，浓度均较高，不容易计算，故都经log转换后再分析。1617平均数、标准差、变异系数描述定量资料分布规律的指标有三类一类是：平均数X（集中趋势）一类是：标准差S（离散趋势）一类是变异系数CV%.变异系数变异系数CV=（标准差标准差S平均值平均值X）100%18平均数X的公式是：所有样本数据之和（x）除以样本个数n.它是用来描述一组资料的集中趋势的。算数平均数X：19标准差S是怎么来的：S是用来表示样本资料的离散趋势的，实际上是求每个样本值与平均值差值的平均数。一、公式是所有数据减去平均数（离均差）之和除以n-1(自由度)。缺点是离均差之和为零！二、为了解决，公式改为离均差先平方再

19、相加除以n-1(自由度)。缺点是数据平方之后太大，不利于统计处理！三、数据再开方求出算数根，这就是最终的标准差S，标准差S和算术平均数是有相同单位的，某个数据距离均数的距离可以用1S、2S、3S来表示！四、控制限 是判断质控品测定结果允许范围的上、下限，通常以标准差的倍数标准差的倍数表示20 平均数平均数就是绝大多数正常人群检测后的数值，人为就是绝大多数正常人群检测后的数值，人为的定一个区间的定一个区间95%95%或或99%99%，超过的在统计学上视为小概率，超过的在统计学上视为小概率或不可能发生的事件，视为异常。或不可能发生的事件，视为异常。标准差标准差就是观察检测值偏离整体均数的计量单位，

20、就是观察检测值偏离整体均数的计量单位，1S1S处的数值，大概处于整体的处的数值，大概处于整体的68%68%以外，以外，1.96S1.96S大概处于大概处于95%95%以外，以外，2S2S是是95.45%95.45%，3S3S是是99.73%99.73%。医学上制定参考值范围通常把绝大多数正常人的某医学上制定参考值范围通常把绝大多数正常人的某指标值范围称为正常值范围，那这个绝大多数到底是选指标值范围称为正常值范围，那这个绝大多数到底是选一个多大的区间合适呢？多少呢？一个多大的区间合适呢？多少呢？90%90%、95%95%、99%99%？我们我们认为根据实际情况认为根据实际情况一般选择一般选择95

21、%95%，95%95%的正常人的值认为的正常人的值认为是正常的，超过的则异常。是正常的，超过的则异常。21XS范围曲线所占頻数是68.27%X1.64S范围曲线所占頻数是90.90%X1.96S范围曲线所占頻数是95.00%X2S范围曲线所占頻数是95.45%X3S范围曲线所占頻数是99.73%22变异系数 CVCV=SD/X100%标准差S S描述的是数据相对均数数据相对均数的绝对绝对离散离散程度程度变异系数CVCV是描述数据相对均数数据相对均数的相对相对离散离散趋势趋势CV的优势：比较度量衡不同度量衡不同的多组资料多组资料相对于各自均 数的离散趋势（变异度）。离散趋势（变异度）。比如一组身

22、 高，一组体重、一组肺活量，各组数据虽 单位不同，但可用但可用CVCV来比较它们的相对离来比较它们的相对离 散趋势，标准差大，不一定代表总体的离散趋势，标准差大，不一定代表总体的离 散趋势就大。散趋势就大。标准差标准差 平均值平均值/23统计质控方法实验变异的基线（X X）的的测定：OCV（optimal conditions variance）质控物在最佳条件下的变异最佳条件是指在仪器、试剂和实验操作者等可能影响实验结果的因素处于最佳时，连续测定同一浓度同一批号质控物2020批批次以上，即可得到一组质控数据，经过计算得出均值、标准差和变异系数CV，此CV即为OCV。RCV（routine c

23、onditions variance）常规条件下的变异常规条件是指在仪器、试剂和实验操作者等可能影响实验结果的因素均处于通常的实验条件下，连续测定同一浓度同一批号质控物2020批批次以上，即可得到一组质控数据，经过计算得出均值、标准差和变异系数CV，此CV即为RCV。所有数据无论是否超过所有数据无论是否超过3S3S，均应用于上述统计计算，否则标准差变小，均应用于上述统计计算，否则标准差变小，导致以后的实验数据更容易失控：导致以后的实验数据更容易失控：RCVRCV与与OCVOCV接近接近或小于小于2 2倍倍OCVOCV时，则RCV是可以接受的，否则就需要对常规条件下的操作水平采取措施予以改进。这

24、这2020批次的测定值间的变异即称为批次的测定值间的变异即称为批间变异批间变异！24精密度精密度精密度是指在规定条件下相互独立的检测结果间的一致程度。它表示测量结是指在规定条件下相互独立的检测结果间的一致程度。它表示测量结果中的果中的随机误差大小随机误差大小。它分三种：它分三种：（1 1）批内精密度（批内变异）批内精密度（批内变异）是指对同一标本用同一方法在相同条件是指对同一标本用同一方法在相同条件 下多次重复测定所下多次重复测定所得的各次结果之间或各次结果与均值之间的符合程度。得的各次结果之间或各次结果与均值之间的符合程度。在重复检测时它的变异性是最小的。在重复检测时它的变异性是最小的。（同

25、一质控品提取完毕后，多次重复上机检测所得结果）（同一质控品提取完毕后，多次重复上机检测所得结果）（2 2）批间精密度（批间变异）批间精密度（批间变异）是指在同一天内（日内）几个不同批重复检测同一是指在同一天内（日内）几个不同批重复检测同一标本时的变异性，它通常比批内变异性要高。标本时的变异性，它通常比批内变异性要高。（同一质控品在一日内重复提取数次上机检测所得结果）（同一质控品在一日内重复提取数次上机检测所得结果）（3 3）日间精密度）日间精密度 是在不同天重复检测同一样本所得的变异性。这种变异性是分析性能最是在不同天重复检测同一样本所得的变异性。这种变异性是分析性能最实际的评价，因为它包括了

26、不同操作人员、仪器日间、实验室温度或其它条件的变化对方法性实际的评价，因为它包括了不同操作人员、仪器日间、实验室温度或其它条件的变化对方法性能的影响。能的影响。（同一质控品在不同日期内重复提取数次上机检测所得结果）（同一质控品在不同日期内重复提取数次上机检测所得结果）基本概念基本概念25在临床基因扩增检验中，按上述步骤通常会很繁琐，希望直接能进入RCV的测定计算，如果有一定的实验工作基础，应该说是可以的。因为OCV从某种意义上来说，指的是试剂盒或方法学本身的批间变异，可以从其他一些途径得到，如试剂的生产厂家或文献报道。基因扩增结果的原始数据很大，故使用对数值对数值来进行质控统计分析要更为方便一

27、些。26室内质控基本概念 室室内内质质量量控控制制：是由检验人员对实验室的工作和测定结果进行连续评价，以决定工作和结果的可靠性是否达到发出报告规定的一系列活动。主主要要目目的的是是保保证证日日间间结结果果的的一一致致性性，因因此此要要求求每每个个项项目目具具有有一一定定的的重重现现性，其以精密度来衡量。性，其以精密度来衡量。27室内质控室内质控的目的是室内质控的目的是监测测定过程，监测测定过程，当出现医学上重当出现医学上重要的误差时，用适当的质控方法警告分析人员。要的误差时，用适当的质控方法警告分析人员。一般来说，一般来说，实验室通过测定实验室通过测定质控品质控品来检查检验结果来检查检验结果的

28、质量，并将质控结果画在质控图上，的质量，并将质控结果画在质控图上，观察质控结观察质控结果是否超过质控限来决定是否失控。果是否超过质控限来决定是否失控。实验室最常用的是实验室最常用的是Levey-JenningsLevey-Jennings质控图。质控图。28误差给你一个质控图你会判断什么是系统误差系统误差什么是随机误差随机误差吗？心里有概念吗！心里有概念吗！29误差误差是指是指测量结果测量结果减去被测量的减去被测量的真值真值所得的差，称为误差。所得的差，称为误差。随机误差随机误差 是由于某些偶然原因引起，这种误差难以预料或不可控制。特特点点：标标准准差差增增大大，有有的的测测定定值值落落在在左

29、左边边，有有的的落落在在右右边边，简简言言之之随随机机误误差差在在质质控控图图上上的的特特点点就就是是忽忽左左忽忽右右，没没有有规规律律，多多次次试试验验后后，发发现现检检测测值值在在均数两侧对称分布（正态分布）；均数两侧对称分布（正态分布）；主要来自能影响结果的操作误差、实验条件的改变等。标本多次重复测定可减少偶然误差，提高精密度。系统误差系统误差 是指一系列分析测定结果对真值或靶值真值或靶值存在同一倾向同一倾向的误差。其特点是重复检验时，常按一定规律重复出现，即测定结果与靶值相其特点是重复检验时，常按一定规律重复出现，即测定结果与靶值相 比，结果比，结果总是偏高或偏低，总是偏高或偏低，增加

30、测定次数也不能使之消除；增加测定次数也不能使之消除；主要来源于方法误差仪器误差、试剂误差、实验器具误差、恒定的环境误差等。消除系统误差能提高测结果的准确性。基本概念基本概念30标准品标准品 是指一定量的是指一定量的纯品溶解纯品溶解在容量瓶内稀释至容在容量瓶内稀释至容积刻度的积刻度的标准液标准液，标准品的值由称量和容积计算确，标准品的值由称量和容积计算确定定。（定量）（定量）校准品校准品 是指定用来校准某检测系统的物质，它有在是指定用来校准某检测系统的物质，它有在考虑了考虑了基质效应基质效应的情况下，人为赋予的值。校准品的情况下，人为赋予的值。校准品专用于某一检测系统；专用于某一检测系统；同一个

31、校准品用于不同仪器同一个校准品用于不同仪器时，应该有不同的校准值。时，应该有不同的校准值。（校准机器）（校准机器）质控品质控品 专门用于质量控制目的的标本或溶液，不能专门用于质量控制目的的标本或溶液，不能用作校准。用作校准。（控制检测质量）（控制检测质量）基本概念31干扰干扰 指标本中某些非被测物质本身不与试剂反应，但以其它方式使测定结果偏高或偏低，这种现象称为干扰，这些非被测物质称为干扰物。例如患者服用维生素C达到一定浓度可干扰葡萄糖氧化酶法，使血糖测定结果偏低。基质基质 是指标本中除分析物以外的一切组成成分。基质效应基质效应 是指标本中除分析物以外的其它成分对分析物测定值的影响；或者是指基

32、质对分析方法准确测定分析物能力的干扰。检测系统检测系统 是指完成一个检验项目的测定所涉及的仪器、试剂、校准品、耗材等的组合。基本概念基本概念32质质控控规规则则 是解释质控数据和作出控制状态判断的规定，一般用符号AL表示，A是质控测定值的个数或特定统计量的缩写，L是控制界限，如12s、13s、22s、R4s、41s、10 x等。符符 号号 定定 义义12S 一个质控测定值超出2s控制限。13S 一个质控测定值超出3s控制限。22S 两个连续的质控测定值同时超出+2s或2s控制限。R4S 同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间的 差值超出4s控制限。41S 四个连续的质控测定值同时超出+1

33、s或1s控制限。10 x 十个连续的质控测定值同时处于均值的同一侧。在控在控 指指根据质控规则判断质控品检测结果没有符合失控规则的情况。根据质控规则判断质控品检测结果没有符合失控规则的情况。失控失控 指指根据质控规则判断质控品检测结果有符合失控规则的情况根据质控规则判断质控品检测结果有符合失控规则的情况基本概念基本概念33质控品 1.质控品的种类：根据物理性状不同分为冻干质控品、液体质控冻干质控品、液体质控品和混合血清等。品和混合血清等。根据生产商是否赋值分为定值质控品和非定定值质控品和非定值质控品。值质控品。不论定值还是非定值质控品，用户在使用时，必必须须用用自自己己的的检检测测系系统统确确

34、定定自自己己的的均均值值和和标标准准差差。厂厂家家提提供供的的均均值值是是基基于于人人家家实实验验室室检检测测系系统统和和环环境境测测出出的的，他他标标示示的的预预期期范范围围只只是是告告诉诉用用户户，只只要要你你的的测测定定值值在在预预期期范范围围内内，说说明明他他的的控控制制品品是是好好的的，千千万万不不能能将将预预期期值值范范围围认认为为是是控控制制的的允允许许范围。范围。34352.质控品的质量要求：、质控品应为人血清基质；基质效应小；、生化、免疫等质控品在规定保存条件下至少稳定一年，冻干品复溶后室温下稳定时间大于8小时；、临床实验室开展统计过程分析其目的是控制检验结果的重复性。检检验

35、验结结果果的的变变异异由由检检测测不不精精密密度度和和更更换换的的各各瓶瓶控控制制品品间间差差异异的的综综合合因因素素导导致致。只只有有将将瓶瓶间间差差异异控控制制到到最最小小，才才能能使使检检测测结结果果间间的的变变异异真真正正反反映映日日常检验常检验操作的不精密度操作的不精密度。日常控制品若是冻干品，用户对冻干品的复溶要遵循严格的复溶操作标准化。如：质控品均匀溶解，用AA级容量移液管，优级的去离子水，对瓶内冻干物湿润和混匀的动作与时间要求都有明确规定。市场上已提供液体的控制品，它消除了复溶过程引入的误差；缺点是价格昂贵，而且总含有防腐剂，会引入新的基质效应带来的误差。液体控制品虽昂贵，但开

36、瓶后可稳定14-30天；而冻干的控制品复溶后通常只稳定48小时。液液体体控控制制品品的的稳稳定定可可减减少少浪浪费费，消消除除瓶瓶间间差差，也也消消除了操作人员原来复溶过程的操作误差，除了操作人员原来复溶过程的操作误差，所以不少实验室愿意采用。、质质控控品品应应尽尽量量保保证证一一个个批批号号一一年年左左右右用用量量，这这样样才才能能在在较较长长时时间间内内观观察察控控制制过过程程的的质质量量变变化化，也也减减低低不不断断应应用用新新批批号号质质控控品品的的成成本本和和工工作作量。量。363.3.冻干质控品的复溶与储存，须严格按其说明书执行，要冻干质控品的复溶与储存，须严格按其说明书执行，要点

37、有：点有：按生产商推荐方法储存。按生产商推荐方法储存。复融时从冰箱中取出，放室温约30待与室温平衡后，再小心打开瓶塞，防止质控物丢失。用经校准的移液管，用符合厂家要求的稀释液准确稀释。盖上盖子，室温静置约15，期间温和转动瓶子让其完全溶解，取样前，温和颠倒瓶子数次，以保各成分均一。37质控品的设置、数量及排列顺序临床基因扩增检验的室内质控中，每次检测究竟使用几个质控样本？并排在哪个位置最为适宜呢？这个问题非常实际，理论上说，为最大可能的检出实验的随机和系统误差，应每隔几份临床标本插入1份质控样本，均匀分散于临床标本中，与临床标本一同处理（核酸提取）。但考但考虑国内国内实际和成本效益和成本效益，

38、如果扩增的样本量不是特别大如小于30，弱阳性和阴性弱阳性和阴性质控各控各1份，份，标本数量增加，本数量增加，质控物数量相控物数量相应按比例增加按比例增加定性定性测定定有一份接近cut-off（定性阳性判断（定性阳性判断值copies/ml）的弱阳性弱阳性和一份阴性质控样本应可以满足要求。定量定量测定定要根据实验的测定范围，采取高、中、低高、中、低三种浓度的质控样本。至于测定中的排列顺序，可排于标准品或校准品之后，临床样本之前。但在扩增仪中的位置，不应永久性的固定的在一个孔，而应在每次扩增检测时，进行相应的顺延，以使在一定的时间内，可以尽可能的监测每一个孔的扩增有效性。？38需要指出的是，临床基

39、因扩增检验室内质控与其他临床检验室内质控相比，应增加一个监测污染染发生的阴性生的阴性质控控设置，置，它不用参与它不用参与统计学方法来分析，学方法来分析，但但对于于临床基因床基因扩增增检验必不可少！必不可少！具体方法是：一个具体方法是：一个阴性原血清阴性原血清质控控样本本；一个由核酸提取一个由核酸提取过程中程中带入的一入的一个个空管，内加水来空管，内加水来模模拟标本本；一个一个仅含含扩增反增反应混合液的管以水代替混合液的管以水代替核酸核酸提取提取样本本。阴性原血清阴性原血清质控控样本本功能：功能：监测实验室的室的以前以前扩增增产物是否已物是否已产生生污染。染。实验室操作所致的室操作所致的标本本间

40、的交叉的交叉污染，染，具体如：具体如：强阳性阳性标本气溶胶本气溶胶经加加样器所致的器所致的污染。染。强阳性阳性标本本经操作者的手所致的操作者的手所致的污染。染。使用翻盖离心管核酸提取使用翻盖离心管核酸提取时在在较高温温育高温温育时盖子崩开等。盖子崩开等。扩增反增反应试剂的的污染。染。空管作用是其内不含可能有的空管作用是其内不含可能有的扩增抑制物，因此增抑制物，因此对污染的反染的反应更更为敏感，敏感，但因但因阴性原血清阴性原血清质控控样本含蛋白、脂本含蛋白、脂类的特殊性，具体操作的特殊性，具体操作细节还是有所是有所不同，不能替代。不同，不能替代。仅含含扩增反增反应液的液的A管加管加样前前（水）（

41、水）不要打开，另取一个或多个不要打开，另取一个或多个B空管，打空管，打开盖子静置于开盖子静置于标本制本制备区区30-60分分钟，然后加入，然后加入扩增反增反应液以及以水替代核液以及以水替代核酸酸样本本扩增，增，A管管为阴性阴性，而，而B管管扩增出增出现阳性阳性，说明明实验室以前室以前扩增增产物物的存在。的存在。39 1）稳定性较好的质控物：(1)先建立暂定均值和质控限。在“旧”批号质控物使用结束前，将新批号质控物与“旧”批号质控物同时进行测定约一个月，获得至少20个新质控物的测定结果，计算其均值、标准差和变异系数，剔除超过均值3S的离群值，重新计算余下数据的均数和标准差，作为下一个月新质控物室

42、内质控图的均值和标准差；此月结束后，将该月的在控结果与前20个质控测定结果汇集一起，计算它们的累积均值和标准差，作为再下一个月质控图的均值和标准差，绘制该月质控图。(2)重复上述过程，连续累积三至五个月，作为该质控物在有效期内的常规均值和标准差。2）稳定期较短的质控品：在3至4天内，每天分析每水平质控品3至4瓶，每瓶进行2至3次重复，收集数据计算均值、标准差和变异系数，剔除离群值，重新计算其均数和标准差，其中均值作为质控图的均值。标准差获得 由于使用的数据量越大，标准差估计值就越好，因此，不推荐用上述对稳定性较短的质控品建立均值的方法来建立其标准差，而用以前变异系数（CV%）来估计。以前变异系

43、数是几个月数据累积的结果，考虑了检测过程中更多的变异。新的标准差等于其均数乘上以前变异系数。质控品的均值、标准差、变异系数获得40内质控（internal control,IC）临床标本中有多种成分可能会通过与与酶反反应成分成分的相互作用而抑制核酸扩增，如血红素，以及脑脊液、尿液、痰液中也存在DNA聚合聚合酶抑制物抑制物，以及降解靶核苷酸的核酸降解靶核苷酸的核酸酶，但抑制物的确切成分尚不清楚。但抑制物的确切成分尚不清楚。对临床标本及核酸提取中可能存在的抑制/干扰物的质控措施，可通过内内质控控(通常也称为内内标)来检测。这种内标最好在临床标本制备前加入，然后与标本中靶核酸一起经历核酸提取过程，成

44、成为核酸提取核酸提取过程中的程中的质控。控。内标和样本靶核苷酸都未出都未出现扩增增，说明抑制物的存在，处理措施最简单的是稀稀释法，但不能稀法，但不能稀释过大至大至浓度低至度低至测定方法的下限以下。定方法的下限以下。内标未出未出现扩增增但靶序列出出现扩增，增，则可能是靶序列可能是靶序列浓度度过高，内高，内标受到抑制，同受到抑制，同样可用可用稀稀释方法方法来来证明明这一点。一点。411924年，美国休哈特（W.A.Shewhart）首先提出质控图。（在提出质控图之前，人们曾试图采用各种方法来预测质量变动的预兆，但均未获成功，工业品的不合格率相当高）20世纪50年代，Levey和Jennings把质

45、控图引入到临床检验中。（质控方法是建立在单个质控品双份测定值的均值和极差的基础上）Henry和Segalove对L-J质控图（X-R）进行了修改，以2020份份质控品的试验结果，计算均值均值和标准差标准差，定出质控限，每天或每批随患者标本测定质控品一次，将所得的质控结果标在质控图上。这各质控图一般称为单值质控图单值质控图，也就目前大家所熟悉的L-JL-J质控图质控图。质控图质控图42Levey-Jennings质控图 的演变过程最早最早的L-J质控图，每天要做两个两个控制品检测，只要有一个超过 1 13S3S控制限控制限即为 失控；（假失控率0.3%）修改修改的L-J质控图，每天只做一个一个控

46、制品检测，只要有一个超过1 12S2S控制限控制限即为 失控，这是L-J质控图统计学控制方法确定的。因为仅检测一个控制品超出因为仅检测一个控制品超出1 12S2S假失控的概率为假失控的概率为5%5%。假若是两个不同浓度假若是两个不同浓度控制品同时使用，任一个控制值超出控制品同时使用，任一个控制值超出2SD2SD控制限，不能判断为失控，因为任控制限，不能判断为失控，因为任一个控制品的控制值超出一个控制品的控制值超出2SD2SD控制限的可能性升为控制限的可能性升为10%10%，会增加结果属于正常，会增加结果属于正常的假失控错误率。的假失控错误率。改良改良的L-J质控图，是在控制图上同时标出12S

47、和13S控制限。两个水平控制品中，任一个超出13S可立即确定失控，因为 0.3%假失控率很小，可以认为，一旦出现，即真有问题。两个水平控制品中，任一个超出12S，不能判断失控，仅为警 告限，继续观察。改良的改良的L-JL-J质控图，其实为将来质控图，其实为将来WestgardWestgard多规则质控图奠定基础。多规则质控图奠定基础。第一代质量控制技术第一代质量控制技术43u一次试验中如果使用一个控制品，则应以一次试验中如果使用一个控制品，则应以2S2S为失控限。为失控限。超过2SD即为失控，不可以发报告，假失控的错误概率为5%5%。u假若是两个不同浓度控制品同时使用，任一个控制值假若是两个不

48、同浓度控制品同时使用，任一个控制值超出超出2SD2SD控制限，不能判断为失控，控制限，不能判断为失控，因为任一个控制品的控制值超出超出2SD2SD控制限的可能性升为控制限的可能性升为10%10%，三个质控，三个质控物则假失控率为物则假失控率为15%15%！u如果使用两个不同浓度的控制品则应以如果使用两个不同浓度的控制品则应以3s3s为失控限。超为失控限。超过过3SD3SD即为失控。即为失控。Levey-Jennings质控图 基本的统计学含义4445补充一句：充一句：若若样本本值落在落在3s的失控的失控线上，不算失控；上，不算失控；若落在若落在2s的警告的警告线上，不上，不视为报警！警！其它其

49、它质控方法同控方法同样适用此适用此规则！46Levey-Jennings质控图存在不足n以以2SD为失控限，有失控限，有5%的假失控率，只要超的假失控率，只要超过2SD就就认为失控。失控。随着自动化控制仪器的引入，电脑严格按照程序执行质量控制，按此超过2SD，仪器会自动报警，就必须寻找原因，排除故障，方可重新启动。但是究竟是失控还是95%以外的偶然概率，无法分辨。n那么经实验证实，若每批用两个控制品，同时使用3SD和2SD两个控制规则，则判断为“失控失控”的次数之比约为3SD:2SD=1:9仅以仅以2SD为控制规则灵敏度为控制规则灵敏度特异度特异度仅以仅以3SD为控制规则灵敏度为控制规则灵敏度

50、特异度特异度这两种规则不论单独还是联合使用，均应小心判断！这两种规则不论单独还是联合使用，均应小心判断！仪器的引入，使第一代质量控制技术显得粗糙、落后！仪器的引入，使第一代质量控制技术显得粗糙、落后！47如必须采用以如必须采用以2SD2SD为失为失控线的话，为了弥补控线的话，为了弥补5%5%的的假失控率，若以假失控率，若以2.5SD2.5SD为失控线常可获得较好的为失控线常可获得较好的控制效果！控制效果！48Westgard多规则控制方法第二代质量控制方法第二代质量控制方法1.Westgard建议使用两个控制品，浓度一高一低，两个控制品，浓度一高一低，形成一个范围的控制（没有条件 也可只用一个