单克隆抗体的制备(1).ppt

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1、动物细胞融合动物细胞融合 目标：目标：1、举例说出动物细胞融合的原理和、举例说出动物细胞融合的原理和应用应用2、单克隆抗体的制备和应用、单克隆抗体的制备和应用细胞细胞A细胞细胞B杂种细胞杂种细胞灭活的病毒灭活的病毒物理法物理法化学法化学法仙台病毒仙台病毒 一、动物细胞融合一、动物细胞融合 2、过程：、过程：1、概念：、概念：用用 诱导动物细胞融合过程诱导动物细胞融合过程细胞核细胞核病毒颗粒病毒颗粒细胞核细胞核思考讨论：思考讨论：思考讨论：思考讨论：1 1、灭活的病毒诱导细胞融合的原理是：、灭活的病毒诱导细胞融合的原理是：、灭活的病毒诱导细胞融合的原理是：、灭活的病毒诱导细胞融合的原理是：2 2

2、、为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？、为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？、为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？、为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？灭活的病毒灭活的病毒用用 途途诱导方法诱导方法融合前处理方法融合前处理方法原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用用 途途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理法（离心、振物理法（离心、振荡、电刺激）荡、电刺激）化学法（聚乙二醇）化

3、学法（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合融合前的处理方法融合前的处理方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较单克隆抗体单克隆抗体二、单克隆抗体二、单克隆抗体1、什么是抗体？其本质是什么？、什么是抗体？其本质是什么？2、传统的抗体生产方法及缺陷是什么？、传统的抗体生产方法及缺陷是什么？抗体是从何来的？抗体是从何来

4、的？B B淋巴细胞产生抗体。淋巴细胞产生抗体。抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。球蛋白。3、B淋巴细胞有什么特点？淋巴细胞有什么特点？（）（）B B淋巴细胞受淋巴细胞受抗原刺激抗原刺激后，可后，可以产生以产生抗体抗体。（）动物体内的（）动物体内的B B淋巴细胞可以产淋巴细胞可以产生生百万种以上百万种以上的抗体，每种抗体对特定的的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。抗原具有特异性免疫作用。（）每一个淋巴细胞（）每一个淋巴细胞只能只能产生一产生一种抗体。种抗体。3、B淋巴

5、细胞有什么特点？淋巴细胞有什么特点？单克隆抗体及特点：单克隆抗体及特点：单克隆抗体及单克隆抗体及特点：特点：由单个由单个B B淋巴细胞经过淋巴细胞经过无性繁殖无性繁殖（克隆）（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞，形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学群所产生的化学性质单一、特异性强性质单一、特异性强的的抗体称为单克隆抗体。抗体称为单克隆抗体。特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 遗憾的是遗憾的是 单克隆抗体制备过程？单克隆抗体制备过程？1、单克隆抗体：、单克隆抗体：2、特点：、特点：单克隆抗体制备单克隆抗体制备过程过程 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程 注射抗原注射抗原B淋巴

6、细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选，继续培养筛选，继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体视频视频单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备.flv思考：思考：1、本过程利用了哪些技术？、本过程利用了哪些技术？细胞融合技术和动物细胞培养技术细胞融合技术和动物细胞培养技术2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞双亲细胞的遗传的遗传物质，

7、不仅具有物质，不仅具有B细胞细胞分泌抗体分泌抗体的能力，而且还有的能力，而且还有无限增殖无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体的本领，因而可以获得大量单克隆抗体3 3、整个制备过程为何要经过两次筛选、整个制备过程为何要经过两次筛选?第一次筛选得到第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔第二次需先在多孔培养板上，在每孔只只有一个有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是由于该细胞群是单个杂交瘤细胞单个杂交瘤细胞克隆得克隆得来的，所以产生的

8、抗体必然是化学性质单一来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。的，特异性强的单克隆抗体。这里的这里的单克隆单克隆的确有的确有单个细胞单个细胞克隆的含克隆的含义，只不过克隆的不是义，只不过克隆的不是B B淋巴细胞，而是淋巴细胞，而是杂杂交瘤细胞交瘤细胞。B BB B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤4、细胞融合后培养液中有几种细胞、细胞融合后培养液中有几种细胞单克隆抗体的单克隆抗体的应用应用小结小结动物细胞融合的原理和诱导方法动物细胞融合的原理和诱导方法单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三三个个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法一个新细胞一个新细胞一个优势一个优

9、势灭活的病毒灭活的病毒杂交瘤细胞杂交瘤细胞单克隆抗体单克隆抗体：特异性强、灵敏度高的优势：特异性强、灵敏度高的优势1.动物细胞工程技术的基础是：（）动物细胞工程技术的基础是：（）A动物细胞融合动物细胞融合B胚胎移植胚胎移植C动物细胞培养动物细胞培养D核移植核移植教学目标巩固教学目标巩固在动物细胞融合和植物体细胞杂交的在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）比较中，正确的是（）A结果是相同的结果是相同的B杂种细胞的形成过程基本相同杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同诱导融合的手段相同教学目标巩固教学目标巩固.单克隆抗体制备过程中

10、，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞A BC D C教学目标巩固教学目标巩固已知细胞合成已知细胞合成DNA有有D和和S两条途径，其中两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断，人淋巴细胞中有这两途径能被氨基嘌呤阻断，人淋巴细胞中有这两种种DNA的合成途径，

11、但一般不分裂增殖。鼠骨的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞尽管没有髓瘤细胞尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂交瘤细胞，请回答：获得杂交瘤细胞，请回答：（1）试管中除融合的杂交瘤细胞外，还）试管中除融合的杂交瘤细胞外，还有有_种融合细胞。种融合细胞。（2）设计一方法（不考虑机械方法），）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂交瘤细胞，并说明原理。从培养液中分离出杂交瘤细胞，并说明原理。方法：方法：原理：原理：解析：解析：（1）试管中有人的淋巴管中有人的淋巴细胞和小鼠骨

12、髓瘤胞和小鼠骨髓瘤细胞，在促溶胞，在促溶剂的作用下，可能出的作用下，可能出现以下以下3种种细胞的融合情况，人的淋巴胞的融合情况，人的淋巴细胞和淋巴胞和淋巴细胞融合，胞融合，小鼠的骨髓瘤小鼠的骨髓瘤细胞和骨髓瘤胞和骨髓瘤细胞融合，人的淋胞融合，人的淋巴巴细胞和小鼠的骨髓瘤胞和小鼠的骨髓瘤细胞融合，胞融合，实验需要的需要的是第是第3种种细胞，即胞，即杂交瘤交瘤细胞；胞；（2）要将）要将杂交瘤交瘤细胞分离出来，可以在培胞分离出来，可以在培养液中加入氨基养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的呤，收集增殖的细胞；加入胞；加入氨基氨基嘌呤后，使呤后，使D合成途径阻断，合成途径阻断，仅有有D合成途合成途径的骨髓瘤径

13、的骨髓瘤细胞及其彼此融合的胞及其彼此融合的细胞就不能增胞就不能增殖，但人淋巴殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤胞和骨髓瘤细胞融合后的胞融合后的杂种种细胞中可以利用淋巴胞中可以利用淋巴细胞中的胞中的S途径合成途径合成DNA而增殖。而增殖。变式训练变式训练生产单克隆抗体时，要在培养液中加入某种试生产单克隆抗体时，要在培养液中加入某种试剂才能筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂剂才能筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂 A能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的DNA复制复制 B能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活 C选择性抑制骨髓瘤细胞的选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制复制 D能能阻阻止止杂杂交交瘤瘤细细胞胞核核糖糖体体上上所所有有蛋蛋白白质质的的合成合成