实验八叶绿体中色素的提取和分离整理.pptx
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1、实验八叶绿体中色素的提取和分离整理实验八叶绿体中色素的提取和分离整理二、实验原理(一)叶绿体色素:1.叶绿素2.类胡萝卜素叶绿素叶绿素叶绿素叶绿素a a叶绿素叶绿素叶绿素叶绿素b b胡萝卜素胡萝卜素胡萝卜素胡萝卜素叶黄素叶黄素叶黄素叶黄素 3:1(3:1(3:1(3:1(阳生阳生阳生阳生):1(:1(:1(:1(阴生阴生阴生阴生)2 2:1 13 3:1 1第1页/共39页叶绿素a、b的结构式第2页/共39页类胡萝卜素的结构式第3页/共39页(二)四种色素的化学性质均为亲脂性亲水性,均不溶于水,而溶于有机溶剂,故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。极性大小:叶绿素b叶绿素a叶黄素胡萝卜素。根据相似相
2、溶原理,在有机溶液中的溶解度:叶绿素b叶绿素a叶黄素胡萝卜素。第4页/共39页(二)叶绿素的光学性质叶绿素的吸收光谱第5页/共39页类胡萝卜素的吸收光谱第6页/共39页实验原理:叶绿体中的色素是有机物,不溶于叶绿体中的色素是有机物,不溶于水,易溶于丙酮等有机溶剂中,所水,易溶于丙酮等有机溶剂中,所以用丙酮、无水乙醇等能提取色素。以用丙酮、无水乙醇等能提取色素。层析液是一种脂溶性很强的有机溶层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂。叶绿体色素在层析液中的溶解剂。叶绿体色素在层析液中的溶解度不同,分子量小的溶解度高,随度不同,分子量小的溶解度高,随层析液在滤纸上扩散得快,溶解度层析液在滤纸上扩散得快,溶解
3、度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。低的随层析液在滤纸上扩散得慢。所以用层析液来分离四种色素。所以用层析液来分离四种色素。第7页/共39页实验材料用具:1、材料:新鲜的绿色叶片(如菠菜叶片)。2、仪器:干燥的定性滤纸,烧杯(100mL),研钵玻璃漏斗,尼龙布(或棉花),毛细吸管,剪刀,小试管,培养皿盖,药勺,量筒(10mL),天平,镊子,铅笔,尺子。3、药品:丙酮,层析液,二氧化硅,碳酸钙。第8页/共39页实验过程:1 1、提取叶绿素的步骤、提取叶绿素的步骤:(1 1)称:用天平称量)称:用天平称量5g5g除去叶柄的叶片除去叶柄的叶片(2 2)剪:越细越好,尽量去除叶脉等部分)剪:越细越好,尽量去
4、除叶脉等部分(3 3)加药品:加少量二氧化硅,碳酸钙和丙酮(约)加药品:加少量二氧化硅,碳酸钙和丙酮(约5mL5mL)快速充分研磨。)快速充分研磨。第9页/共39页(4 4)磨:研磨要领是要用力压快速研磨。)磨:研磨要领是要用力压快速研磨。(5 5)过滤:用纱布(或棉花)、漏斗和试管,最后)过滤:用纱布(或棉花)、漏斗和试管,最后提取液置于试管中待用,及时用棉塞(或塞子)将提取液置于试管中待用,及时用棉塞(或塞子)将试管塞严试管塞严.第10页/共39页第11页/共39页第12页/共39页第13页/共39页第14页/共39页第15页/共39页2、分离色素的步骤制备滤纸条:将预备在试验桌上的滤纸条
5、一端剪去制备滤纸条:将预备在试验桌上的滤纸条一端剪去两个角作标记,在距离这一端两个角作标记,在距离这一端1cm1cm处用铅笔画一条处用铅笔画一条细的横线。细的横线。画滤液细线:沿铅笔线轻轻均匀地画一道线,用提画滤液细线:沿铅笔线轻轻均匀地画一道线,用提取液反复划好几次,每次划完尽量吹干,不要弄破取液反复划好几次,每次划完尽量吹干,不要弄破纸条。纸条。第16页/共39页层析分离叶绿体中的色素:将3mL层析液倒入烧杯中,注意将纸条画有滤液细线的一端置于烧杯中的层析液中,注意千万不要将滤液细线浸没在层析液中。观察实验结果:最后滤纸条上将分离出四条色素带,颜色从上往下分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色
6、,四种色素分别是胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和叶绿素b。第17页/共39页实验结果:第18页/共39页问题讨论:第19页/共39页1、加入SiO2、CaCO3的作用是什么?二氧化硅的作用是使研磨更加充分、迅速;碳酸钙的作用是保护叶绿素不分解第20页/共39页2、将滤液放在试管中,为什么要及时用棉塞将试管塞严?滤液含有丙酮,丙酮有毒,防止挥发第21页/共39页3、画滤液细线时重复画几次的目的是什么?增加色素的含量,使分离后的色素带更加清晰第22页/共39页4.为什么不能让滤液细线触及层析液?层析液会溶解色素使色素无法分离。第23页/共39页5.观察实验结果有什么现象?滤纸条上出现了几条色素带?每条
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