兽医微生物.ppt

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1、沙门氏菌研究进展沙门氏菌研究进展Lecture4一一概述概述沙门氏菌属（Salmonella）是一大群寄生于人类和动物肠道内生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌统称为沙门氏杆菌。1880年Eberth首先发现伤寒杆菌，1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌，由于Salmon发现本属细菌的时间较早，在研究中的贡献较大，遂定名为沙门氏菌属。目前至少有67种O抗原和2000个以上血清型，所致疾病称沙门氏菌病。分类地位Taxonomicposition命名NomenclatureGenus(italics)SalmonellaSpecies(italics)enterica,whichinclude

2、ssubspeciesI,II,IIIa,IIIb,IV,andVIbongori(formerlysubspeciesV)Serotype(capitalized,notitalicized)bThefirsttimeaserotypeismentionedinthetext;thenameshouldbeprecededbythewordserotypeorser.SerotypesarenamedinsubspeciesIanddesignatedbyantigenicformulaeinsubspeciesIItoIV,andVIandS.bongoriMembersofsubspec

3、iesII,IV,andVIandS.bongoriretaintheirnamesifnamedbefore1966TABLE1.SalmonellanomenclatureinuseatCDC,2000aaIn1984Farmeretal.(10)updatedthereportingsystemusedatCDCforSalmonella.Themajorchangesthat CDCmadeandthat result inadifference from the1984reporting system are(i)capitalizationoftheserotypename,(ii

4、)inclusionofsubspeciesVIandS.bongori,and(iii)adoptionofthetypespeciesnameS.enterica.bExamplesofserotypedesignationsareSalmonellaserotype(ser.)Typhimurium,SalmonellaII50:b:z6,SalmonellaIIIb60:k:z,andSalmonellaser.Marina(IV48:g,z51:).（一）生物学性状1、形态与染色 大小0.61.023um，无芽胞，一般有鞭毛，无荚膜，多数有菌毛，革兰氏阴性杆菌。2、培养特性 兼性厌氧

5、菌，在普通琼脂平板上形成中等大小、半透明的S型菌落。在肠道杆菌选择性培养基上形成无色菌落。培养基观察结果特性EMB(伊红美蓝琼脂)菌落为无色不发酵乳糖MCA（麦康凯培养基）菌落为无色不发酵乳糖Phenolredlactosebroth培养基呈红色()不发酵乳糖Phenolredsaccharosebroth培养基呈紅色()不发酵蔗糖Phenolreddextrosebroth培养基呈黃色，发酵管中有气体(A/G)发酵葡萄糖并产气Starchagarplate滴加碘液后不产生clear zone()无胞外淀粉水解酶Nutrientgelatindeeptube培养基培养后放入冰箱中呈固态()无胞

6、外动物凝胶水解TSIagarslant斜面紅色，底部黃色，培养基断裂成两段发酵葡萄糖并且产生气体和H2SSIMagar(0.3agar)培养基有黑色沉淀物且扩散至接种线外产生H2S且具运动性Trypticasesoyagarslant培养后滴入H2O2有气泡产生（）有H2O2酶可分解H2O2且非绝对厌氧菌IMViC（培养基颜色）I 黃色（-）M红 色（+）V上 层 不变 色（-）C 蓝色有菌 生 长 （+）不分解色氨酸故不形成吲哚;但发酵葡萄糖，并保持酸性;可利用柠檬酸盐为碳源 Ureabroth无桃紅色产生 尿素酶Urease來分解 3、生化反应、生化反应表3 沙门氏菌种、亚种、血清型及其主

7、要宿主（Kauffmann-Whiteschemea）沙门氏菌种和亚种Salmonellaspeciesandsubspecies亚种中存在的血清型数目No.ofserotypeswithinsubspecies主要宿主Usualhabitat种亚种肠道沙门氏菌SertericaSubspeciesIsubspeciesenterica肠道亚种1,454温血动物SubspeciesIIsubspeciessalamae萨拉姆亚种489冷血动物和环境bSubspeciesIIIasubspeciesarizonae亚利桑那亚种94SubspeciesIIIbsubspeciesdiarizona

8、e双相亚利桑那亚种324SubspeciesIVSubspecieshoutenae豪顿沙门氏菌70SubspeciesVIsubspeciesindica因迪卡沙门氏菌12邦戈尔沙门氏菌S.bongoriS.bongori(V)20Total2463aTheKauffmann-WhiteschemehasbeendescribedelsewherebIsolatesofallspeciesandsubspecieshaveoccurredinhumans.表4 沙门氏菌种和亚种之间生化特征区别种S.entericaS.bongori亚种Enterica肠炎Salamae萨拉姆 Arizona

9、e亚利桑那Diariaonae双亚利桑那Houtenae豪顿Indica印度反应卫矛醇+-d+ONPG（2h）-+-d+丙二酸-+-明胶酶-+-山梨醇+-+KCN-+-+L(+)-酒石酸盐+-半乳糖醛酸-+-+-谷氨酰转肽酶+(*)+-+-葡糖苷酸酶dd-+-d-粘液酸+-(70%)-+水杨苷-+-乳糖-(75%)+(75%)-d-O1噬菌体裂解+-+-+d根据DNA亲缘关系分类DNA杂交研究证明几乎所有的沙门氏菌的DNA同源性都极为一致，也就是几乎所有的亚属都属于同一个种(有亚属V是个例外)。所以现在分类学上确认的沙门氏菌只有两个种:S.enteritid、和S.bongori目前最新的沙门

10、氏菌抗原表最新抗原表中共收录沙门氏菌2463个血清型。抗原表中将沙门氏菌分为两个种七个亚种:S.enterica(该种又分为6个亚种:S.entericasubsp.enterica，S.entericasubsp.salanuze，S.enterica.subsp.arizonae，S.enterica.subsp.diarizonaze，S.entericesubsp.houtenae，S.entericasubsp.indicaS.bongori二、基因组研究进展二、基因组研究进展2001年十月的自然杂志发表了肠道沙门氏菌两种变体的完整基因组序列。ServovarTyphi(或S.typ

11、hi)是伤寒的致病原因，serovarTyphimuriumLT2(S.typhimurium)可让人患肠胃炎。将这两个序列彼此比较、并与埃希氏杆菌(E.coli)的基因组序列进行比较，让研究人员了解到了涉及多药物抗性的质粒和与鼠疫病原体耶尔森氏鼠疫杆菌的质粒具有很大程度的相似性的一种致病质粒的详细情况.WebLinkStrainsSequencedMicrobialGenomesatNCBISalmonellaentericasv.TyphimuriumLT2;Salmonella enterica sv.TyphiCT18BacterialGenomesatGenomeSequencing

12、Center,WashingtonUniversitySalmonellaentericasv.TyphimuriumLT2;Salmonellaentericasv.ParatyphiA;KlebsiellapneumoniaeMGH78578SangerCentre,UKSalmonellaentericasv.TyphiCT18UniversityofIllinoisSalmonella enterica sv.Pullorum;Salmonella enterica sv.Enteritidis;Salmonellaentericasv.DublinFig1Circularrepres

13、entationoftheS.typhigenome.Theouterscaleismarkedinmegabases.Circlesrangefrom1(outercircle)to9(innercircle).Circles1and2,genesonforwardandreversestrand;circles3and4,genesconservedwithE.coli;circles5and6,genesuniquetoS.typhiwithrespecttoE.coli;circle7,pseudogenes;circle8,G+Ccontent;circle9,GCbias(G-C/

14、G+C);khaki（黄褐色）indicatesvalues1;purple1).Allgenesarecolour-codedbyfunction:darkblue,pathogenicity/adaptation;black,energymetabolism;red,informationtransfer;darkgreen,membranes/surfacestructures;cyan（蓝绿色）,degradationofmacromolecules;purple,degradationofsmall molecules;yellow,central/intermediarymetab

15、olism;lightblue,regulators;pink,phage/ISelements;orange,conservedhypothetical;palegreen,unknownfunction;brown,pseudogenes Nature S.typhi(CT18)thatisresistanttomultipledrugsGenome4,809,037-basepair(bp)PseudogenesovertwohundredplasmidpHCM1218,150-bp（multiple-drug-resistance）pHCM2（cryptic）106,516-bp（re

16、centcommonancestrywithavirulenceplasmidofYersinia）三、沙门氏菌的毒力和耐药基因1、沙门氏菌毒力基因spv基因沙门氏菌毒力岛沙门氏菌沙门氏菌spvspv基因基因 沙门氏菌可在宿主的巨噬细胞内存活和繁殖，这一特点对其发生严重全身感染极为关键。在能引起严重感染的非伤寒沙门氏菌中，普遍存在一个大小约50-90kb的质粒，该质粒与沙门氏菌的毒力表型密切相关，因此称其为spv（Salmonella Plasmid Virulence）。在不同血清型沙门氏菌（伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌和鸡沙门氏菌）菌株中，都分离到不同分子量、基因组成不同的

17、大质粒，但它们均含有一段高度保守的约8kb的spv基因，spv基因编码的产物和细菌的毒力表型关系最为密切。Fig2GeneticorganizationofthevirulenceplasmidsofseveralserovarsofSalmonella.ThealignmentofthemapsofS.dublinandS.gallinarumplasmidsistentative31,46.Thepar,spvandtraregionsareshownindetailabovetheS.enteritidisplasmidmap.TheS.enteritidisplasmiddiffers

18、fromtheS.typhimuriumplasmidbyonlytwodeletions,thelocationandestimatedsizesofwhichareindicated(blacktriangles).Inturn,thedeletionsdetectedinthetraregionoftheS.enteritidisplasmidwithrespecttotheFplasmidareshownaswhitetriangles12,44.Restriction-siteabbreviationsareasfollows:H,HindIII;S,SalI;X,XhoI;Xb,X

19、baI1OtherserovarsofSalmonellathatcouldalsobearvirulenceplasmids,asdeducedfromhybridizationexperiments,areS.johannesburg,S.kottbus,S.give,S.newportandS.derby。2S.gallinarumandS.pullorumarebiovarsofthesameserovars.SerovarHostDiseasePlasmid(kb)S.paratyphiCHumansParatyphoid fever54S.enteritidisRodentsMur

20、ine typhoid60S.typhimurium RodentsMurine typhoid90S.dublinCattleSepticemic disease80S.choleraesuisPigsSepticemic disease50S.gallinarum2PoultryFowl typhoid85S.pullorum2PoultryPullorum disease85S.AbortusovisSheepAbortion5067表5Salmonellaserovarscarryingvirulenceplasmids1.11.1、spvspv的结构的结构 （Spv基因由6个开放阅读

21、框（ORF）正性调控基因正性调控基因spvRspvR:编码Lys/metR家族转录活化因子的细菌调节性蛋白，并使spv基因按照spvABCD的方向进行转录4 4个效应基因个效应基因:编码产物 spvA:28.2kDa的蛋白质 spvB:65kDa的单链多肽 spvC:28kDa的蛋白质 spvD:24.8kDa的蛋白质 ORFEORFE:位于5个基因之后但其功能尚未完全清楚的。SpvB氨基端与属于Lys/metR家族的乙酸钙不动杆菌的CatM抑制子、发光 线虫TcaC（一种多组分的杀虫毒素）N端和昆虫沙雷菌的sepB均有同源性。1.21.2、spvspv结构基因的调控结构基因的调控 首先，首先

22、，spvspv基因的表达和调控与细菌的生长阶段有关。基因的表达和调控与细菌的生长阶段有关。SpvA的表达始于对数生长晚期，培养基中的营养物质如葡萄糖、氮、磷的减少可能是spv基因表达重要的刺激因素。另外，铁离子耗竭、培养环境、温度升高及酸性压力也可以在特定条件下诱导spv蛋白的表达。第二个因素是第二个因素是spvRspvR蛋白。蛋白。Spv基因在稳定期由spvR蛋白调控表达，同时RpoS也参与调控，两者均起正性调控作用。由Lys-metR家族转录活化因子调节。spvspv基因的表达还可能受细胞吞噬作用的调控：基因的表达还可能受细胞吞噬作用的调控：当细菌被吞噬后，spv基因被诱导后快速表达，其水

23、平可以与稳定期基因表达水平相当。培养环境中电解质的改变与营养的缺乏可能是刺激基因表达培养环境中电解质的改变与营养的缺乏可能是刺激基因表达的主要机制的主要机制。PhoPPhoP-PhoQPhoQ双因子调控系统双因子调控系统是沙门氏菌基因在巨噬细胞内表达的一种重要的调节因素。此外，还有很多因素也可影响spv的表达，如VacB/C调节系统和选择性sigma因子KatF等其他常见调节系统。3 3、spvspv的功能的功能 增加沙门氏菌在肠外组织细胞内的生长，并与细菌血清抗性、黏附与定居有关。spv基因为细菌在巨噬细胞内存活和生长所必需，spv的毒力表现为细胞毒性，细菌增殖可致巨噬细胞分化和凋亡。沙门氏

24、菌毒力岛沙门氏菌毒力岛沙门氏菌染色体、质粒或噬菌体上成簇分布的编码毒力相关基因的特定区域称为毒力岛（Salmonellapathogenicityisland，SPI）。目前已在沙门氏菌中发现5个毒力岛即SPI1-SPI5。SPI-16340kb,在部分血清型的沙门氏菌中的毒力岛的临界部分发现有IS3,介导沙门氏菌对上皮细胞的侵袭力,编码型分泌系统SPI-2tRNAval编码一个型分泌系统SPI-3 82 selC与巨噬细胞内存活和在镁离子不足的条件下存活有关SPI-4 92在ssb和soxSR之间25kb，编码18个开放阅读框架。与type 1 分泌系统和巨噬细胞内存活有关SPI-5 ser

25、T编码 pipA,pipB,pipC,pipD等基因，不具有与全身感染有关的基因当鼠伤寒沙门氏菌的SPI-1毒力岛发生了突变，经口感染，对小鼠的毒力可降低1550倍。但是如果经过腹腔途径感染，则毒力没有明显降低。这说明，SPI-1毒力岛主要与肠道粘附和侵袭有关。经过腹腔途径感染，使鼠伤寒沙门氏菌逃避了肠道屏障，SPI-1毒力岛的作用就表现不出来。而SPI-2毒力岛则不同。如果SPI-2毒力岛发生了突变，即使经过腹腔途径感染，伤寒沙门氏菌对小鼠的毒力也降低了10,000倍，就不能够引起全身性感染。尽管有一部分毒力基因位于毒力质粒上，但大多数毒力基因由染色体上的毒力岛编码。通过特征标签突变（STM

26、）证明与沙门氏菌侵袭力有关的许多基因集中在染色体63，和62.5，位点之间形成一个基因簇岛，即毒力岛SPI1；与细菌系统致病性有关的毒力基因在沙门氏菌染色体30，和31，位点之间形成一个基因簇岛，即毒力岛SPI2。2毒力岛的作用即SPI1SPI5，大部分位于染色体上，小部分在质粒中;SPI1编码与侵袭力相关的型分泌系统（typesecretionsystem，TTSS）;SPI2编码与系统感染有关的型分泌系统。细菌型分泌系统是由多组分蛋白复合体形成的跨膜通道，它通过分泌毒力蛋白或将这些蛋白注入宿主细胞而发挥致病作用。SPI1与SPI2以外的毒力基因在致病中不起主要作用，但可能与沙门氏菌的宿主特

27、异性和引起不同形式的疾病相关。2.1 SPI1的分子结构SPI1全长约40kb，G+C含量为42%，位于沙门氏菌染色体的上游和下游分别为fhlA和mutS的63，位点处。它至少含29个编码TTSS各组分的基因，包括调节子和效应子。目前，在SPI1中已鉴定出39个基因，但并非所有的基因为TTSS所必须。其中，位于SPI1边缘的4个基因（sitA、B、C、E）与沙门氏菌的侵袭力无关，这个基因族编码一个铁摄入系统。SPI1与志贺氏菌毒力质粒上的spa/mxi/ipa基因结构非常相似。Fig5SalmonellaPathogenicityIslandI(SPI-1).GenemapofSalmonel

28、lainvasiongenelocatedatcentisome63.Arrowsindicatedirectionoftranscription.Genesencodestructuralcomponentsofthesecretionmachinery,effectorproteins,chaperoneproteins,andregulatorsasdescribedinthetext.SPI 1编码的蛋白质具有以下功能：入侵宿主非吞噬细胞；（invA、B-粘附和/或侵袭）离体诱导巨噬细胞凋亡；（sifA整合宿主染色体）SipA和SptP蛋白介导尚不清楚的功能。两个SPI都含有一组相似的

29、编码TTSS的基因。2.2 SPI2的分子结构SPI2全长约40kb，含40多个基因，包括一个二元调节系统和一个TTSS。SPI2分为两部分，第一部分从tRNAvalV到ORF242，全长约25kb；这个区域内包含编码二元系统的基因（ssrA和ssrB）、编码TTSS结构成分的基因（ssa）、编码底物蛋白的基因（sse）和编码它们的特异性伴侣蛋白的基因（ssc）共4种基因，其中ssrA和ssrB是反向转录，而后3种基因是正向转录。第二部分位于ssrB和SPI2边缘之间，全长约15kb；这个区域内含5个ttr基因，包括编码连四硫酸盐还原酶基因（ttrA、B、C）和二元调节系统基因（ttrR、S）

30、通过特征标签突变。SPI1和SPI2编码的TTSS的功能SPI1和SPI2的功能是通过TTSS分泌的底物蛋白实现的。底物蛋白按功能可分为3类：第一类为转运效应分子进入真核靶细胞的蛋白；第二类为效应分子蛋白#第三类为具有调节作用的蛋白。FIG.6.SPI2.ThepositionsandorientationsofinsertionsofmTn5insertions(openarrows)andtheaphTgenecassette(solidarrow)inmutantstrainsusedinthisstudyareshown.ThetranscriptionalorientationofS

31、PI2genesencodingthetypeIIIsecretionsystemapparatus(ssa)andthetwo-componentregulatorysystem(ssr)isindicatedbyarrows.cs,centisomes.（1）粘附因子:也称定殖因子或粘附素，是沙门氏菌的纤毛成分，能与肠上皮细胞表面的甘露糖结合，这是沙门氏菌与肠上皮细胞接触并进入细胞内的一种方式。与沙门氏菌毒力相关的表达产物（2 2）侵袭蛋白）侵袭蛋白:沙门氏菌侵袭宿主细胞时，先由沙门氏菌侵袭宿主细胞时，先由TTSSTTSS分泌的分泌的SspCSspC插入胞浆膜，再由插入胞浆膜，再由SipC

32、SipC和和SipASipA与细胞骨架的与细胞骨架的肌动蛋白结合，使骨架重排，有利于细菌进入肌动蛋白结合，使骨架重排，有利于细菌进入;沙沙门氏菌门氏菌hoPhoP/phoQphoQ系统尚能编码耐受阳离子抗菌肽系统尚能编码耐受阳离子抗菌肽及酸性环境的蛋白，调节酸性磷酸酶合成，使细胞及酸性环境的蛋白，调节酸性磷酸酶合成，使细胞内内pHpH适合细菌生长。适合细菌生长。（3）肠毒素:沙门氏菌肠毒素（S-LT）与霍乱毒素(CT）、大肠杆菌不耐热肠毒素（E-LT）有相似的生物学活性和致病机制，与神经节苷酯结合后便促进前列腺素E2（PGE2）合成，激活腺苷环化酶，使cAMP生成增多，后者刺激小肠上皮细胞分泌

33、Cl-而抑制Na+吸收，从而造成分泌性腹泻。(4)(4)细菌防御机制细菌防御机制:沙门氏菌被巨噬细胞和中性粒细胞吞食后可通过沙门氏菌被巨噬细胞和中性粒细胞吞食后可通过过氧化氢酶和过氧化氢酶和DNADNA修补系统来减轻和修补活性氧造修补系统来减轻和修补活性氧造成的成的DNADNA损伤损伤;鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌katkat E/E/katkat G G基因是编码基因是编码型或型或型过氧化氢酶（型过氧化氢酶（HPHP或或HPHP）的活性部位，故的活性部位，故katkat E/E/katkat G G基因突变株对基因突变株对H 2 O 2 H 2 O 2 较为敏感较为敏感;若若katkat F

34、 F调调节基因表达障碍，则其毒力大减。节基因表达障碍，则其毒力大减。(5）诱导巨噬细胞凋亡:侵袭性沙门氏菌侵入巨噬细胞后可通过Sips激活半胱氨酸一天冬酶-1（caspaes-1）引起迟发性细胞毒性，此过程依赖SPI2-TTSS和SpvB的ADP核糖基化活性;各型沙门氏菌所引起的疾病类型可能与其在巨噬细胞中存活时间以及其引起巨噬细胞损伤情况有关，其存活愈长，巨噬细胞损伤愈重，愈容易引起扩散。非侵袭性沙门氏菌一般不诱导巨噬细胞凋亡。沙门氏菌抗生素耐药性的产生机制有多种：第一，原有劣势耐药菌株菌种过度生长；第二，在抗生素选择压力下，发生突变，使细菌具有耐药性；第三，细菌之间发生耐药基因的横向基因转

35、移；1、整合子（可传播整合子（可传播60多种耐药基因。）多种耐药基因。）2、插入序列（、插入序列（IS）3、转座子（转座子（Transporon）4、质粒质粒第四，共同选择，即一种抗生素的使用选择产生了对另一种抗生素的耐药性。3 3 诱生细胞因子诱生细胞因子 沙门氏菌不仅能分泌肠毒素和细胞毒素，还能通沙门氏菌不仅能分泌肠毒素和细胞毒素，还能通过其释放的内毒素刺激免疫活性细胞产生炎症性细过其释放的内毒素刺激免疫活性细胞产生炎症性细胞因子，如白细胞介素胞因子，如白细胞介素-1-1（IL-1IL-1）、）、IL-6IL-6、IL-8IL-8、肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子（TNF-TNF-）、）、IL-1

36、8IL-18等等 16161818 ，引起全身炎症反应综合征（引起全身炎症反应综合征（SIRSSIRS）。）。沙门氏菌感染的诊断沙门氏菌感染的诊断（1）核酸杂交试验:用分子生物学技术克隆出特异性DNA分子，经酶切回收，制成核酸探针，用以检测标本中沙门氏菌特有的DNA片段。（2）基因扩增试验:用PCR法扩增沙门氏菌染色体鞭毛素基因，其敏感性和特异性均较高，5h可出结果，比核酸分子杂交法更加快速简便。也有人以沙门氏菌保守序列侵袭基因A（invA）作为靶序列，进行基因扩增，亦同样快速简便。（3）噬菌体分属试验:即利用0-1噬菌体对培养的细菌进行裂解试验，6h可判定可结，比常规法提前13天。（4）质粒

37、分析、核酸序列分析、细菌外膜蛋白电泳等均用于鉴定流行菌株。运送载体核酸疫苗的运送载体核酸疫苗的减毒鼠伤寒沙门氏菌沙门氏菌研究进展减毒鼠伤寒沙门氏菌沙门氏菌研究进展沙门氏菌的减毒目前，已报道的能使沙门氏菌通过基因工程减毒突变的基因有：galE，aro，pur，cya和crp，phoP和phoQ，ompA，dam，poxA，surA，waap，asd，htrA。其功能分别为合成脂多糖，影响碳水化合物的利用；控制芳香族化合物的合成；控制嘌呤的生物合成；调节环腺苷酸的代谢；合成酸性磷酸酶；调节膜孔蛋白的表达；合成DNA腺苷酸甲基化酶；编码丙酮酸氧化酶；编码肽酰脯氨酸顺反异构酶；参与多阳离子抗生素抗性有

38、关的LPS核心区第一个庚糖的磷酸化，参与形成稳定的外膜与粗造型菌落的形成；编码天冬酰氨脱氢酶；编码热激蛋白。沙门氏菌作为核酸载体疫苗的优点和潜在的威胁沙门氏菌作为核酸载体疫苗的优点和潜在的威胁可以将携带的核酸疫苗运呈到宿主的淋巴细胞，在淋巴细胞的可以将携带的核酸疫苗运呈到宿主的淋巴细胞，在淋巴细胞的真核环境中表达外原基因而激发宿主产生针对外原基因的体液真核环境中表达外原基因而激发宿主产生针对外原基因的体液免疫应答和细胞免疫应答。同时，沙门氏菌的脂多糖免疫应答和细胞免疫应答。同时，沙门氏菌的脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）起到很好的免疫佐剂作用，而且，起到很好的免疫佐剂作用

39、，而且，一处黏膜免疫可以激活其他组织黏膜的持续免疫，减少了常规一处黏膜免疫可以激活其他组织黏膜的持续免疫，减少了常规免疫的反复注射等。免疫的反复注射等。潜在的威胁：潜在的威胁：质粒质粒DNA进入宿主细胞后，尤其是进入分化活跃进入宿主细胞后，尤其是进入分化活跃的淋巴细胞，很有可能的淋巴细胞，很有可能整合到宿主的基因组整合到宿主的基因组中去，从而使原癌中去，从而使原癌基因和抑癌基因的表达失控而导致体细胞癌变，另外，减毒的基因和抑癌基因的表达失控而导致体细胞癌变，另外，减毒的沙门氏菌很有可能出现沙门氏菌很有可能出现毒力返强毒力返强的危险性。的危险性。2、沙门氏菌耐药机理、沙门氏菌耐药机理（一（一）作用靶位的改变1、DNA促旋酶的变异 2、拓扑异构酶IV的变异（二）主动排出系统（二）主动排出系统（efflux systemefflux system）（三）细胞膜通透性的变化三）细胞膜通透性的变化（1）膜孔蛋白缺失；（2）多向性突变；（3）特异性通道的突变；（4）脂质双层改变。