临床常用免疫学检查-5.ppt
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1、临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查苏大附二院检验科苏大附二院检验科 冯萍冯萍掌握:免疫球蛋白、补体的临床意义病毒性肝炎血清标记物的检测肿瘤标记物的检测熟悉:感染免疫检查自身抗体的检测第一节第一节 体液免疫检查体液免疫检查一、血清免疫球蛋白的检测一、血清免疫球蛋白的检测 免疫球蛋白是指由浆细胞所产生免疫球蛋白是指由浆细胞所产生的的,具有抗体活性和具有抗体活性和(或或)抗体样结构抗体样结构的球蛋白的球蛋白.主要分为主要分为:IgG,IgA,IgM,IgEIgG,IgA,IgM,IgE和和IgDIgD五类五类.IgG IgA IgMIgG IgA IgM测定测定IgGIgG:含量最多或最主要的含量
2、最多或最主要的IgIg(75%75%),),唯一能够通过胎盘的唯一能够通过胎盘的IgIgIgAIgA:约占约占10%10%,分为分泌型和血清型,分为分泌型和血清型,在局部免疫中起重要作用在局部免疫中起重要作用IgMIgM:分子量最大,是抗原刺激后最早分子量最大,是抗原刺激后最早出现的抗体出现的抗体检测方法检测方法:免疫比浊法免疫比浊法参考值参考值:成人成人 IgGIgG:7.07.016.016.0 g/L g/L IgAIgA:0.70.75.05.0 g/L g/L IgMIgM:0.40.42.8 2.8 g/Lg/L临床意义临床意义免疫球蛋白增高免疫球蛋白增高l多克隆增高多克隆增高:常
3、见于各种慢性感染、慢性肝常见于各种慢性感染、慢性肝病病 肝硬化、淋巴瘤和某些自身免疫性疾病,肝硬化、淋巴瘤和某些自身免疫性疾病,如如SLESLE、类风湿关节炎等、类风湿关节炎等l单克隆增高单克隆增高:主要见于免疫增殖性疾病,如主要见于免疫增殖性疾病,如多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症等多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症等临床意义临床意义免疫球蛋白降低免疫球蛋白降低 常见于各类先天性免疫缺陷病、重链病、常见于各类先天性免疫缺陷病、重链病、轻链病、获得性免疫缺陷病、肾病综合征、轻链病、获得性免疫缺陷病、肾病综合征、联合免疫缺陷病及长期使用免疫抑制剂的联合免疫缺陷病及长期使用免疫抑制剂的病人。病人。I
4、gG下降:细菌感染下降:细菌感染 IgA下降:反复呼吸道感染下降:反复呼吸道感染 IgM下降:败血症下降:败血症二、血清M蛋白检测 M蛋白或称单克隆免疫球蛋白,是一种单克隆B淋巴细胞异常增殖产生的,具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子或其分子片断,一般不具有抗体活性 参考值 阴性 临床意义见于单克隆免疫球蛋白增殖病:MM 巨球蛋白血症 重链病(、重链)轻链病(、轻链)半分子病:IgA、IgG型 恶性淋巴瘤 良性M蛋白血症三、血清补体检测 补体(complement,C)是一组具有酶原活性的糖蛋白,共有20余种组分,具有溶细胞、调理作用、中和与溶解病毒和炎症介质、清除免疫复合物等作用。是抗体
5、发挥溶细胞作用的必要补充条件,故称为补体。按功能分为经典途径、旁路激活途径、膜攻击组分和调节分子4种。总补体溶血活性检测(CH50)抗原:绵羊红细胞 +抗体:兔抗羊红细胞抗体(溶血素)+补体 溶血100806040201234 血清(ml)溶血%溶血程度与补体含量的关系参考值试管法:50-100u/ml临床意义主要反映补体传统途径活化的活性程度.lCH50增高:见于急性炎症、组织损伤(风湿热急性期、结节性动脉周围炎、皮肌炎、多发性关节炎、伤寒)和某些肿瘤。lCH50降低:更有意义。见于肾小球肾炎、自身免疫性疾病(SLE、RA)、感染性心内膜炎、病毒性肝炎、慢性肝病和遗传性血管神经水肿。在患SL
6、E、RA等自身免疫病时,血清补体水平随病情发生变化。细菌感染,特别是革兰阴性细菌感染时,常因补体旁路途径的活化过度引起血清补体水平降低。心肌梗塞、甲状腺炎、大叶性肺炎、糖尿病、妊娠等情况下血清补体水平常升高。补体C3检测 C3是补体系统中含量最多的物质,主要由巨噬细胞和肝脏合成,在C3转化酶的作用下,裂解成C3a与C3b,在传统途径和旁路途经中发挥重要作用。参考值 成人:0.821.70g/L临床意义l 增高:急性炎症、传染病早期、肿瘤、排斥反应。l 降低:消耗增多:肾炎、活动性SLE、RA。合成不足:肝病。大量丧失:肾病综合症、大面积烧伤等。补体C4检测 C4由肝脏、巨噬细胞合成,为C1s底
7、物,参与经典激活途径,在补体活化、促进吞噬、防止免疫复合物沉着和中和病毒等方面发挥作用。参考值 成人:0.150.49g/L 临床意义 增高:组织损伤性疾病.降低:狼疮性肾炎、SLE、自身免疫 性肝炎、型糖尿病、胰腺癌、多发 性硬化症、RA、IgA型肾炎、遗传性 IgA缺乏症。第二节 细胞免疫检查 人的淋巴细胞可分为人的淋巴细胞可分为:T T、B B、NKNK等细胞群他们有不同的表面标志等细胞群他们有不同的表面标志和功能。和功能。T T、B B细胞还分为不同的亚细胞还分为不同的亚型。型。一、淋巴细胞表面标志物检测一、淋巴细胞表面标志物检测lE E玫瑰花形成试验玫瑰花形成试验 :T T细胞表面有
8、绵羊红细胞表面有绵羊红 细胞受体,与细胞受体,与SRBCSRBC 结合形成花结样的结合形成花结样的 细胞,可用于细胞,可用于T T淋巴细胞计数。淋巴细胞计数。分化抗原测定:荧光标记的抗体与分化抗原测定:荧光标记的抗体与T T细胞细胞反应,用荧光显微镜或流式细胞仪计数。反应,用荧光显微镜或流式细胞仪计数。临床意义l降低降低:见于免疫缺陷疾病,如恶性肿:见于免疫缺陷疾病,如恶性肿瘤、免疫性疾病、某些病毒感染、大瘤、免疫性疾病、某些病毒感染、大面积烧伤、多发性神经炎、淋巴增殖面积烧伤、多发性神经炎、淋巴增殖疾病。疾病。l升高升高:见于甲亢、甲状腺炎、重症肌:见于甲亢、甲状腺炎、重症肌无力、慢性活动肝
9、炎等。无力、慢性活动肝炎等。T细胞亚群检测CDCD3 3代表总代表总T T淋巴细胞淋巴细胞CDCD4 4是是辅助、诱导辅助、诱导T T细胞的细胞的标志标志CDCD8 8是抑制、杀伤性是抑制、杀伤性T T细胞细胞的标志的标志应用单抗和荧光标应用单抗和荧光标记二抗反应在荧光显记二抗反应在荧光显微镜下或流式细胞仪微镜下或流式细胞仪中计数中计数CDCD的百分率。的百分率。CD3CD8CD3CD4 参考值参考值 免疫荧光法(免疫荧光法(IFAIFA):):CD CD3 3为为63.1%10.8%63.1%10.8%;CD CD4 4 为为42.8%9.5%42.8%9.5%;CD CD8 8 为为19.
10、6%5.9%19.6%5.9%;CD CD4 4/CD/CD8 8为(为(2.20.72.20.7)/1/1。流式细胞术:流式细胞术:CDCD3 3 61%61%85%85%;CDCD4 4 28%28%58%58%;CDCD8 8 19%19%48%48%;CDCD4 4/CD/CD8 80.90.92.0/12.0/1 CD3CD3下降下降:自身免疫性疾病、免疫缺陷病、自身免疫性疾病、免疫缺陷病、放疗、化疗后、肾上腺素治疗后放疗、化疗后、肾上腺素治疗后 CD4CD4下降下降:恶性肿瘤、免疫缺陷病、免疫恶性肿瘤、免疫缺陷病、免疫抑制剂的使用、病毒感染、严重创伤、大抑制剂的使用、病毒感染、严重
11、创伤、大手术手术 CD8CD8下降下降:自身免疫性疾病、变态反应:自身免疫性疾病、变态反应疾病疾病临床意义CD4/CD8增高:自身免疫性疾病、恶性肿瘤、病毒感染、变态反应CD4/CD8下降:HIV(0.5)、传单、巨细胞病毒感染等器官移植排斥反应的监测:升高预示可能发生排斥发应;持续下降提示感染发生,0.2必须停止使用免疫抑制剂。B淋巴细胞表面标志测定膜表面免疫球蛋白(SmIg)测定:升高与淋巴细胞恶性增殖有关,降低与体液免疫缺陷有关分化抗原的测定:CD19为最重要的B淋巴细胞标记分子,升高主要见于淋巴系统的恶性肿瘤 二、淋巴细胞功能检测二、淋巴细胞功能检测T T细胞转化试验细胞转化试验 原理
12、:原理:在体外培养时,在体外培养时,T T细胞在刺激细胞在刺激物的作用下,转化为淋巴母细胞,部物的作用下,转化为淋巴母细胞,部分发生有丝分裂,计数淋巴细胞及转分发生有丝分裂,计数淋巴细胞及转化的母细胞数,求出转换百分数化的母细胞数,求出转换百分数。意义:判断机体细胞免疫功能水平、估计疾病的疗效和预后。1.形态法形态法2.H-TdR掺入法掺入法3.MTT法法混合淋巴细胞反应 原理:两个无关个体的淋巴细胞混合培养时,双方淋巴细胞会以对方为抗原发生反应,T淋巴细胞发生转化 意义:反应机体整体的细胞免疫功能水平、用于HLA的细胞学分型NKNK细胞活性测定细胞活性测定 能直接杀伤效应细胞,具有抗肿瘤、能
13、直接杀伤效应细胞,具有抗肿瘤、抗感染和免疫调节等功能,亦参与抗感染和免疫调节等功能,亦参与移植物排斥反应、自身免疫病和超移植物排斥反应、自身免疫病和超敏反应的发生敏反应的发生方法:乳酸脱氢酶释放法、51Cr释放法、流式细胞术l意义:肿瘤疗效观察与预后、免疫调节功能第三节、病毒性肝炎血清 标志物检测甲型肝炎病毒标志物检测甲型肝炎病毒抗原和RNA检测 参考值均阴性 临床意义HAVAg阳性:HAVAg在发病前两周可从粪便中排出.HAV-RNA阳性:早期诊断及特异性诊断。在病人粪便中检出表明病人急性感染,且病人及其排泄物皆为传染原。甲型肝炎病毒抗体检测 机体可产生IgM,IgG,IgA,HAV-IgM
14、是病毒衣蛋白抗体,HAV-IgA是肠道粘膜分泌的局部抗体,HAV-IgG可长期存在.参考值均为阴性.抗HAV-IgM阳性:是机体早期诊断指标,说明机体正处于感染期,是感染的特异性指标。抗HAV-IgA阳性:早期和急性期在粪便中测得,是早期诊断指标之一。抗HAV-IgG阳性:阳性提示既往感染,可作为流行病学调查指标。临床意义乙型肝炎病毒标志物检测The infectious virion is called the DANE particle.HBsAg:具有抗原性,无传染性 参考值阴性 临床意义 1.HBsAg为乙肝患者首先出现的病毒标志物,可作为乙肝的早期诊断和普查项目。在急性肝炎潜伏期即可
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- 临床 常用 免疫学 检查
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