课题1微生物的实验室培养(精品).ppt

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1、专题专题2:2:微生物的培养与应用微生物的培养与应用微生物包括五类：微生物包括五类：病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界微生物微生物 是一切肉眼看不见或看不是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。清楚的微小生物的总称。病毒的结构病毒的结构细菌的外形与大小细菌的外形与大小图图1-1 常见的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态A.球菌球菌 B.杆菌杆菌 C.弧菌弧菌 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做形的休眠体，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，

2、对干旱、低温、。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。有的细菌的芽孢，高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。有的细菌的芽孢，煮沸煮沸3 3小时以后才死亡。小时以后才死亡。菌落：菌落：n单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落形态结构的子细胞群体，叫做菌落。n菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落细菌的菌落特征细菌的菌落特征因种而异因种而异 细菌的营养类型细菌的营养类型 n根据细菌所利用的根据细菌所利用的能源和碳源能源和碳源的不同

3、，的不同，将细菌分为两大营养类型。将细菌分为两大营养类型。n自养菌自养菌:n异养菌异养菌:腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌 (大部分病原菌大部分病原菌)光合自养型光合自养型:光合细菌光合细菌化能自养型化能自养型:硝化细菌硝化细菌,铁细菌铁细菌,硫细菌硫细菌放线菌放线菌1 1、结构：、结构：单细胞原核单细胞原核分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）真菌真菌酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉 1、了解有关微生物及培养基的基础知识、了解有关微生物及培养基的基础知识 2、进行、进行无菌技术的操作无菌技术的操作，进行微生物的，进行微生物的 培养。培养。教学目标：教学目标：教学重点：教

4、学重点：无菌技术的操作无菌技术的操作。教学难点：教学难点：无菌技术的操作无菌技术的操作。教学重点和难点：教学重点和难点：（一）培养基（一）培养基 培养基是培养基是由人工方法配制而成的，由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的专供微生物生长繁殖使用的营养基质营养基质。（1 1）按物理状态分：）按物理状态分：固体培养基固体培养基和和液体培养液体培养基、半固体培养基基、半固体培养基。（2 2）按功能分：）按功能分：选择培养基选择培养基和和鉴别培养基鉴别培养基。（3 3）按成分分：）按成分分：天然培养基天然培养基和和合成培养基合成培养基。1.1.培养基的类型培养基的类型一、基础知识一、基础知识固

5、体培养基及菌落固体培养基及菌落液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长半固体培养基：半固体培养基：不同的微生物往往需要采用不同不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方。的培养基配方。不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、无机盐无机盐、等等营养物质，营养物质，另外还需要满足微生物生长对另外还需要满足微生物生长对pHpH、特殊特殊营养物质以及氧气的要求营养物质以及氧气的要求培养基的用途培养基的用途液体液体培养基：增菌、培养基：增菌、工业生产工业生产固体固体培养基：培养基：纯化纯化（分离），（分离），鉴定鉴定、活、

6、活菌计数、保藏菌种菌计数、保藏菌种半固体半固体培养基：微生物培养基：微生物动力检测动力检测（二）无菌技术（二）无菌技术1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。中，所有防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。成功地培养微生物的关键。（）（）消毒：消毒：2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别（2 2）灭菌：）灭菌：区别：区别：消毒消毒能杀死能杀死部分部分微生物（微生物（不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子）灭菌灭菌灭菌灭菌能杀死能杀死能杀死能杀死所有所有所有所有微生物微生物微生物微生物（

7、包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子）3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法消毒的方法：消毒的方法：煮沸消毒法、巴氏消毒法、煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法。化学药剂消毒法。1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌灭菌的方法：灭菌的方法：2 2、干热灭菌、干热灭菌：160-170 160-170 下加热下加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌、高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下下维持维持15-30min.15-30min.1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？外来微生物污染外，还有什么目

8、的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌干热灭菌干热灭菌化学消毒化学消毒微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基

9、的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存三、实验操作三、实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌用于培养细菌）1 1计算计算、称量称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7pH76 64 4过滤：过滤：这一步可以省去。这一步可以省去。5 5分装：分装：分装过程中注意不要使培养分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过不超过三角烧瓶容积的三角烧瓶容积

10、的一半一半为宜。为宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步骤操作步骤 8 8灭菌灭菌:将培养基转移至三角锥瓶中，塞上棉将培养基转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，进行花塞，包上牛皮纸，进行高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌。9 9倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精左右时，在酒精灯附近倒平板。灯附近倒平板。1010无菌检查：无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培的温室中培养养24244848小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。微生物的微生物的实验室培养室培养倒平板技术倒平板技术倒平板技术倒平板技术 1.1.培养基灭菌后，需要冷

11、却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？度？答：答：可以可以用手触摸用手触摸盛有培养基的锥形瓶，盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手到刚刚不烫手时，就可时，就可以进行倒平板了。以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过答：通过灼烧灭菌灼烧灭菌，防止瓶口的微生物，防止瓶口的微生物污染培养基。污染培养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中

12、，如果不小心将培养在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？还能用来培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以既可以使培养基表面的水分更好地挥发使培养基表面的水分更好地挥发，又可以，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。，造成污染。答：空气中的微答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生间的培养

13、基上滋生，因此，因此最好不要用最好不要用这个平板这个平板培养微生物。培养微生物。（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法微生物的接种技术：微生物的接种技术：平板划线的操作方法平板划线的操作方法交叉划线法交叉划线法连续划线法连续划线法 平板划线的操作平板划线的操作一旦划破，会造成划线不均匀，难一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。处生长，

14、会形成一个条状的菌落。1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？要灼烧接种环吗？为什么？答：答：第一步灼烧是为了避免接种环上的微生第一步灼烧是为了避免接种环上的微生物污染培养物物污染培养物；每次划线前灼烧是为了杀死接每次划线前灼烧是为了杀死接种环上残留的菌种种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。划线上的菌种直接来源于上次划线的末端。划线结结束后灼烧束后灼烧，能及时，能及时杀死杀死接种环上接种环上

15、残留的菌种残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。避免细菌污染环境和感染操作者。2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，

16、使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。稀释涂布平板法稀释涂布平板法微生物的微生物的实验室培养室培养涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第一想，第2 2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？应从操作的应从操作的各个细节保证各个细节保证“无菌无菌”。例如，。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等触任何其他物

17、体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。等。微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养菌种的保存菌种的保存 1 1、临时保藏临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后养基，菌落长成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。2 2、长期保存长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法四、结果分析与评价四、结果分析与评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果如果未接种的培养基未接种的培养基在恒温箱中保温在恒温箱中保温1 12 d2 d后后无菌落生长无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制

18、备。则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大颜色、形状、大小基本一致小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点并符合大肠杆菌菌落的特点，则说则说明接种操作是符合要求的明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求。到要求。课堂练习课堂练习1 1关微生物营养物质的叙述中，正确的关微生物营养物质的叙述中，正确的A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量D2 2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解不不 正确正确的是的是A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前B