动物细胞融合与单克隆抗体第二课时.ppt

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1、一、动物细胞融合1.概念：概念：动物细胞融合（动物细胞融合（cell fusion）也称细胞杂）也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。胞的过程。融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为物质的单核细胞，称为杂交细胞杂交细胞。2、原理：、原理：细胞膜的流动性细胞膜的流动性2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体诱导方法：诱导方法：物理方法：物理方法：化学法：化学法：生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒电激等电激等聚乙二醇（聚乙二醇（PEG)3.融合过程：融合过程：诱导融合的方法？灭活病毒

2、诱导融合的方法？灭活病毒诱导融合的方法？灭活病毒诱导融合的方法？灭活病毒植物细胞杂交与动物细胞融合的比较植物细胞杂交与动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合原理原理融合前处理融合前处理使用的酶使用的酶诱导方法诱导方法主要用途主要用途细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性细胞的全能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性纤维素酶、果胶酶纤维素酶、果胶酶 物理方法物理方法（离心、振荡、电激）离心、振荡、电激）化学方法（化学方法（PEG）物理、化学方法物理、化学方法灭活的病毒灭活的病毒获得杂种植株获得杂种植株制备单克隆抗体制备单克隆抗体去除细胞壁后诱去除细胞壁

3、后诱导原生质体融合导原生质体融合使细胞分散后使细胞分散后诱导细胞融合诱导细胞融合4.意义：意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。5.应用：应用：最重要的用途是最重要的用途是制备单克隆抗体制备单克隆抗体思考思考？1.1.抗体由何种细胞产生？抗体由何种细胞产生？如何产生如何产生？2.2.抗体抗体的化学本质是什么？的化学本质是什么？与抗原作用的特点？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？主要分布在哪里？3.3.用传统的方法如何获得抗体用传统的方法如何获得抗体？二、单克隆抗体的制备抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法从从血血清清中中分分离离抗抗体体该法制备抗体

4、的特点：该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。体的特异性差、灵敏度低。多多种种效效应应B细细胞胞动动物物体体内内多多种种抗抗体体抗抗原原 单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备单克隆单克隆抗体抗体:单个细胞克隆产生的单个细胞克隆产生的化学性质化学性质单一单一,特异性强的抗体特异性强的抗体n利用效应利用效应B细胞产生抗体的功能细胞产生抗体的功能n利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用肿瘤细胞无限增殖的特性n利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂交瘤细利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞胞n利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞利用动物细胞培养技术大量培养

5、杂交瘤细胞设计方案：设计方案：单克隆抗体的制备过程过程杂交杂交杂交杂交 细胞细胞细胞细胞灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞经免疫经免疫经免疫经免疫的小鼠的小鼠的小鼠的小鼠提取提取杂交瘤杂交瘤杂交瘤杂交瘤细胞细胞细胞细胞第一次筛选第一次筛选第一次筛选第一次筛选用特定的用特定的选选择性培养基择性培养基第二次筛选第二次筛选第二次筛选第二次筛选能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交

6、瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养体外培养体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体提取单克隆抗体提取单克隆抗体提取单克隆抗体整个制备过程为何要经过两次筛选？整个制备过程为何要经过两次筛选？第一次第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），筛选得到杂交瘤细胞（多种），在特定的在特定的选择性培养基选择性培养基上上,未融合的亲本细胞未融合的亲本细胞(浆细胞和骨髓瘤细胞浆细胞和骨髓瘤细胞)和融合的具有同种核的细胞和融合的具有同种核的细胞(BB(BB融合细胞、瘤瘤融合细胞融合细胞、瘤瘤融合细胞)都会死亡都会死亡,只有融合的杂种细胞只有融合的

7、杂种细胞(杂交瘤细杂交瘤细胞胞)才能生长。才能生长。第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆单克隆确有确有单个细胞单个细胞克隆的含义，只不克隆的含义，只不过克隆的不是过克隆的不是B B淋巴细胞，而是淋巴细胞，而是杂

8、交瘤细胞杂交瘤细胞。植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合(单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备)过程过程第一步第一步原生质体的制备原生质体的制备(酶解法酶解法)正常小鼠免疫正常小鼠免疫处理处理第二步第二步原生质体的融合原生质体的融合(物、化法物、化法)动物细胞的融动物细胞的融合合(物、化、物、化、生法生法)第三步第三步杂种细胞的筛选杂种细胞的筛选与培养与培养杂交瘤细胞的杂交瘤细胞的筛选与培养筛选与培养第四步第四步杂种植株的诱导杂种植株的诱导与鉴定与鉴定单克隆抗体的单克隆抗体的提纯提纯意义意义和用和用途途(1)(1)克服远源杂交不亲和的障碍，大大扩展克服远源杂交不亲和的障碍，大大扩展

9、了杂交的亲本组合范围了杂交的亲本组合范围(2)(2)克服有性杂交的母系遗传现象，获得细克服有性杂交的母系遗传现象，获得细胞质基因的杂合子，研究细胞质遗传胞质基因的杂合子，研究细胞质遗传(1)(1)制备单克隆抗体等制备单克隆抗体等 (2)(2)诊断、治疗、预防疾病诊断、治疗、预防疾病三、三、单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用（1）作为诊断试剂）作为诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速（如同位素标记（如同位素标记单克隆抗体，可单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血诊断肿瘤、心血管畸形等）管畸形等）（2）运载药物）运载药物生物导弹生物导弹生物导弹生物导弹=单克隆抗体单克隆抗体

10、单克隆抗体单克隆抗体+药物，药物，药物，药物，治疗肿瘤）治疗肿瘤）治疗肿瘤）治疗肿瘤）(“(“生物导弹生物导弹生物导弹生物导弹”单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头)B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌单克隆抗体的实验方案风杆菌单克隆抗体的实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为

11、诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_3、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_5、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体制备单克隆抗体B细胞细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50例例1 1：1 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，、科

12、学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A.诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 B.C.操作步骤基本相同操作步骤基

13、本相同 D.都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 D3.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（）A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D4.4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（）A APEGPEG B B灭活的病毒灭活的病毒 C C

14、电刺激电刺激 D D离心离心B5.5.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （）淋巴细胞淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞 B B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞杂交瘤细胞A.B.A.B.C.C.D.D.C C6.6.“生物导弹生物导弹”是指是指 （）A.A.单克隆抗体单克隆抗体 B.B.杂交瘤细胞杂交瘤细胞C.

15、C.产生特定抗体的产生特定抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞 D.D.在单克隆抗体上连接抗癌药物在单克隆抗体上连接抗癌药物 DA A、B B细胞为动物细胞细胞为动物细胞,请据图回答问题请据图回答问题:A细胞细胞B细胞细胞C细细胞胞D细细胞胞(1)(1)若若A A细胞为骨髓瘤细胞细胞为骨髓瘤细胞B B细胞为淋巴细胞细胞为淋巴细胞,那么那么D D细胞细胞称为称为 细胞细胞,D,D细胞具有两个亲本细胞的细胞具有两个亲本细胞的特征特征,一方面因具有骨髓瘤细胞的一方面因具有骨髓瘤细胞的 性性质质,通过通过 方式产生大量细胞方式产生大量细胞,我们称之我们称之为为 过程过程;另一方面能分泌大量的抗体另一方面能分泌

16、大量的抗体,我我们把该过程分泌的抗体称们把该过程分泌的抗体称 .杂交瘤杂交瘤连续分裂连续分裂有丝分裂有丝分裂单克隆单克隆单克隆抗体单克隆抗体练一练练一练(2)D(2)D细胞中产生的抗体其化学本质是细胞中产生的抗体其化学本质是 ,合成该物质的场所是合成该物质的场所是 ,它是由它是由 控制合成的控制合成的,合成过程包括合成过程包括 和和 两个重要步骤两个重要步骤.球蛋白球蛋白核糖体核糖体基因基因转录转录翻译翻译(3)D(3)D细胞中产生的抗体具有细胞中产生的抗体具有 作用作用,与血清抗体相比其优越之处在于与血清抗体相比其优越之处在于 强强 高高.免疫免疫特异性特异性灵敏度灵敏度(4)(4)若若A A为人细胞为人细胞,B,B为鼠细胞为鼠细胞,用同位素标记用同位素标记A A细胞膜上细胞膜上的蛋白质的蛋白质,B,B不标记不标记,在在C C细胞时细胞时,检测结果发现整个细检测结果发现整个细胞一半有放射性另一半没有胞一半有放射性另一半没有.在在D D细胞时细胞时,检测结果发检测结果发现整个细胞都有放射性现整个细胞都有放射性,请解释原因请解释原因 .构成细胞膜的蛋白质分子大都可以流动构成细胞膜的蛋白质分子大都可以流动