黄酮类化合物--鉴定.ppt

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1、第6章 黄酮类化合物-黄酮类的鉴定黄酮类的鉴定黄酮类的鉴定黄酮类的鉴定鉴鉴 定定一、薄层色谱法（一、薄层色谱法（TLC）二、二、纸色谱法（纸色谱法（PC)一、一、薄层色谱法薄层色谱法 一般采用吸附薄层，吸附剂大多用硅胶和聚酰胺。一般采用吸附薄层，吸附剂大多用硅胶和聚酰胺。（1）硅胶薄层色谱硅胶薄层色谱:用于分离与鉴定弱极性黄酮类化合物用于分离与鉴定弱极性黄酮类化合物 分离苷元常用展开剂：甲苯分离苷元常用展开剂：甲苯-甲酸甲酯甲酸甲酯-甲酸；氯仿甲酸；氯仿-甲醇等。甲醇等。（2）聚酰胺薄层色谱聚酰胺薄层色谱：分离含游离酚羟基的黄酮苷与苷元。：分离含游离酚羟基的黄酮苷与苷元。展开剂：具有较强的极性

2、，大多含有醇、酸或水展开剂：具有较强的极性，大多含有醇、酸或水 如：乙醇水（如：乙醇水（3：2），），水乙醇甲酸乙酰丙酮水乙醇甲酸乙酰丙酮(5:1.5:1:0.5)聚酰胺薄层聚酰胺薄层(乙醇水）乙醇水）二、纸色谱法（二、纸色谱法（PC)PC适适于于分分离离各各种种天天然然黄黄酮酮类类化化合合物物及及其其苷苷类的混合物。类的混合物。黄酮苷：一般采用双向展开黄酮苷：一般采用双向展开 7黄酮类化合物的检识和结构鉴定黄酮类化合物的检识和结构鉴定第一相展开采用醇性展开剂第一相展开采用醇性展开剂第一相展开采用醇性展开剂第一相展开采用醇性展开剂如如如如:BAW :BAW n-BuOHn-BuOH:HOAc:

3、H:HOAc:H2 2O=4:1:5O=4:1:5上层上层上层上层 TBA TBA t-BuOHt-BuOH:HOAcHOAc:H:H2 2O=3:1:1O=3:1:1 水饱和水饱和水饱和水饱和n-BuOHn-BuOH层析行为层析行为层析行为层析行为:R Rf f值值值值:苷元苷元苷元苷元 单糖苷单糖苷单糖苷单糖苷 双糖苷双糖苷双糖苷双糖苷一般一般一般一般:苷元在苷元在苷元在苷元在0.700.70以上，而苷则小于以上，而苷则小于以上，而苷则小于以上，而苷则小于0.70.7。第二相展开采用水性展开剂第二相展开采用水性展开剂 如：如：26%HOAc水溶液水溶液 3%NaCl 水溶液水溶液 HOAc

4、:浓浓HCl:H2O=30:3:10层析行为层析行为:连接糖链越长连接糖链越长,Rf 越大越大(0.5);苷元苷元Rf较小，有的留在原点。较小，有的留在原点。ABCDABCD苷元苷元苷元苷元苷元苷元苷元苷元纸色谱纸色谱 第第I向向 醇性展开剂醇性展开剂 第第II向向 水性展开剂水性展开剂（BAW、TBA、水饱和正丁醇）、水饱和正丁醇）（28%HAc、3%NaCl、1%HCl）正相色谱正相色谱 反相色谱反相色谱固定相（水）极性固定相（水）极性 流动相流动相 （有认为是吸附原理）有认为是吸附原理）Rf规律：极性小的化合物规律：极性小的化合物Rf大大 极性大的化合物极性大的化合物Rf大大 苷元苷元单

5、糖苷单糖苷双糖苷双糖苷 Rf规律与左边相反规律与左边相反母核相同，二母核相同，二-OH三三-OH四四-OH五五-OH黄酮黄酮 主要应用：苷元的分离鉴别主要应用：苷元的分离鉴别 黄酮苷及花色素类的分离鉴别黄酮苷及花色素类的分离鉴别双相色谱双相色谱9纸层析（纸层析（PC）：采用双向纸层析）：采用双向纸层析。苷元苷元:平面型分子平面型分子:黄酮黄酮(醇醇)、查耳酮的、查耳酮的Rf小小,几乎留在几乎留在 原点不动原点不动(Rf 0.02);非平面型分子非平面型分子:二氢黄酮二氢黄酮(醇醇)、二氢查耳酮的、二氢查耳酮的Rf大大,因亲水性较强因亲水性较强(Rf 0.10-0.30)。层析检查方法：层析检查

6、方法：观察荧光观察荧光,用紫外光灯照射看到有色斑点，用紫外光灯照射看到有色斑点，NH3处处理理 产生明显的色变。产生明显的色变。用用2%AlCl3甲醇液喷雾甲醇液喷雾,UV灯下呈亮黄色荧光斑点。灯下呈亮黄色荧光斑点。习题有下列四种黄酮类化合物有下列四种黄酮类化合物A、R1R2HB、R1H,R2RhaC、R1Glc,R2HD、R1Glc,R2Rha比较其酸性及极性的大小比较其酸性及极性的大小:酸性酸性()()()()极性极性()()()()比较这四种化合物在如下三种色谱中比较这四种化合物在如下三种色谱中Rf值大小顺序值大小顺序:(1)硅胶硅胶TLC(条件条件CHCl3MeOH 4:1展开展开),Rf值值()()()()(2)聚酰胺聚酰胺TLC(条件条件60%甲醇甲醇水展开水展开),Rf值值()()()()(3)纸色谱纸色谱(条件条件8%醋酸水展开醋酸水展开),Rf值值()()()()