紫外可见分光光度计 演示文稿.ppt

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1、紫外可见风光光度计学习目的v1.熟悉分光光度计的使用方法 v2.练习测绘吸收曲线的方法v3.掌握利用标准曲线进行微量成分分光光度测定紫外可见分光光度计紫外可见分光光度计要点 光是一种电磁波，与其它波如声波不同，电磁波不需要传播介质，可以在真空中传播，传播速度c2997924580001千米秒。1.实验目的2.实验原理3.实验步骤4.实验结果的处理光的波动性光的粒子性单色光、复合光、互补色光成分的定性分析v物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收

2、光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特性波长处的最大吸收峰(峰值)和波形图来判断某种物质是否存在。基本组成基本组成光源在整个紫外光区或可见光谱区在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。的使用寿命。v可见光区：钨灯作为光源，其辐可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在射波长范围在3202500 nm。v 紫外区：氢、氘灯。发射紫外区：氢、氘灯。发射185400 nm的连续光谱。的连续光谱。单色器样品室检测器显示v朗伯一比耳定律(

3、LambertBeer)是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。当入射光波长一定时，溶液的吸光度A是吸光物质的浓度C及吸收介质厚度l(吸收光程)的函数。其常用表达式为：vA=kbC(式中，为系数)2.分光光度计原理v物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其 特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或 测 定该物质的含量，3.操作步

4、骤及使用方法v准备工作：v将以装好的仪器接入220V的市电，开机，同时开启所需光源（钨灯和氘灯，不需要用氘灯时请不要打开氘灯开关）。开机后仪器显示800-3，表示主机进入预热十分钟。1.预热完毕后，显示器将显示HELLO，表示仪器可以进入工作状态。（在在预预热热过过程程中中，如如果果想想直直接接进进入入工工作作状状态态，可可以以按按STOP键键进进入入HELLO工工作作状状态态。仪仪器器要要求求开开机机后后预预热热十十分分钟钟以以使使仪仪器器工工作作更更稳稳定定。）仪器进入工作状态后，首先根据实际测量的需求调节好光源、波长、狭缝、滤色片。选择后即可准备好样品进行各种测量。根据所需的测量进入相应

5、的测量功能（T、A、C）。测量工作v5.确定工作波长v6.建立工作曲线v7.测试带测样品测量样品透射比（T）：v将参比、样品放入样品池，拉动样品池拉杆使参比的比色皿对准光线通道，按100%T键（调百），待显示 100.0，然后打开样品池盖，按Clear键（调零），待显示 0000 ，盖上样品池盖再次按100%T键，待显示 100.0，拉动样品池拉杆使样品的比色皿对准光线通道，按Enter键后等待显示结果 测量样品吸光值（A）：v将参比、样品放入样品池，拉动样品池拉杆使参比的比色皿对准光线通道，按ABSO键，待显示 A0.000，然后打开样品池盖，按Clear键，待显示 A 0000 ，盖上样品

6、池盖再次按ABSO键，待显示 A0.000，拉动样品池拉杆使样品的比色皿对准光线通道，按Enter键后等待显示结果 测量样品浓度（C）：v在测量浓度之前，必须建立标准曲线才能进行浓度测量。如没有建立标准曲线则不能进行浓度测量，仪器会提示操作出错。v 测量浓度应该按以下过程操作：v A：建立标准曲线（共有三种方法选择）；v B：工作曲线的修正（自己认为工作曲线没问题可以不修正）；v C：测量浓度。工作曲线的修正工作曲线的修正v 工作曲线方程为C=KA+B，最多测量标准液的样点为20个。因此在建立曲线时是选20个样点的平均值建立方程，因此总有其中的样点离曲线较远（坏点），可以剔除该样点来达到修正曲

7、线的目的，方法是在建立完曲线显示K、B、R后按STOP键，则程序会自动剔除坏点，按一次STOP键则剔除一个坏点，最多可以有n-1次（n个标准液）。7.测试带测样品v建立工作曲线以后，可以开始测试待测样品，v8.实验结果的处理v根据数据绘制表格：v吸光度-PH曲线（吸光度为纵坐标）v吸光度-显色剂用量曲线（吸光度为纵坐标）v吸光度-反应时间曲线（吸光度为纵坐标）v所得三条曲线上确定显色反应适宜的PH范围、显色剂用量范围和显色时间范围标准曲线法v配置一系列不同浓度的标准溶液，以不含被测组分的溶液为参比溶液，测定标准系列溶液的吸光度，以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标，绘制吸光度-浓度曲线，称为标准

8、曲线。在相同条件下测定样品溶液的吸光度，从校正曲线上找出与之相对应的未知组分的浓度，用于单组分的定量分析。cv参比容液的选择v1.溶剂参比v2.试剂参比v3.样品参比v4.平行操作溶液参比Acv0A仪器的维护保养与注意事项仪器的维护保养与注意事项v当显示错误信息时一定查阅错误故障表，找出原因，再继续操作。v放入样品池架时，要检查是否定位准确平稳，不能出现歪斜现象。v当仪器执行程序发生错误时，先用STOP键转出，让显示器显示HELLO。如果出现的错误比较严重，不能转出的话，可以用复位键Reset键复位。v仪器运行期间，注意仪器附近电磁干扰比较严重的电器应该关闭。以免仪器受到电磁干扰。v仪器开电后不要用手拨保护光闸片，因为仪器的接收器不能受强光的照射。v为了延长仪器的使用寿命，一般情况下，如果不使用氘灯，请最好不要开氘灯。氘灯关闭后，要等几分钟才能重新点燃。关闭仪器前，请先关氘灯。