实验室生物安全防护.pptx

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1、会计学1实验室生物安全防护实验室生物安全防护2第四节第四节 实验室生物安全防护实验室生物安全防护 实验室生物安全防护类型实验室生物安全防护类型一一 常用生物安全设备常用生物安全设备二二 个人安全防护用具个人安全防护用具三三 生物实验室技术规范生物实验室技术规范四四 生物实验室的消毒与灭菌生物实验室的消毒与灭菌五五第1页/共52页3 实验室生物安全防护类型实验室生物安全防护类型一一n n实验室生物安全防护的内容包括安全设备、个体防护装置和措施（一级屏障）；实验室的特殊设计和建设（分区、单向气流）要求（二级屏障）；严格的管理制度和标准化的操作程序及规程（三级屏障）n n不同生物安全防护等级的实验室

2、其具体要求各不相同。第2页/共52页4（一）BSL-1实验室1、针对对象级微生物类别，不引起人或动物疾病的微生物级微生物类别，不引起人或动物疾病的微生物2、基本要求n n建设建设选址方面无特殊要求选址方面无特殊要求n n不需要安装生物安全柜不需要安装生物安全柜等防护设备等防护设备n n应能防止昆虫和啮齿动物等进入应能防止昆虫和啮齿动物等进入n n在可以开启的窗户上安置纱窗在可以开启的窗户上安置纱窗n n应配备消毒设备应配备消毒设备n n在靠近实验室出口处设立洗手池在靠近实验室出口处设立洗手池n n地面光滑无缝，台面耐热、耐腐蚀、耐水地面光滑无缝，台面耐热、耐腐蚀、耐水3、操作规范不需要不需要制

3、订特殊的安全操作规程制订特殊的安全操作规程如用于教学的普通微生物实验室等。检测如用于教学的普通微生物实验室等。检测如用于教学的普通微生物实验室等。检测如用于教学的普通微生物实验室等。检测 大肠杆菌、枯草杆菌大肠杆菌、枯草杆菌第3页/共52页51、针对对象级微生物，公共卫生、临床、医院的诊断实验室2、基本要求n n除满足BSL-1实验室的全部要求之外n n配备高压蒸汽灭菌器、化学消毒装置等消毒灭菌设施n n安装不低于II级的生物安全柜n n实验室的门能自动关闭n n实验室应配备洗眼装置、喷淋装置等n n需制定专门的安全操作规程（二）（二）BSL-2实验室实验室 如麻疹病毒、如麻疹病毒、沙门氏沙门

4、氏菌、乙型肝炎病毒、菌、乙型肝炎病毒、HIV血清学检测等血清学检测等 第4页/共52页61 1、针对对象、针对对象级微生物、新发传染病和大容量或高浓度的、具有级微生物、新发传染病和大容量或高浓度的、具有高度气溶胶扩散危险的高度气溶胶扩散危险的级微生物级微生物2、基本要求n n除满足除满足BSL-1BSL-1、2 2实验室的要求之外实验室的要求之外n n独立建筑物或者在建筑物中独立建筑物或者在建筑物中自成隔离区自成隔离区n n在主实验室内在主实验室内设置设置级生物安全柜级生物安全柜n n设置不产生蒸汽的高压灭菌锅或其他消毒装置设置不产生蒸汽的高压灭菌锅或其他消毒装置n n实验室应明确划分为实验室

5、应明确划分为清洁区、半污染区和污染区清洁区、半污染区和污染区n n安装独立的通风空调系统以安装独立的通风空调系统以控制实验室气流方向和压强梯度控制实验室气流方向和压强梯度n n实验记录等资料通过传真机等发送至实验室外实验记录等资料通过传真机等发送至实验室外n n不得将任何未经消毒灭菌的材料带出实验室不得将任何未经消毒灭菌的材料带出实验室n n制定更加制定更加严格的严格的生物安全操作规范生物安全操作规范（三）（三）BSL-3实验室实验室多集中在北京，上海，多集中在北京，上海，2004 年建成我国首个移动式年建成我国首个移动式P3实验实验 结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、鼠疫杆菌、炭疽杆菌、结核分枝杆菌

6、、牛分枝杆菌、鼠疫杆菌、炭疽杆菌、Q热病原体、热病原体、HIV(血清学检测除外血清学检测除外)、立克次氏体等、立克次氏体等第5页/共52页71、针对对象级微生物。实验室隶属于国家或卫生主管机构级微生物。实验室隶属于国家或卫生主管机构。2 2、基本要求、基本要求n n除满足除满足BSL-1BSL-1、2 2和和3 3级生物安全实验室的要求之外级生物安全实验室的要求之外n n分分安全柜型实验室和穿着正压服型实验室安全柜型实验室和穿着正压服型实验室n n安全柜型实验室中所有操作均在安全柜型实验室中所有操作均在级生物安全柜级生物安全柜中进中进行行n n正压服型实验室中工作人员必须穿着特殊的正压服式正压

7、服型实验室中工作人员必须穿着特殊的正压服式保护服装保护服装n n设立在独立建筑物内，且该建筑设立在独立建筑物内，且该建筑应远离市区应远离市区n n制定制定最严格最严格的操作规范的操作规范（四）（四）BSL-4实验室实验室魔鬼式、全封闭式实验室，魔鬼式、全封闭式实验室，全球全球50个，我国仅中科院个，我国仅中科院武汉病毒研究所有武汉病毒研究所有1个，个，中国农科院哈尔滨兽医研中国农科院哈尔滨兽医研究所，在建中究所，在建中 黄病毒、埃博拉病毒、中欧蜱传脑炎病毒黄病毒、埃博拉病毒、中欧蜱传脑炎病毒第6页/共52页8病病 源源一级屏障一级屏障二级屏障二级屏障三级屏障三级屏障P1BSL1不会引发健康成不

8、会引发健康成人疾病人疾病不要求不要求开放实验台、洗开放实验台、洗手池手池标准的微生物操标准的微生物操作，无特殊操作作，无特殊操作规范规范P2BSL2人类病源菌，因人类病源菌，因皮肤伤口、吸入、皮肤伤口、吸入、黏膜曝露而发生黏膜曝露而发生危险危险1 1级、级、2 2级生物级生物安全柜实验安全柜实验服、手套、若服、手套、若需要则采取面需要则采取面部保护措施部保护措施 BSL-1BSL-1外加：高外加：高压灭菌锅压灭菌锅BSLBSL1 1操作外加：操作外加：1 1、限制进入、限制进入2 2、有生物危险警告有生物危险警告标志标志3 3、“锐器锐器”安全措施安全措施4 4、生物安全手册，生物安全手册，其

9、中规定废物消其中规定废物消毒和医疗观察毒和医疗观察P3BSL3内源性和外源性内源性和外源性病源，可通过气病源，可通过气溶胶传播，能导溶胶传播，能导致严重后果或生致严重后果或生命危险命危险 1 1级、级、2 2级生物级生物安全柜保护性安全柜保护性实验服、手套、实验服、手套、若需要则采取若需要则采取呼吸保护措施呼吸保护措施BSL-2BSL-2外加：外加：1 1、和进入走廊隔开和进入走廊隔开2 2、双门进入，、双门进入，门自动关闭门自动关闭3 3、排出的空气不循排出的空气不循环环4 4、实验室内、实验室内负压负压BSL-3 BSL-2BSL-3 BSL-2操操作外加：作外加：1 1、控、控制进入制进

10、入2 2、所有、所有废物消毒废物消毒3 3、洗、洗涤前，实验服消涤前，实验服消毒毒4 4、有基础血、有基础血清清P4BSL4对生命有高度危对生命有高度危险的危险性病源险的危险性病源或外源性病源：或外源性病源：致命、通过气溶致命、通过气溶胶而致实验室感胶而致实验室感染：或未知传播染：或未知传播风险的有关病源风险的有关病源3 3级生物安全柜级生物安全柜或或1 1级、级、2 2级生级生物安全柜加全物安全柜加全身的、供应空身的、供应空气的正压防护气的正压防护服服BSL3BSL3外加：外加：1 1、单独建筑或隔离单独建筑或隔离区域区域2 2、有供气、有供气系统、排气系统、系统、排气系统、真空系统、消毒真

11、空系统、消毒系统系统3 3、其他有、其他有关要关要BSL3BSL3操作外加：操作外加：1 1、进入前换衣、进入前换衣服服2 2、出实验室、出实验室前淋浴前淋浴3 3、带出、带出设施的所有材料设施的所有材料消毒消毒第7页/共52页9BSL-1BSL-1BSL-2BSL-3正压服型实验室正压服型实验室安全柜型实验室安全柜型实验室第8页/共52页101 1、ABSL-1ABSL-1适用于饲养大多数适用于饲养大多数经过检疫的储备实验动物经过检疫的储备实验动物(灵长类灵长类除外除外)，以及专门，以及专门接种了危险度接种了危险度级微生物的动物级微生物的动物。要求应用微生物学操作技术规范要求应用微生物学操作

12、技术规范(GMT)(GMT)。2、ABSL-2适用于专门接种了危险度适用于专门接种了危险度级微生物的动物级微生物的动物。（五）实验动物设施的生物安全防护实验室（五）实验动物设施的生物安全防护实验室第9页/共52页113、ABSL-3n n适用于接种适用于接种危险度危险度级微生物的动物级微生物的动物，或根，或根 据危险度评估结果来确定。所有系统、操作和规据危险度评估结果来确定。所有系统、操作和规程程每年都需要重新检查及认证每年都需要重新检查及认证。4、ABSL-4n n适用于接种适用于接种危险度危险度级微生物的动物级微生物的动物，或根，或根 据危险度评估结果来确定。所有系统、操作和规据危险度评估

13、结果来确定。所有系统、操作和规程程每年都需要重新检查及认证每年都需要重新检查及认证。第10页/共52页12动物设施的防护水平的实验操作和安全设备汇总动物设施的防护水平的实验操作和安全设备汇总动物设施的防护水平的实验操作和安全设备汇总动物设施的防护水平的实验操作和安全设备汇总 危害程度分类危害程度分类防护水平防护水平实验室操作和安全设施实验室操作和安全设施第四类第四类ABSL-1ABSL-1限制出入，穿戴防护服和手套。限制出入，穿戴防护服和手套。第三类第三类ABSL-2ABSL-2ABSL-1ABSL-1的操作内容加上的操作内容加上,危险警告标志。可危险警告标志。可产生气溶胶的操作应使用产生气溶

14、胶的操作应使用级或级或级级BSCBSC。废。废弃物和饲养笼具在清洗前先清除污染。弃物和饲养笼具在清洗前先清除污染。第二类第二类ABSL-3ABSL-3ABSL-2ABSL-2的操作内容加上的操作内容加上,进入限制进入限制,所有操作所有操作均在均在BSCBSC内进行，并穿着专用特殊防护服。内进行，并穿着专用特殊防护服。第一类第一类ABSL-4ABSL-4ABSL-3ABSL-3的操作内容加上的操作内容加上,严格限制出入严格限制出入,进入进入前更衣前更衣,配备配备级级BSCBSC或正压防护服或正压防护服,离开时淋离开时淋浴浴,所有废弃物在清除出设施前需先清除污染。所有废弃物在清除出设施前需先清除污

15、染。第11页/共52页13 常用生物安全设备常用生物安全设备二二 实验室安全设备主要有实验室安全设备主要有生物安全柜生物安全柜高压灭菌器高压灭菌器离心机离心机负压柔性薄膜隔离装置负压柔性薄膜隔离装置洗眼器洗眼器第12页/共52页n n（一）原理n n（二）分类及特点 n n（三）使用要求n n（四）维护校验一、生物安全柜一、生物安全柜一、生物安全柜一、生物安全柜biological safety cabinet,BSCbiological safety cabinet,BSCbiological safety cabinet,BSCbiological safety cabinet,BSC第1

16、3页/共52页15 （一）（一）原理原理n n利用高效空气过滤器对空气中微小粒子的阻留特性，结合负压环境和专门设计的气体流动模式，实现对危害性生物气溶胶的屏蔽 第14页/共52页16 （二）分类及特点（二）分类及特点n nBSC有三个级别，即BSC-、BSC-（A1、A2、B1、B2）和BSC-级为密闭袖套操作，其余为前开口操作。第15页/共52页17BSC-n nBSC-级生物安全柜原理图 A 前开口 B 可视窗 C 排风HEPA过滤器 D 压力排风系统l l特点：为人和环境提供保护，但进入空气未过滤，无法有效保护操作的标本和材料。第16页/共52页18Al Al、A2A2、Bl Bl 和和

17、 B2 B2 型型无菌空气经工作台面，提供无菌空气经工作台面，提供个个体防护体防护，和台面，和台面物品物品不受污染。不受污染。可用于操作危险度可用于操作危险度 级和级和级级的感染性物质的感染性物质在使用正压防护服的条件下，在使用正压防护服的条件下，可用于操作可用于操作级级的感染性物质的感染性物质四种类型区别：四种类型区别：排风、气体循排风、气体循环、气流方向等不同环、气流方向等不同A 前开口；前开口；B 可视窗口；可视窗口；C 排风排风HEPA过滤器；过滤器；D 后面的压力排风系统；后面的压力排风系统；E 送风送风HEPA过滤器；过滤器；F 风机风机BSC-II第17页/共52页19BSC-为

18、为负压封闭式操作环境负压封闭式操作环境，由一，由一个外置的专门的排风系统控制个外置的专门的排风系统控制气流气流操作人员通过固定在安全柜窗操作人员通过固定在安全柜窗口的口的橡胶手套橡胶手套，进行工作台面，进行工作台面的操作的操作有可灭菌的、装有有可灭菌的、装有HEPAHEPA过滤过滤排风装置的排风装置的传递箱传递箱与一个双开门的与一个双开门的高压灭菌器高压灭菌器相相连接，并用它来清除进出安全连接，并用它来清除进出安全柜的所有物品的污染柜的所有物品的污染适用于适用于三级和四级三级和四级生物安全水生物安全水平的平的实验室实验室。用于操作危险度用于操作危险度、级生物级生物因子因子 第18页/共52页2

19、0第19页/共52页211、生物安全柜的安装要求、生物安全柜的安装要求清洁环境，远离人员、物品流动大的地方。清洁环境，远离人员、物品流动大的地方。远离门和窗。远离门和窗。侧面留有侧面留有30cm30cm的间距。的间距。预留出预留出30-35cm30-35cm空间连接管道，外接的排气口空间连接管道，外接的排气口要比楼层高要比楼层高2 2米。米。专用电源专用电源（三）使用要求（三）使用要求（三）使用要求（三）使用要求第20页/共52页222 2、生物安全柜的使用生物安全柜的使用1 1.正确安装正确安装，确保安全柜与外部排风系统压力平衡，保证安，确保安全柜与外部排风系统压力平衡，保证安全柜处于正常工

20、作状态。全柜处于正常工作状态。2.2.定期维护和检测定期维护和检测，确保安全性。，确保安全性。3.3.注意保洁，每天做完实验后，注意保洁，每天做完实验后，清除所有废弃物，再用清除所有废弃物，再用75%75%酒精消毒酒精消毒。4.4.一般滤膜有一般滤膜有5-105-10年使用寿命，在仪器压力表显示压力为年使用寿命，在仪器压力表显示压力为50%50%时候，需时候，需更换滤膜更换滤膜。第21页/共52页3 3、操作规范、操作规范、操作规范、操作规范1)1)1)1)操作人员操作人员操作人员操作人员:维持生物安全柜开口处气流的完整性。双臂应垂直维持生物安全柜开口处气流的完整性。双臂应垂直维持生物安全柜开

21、口处气流的完整性。双臂应垂直维持生物安全柜开口处气流的完整性。双臂应垂直缓慢进出安全柜。进入后等待约缓慢进出安全柜。进入后等待约缓慢进出安全柜。进入后等待约缓慢进出安全柜。进入后等待约1min1min1min1min，再操作。必需的物品提前，再操作。必需的物品提前，再操作。必需的物品提前，再操作。必需的物品提前置于安全柜内，减少置于安全柜内，减少置于安全柜内，减少置于安全柜内，减少双臂进出次数。双臂进出次数。2)2)2)2)生物安全柜运行生物安全柜运行生物安全柜运行生物安全柜运行:A1A1及及A2A2型，不使用时可以关闭。型，不使用时可以关闭。B1B1和和B2B2型始型始终保持空气流动以维持房

22、间空气平衡。开始工作前和完成工作后，终保持空气流动以维持房间空气平衡。开始工作前和完成工作后，应运行数分钟排出污染空气。应运行数分钟排出污染空气。3)3)3)3)物品放置物品放置物品放置物品放置:生物安全柜前后气格栅不被阻挡生物安全柜前后气格栅不被阻挡;安全柜内物安全柜内物品应品应70%70%酒精表面消毒酒精表面消毒;物品应尽可能地放在工作台后部，可产物品应尽可能地放在工作台后部，可产生气溶胶的设备靠后部放置生气溶胶的设备靠后部放置;盛装生物危害性废弃物的物品，盛装生物危害性废弃物的物品，放在安全柜内某一侧，不应放在柜外面放在安全柜内某一侧，不应放在柜外面;工作台面上的实验操工作台面上的实验操

23、作应该按照从清洁区到污染区的方向进行。作应该按照从清洁区到污染区的方向进行。第22页/共52页干净的物品干净的物品干净的物品干净的物品 理想的工作台摆放原则理想的工作台摆放原则理想的工作台摆放原则理想的工作台摆放原则 清洁清洁清洁清洁污染区污染区污染区污染区 在工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到污染区的方向进行在工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到污染区的方向进行在工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到污染区的方向进行在工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到污染区的方向进行 被污染的区域被污染的区域被污染的区域被污染的区域废弃物托盘废弃物托盘废弃物托盘废弃物托盘垃圾袋垃圾袋垃圾袋垃圾袋第

24、23页/共52页4)4)4)4)紫外灯紫外灯紫外灯紫外灯:每每每每周对紫外灯进行清洁，避免灰尘和污垢影响周对紫外灯进行清洁，避免灰尘和污垢影响杀菌效果。定期检查紫外线的强度，操作时关闭紫外灯，杀菌效果。定期检查紫外线的强度，操作时关闭紫外灯，实验前、后开启实验前、后开启20-30min20-30min。5)5)5)5)明火明火明火明火:避免使用明火对气流产生影响。用微型燃烧器对避免使用明火对气流产生影响。用微型燃烧器对接种环灭菌。接种环灭菌。6)6)6)6)溢出物处理溢出物处理溢出物处理溢出物处理:发生感染性物品溢出时，在安全柜工作状发生感染性物品溢出时，在安全柜工作状态下，用有效消毒剂立即进

25、行清理，尽可能减少气溶胶的态下，用有效消毒剂立即进行清理，尽可能减少气溶胶的生成。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒或高压灭菌。生成。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒或高压灭菌。7)7)7)7)保持洁净保持洁净保持洁净保持洁净:在实验结束时，所有物品清除表面污染后移在实验结束时，所有物品清除表面污染后移出安全柜。擦拭生物安全柜的内部表面污染。用出安全柜。擦拭生物安全柜的内部表面污染。用70%70%酒精消酒精消毒。毒。第24页/共52页8)8)8)8)个人防护个人防护个人防护个人防护:在进行一级和二级生物安全水平的操作时，在进行一级和二级生物安全水平的操作时，可穿普通实验服。在进行三级和四级生

26、物安全水平操作时，可穿普通实验服。在进行三级和四级生物安全水平操作时，使用前面加固处理的反背式实验隔离衣。手套应套在隔离使用前面加固处理的反背式实验隔离衣。手套应套在隔离衣的外面，可以戴加有松紧带的套袖来保护操作人员的手衣的外面，可以戴加有松紧带的套袖来保护操作人员的手腕。有些操作还需戴口罩和安全眼镜。腕。有些操作还需戴口罩和安全眼镜。9)9)9)9)警报器警报器警报器警报器:生物安全柜采用两种警报方式，窗式警报器提生物安全柜采用两种警报方式，窗式警报器提示滑动窗移到适宜的位置；气流警报器表明正常气流模式示滑动窗移到适宜的位置；气流警报器表明正常气流模式受到了干扰，立刻停止工作，并通知实验室主

27、管。受到了干扰，立刻停止工作，并通知实验室主管。第25页/共52页27n n在进行维护、更换过滤器、性能测试、以及气体消毒以前，应使用消毒剂清除所有内部工作表面和暴露内表面的污染。n n评估内容：安全柜的完整性、HEPA过滤器的泄漏、向下气流的速度、正面气流的速度、负压/换气次数、气流的烟雾模式以及警报和互锁系统进行测试。还可选择进行漏电、光照度、紫外线强度、噪声水平以及振动性的测试。（四）维护校验（四）维护校验第26页/共52页28n n将工作空间用透明聚氯乙烯将工作空间用透明聚氯乙烯(PVC)(PVC)完全包裹起来悬挂在钢架上，隔离装置始终完全包裹起来悬挂在钢架上，隔离装置始终维持负压。入

28、口处的空气经一个维持负压。入口处的空气经一个HEPAHEPA过滤器过滤，出口处经两个过滤器过滤，出口处经两个HEPAHEPA过滤过滤器过滤，可直接将空气排到建筑物外器过滤，可直接将空气排到建筑物外 n n无生物安全柜的现场，采用柔性薄膜隔离装置来进行无生物安全柜的现场，采用柔性薄膜隔离装置来进行高危险生物体高危险生物体(危险度危险度级或级或级级)的操作的操作 二、负压柔性薄膜隔离装置二、负压柔性薄膜隔离装置第27页/共52页29n n1.实验服、隔离衣、连体衣、围裙n n2.护目镜、安全眼镜和面罩n n3.口罩及防毒面具 n n4.手套n n5.鞋 个人安全防护用具个人安全防护用具三三P3P4

29、第28页/共52页30n n（一）标本的安全操作（一）标本的安全操作n n1.1.标本收集标本收集 容器坚固，防止意外破损。标本不得超过总体积的容器坚固，防止意外破损。标本不得超过总体积的50%50%，无泄漏，无泄漏，外部无残留。粘贴标签，要求或说明书与标本分开放置，并置于防水袋中。外部无残留。粘贴标签，要求或说明书与标本分开放置，并置于防水袋中。n n2.2.标本运输标本运输 使用可高使用可高 压灭菌或耐受化学消毒剂的二级容器，固定标本容器并压灭菌或耐受化学消毒剂的二级容器，固定标本容器并保持直立运输。保持直立运输。n n3.3.标本处理标本处理 接收大量标本的实验室应安排专门的房间或空间。

30、工作人员了解接收大量标本的实验室应安排专门的房间或空间。工作人员了解标本的潜在危害和防护方法，掌握破碎或泄漏容器的处理方法。内层容器需标本的潜在危害和防护方法，掌握破碎或泄漏容器的处理方法。内层容器需在生物安全柜内打开，并准备好消毒剂。在生物安全柜内打开，并准备好消毒剂。生物实验室技术规范生物实验室技术规范四四第29页/共52页31（二）实验室仪器和器具操作（二）实验室仪器和器具操作1.移液管和移液器移液管和移液器第30页/共52页32l l2.2.离心机离心机-离心桶的装载、平衡、密封、打开在安全柜中进行。离心桶的装载、平衡、密封、打开在安全柜中进行。-每次使用后要及时清除离心桶、转子和离心

31、机腔的污染每次使用后要及时清除离心桶、转子和离心机腔的污染第31页/共52页33l l3.3.搅拌器、振荡器、混匀器和超声波破碎仪的使用搅拌器、振荡器、混匀器和超声波破碎仪的使用n n确认仪器正常运转。确认仪器正常运转。n n建议使用聚四氟乙烯（建议使用聚四氟乙烯（PTFEPTFE）器皿。）器皿。n n应有防护装置，有条件在生物安全柜里，覆盖塑料罩操作。应有防护装置，有条件在生物安全柜里，覆盖塑料罩操作。n n在操作结束后，应在生物安全柜里开启容器。在操作结束后，应在生物安全柜里开启容器。n n使用超声波破碎仪时，应有耳部听力保护装置。使用超声波破碎仪时，应有耳部听力保护装置。第32页/共52

32、页34l l4.4.冰箱冰箱n n冰冰箱箱、低低温温冰冰箱箱和和固固体体干干冰冰盒盒要要定定期期除除霜霜和和清清扫扫。破破裂裂的的安安瓿瓿、冻冻存存管管等等要要及及时时清清除除，应应配配戴戴面面部部保保护护装装置置并并戴戴手手套套，清清扫扫后后，进进行行表面消毒处理。表面消毒处理。n n冰冰箱箱内内容容器器有有清清楚楚的的标标签签（内内容容物物的的科科学学命命名名、贮贮存存日日期期和和贮贮存存人人），无无标标签签及及过过期期材材料料应应高高压压灭灭菌菌后后丢丢弃弃。对对于于冰冰箱箱内内的的储储存存物物应应有有详细的目录。详细的目录。n n除除非非有有防防爆爆措措施施，严严禁禁将将易易燃燃液液体

33、体保保存存在在冰冰箱箱里里，冰冰箱箱的的门门上上应应张张贴这方面的注意事项。贴这方面的注意事项。第33页/共52页35l l5.5.玻璃器皿和锐器玻璃器皿和锐器n n尽可能用塑料制品代替玻璃制品。用巴斯德塑料吸管代替玻璃吸管尽可能用塑料制品代替玻璃制品。用巴斯德塑料吸管代替玻璃吸管n n减少使用注射器和针头，必须使用时采用锐器安全装置。减少使用注射器和针头，必须使用时采用锐器安全装置。n n严禁给用过的针头戴护套。严禁给用过的针头戴护套。第34页/共52页36n n安安瓿瓿开开启启：首首先先消消毒毒安安瓿瓿的的外外表表面面，再再用用砂砂轮轮在在安安瓿瓿外外表表面面的的棉棉塞塞或或纤纤维维塞塞中

34、中部部挫挫一一划划痕痕，手手里里垫垫一一块块酒酒精精浸浸透透的的棉棉花花再再握握住住安安瓿瓿，轻轻轻轻地地移移去去安安瓿瓿顶顶部部并并将将其其按按污污染染物物处处理理。如如果果棉棉塞塞或或纤纤维维塞塞留留在在安安瓿瓿上上，则则将将其其用用灭灭菌菌镊镊子子除除去去。向向安安瓿瓿内内缓缓慢慢地地加加入入液液体体以以重重悬悬内内容容物物，避免产生泡沫。避免产生泡沫。n n安安瓿瓿储储存存：不不得得将将装装有有感感染染性性物物品品的的安安瓿瓿侵侵入入液液氮氮，可可将将感感染染性性物物质质真真空空冷冷冻冻干干燥燥后后超超低低温温保保存存。从从冷冷藏藏处处取取出安瓿时要进行眼睛和手的防护出安瓿时要进行眼睛

35、和手的防护l l6.6.装有冻干传染性物质安瓿开启与储存装有冻干传染性物质安瓿开启与储存第35页/共52页37n n(1)(1)血样采集血样采集:由受过培训的人员采集，戴手套操作。检由受过培训的人员采集，戴手套操作。检验申请单放在防水袋或信封内，不应打开袋子。验申请单放在防水袋或信封内，不应打开袋子。n n(2)(2)血清分离血清分离:操作人员经过严格培训，操作时戴手套、操作人员经过严格培训，操作时戴手套、眼睛和粘膜保护装置。操作中避免或尽量减少气溶胶的眼睛和粘膜保护装置。操作中避免或尽量减少气溶胶的产生，不得倾倒。废弃标本管需高压灭菌。操作前应准产生，不得倾倒。废弃标本管需高压灭菌。操作前应

36、准备相应的消毒剂，用于及时处理喷溅和溢出的标本。备相应的消毒剂，用于及时处理喷溅和溢出的标本。n n(3)(3)涂片、盖玻片、组织及组织切片涂片、盖玻片、组织及组织切片:用于显微镜观察血用于显微镜观察血液、唾液等标本所使用的载玻片、盖玻片、染色及洗液液、唾液等标本所使用的载玻片、盖玻片、染色及洗液等废弃物均经消毒液浸泡或高压灭菌后再丢弃。组织标等废弃物均经消毒液浸泡或高压灭菌后再丢弃。组织标本应用甲醛或多聚甲醛固定，避免冷冻切片。如果必须本应用甲醛或多聚甲醛固定，避免冷冻切片。如果必须进行冷冻切片，应当使用安全罩，戴安全防护面罩。清进行冷冻切片，应当使用安全罩，戴安全防护面罩。清除污染时，仪器

37、温度要求升至室温。除污染时，仪器温度要求升至室温。l l7.7.感染性物品操作感染性物品操作第36页/共52页38n n(4)朊蛋白（prion）相关组织:朊病毒的抵抗力很强，一旦发生污染清除困难，故操作的实验室应朊病毒的抵抗力很强，一旦发生污染清除困难，故操作的实验室应使用使用专用的设备，不能共享专用的设备，不能共享。所有的操作都应在所有的操作都应在生物安全柜里进行生物安全柜里进行。必须穿。必须穿一次性的实验室保护一次性的实验室保护服（罩衫和围裙）和戴手套服（罩衫和围裙）和戴手套（病理学操作者要在两层橡胶手套之间（病理学操作者要在两层橡胶手套之间戴钢网手套）。戴钢网手套）。使用使用一次性的塑

38、料器一次性的塑料器皿取代玻璃器皿。皿取代玻璃器皿。不应使用组织处理机，可代之以塑料的广口瓶和大口杯。不应使用组织处理机，可代之以塑料的广口瓶和大口杯。使使用用过过的的钢钢网网手手套套和和KevlarKevlar手手套套在在内内的的非非一一次次性性器器械械必必须须灭灭菌菌后后方方可再次使用。可再次使用。朊蛋白对紫外线不敏感，朊蛋白对紫外线不敏感，安全柜用甲醛蒸汽处理安全柜用甲醛蒸汽处理 高效空气过滤器（高效空气过滤器（HEPAHEPA）在拆除后应用最低达）在拆除后应用最低达10001000的温度焚烧的温度焚烧。第37页/共52页39n n（三）个人行为要求n n个人物品、服装、食品和饮料只应存放

39、于非实验室区域个人物品、服装、食品和饮料只应存放于非实验室区域内指定的专用处。内指定的专用处。n n实验室内禁止吸烟、喝水、吃东西。实验室内禁止吸烟、喝水、吃东西。n n禁止在工作区内使用化妆品和处理隐形眼镜。禁止在工作区内使用化妆品和处理隐形眼镜。n n长发应束在脑后。长发应束在脑后。n n在工作区内不应配戴戒指、耳环、腕表、手镯、项链和在工作区内不应配戴戒指、耳环、腕表、手镯、项链和其他珠宝其他珠宝 第38页/共52页40n n（一）不同设备与物品的消毒方法n n（二）消毒灭菌操作与效果监测n n（三）实验室废弃物处理要点 生物实验室的消毒与灭菌生物实验室的消毒与灭菌五五第39页/共52页

40、41n n（一）不同设备与物品的消毒方法n n1 1、生物安全柜、生物安全柜实验完毕，生物安全柜内所有物品实验完毕，生物安全柜内所有物品(包括仪器设备包括仪器设备)都应进行消毒，都应进行消毒，并从生物安全柜内取出。并从生物安全柜内取出。用有效氯用有效氯2000mg/L2000mg/L的含氯消毒剂溶液擦拭台面、内壁和前后面玻的含氯消毒剂溶液擦拭台面、内壁和前后面玻璃，保持完全湿润璃，保持完全湿润30306060分钟。分钟。开启紫外线灯照射开启紫外线灯照射30306060分钟。分钟。然后用清水与干净的抹布擦净，以防消毒液腐蚀。然后用清水与干净的抹布擦净，以防消毒液腐蚀。消毒完毕，逐一关闭送风和通风

41、设备。消毒完毕，逐一关闭送风和通风设备。更换过滤器（网）前用更换过滤器（网）前用甲醛进行熏蒸消毒甲醛进行熏蒸消毒，然后轻轻取下过滤器，然后轻轻取下过滤器（网）装入专用密闭包装与容器内，容器外表面消毒后由专车（网）装入专用密闭包装与容器内，容器外表面消毒后由专车运至指定单位焚烧处理。运至指定单位焚烧处理。第40页/共52页42n n2、仪器设备局部轻度污染。局部轻度污染。用用有效氯有效氯1000-2000mg/L1000-2000mg/L擦拭，保持湿润擦拭，保持湿润30-6030-60分钟；分钟；贵重或精密仪器用贵重或精密仪器用2%2%戊二醛擦拭戊二醛擦拭30-6030-60分钟分钟（按制造商说

42、明），消毒（按制造商说明），消毒完毕用清水与干净的布擦净；紧急时对非芽孢污染仪器设备用完毕用清水与干净的布擦净；紧急时对非芽孢污染仪器设备用75%75%乙乙醇溶液擦拭三遍。醇溶液擦拭三遍。离心管未密闭、试管破裂等液体外溢时。离心管未密闭、试管破裂等液体外溢时。用用2%2%戊二醛戊二醛擦拭离心机内部，擦拭离心机内部，保持湿润至少保持湿润至少6060分钟分钟（按制造商说明）。（按制造商说明）。有有内腔的或严重污染的仪器设备内腔的或严重污染的仪器设备（如受细胞、培养液、体液或血液等（如受细胞、培养液、体液或血液等污染），整机装入专用密闭包装与容器内，容器外表面消毒后由专污染），整机装入专用密闭包装与

43、容器内，容器外表面消毒后由专车运至指定单位用车运至指定单位用环氧乙烷消毒环氧乙烷消毒。需操作不同的病原微生物前、设备维修前、出现重大污染或意外暴露需操作不同的病原微生物前、设备维修前、出现重大污染或意外暴露事故后事故后，应用，应用甲醛或过氧乙酸熏蒸甲醛或过氧乙酸熏蒸消毒。消毒。第41页/共52页43n n3 3、感染性材料与器材、感染性材料与器材使用后丢入专用密闭收集袋与容器内，连同包装与容器使用后丢入专用密闭收集袋与容器内，连同包装与容器一起经压力蒸汽一起经压力蒸汽121121作用作用20-3020-30分钟分钟。大的容器表面用有效氯大的容器表面用有效氯2000mg/L2000mg/L含氯消

44、毒液消毒，保持含氯消毒液消毒，保持完全湿润完全湿润6060分钟；如遇细胞、培养液、体液或血液等分钟；如遇细胞、培养液、体液或血液等污染，有效氯含量加大至污染，有效氯含量加大至5000mg/L5000mg/L作用作用6060分钟。分钟。n n4 4、物体表面、物体表面用用有效氯有效氯1000-2000mg/L1000-2000mg/L含氯消毒液擦拭消毒，保持完含氯消毒液擦拭消毒，保持完全湿润全湿润30306060分钟后用清水去除消毒液残留；如有细分钟后用清水去除消毒液残留；如有细胞、培养液、体液或血液等污染，有效氯含量加大至胞、培养液、体液或血液等污染，有效氯含量加大至5000mg/L5000m

45、g/L作用作用6060分钟。分钟。第42页/共52页44n n5 5、防护用品、防护用品除防护眼镜与呼吸器外均使用一次性防护用品。除防护眼镜与呼吸器外均使用一次性防护用品。每次实验结束后离开实验室前，脱下防护用品进行消毒，每次实验结束后离开实验室前，脱下防护用品进行消毒，有明显污染时随时消毒。有明显污染时随时消毒。一次性防护用品使用后丢入专用密闭收集袋内，经压力一次性防护用品使用后丢入专用密闭收集袋内，经压力蒸汽蒸汽121121作用作用20-3020-30分钟。分钟。防护眼镜在防护眼镜在2000mg/L2000mg/L有效氯溶液中浸泡有效氯溶液中浸泡6060分钟。分钟。呼吸器用呼吸器用环氧乙烷

46、消毒环氧乙烷消毒或按制造商提供的方法消毒，消或按制造商提供的方法消毒，消毒后更换呼吸过滤部分。毒后更换呼吸过滤部分。第43页/共52页45n n6 6、检验记录、检验记录应通过传真机、计算机等手段发送至实验室外。应通过传真机、计算机等手段发送至实验室外。污染的检验原始记录等送出实验室前用压力污染的检验原始记录等送出实验室前用压力蒸汽蒸汽121121作作用用2020分钟，快排干燥；大量的检验原始记录等可采用密分钟，快排干燥；大量的检验原始记录等可采用密封包装后外送专业单位进行封包装后外送专业单位进行辐照或环氧乙烷辐照或环氧乙烷消毒。消毒。n n7 7、污水消毒、污水消毒所有实验污水必须经过消毒处

47、理并达到标准后方可排放；所有实验污水必须经过消毒处理并达到标准后方可排放；污水排放标准参照国家标准污水排放标准参照国家标准医疗机构水污染排放标准医疗机构水污染排放标准（GB18466-2005GB18466-2005）执行。执行。第44页/共52页46n n8 8、手的消毒、手的消毒消毒方法消毒方法。用肥皂流水洗手。用肥皂流水洗手 1 12 2分钟，擦干后用分钟，擦干后用75%75%乙乙醇、醇、3000-5000mg/L3000-5000mg/L有效碘有效碘溶液或经卫生部批准的手消溶液或经卫生部批准的手消毒剂消毒手部毒剂消毒手部1 13 3分钟，然后用清水冲洗，用自动干分钟，然后用清水冲洗，用

48、自动干手机将手吹干或用消毒纸巾、纱布或毛巾擦干。手机将手吹干或用消毒纸巾、纱布或毛巾擦干。注意事项注意事项。水龙头、皂液与手消毒液均应采用非手触方。水龙头、皂液与手消毒液均应采用非手触方式。式。第45页/共52页47n n（二）消毒灭菌操作与效果监测n n1 1、压力蒸汽灭菌器、压力蒸汽灭菌器物理监测：物理监测：每次消毒用留点温度计作温度监测并记录作每次消毒用留点温度计作温度监测并记录作用时间，代表物理参数。用时间，代表物理参数。化学监测：化学监测：-每每包外包外用化学指示胶带监测，用化学指示胶带监测，是否经过灭菌处理；是否经过灭菌处理；-大包或难消毒物品包，中央用大包或难消毒物品包，中央用包

49、内包内化学指示剂监测，根据化学指示剂监测，根据颜色变化判断颜色变化判断是否达到灭菌条件。是否达到灭菌条件。生物监测：生物监测：每月用生物指示剂监测，嗜热脂肪芽孢杆菌（每月用生物指示剂监测，嗜热脂肪芽孢杆菌（ATCC 7953)ATCC 7953)生物指示剂，监测后应置生物指示剂，监测后应置5656培养培养242448h48h后观察。后观察。第46页/共52页48n n2、紫外线杀菌灯-操作方法：*无人条件下用悬吊式或移动式照射，无人条件下用悬吊式或移动式照射，30W30W，1m1m处辐照强处辐照强度度70W/cm70W/cm2 2，每，每m m3 3不少于不少于1.5W1.5W，照射时间，照射

50、时间3030分钟。分钟。-注意事项：注意事项：*保持紫外线灯表面清洁，每两周用酒精棉球擦拭一次保持紫外线灯表面清洁，每两周用酒精棉球擦拭一次*室内保持清洁干燥，减少尘埃和水雾，温度低于室内保持清洁干燥，减少尘埃和水雾，温度低于2020或或高于高于4040、相对湿度大于、相对湿度大于60%60%时应适当延长照射时间；时应适当延长照射时间；*紫外线辐照强度低于紫外线辐照强度低于70%70%应及时更换。应及时更换。-消毒效果监测：消毒效果监测：*每每3-63-6个月测定一次紫外线灯辐照强度。个月测定一次紫外线灯辐照强度。第47页/共52页49n n3、化学消毒剂-操作方法：*严格按卫生部严格按卫生部