液相色谱仪日常维护及常见故障解决精选课件.ppt
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1、关于液相色谱仪日常维护及常见故障解决第一页,本课件共有70页1流动相2脱气机(在线)3泵(单元、二元、四元)4进样器(手动、自动)5色谱柱6检测器(VWD/DAD/FLD/RID)一、液相色谱仪日常维护及注意事项第二页,本课件共有70页1流动相第三页,本课件共有70页第四页,本课件共有70页溶剂UV截止波长(nm)乙睛190水190环己烷195己烷200甲醇210乙醇210乙醚220二氯甲烷220氯仿240四氯化碳265四氢呋喃280(220)甲苯285所以在使用紫外检测器时,所用波长应至少比所用溶剂的截止波长大20nm以上。在使用紫外检测器时,所用波长与所用溶剂的截止波长接近(或低于截止波长
2、)时,容易产生噪音干扰,从而影响检测结果。第五页,本课件共有70页生色团分子式实例最大吸收波长(nm)羰基(酮)RRC=O丙酮271羰基醛RHC=O乙醛293羧基RCOOH醋酸271酰胺RCONH2乙酰胺208次乙基RCH=CHR乙烯193亚次乙基RC=CR乙炔173睛RC=N乙睛160硝基RNO2硝基甲烷271溶剂、PH、温度等都会影响生色团的最大吸收峰的强度和位置。第六页,本课件共有70页第七页,本课件共有70页第八页,本课件共有70页第九页,本课件共有70页目的脱气方法:氦气脱气回流加热脱气真空脱气超声脱气排除溶解在流动相中的氧气和氮气2脱气机第十页,本课件共有70页在线真空脱气机12m
3、lSolenoidvalve第十一页,本课件共有70页阻尼器/压力传感器泵驱动溶剂瓶梯度比例阀主动输入阀AV出口球阀BOV清洗阀PurgeValve柱塞杆Piston3泵第十二页,本课件共有70页二元泵工作原理二元泵工作原理DamperPurge valveMixerABInlet valveOutlet valveWasteInlet valveOutlet valve第十三页,本课件共有70页泵的注意事项第十四页,本课件共有70页样品完全溶解在流动相中样品没有完全溶解过滤样品,确保样品中不含固体颗粒用流动相或比流动相弱的溶剂溶解样品进样量尽量小4进样器第十五页,本课件共有70页六通阀手动进
4、样阀-六通阀ToWasteSampleLoop(FixedVolume)FromToColumnSampleSyringeLoadInjectToColumnPumpFrom PumpTo Waste手动进样器第十六页,本课件共有70页样品要干净、经过过滤。合适的进样体积,比如定量环为20ul,进样体积应为010ul,或者20ul,进样20ul时注射样品量应至少60ul以上。定期清洗进样阀,清洗过程如下:1,将进样阀旋至Inject位置;2,用带有专用头的注射器用纯水约2030ml冲洗进样阀;3,将进样阀旋至Load位置。参考左图。手动进样器第十七页,本课件共有70页自动进样器Metering
5、device6-portvalveSamplingunitFrompumpTocolumnTowaste准备位置准备位置调用样品瓶调用样品瓶吸样品吸样品进样和运行位置进样和运行位置标准进样过程标准进样过程 .第十八页,本课件共有70页自动进样器样品要干净、经过过滤。l洗针:把样品残留降低到最小洗针:把样品残留降低到最小限度,可降低进样的记忆效应,限度,可降低进样的记忆效应,洗针瓶最好不要加瓶垫。洗针瓶最好不要加瓶垫。l多次吸液多次吸液用于进样量大于用于进样量大于100100ulul第十九页,本课件共有70页色谱柱保护色谱柱保护第二十页,本课件共有70页色谱柱的再生进行色谱柱再生时,应使用一个廉
6、价的泵,我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积125-41.6ml30ml250-43.2ml60ml250-10-20ml400ml请根据下表选择您的再生方法:极性固定相(如Si,NH2*,DIOL基色谱填料)的再生:正庚烷氯仿乙酸乙酯丙酮乙醇水*非极性固定相(如反相色谱填料RP18,RP8,CN等)的再生:水乙腈氯仿(或异丙醇)乙腈水0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱注意:在对NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能成铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。*如果简单的有机溶剂/水的处理不能够
7、完全洗去硅胶表面吸附的杂质,用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。第二十一页,本课件共有70页6检测器VWD的光源氘灯有一定的半衰期,一般为1000小时左右,所以在没有样品分析任务时要关闭氘灯,以延长氘灯的使用寿命。流动池污染后,会造成灵敏度下降、噪声加大,应避免脏的样品进入流动池。定期使用异丙醇冲洗系统对保持流动池性能有一定好处。更换氘灯。第二十二页,本课件共有70页能引起能引起HPLCHPLC发生问题的潜在因素发生问题的潜在因素:工作环境工作环境电源及地线电源及地线流动相流动相泵泵进样器进样器保护柱保护柱在线过滤器在线过滤器连接管路连接管路色谱柱色谱柱检测器检测器数据处理装置数据处理装置操作操作
8、二、液相色谱仪故障分析第二十三页,本课件共有70页逻辑判断及处理问题问题 化学品 环境 机器*色谱柱/保护柱*电源*泵*溶液*地线*进样器*样品*温度*检测器*湿度*数据处理单元*清洁程度第二十四页,本课件共有70页液相色谱仪器出现故障可以从多方面入手1.从部件的运转情况推测,如压力、流速的变化2.从色谱图的异常情况推测,如出峰时间、峰形3.从数据结果中分析第二十五页,本课件共有70页流动相内含有空气流动相内含有空气-脱气处理脱气处理检测池内有气泡检测池内有气泡-冲洗检测池或在检测池出口接一段内径冲洗检测池或在检测池出口接一段内径0.009“的的 管子管子(此法只适用于耐压检测器此法只适用于耐
9、压检测器!)色谱柱内有未洗脱尽的组份色谱柱内有未洗脱尽的组份-洗脱色谱柱洗脱色谱柱.系统有漏液之处系统有漏液之处-检漏并处理检漏并处理电噪声电噪声-去除噪声源去除噪声源,信号线屏蔽信号线屏蔽,检查系统接地状况检查系统接地状况检测器光源灯能量低检测器光源灯能量低-更换光源灯更换光源灯检测池污染检测池污染-冲洗检测池冲洗检测池典型故障分析及实例基线噪声基线噪声第二十六页,本课件共有70页基线周期性噪声基线周期性噪声绝大多数情况下是来源于泵的问题绝大多数情况下是来源于泵的问题泵头内有气泡泵头内有气泡 -流动相脱气流动相脱气 ,泵头排气泵头排气(注意正确的排气方法注意正确的排气方法)泵进出口阀有问题泵
10、进出口阀有问题 -更换阀组件更换阀组件柱塞杆有问题柱塞杆有问题 -更换柱塞杆及其密封圈更换柱塞杆及其密封圈溶剂混合不良溶剂混合不良 -加装混合器加装混合器电噪声电噪声 -去除噪声源去除噪声源第二十七页,本课件共有70页非周期性噪声非周期性噪声气泡-流动相脱气检测池内有气泡-流动相脱气,检测池后加适当反压系统有漏液之处-检漏并处理溶剂混合不良-加装混合器电噪声-去除噪声源第二十八页,本课件共有70页基线漂移基线漂移梯度系统-溶剂A于溶剂B的ABS值相差大-试用另种溶剂或使用基线扣除法色谱柱有其他组份被洗脱出-冲洗,直至基线稳定溶剂发生变化(如溶入气体或溶剂挥发)-氦气或脱气机脱气,溶剂瓶避光,密
11、封(但要注意防止溶剂瓶内产生负压)系统有漏液之处-检漏并处理环境温度影响(尤其对示差,电导,电化学检测)-室温,柱温,检测池温度控制反压变化-溶剂和样品过滤.注意黏度过大的样品第二十九页,本课件共有70页基线周期性波动基线周期性波动温度影响-环境温度及检测池温度控制.注意空调机的 影响溶剂混合不良-加装混合器流动相脱气不良-流动相脱气供电电源的影响 泵不良-检修处理 第三十页,本课件共有70页基线有无规律的尖峰基线有无规律的尖峰气泡-溶剂脱气电路接触不良-保证清洁,接线牢固,接点无氧 化光源灯不良-检查处理电噪声-去除噪声源第三十一页,本课件共有70页无样品峰无样品峰未进样 泵未工作漏液流动相
12、或样品的问题柱子或保护柱的问题数据采集装置的问题或其与检测器连线的问题最简单快捷的检查-泵是否工作,系统是否漏液,进一针丙酮溶液检查检测器读数及数据单元是否有响应 第三十二页,本课件共有70页负峰负峰负峰负峰组份的组份的ABSABS值小于溶剂的值小于溶剂的ABSABS值值气泡通过了检测池气泡通过了检测池对对RIRI检测器不一定是有了问题,很可能是正常的检测器不一定是有了问题,很可能是正常的所有峰都是负峰所有峰都是负峰-可能是检测器输出与数据单元连线可能是检测器输出与数据单元连线 极性接反极性接反第三十三页,本课件共有70页峰形不好峰形不好峰形不好峰形不好 -如峰拖尾如峰拖尾如峰拖尾如峰拖尾,峰
13、分叉峰分叉峰分叉峰分叉,出肩膀出肩膀出肩膀出肩膀在线过滤器在线过滤器(IN LINE FILTER)(IN LINE FILTER)污染污染 (通常会伴随有系统压力升高之现象通常会伴随有系统压力升高之现象)色谱柱污染色谱柱污染系统有不正常的死体积系统有不正常的死体积-检查管路连接是否正确检查管路连接是否正确-内径内径,接头接头保护柱保护柱(GUARD COLUMN)(GUARD COLUMN)污染污染溶剂不好或使用不对溶剂不好或使用不对样品不好样品不好色谱柱坏了色谱柱坏了-*PH 2 PH 8 8 会破坏柱子内的填料会破坏柱子内的填料 *流速变化率太大流速变化率太大-操作上应注意操作上应注意
14、第三十四页,本课件共有70页两个要点两个要点两个要点两个要点-峰保留时间峰保留时间峰保留时间峰保留时间(RT)(RT)(RT)(RT)重现性重现性重现性重现性,峰面积重现性峰面积重现性峰面积重现性峰面积重现性RTRTRTRT重现性不好重现性不好重现性不好重现性不好 -无规律变化无规律变化 :*:*流量不稳流量不稳 -气泡气泡,漏液漏液,泵泵 *温度影响温度影响 有规律的变化有规律的变化,且逐渐趋于稳定且逐渐趋于稳定 :系统未充分平衡系统未充分平衡 RT RT RT RT 重现性好重现性好重现性好重现性好,但峰面积重现性不好但峰面积重现性不好但峰面积重现性不好但峰面积重现性不好 -*进样量进样量
15、-选用定量管进样时选用定量管进样时,进样进样 体积应大于体积应大于3 3倍定量管容积倍定量管容积;*样品样品,气泡气泡;*样品在流动相各组份中不能充分样品在流动相各组份中不能充分 溶解溶解(通常伴随有柱压逐渐升高通常伴随有柱压逐渐升高 且经反冲后且经反冲后,柱压会恢复正常之现柱压会恢复正常之现 象象););*基线噪声的影响基线噪声的影响;*积分处理的影响积分处理的影响;系统性能:重复性差系统性能:重复性差第三十五页,本课件共有70页常见故障分析列表:一.从压力变化判断1.压力无现象判断故障排除面版灯不亮电源不通检查电源接头松脱拧紧接头泵头漏液接口太松拧紧泵头螺丝泵密封垫磨损更换密封垫第三十六页
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