实验三 霉菌、放线菌及土壤中微生物的分离纯化.ppt

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1、实验三实验三 放线菌、霉菌的形态观察放线菌、霉菌的形态观察及微生物的分离纯化及微生物的分离纯化 一、实验目的一、实验目的vv观察放线菌、霉菌的形态结构特征观察放线菌、霉菌的形态结构特征观察放线菌、霉菌的形态结构特征观察放线菌、霉菌的形态结构特征vv学习掌握霉菌染色的基本方法学习掌握霉菌染色的基本方法学习掌握霉菌染色的基本方法学习掌握霉菌染色的基本方法vv基本掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌菌落形态基本掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌菌落形态基本掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌菌落形态基本掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌菌落形态特征特征特征特征实验（一）放线菌、霉菌的形态观察实验（一）放线菌、霉菌的形态

2、观察二、实验原理二、实验原理 1、放放线线菌菌：放放线线菌菌是是介介于于细细菌菌与与丝丝状状真真菌菌之之间间而而又又接接近近于细菌的一类丝状原核生物，因菌落呈放射状而得名。于细菌的一类丝状原核生物，因菌落呈放射状而得名。放线菌的菌落在培养基上着生牢固，不易被接种针挑取，放线菌的菌落在培养基上着生牢固，不易被接种针挑取，由于孢子的存在，常使菌落表面呈粉末状。它和细菌单染色一样，由于孢子的存在，常使菌落表面呈粉末状。它和细菌单染色一样，可用石炭酸复红和吕氏美蓝等染料着色后，在显微镜下观察它们可用石炭酸复红和吕氏美蓝等染料着色后，在显微镜下观察它们的形态。放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所组成的单细胞

3、菌丝的形态。放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所组成的单细胞菌丝体，菌丝内无隔膜，菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的体，菌丝内无隔膜，菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养营养菌丝菌丝（基内菌丝）和有营养菌丝向上生长的（基内菌丝）和有营养菌丝向上生长的气生菌丝气生菌丝，有些气生，有些气生菌丝分化成各种菌丝分化成各种孢子丝孢子丝，呈螺旋状、波浪形或分枝状等，着生形，呈螺旋状、波浪形或分枝状等，着生形式有丛生、互生和轮生三种。孢子的表面光滑或粗糙，圆或椭圆式有丛生、互生和轮生三种。孢子的表面光滑或粗糙，圆或椭圆和干形。孢子有各种颜色。这些形态特点都是鉴别放线菌的重要和干形。孢子有各种颜色。这些形态特点

4、都是鉴别放线菌的重要依据。依据。营营养养菌菌丝丝：又又叫叫初初级级菌菌丝丝体体或或一一级级菌菌丝丝体体，匍匍匐匐生生长长于于培培养养基基内内，主主要要生生理理功功能能是是吸吸收收营营养养物物，故故亦亦称称基基内内菌菌丝丝。营营养养菌菌丝丝一一般般无无隔隔膜膜，直直径径0.20.8，但但长长度度相相差差很很大大，短短的的小小于于100100，长长的的可可达达600600以以上上，有有的的无无色色素素，有有的的产产生生黄黄、橙橙、红红、紫紫、兰兰、绿绿、褐褐、黑黑等等不不同同色色素素，若若是是水水溶溶性性的的色色素素，还还可可透透入入培培养养基基内内，将将培培养养基基染染上上相相应应的的颜颜色色，

5、如如果果是是非非水水溶溶性性（脂脂溶溶性性）色色素素，则则使使菌落呈现相应的颜色，因此，色素是鉴定菌种的重要依据。菌落呈现相应的颜色，因此，色素是鉴定菌种的重要依据。气气生生菌菌丝丝：又又称称二二级级菌菌丝丝体体。营营养养菌菌丝丝体体发发育育到到一一定定时时期期，长出培养基外并伸向空间的菌丝为长出培养基外并伸向空间的菌丝为气生菌丝。气生菌丝。孢孢子子丝丝：当当气气生生菌菌丝丝体体发发育育到到一一定定程程度度，其其上上分分化化出出可可形形成成孢子的菌丝即孢子丝，又名产孢丝或繁殖丝。孢子的菌丝即孢子丝，又名产孢丝或繁殖丝。放线菌最突出的特性之一是产生大量的、种类繁多的抗生素，放线菌最突出的特性之一

6、是产生大量的、种类繁多的抗生素，根据估计，全世界共发现根据估计，全世界共发现40004000多种抗生素，其中绝大部分是由放多种抗生素，其中绝大部分是由放线菌产生的。线菌产生的。2 2、霉菌：、霉菌：霉霉菌菌是是一一些些“丝丝状状真真菌菌”的的统统称称，不不是是分分类类学学上上的的名名词词。凡凡是是在在基基质质上上长长成成毛毛状状、棉棉絮絮状状或或蜘蜘蛛蛛网网状状的的丝丝状状真菌统称霉菌。真菌统称霉菌。霉霉菌菌形形态态比比细细菌菌、放放线线菌菌复复杂杂，个个体体比比较较大大，具具有有分分枝枝的的菌菌丝丝体体和和分分化化的的繁繁殖殖器器官官。因因此此，在在观观察察是是要要注注意意菌菌丝丝的的直直径

7、径大大小小，菌菌丝丝体体有有无无隔隔膜膜，营营养养菌菌丝丝有有无无假假根根，无无性性繁繁殖殖或或有有性性繁繁殖殖时时形形成成的的孢孢子子是是哪哪一一种种，孢孢子子是是怎怎样样着生的。着生的。由于霉菌的菌丝较粗大，而且孢子容易飞散，如将由于霉菌的菌丝较粗大，而且孢子容易飞散，如将菌体置于水中容易变形，故观察时状不用水浸法制片，而菌体置于水中容易变形，故观察时状不用水浸法制片，而将菌体置于乳酸石炭酸棉兰染液中，使细胞不易干燥，并将菌体置于乳酸石炭酸棉兰染液中，使细胞不易干燥，并有杀菌作用。有杀菌作用。根霉根霉三、实验材料三、实验材料v放线菌和真菌培养物放线菌和真菌培养物1.1.放线菌培养物：放线菌

8、培养物：链霉菌四天插片培养物。链霉菌四天插片培养物。vv2.2.黑曲霉培养物。黑曲霉培养物。3.3.各种真菌示范片。各种真菌示范片。vv显微镜、载玻片、接种环、解剖针、解剖刀、显微镜、载玻片、接种环、解剖针、解剖刀、酒精灯、镊子等。酒精灯、镊子等。vv乳酸石炭酸棉兰染液、碘液、酒精、蒸馏水等乳酸石炭酸棉兰染液、碘液、酒精、蒸馏水等四、实验步骤四、实验步骤vv观察放线菌气生菌丝和观察放线菌气生菌丝和基内菌丝的区别基内菌丝的区别取插片一片，直接在显微镜下取插片一片，直接在显微镜下取插片一片，直接在显微镜下取插片一片，直接在显微镜下进行观察，注意分界面两侧菌进行观察，注意分界面两侧菌进行观察，注意分

9、界面两侧菌进行观察，注意分界面两侧菌丝形态的差异丝形态的差异丝形态的差异丝形态的差异插片法培养放线菌插片法培养放线菌 2、霉菌：、霉菌：在载玻片上滴加一滴乳在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉兰酸石炭酸棉兰用解剖针取少许霉菌用解剖针取少许霉菌于染色液中于染色液中挑开菌丝挑开菌丝盖上盖玻片盖上盖玻片片片镜检。镜检。vv观察黑曲霉菌丝分观察黑曲霉菌丝分隔情况和分生孢子隔情况和分生孢子着生情况（着重辨着生情况（着重辨认分生孢子梗、足认分生孢子梗、足细胞和分生孢子）：细胞和分生孢子）：v观察根霉菌观察根霉菌丝情况和子丝情况和子囊孢子情况囊孢子情况（着重辨认（着重辨认孢子囊、包孢子囊、包囊梗、假根）：囊梗、假

10、根）：五、实验结果五、实验结果vv记录所观察到的放线菌基内菌丝和气生菌丝的差别记录所观察到的放线菌基内菌丝和气生菌丝的差别记录所观察到的放线菌基内菌丝和气生菌丝的差别记录所观察到的放线菌基内菌丝和气生菌丝的差别绘制青霉（绘制青霉（绘制青霉（绘制青霉（40 x40 x40 x40 x）、黑曲霉（黑曲霉（黑曲霉（黑曲霉（40 x40 x40 x40 x）的形态，注明各部的形态，注明各部的形态，注明各部的形态，注明各部分名称。分名称。分名称。分名称。1.1.1.1.为何要用乳酸石炭酸棉兰染液对霉菌进行染色为何要用乳酸石炭酸棉兰染液对霉菌进行染色为何要用乳酸石炭酸棉兰染液对霉菌进行染色为何要用乳酸石炭

11、酸棉兰染液对霉菌进行染色?实验实验(二二)、从土壤中稀释分离微生物从土壤中稀释分离微生物一、实验目的：一、实验目的：一、实验目的：一、实验目的：学习学习学习学习微生物稀释平板计数微生物稀释平板计数微生物稀释平板计数微生物稀释平板计数及划线分离技术及划线分离技术及划线分离技术及划线分离技术二、实验原理二、实验原理二、实验原理二、实验原理:采用适宜采用适宜采用适宜采用适宜(选择选择选择选择)培养基和培养条件，或加入某种培养基和培养条件，或加入某种培养基和培养条件，或加入某种培养基和培养条件，或加入某种抑制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标抑制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标抑制剂

12、有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标抑制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标微生物的纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法微生物的纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法微生物的纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法微生物的纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法在固体培养基上形成单个菌落在固体培养基上形成单个菌落在固体培养基上形成单个菌落在固体培养基上形成单个菌落 依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一菌落从而推算样品中含有多少细菌或真菌的活菌数目菌

13、落从而推算样品中含有多少细菌或真菌的活菌数目菌落从而推算样品中含有多少细菌或真菌的活菌数目菌落从而推算样品中含有多少细菌或真菌的活菌数目 从土壤中稀释分离微生物的方法如下：从土壤中稀释分离微生物的方法如下：（一）土壤悬液制备（一）土壤悬液制备准备准备1 1瓶土壤悬液：称瓶土壤悬液：称1010克土壤放入带玻璃珠的克土壤放入带玻璃珠的9090mlml瓶装无菌水中，手摇振荡瓶装无菌水中，手摇振荡(10-20min)(10-20min)，使，使土样分散。土样分散。三、实验步骤：三、实验步骤：（二）悬液稀释：方法见下图：（二）悬液稀释：方法见下图：（二）悬液稀释：方法见下图：（二）悬液稀释：方法见下图：

14、（三）倒固体琼脂培养基平板：（三）倒固体琼脂培养基平板：（三）倒固体琼脂培养基平板：（三）倒固体琼脂培养基平板：分离细菌的同学取一瓶牛肉膏培养基（分离细菌的同学取一瓶牛肉膏培养基（分离细菌的同学取一瓶牛肉膏培养基（分离细菌的同学取一瓶牛肉膏培养基（200ml200ml200ml200ml瓶）瓶）瓶）瓶）熔化后加制霉菌素熔化后加制霉菌素熔化后加制霉菌素熔化后加制霉菌素1ml1ml1ml1ml后倒平板。后倒平板。后倒平板。后倒平板。分离真菌的同学取一瓶马丁分离真菌的同学取一瓶马丁分离真菌的同学取一瓶马丁分离真菌的同学取一瓶马丁-孟加拉红培养基（孟加拉红培养基（孟加拉红培养基（孟加拉红培养基（200

15、ml200ml200ml200ml瓶）熔化后冷至瓶）熔化后冷至瓶）熔化后冷至瓶）熔化后冷至50505050后加后加后加后加链霉素链霉素链霉素链霉素2ml2ml2ml2ml倒平板。倒平板。倒平板。倒平板。（四）悬液涂布（四）悬液涂布（四）悬液涂布（四）悬液涂布(演示演示演示演示):):):):无菌操作无菌操作无菌操作无菌操作(从稀至浓将菌液涂从稀至浓将菌液涂从稀至浓将菌液涂从稀至浓将菌液涂布均匀布均匀布均匀布均匀)采用采用采用采用101010102 2 2 2，101010103 3 3 3，10101010 4 4 4 4稀释液涂布马丁孟加稀释液涂布马丁孟加稀释液涂布马丁孟加稀释液涂布马丁孟加

16、拉红平板；采用拉红平板；采用拉红平板；采用拉红平板；采用101010103 3 3 3，101010104 4 4 4，101010105 5 5 5稀释液涂布牛肉膏稀释液涂布牛肉膏稀释液涂布牛肉膏稀释液涂布牛肉膏蛋白胨平板蛋白胨平板蛋白胨平板蛋白胨平板,每人用剩下的每人用剩下的每人用剩下的每人用剩下的1 1 1 1个平板做划线分离，从三个平板做划线分离，从三个平板做划线分离，从三个平板做划线分离，从三角瓶中取土壤悬液作划线分离（演示）角瓶中取土壤悬液作划线分离（演示）角瓶中取土壤悬液作划线分离（演示）角瓶中取土壤悬液作划线分离（演示）（五）培养：（五）培养：（五）培养：（五）培养：每个同学把

17、平板用报纸包好（每个平板方向一致），每个同学把平板用报纸包好（每个平板方向一致），每个同学把平板用报纸包好（每个平板方向一致），每个同学把平板用报纸包好（每个平板方向一致），写上班级和姓名，皿底朝上，置于培养箱培养写上班级和姓名，皿底朝上，置于培养箱培养写上班级和姓名，皿底朝上，置于培养箱培养写上班级和姓名，皿底朝上，置于培养箱培养(温度温度温度温度?!)?!)?!)?!)。（六）检查结果（六）检查结果（六）检查结果（六）检查结果平板涂布平板涂布简单易行，但易简单易行，但易造成机械损伤造成机械损伤 划线分离方式划线分离方式 结果分析结果分析结果分析结果分析:1.1.1.1.我所涂平板种类：我所

18、涂平板种类：我所涂平板种类：我所涂平板种类：（牛肉膏或马丁（牛肉膏或马丁（牛肉膏或马丁（牛肉膏或马丁氏）氏）氏）氏）2.2.2.2.计数：牛肉膏平板取单菌落数目在计数：牛肉膏平板取单菌落数目在计数：牛肉膏平板取单菌落数目在计数：牛肉膏平板取单菌落数目在30303030300300300300个个个个左右的稀释度来计数，马丁氏平板取单菌落数目左右的稀释度来计数，马丁氏平板取单菌落数目左右的稀释度来计数，马丁氏平板取单菌落数目左右的稀释度来计数，马丁氏平板取单菌落数目在在在在10101010100100100100个左右的稀释度来计数个左右的稀释度来计数个左右的稀释度来计数个左右的稀释度来计数 3

19、.3.3.3.我所计数的平板稀释度是：我所计数的平板稀释度是：我所计数的平板稀释度是：我所计数的平板稀释度是：单菌落单菌落单菌落单菌落数目：数目：数目：数目：、。4.4.4.4.计算：活菌数目计算：活菌数目计算：活菌数目计算：活菌数目/每克土壤每克土壤每克土壤每克土壤 （计算过程）（计算过程）（计算过程）（计算过程）个个个个/每克土壤每克土壤每克土壤每克土壤 5.5.5.5.对你和同伴的细菌及真菌计数结果进行分析对你和同伴的细菌及真菌计数结果进行分析对你和同伴的细菌及真菌计数结果进行分析对你和同伴的细菌及真菌计数结果进行分析实验报告实验报告实验报告实验报告从土壤中稀释分离微生物从土壤中稀释分离

20、微生物从土壤中稀释分离微生物从土壤中稀释分离微生物的的的的原理、方法、步骤。原理、方法、步骤。原理、方法、步骤。原理、方法、步骤。2 2 2 2思考题思考题思考题思考题(1)(1)(1)(1)为什么融化后的培养基要冷却至为什么融化后的培养基要冷却至为什么融化后的培养基要冷却至为什么融化后的培养基要冷却至45454545左右才能倒平左右才能倒平左右才能倒平左右才能倒平板板板板?(2)(2)(2)(2)要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键?为为为为什么什么什么什么?(3)(3

21、)(3)(3)试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优缺点及应用。缺点及应用。缺点及应用。缺点及应用。(4)(4)(4)(4)当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一起时，你认为问题出在哪里在一起时，你认为问题出在哪里在一起时，你认为问题出在哪里在一起时，你认为问题出在哪里?(5)(5)(5)(5)用倒平板法和涂布法计数，其平板上长出的菌落有用倒平板法和涂布法计数，其平板上长出的菌落有用倒平板法和涂布法计数，其平板上长出的菌落有用倒平板法和涂布法计数，其平板上长出的菌落有何不同何不同何不同何不同?为什么要培养较长时间为什么要培养较长时间为什么要培养较长时间为什么要培养较长时间(48h)(48h)(48h)(48h)后观察结果后观察结果后观察结果后观察结果?本次实验课结束本次实验课结束请确保油镜头擦拭干净！请确保油镜头擦拭干净！所用器皿自己洗净！所用器皿自己洗净！请第三组同学留下值日请第三组同学留下值日下周再见！下周再见！