DNA重组技术的基本工具讲课.pptx

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1、第1页/共50页第2页/共50页第3页/共50页第4页/共50页基因工程需要哪些特殊工具？基因工程需要哪些特殊工具？分子手术刀 限制性核酸内切酶分子运输车载体分子缝合针DNA连接酶第5页/共50页第6页/共50页EcoR黏性末端黏性末端第7页/共50页EcoR黏性末端黏性末端第8页/共50页 将两个相同的黏性末端之间连接起来，即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。E E E E coli DNAcoli DNAcoli DNAcoli DNA连接酶连接酶第9页/共50页有一或多个限制酶切点有一个或多个标记基因，便于筛选导入基因能在受体细胞 中复制、表达对受体细胞无害载体的特点：第10

2、页/共50页在实际操作过程中，载体的这些特点能否满足实际需求？第11页/共50页第12页/共50页第13页/共50页EcoRI酶切后的载体和目的基因目的基因载体第14页/共50页 多个EcoRI酶切后的载体与目的基因混合之后，加入DNA连接酶，其连接产物是否只有一种？第15页/共50页载体与目的基因之间的连接第16页/共50页载体与载体之间的连接第17页/共50页目的基因与目的基因之间的连接第18页/共50页载体自身头尾相连接（自身环化）第19页/共50页目的基因自身环化第20页/共50页载体自身环化和目的基因自身环化是干扰重组的常见因素第21页/共50页 为什么EcoRI酶切后会有这么多种连

3、接产物呢？第22页/共50页结论：一种限制酶切割后产生的黏性末端只有一种，相同的黏性末端之间可以任意连接。第23页/共50页基因工程需要的是目的基因与载体连接而成的重组DNA第24页/共50页观察对比：小组之间观察并比较制作的该重组DNA是否有不同。第25页/共50页同向插入第26页/共50页反向插入第27页/共50页目的基因插入方向不同将导致出现不同的基因产物第28页/共50页如何解决目的基因定向插入的问题呢？第29页/共50页提示：载体的特点之一：有多个不同的酶切位点。第30页/共50页材料：第31页/共50页第32页/共50页两种限制酶切割产生的黏性末端不同第33页/共50页载体与载体间

4、，目的基因与目的基因间仍可连接第34页/共50页载体及目的基因无法自身环化第35页/共50页正确连接第36页/共50页无法连接第37页/共50页一.载体含有多个酶切位点。二.双酶切：1.保证目的基因的定向插入。2.提高DNA的重组率。第38页/共50页拓展提高筛选含目的基因的重组DNA第39页/共50页载体特点中除有多个酶切位点外，还携带标记基因。第40页/共50页如何筛选出含目的基因的重组DNA呢？载体与载体重组DNA载体与目的基因重组DNA第41页/共50页提示：在基因工程的实际操作中，科学家选择的 载体往往含有两个或更多的标记基因。第42页/共50页如果在目的基因的插入位置有一个标记基因

5、，当目的基因插入后，标记基因将被破坏而无法表达，从而达到筛选目的。目的基因第43页/共50页第44页/共50页1.DNA重组所需三种基本工具2.载体特点：a.多酶切位点 b.多标记基因 第45页/共50页反馈练习，巩固提高下列有关基因工程的叙述中，错误的是:（）A.DNA连接酶将黏性末端的碱基连接起来 B.限制性内切酶用于目的基因的获得 C.目的基因需有载体导入受体细胞 D.人工合成目的基因不用限制性内切酶A第46页/共50页反馈练习，巩固提高与“限制酶”作用部位完全相同的酶是：（）A反转录酶 BRNA聚合酶 CDNA连接酶 D解旋酶C第47页/共50页反馈练习，巩固提高质粒是基因工程中最常用

6、的运载体，它存在于许多细菌体内。质粒上有标记基因如图所示，通过标记基因可以推知外源基因（目的基因）是否转移成功。外源基因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同，下表是外源基因插入位置（插入点有a、b、c），请根据表中提供细菌的生长情况，推测三种重组后细菌的外源基因插入点，正确的一组是：（）A是c；是b；是a B是a和b；是a；是bC是a和b；是b；是a D是c；是a；是bA第48页/共50页反馈练习，巩固提高下表为几种限制性核酸内切酶识别的序列和切割的位点。如图，已知某DNA在目的基因的两端1、2、3、4四处有BamH或EcoR或Pst的酶切位点。现用BamH和EcoR两种酶同时切割该DNA片段（假设所用的酶均可将识别位点完全切开），下列各种酶切位点情况中，可以防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状的是（）A1 为BamH，2为EcoR，3为BamH，4为Pst B1 为EcoR，2为BamH，3为BamH，4为PstC1 为Pst，2为EcoR，3为EcoR，4为BamH D1 为BamH，2为EcoR，3为Pst，4为EcoRA第49页/共50页感谢您的观看。第50页/共50页