第五节温敏突变株.ppt
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1、一、温敏突变株的特性一、温敏突变株的特性二、温敏突变株的筛选方法二、温敏突变株的筛选方法 诱变诱变 富集富集 筛选筛选 三、温敏突变株在工业中的应用三、温敏突变株在工业中的应用 第四节第四节 温敏突变株的筛选温敏突变株的筛选 1、温度敏感突变株、温度敏感突变株(temperature-sensitive mutant,TS突变株)突变株)在诱变处理后的菌群中能分离到这样一类在诱变处理后的菌群中能分离到这样一类突变株:在许可温度下能正常生长,其表型和突变株:在许可温度下能正常生长,其表型和野生型没有区别,在非许可的温度下不能生长野生型没有区别,在非许可的温度下不能生长或微弱生长,表型与野生型不同
2、,这属条件致或微弱生长,表型与野生型不同,这属条件致死型突变株。死型突变株。一、温敏突变株的特性一、温敏突变株的特性n n必需基因突变:非许可温度下不生长。必需基因突变:非许可温度下不生长。n n非必需基因突变:添加某些生长因子生长。非必需基因突变:添加某些生长因子生长。2、诱变机制、诱变机制CM(非许可温度下培养)(非许可温度下培养)MM(非许可温度下培养)(非许可温度下培养)MM(许可温度下培养)(许可温度下培养)必必需需基基因因突突变变非必需基因突变非必需基因突变酶的活力、酶的活力、菌体生长和菌体生长和代谢正常代谢正常酶的活力丧失、酶的活力丧失、菌体生长停止菌体生长停止许可温度下许可温度
3、下非许可温度下非许可温度下发酵产发酵产物积累物积累和分泌和分泌 这是因为在许可温度下所合成的酶在转这是因为在许可温度下所合成的酶在转入非许可温度下的一段时间仍然保持一定的入非许可温度下的一段时间仍然保持一定的浓度并具有活性,另外在非许可温度下培养浓度并具有活性,另外在非许可温度下培养时,仍能合成少量酶。时,仍能合成少量酶。3、发酵生理性能、发酵生理性能1、诱变、诱变n n突变株主要是基因错义所致突变株主要是基因错义所致n n采用的诱变剂,要选择易于引起碱采用的诱变剂,要选择易于引起碱基置换的亚硝基类、磺酸酯类化合基置换的亚硝基类、磺酸酯类化合物,或亚硝酸、紫外线物,或亚硝酸、紫外线n n方法同
4、常规育种相同方法同常规育种相同。二、温敏突变株的筛选方法二、温敏突变株的筛选方法n n(1)抗生素法)抗生素法n n(2)过滤或离心法)过滤或离心法n n(3)H3前体法(富集大分子合成缺损前体法(富集大分子合成缺损TS)2、富集、富集离心离心加抗生素加抗生素非许可温非许可温度下培养度下培养分离分离过滤或离心过滤或离心非许可温非许可温度下培养度下培养分离分离非许可温非许可温度下培养度下培养分离分离加入加入H3尿嘧啶尿嘧啶非必需基因突变非必需基因突变必需基因突变必需基因突变3、分离筛选、分离筛选n n(1)常规法)常规法诱变后的菌悬液诱变后的菌悬液分离分离CM(许可温度下培养)(许可温度下培养)
5、MM(30许可)许可)CM MM(40不许可)不许可)影印影印诱变后的菌悬液诱变后的菌悬液分离分离CM(许可温度下培养)(许可温度下培养)诱变后的菌悬液诱变后的菌悬液分离分离CM(许可温度下培养)(许可温度下培养)标记MM(30许可)许可)非许可温度非许可温度三、温敏突变株在发酵工业中的三、温敏突变株在发酵工业中的应用应用1、在谷氨酸发酵中的应用、在谷氨酸发酵中的应用n n加入青霉素和表面活性剂加入青霉素和表面活性剂n n生物素缺陷型生物素缺陷型n n油酸或甘油缺陷型油酸或甘油缺陷型温敏型突变株:温敏型突变株:30培养菌体培养菌体大量繁殖大量繁殖37培养十几培养十几个小时个小时细胞膜的合成细胞
6、膜的合成结构发生障碍结构发生障碍2、在丝氨酸发酵中的应用在丝氨酸发酵中的应用原料原料甲醇甲醇丝氨酸丝氨酸甘氨酸甘氨酸磷酸烯醇式磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸C4二羧酸二羧酸丝氨酸羟甲基酶丝氨酸羟甲基酶8-羟基圭林、2,2-联吡啶、Co2+或Ni2+3、微生物单细胞蛋白的生产、微生物单细胞蛋白的生产 作为生产单细胞蛋白的微生物菌种,除本作为生产单细胞蛋白的微生物菌种,除本身应富含蛋白质外,还要生长速度快,底身应富含蛋白质外,还要生长速度快,底物利用率高;细胞壁易破碎,容易自溶和物利用率高;细胞壁易破碎,容易自溶和絮凝。絮凝。DNA复制缺损酵母复制缺损酵母26生长正常生长正常37细胞形态发生变化,凝细胞形
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- 五节 突变
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