细菌耐药机理及检测方法(精品).ppt

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1、细菌的耐药机理及检测方法细菌的耐药机理及检测方法西京医院检验科西京医院检验科徐徐 修修 礼礼n n随随随随着着着着抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的广广广广泛泛泛泛大大大大量量量量的的的的滥滥滥滥用用用用、介介介介入入入入性性性性治治治治疗疗疗疗、免免免免疫疫疫疫抑抑抑抑制制制制剂剂剂剂应应应应用用用用及及及及某某某某些些些些基基基基础础础础疾疾疾疾病病病病的的的的发发发发生生生生。细细细细菌菌菌菌性性性性感感感感染染染染已已已已是是是是临临临临床床床床重重重重要要要要的的的的常常常常见见见见病病病病，且且且且耐耐耐耐药药药药性性性性和和和和耐耐耐耐药药药药水水水水平平平平越越越越来来来来越越越

2、越高高高高，给给给给疾疾疾疾病病病病的的的的治治治治疗疗疗疗及及及及临临临临床床床床用用用用药药药药造造造造成成成成诸诸诸诸多多多多困困困困难难难难。病病病病原原原原菌菌菌菌对对对对常常常常用用用用抗抗抗抗生生生生素素素素，如如如如-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺类类类类、氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类和和和和喹喹喹喹诺诺诺诺酮酮酮酮类类类类药药药药物物物物的的的的耐耐耐耐药药药药性性性性尤尤尤尤为为为为突突突突出出出出，及及及及时时时时了了了了解解解解细细细细菌菌菌菌的的的的耐耐耐耐药药药药机机机机制制制制和和和和抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的发发发发展展展展及及及及应应应应用用用用对

3、对对对策策策策，对对对对我我我我们们们们预预预预防防防防和和和和治治治治疗疗疗疗细细细细菌菌菌菌性性性性感感感感染染染染、制制制制备备备备新新新新的的的的抗抗抗抗菌菌菌菌药药药药物及控制耐药性的蔓延是非常重要的。物及控制耐药性的蔓延是非常重要的。物及控制耐药性的蔓延是非常重要的。物及控制耐药性的蔓延是非常重要的。n n药药药药物物物物作作作作用用用用机机机机制制制制落落落落后后后后于于于于细细细细菌菌菌菌对对对对抗抗抗抗生生生生素素素素耐耐耐耐药药药药性性性性传传传传播播播播的的的的发发发发展展展展，药药药药物物物物作作作作用用用用机机机机理理理理主主主主要要要要是是是是通通通通过过过过干干干

4、干扰扰扰扰细细细细菌菌菌菌核核核核酸酸酸酸的的的的合合合合成成成成、抑抑抑抑制制制制核核核核糖糖糖糖体体体体的的的的功功功功能能能能、抑抑抑抑制制制制胞胞胞胞壁壁壁壁的的的的合合合合成成成成及及及及叶叶叶叶酸酸酸酸盐盐盐盐的的的的代代代代谢谢谢谢等等等等。细细细细菌菌菌菌对对对对抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的耐耐耐耐药药药药机机机机制制制制包包包包括括括括遗遗遗遗传传传传和和和和生生生生化化化化两两两两种种种种方方方方式式式式：遗遗遗遗传传传传方方方方式式式式包包包包括括括括固固固固有有有有耐耐耐耐药药药药（天天天天然然然然性性性性）和和和和染染染染色色色色体体体体突突突突变变变变产产产产生

5、生生生的的的的耐耐耐耐药药药药或或或或获获获获得得得得新新新新的的的的DNADNA分分分分子子子子；生生生生化化化化方方方方式式式式是是是是指指指指细细细细菌菌菌菌获获获获得得得得性性性性耐耐耐耐药药药药或或或或质质质质粒粒粒粒介介介介导导导导的的的的耐耐耐耐药药药药，主主主主要要要要包包包包括括括括：产产产产生生生生B-B-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶、乙乙乙乙酰酰酰酰基基基基转转转转移移移移酶酶酶酶、腺腺腺腺甘甘甘甘酸酸酸酸酶酶酶酶、磷磷磷磷酸酸酸酸化化化化酶酶酶酶、拓拓拓拓扑扑扑扑异异异异构构构构酶酶酶酶等等等等对对对对药药药药物物物物的的的的灭灭灭灭活活活活作作作作用用用用；依依依

6、依靠靠靠靠菌菌菌菌膜膜膜膜的的的的特特特特性性性性降降降降低低低低药药药药物物物物的的的的通通通通透透透透性性性性；改改改改变变变变抗抗抗抗生生生生素素素素作作作作用用用用的的的的靶靶靶靶位位位位，缩缩缩缩短短短短与与与与药药药药物物物物结结结结合合合合的的的的时时时时间间间间；产产产产生生生生药药药药物物物物代代代代谢谢谢谢的的的的旁旁旁旁路路路路；大大大大量量量量产产产产生生生生青青青青霉霉霉霉素素素素结结结结合合合合蛋蛋蛋蛋白白白白（PBPSPBPS），降降降降低低低低抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的新新新新生生生生力力力力；发展产生耐受；产生抗生素导出泵。发展产生耐受；产生抗生素导出泵

7、。发展产生耐受；产生抗生素导出泵。发展产生耐受；产生抗生素导出泵。遗传方式遗传方式n n固固固固有有有有耐耐耐耐药药药药 固固固固有有有有耐耐耐耐药药药药具具具具有有有有种种种种属属属属特特特特异异异异性性性性，来来来来源源源源于于于于该该该该细细细细菌菌菌菌固固固固有有有有的的的的自自自自然然然然特特特特性性性性，即即即即本本本本身身身身具具具具有有有有耐耐耐耐药药药药基基基基因因因因存存存存在在在在染染染染色色色色体体体体上上上上，非非非非发发发发酵酵酵酵的的的的G-G-杆杆杆杆菌菌菌菌如如如如绿绿绿绿脓脓脓脓秆秆秆秆菌菌菌菌、醋醋醋醋酸酸酸酸钙钙钙钙不不不不动动动动杆杆杆杆菌菌菌菌、假假

8、假假单单单单胞胞胞胞菌菌菌菌属属属属及及及及大大大大多多多多数数数数G-G-杆杆杆杆菌菌菌菌耐耐耐耐万万万万古古古古霉霉霉霉素素素素和和和和甲甲甲甲氧氧氧氧西西西西林林林林，肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌耐耐耐耐头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素，厌厌厌厌氧氧氧氧菌菌菌菌耐耐耐耐氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类药药药药物物物物等等等等，这这这这些些些些菌菌菌菌的的的的高高高高度度度度固固固固有有有有耐耐耐耐药药药药性性性性是是是是由由由由于于于于菌菌菌菌体体体体外外外外膜膜膜膜的的的的通通通通透透透透性性性性低低低低与与与与继继继继发发发发的的的的双双双双重重重重耐耐耐耐药药药药机机机机理理理

9、理（诱诱诱诱导产生头孢菌素酶和抗生素导出泵）导致的。导产生头孢菌素酶和抗生素导出泵）导致的。导产生头孢菌素酶和抗生素导出泵）导致的。导产生头孢菌素酶和抗生素导出泵）导致的。n n染染染染色色色色体体体体突突突突变变变变或或或或获获获获得得得得新新新新的的的的DNADNA分分分分子子子子 突突突突变变变变可可可可发发发发生生生生于于于于DNADNA分分分分子子子子，如如如如结结结结核核核核杆杆杆杆菌菌菌菌的的的的点点点点突突突突变变变变可可可可导导导导致致致致对对对对利利利利福福福福平平平平的的的的耐耐耐耐药药药药，淋淋淋淋球球球球菌菌菌菌的的的的点点点点突突突突变变变变可可可可导导导导致致致致

10、对对对对苯苯苯苯唑唑唑唑西西西西林林林林的的的的耐耐耐耐药药药药；也也也也可可可可发发发发生生生生于于于于质质质质粒粒粒粒和和和和转转转转座座座座子子子子的的的的基基基基因因因因上上上上，如如如如质质质质粒粒粒粒编编编编码码码码产产产产生生生生的的的的超超超超广广广广谱谱谱谱B-B-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶（ESBLESBL）可可可可能能能能由由由由于于于于TEMTEM和和和和SHVSHV酶酶酶酶基基基基因因因因的的的的点点点点突突突突变变变变导导导导致致致致的的的的，这这这这些些些些点点点点突突突突变变变变集集集集中中中中于于于于基基基基因因因因的的的的5 5个个个个区区区区域域域域

11、内内内内，残残残残基基基基的的的的突突突突变变变变能能能能改改改改变变变变B-B-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶与与与与头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素的的的的结结结结合合合合形形形形成成成成，消消消消除除除除阻阻阻阻遏遏遏遏作作作作用用用用，导导导导致致致致抑抑抑抑制制制制和和和和水水水水解解解解三三三三代代代代头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素，如如如如果果果果酶酶酶酶基基基基因因因因的的的的连连连连续续续续突突突突变变变变可可可可从从从从本本本本质质质质上上上上增增增增强强强强酶酶酶酶的的的的活活活活力力力力，使使使使新新新新一一一一代代代代头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素灭灭灭灭活活活

12、活；某某某某些些些些DNADNA调调调调节节节节区区区区基基基基因因因因的的的的突突突突变变变变可可可可产产产产生生生生头头头头孢菌素酶导致对第三代头孢菌素耐药。孢菌素酶导致对第三代头孢菌素耐药。孢菌素酶导致对第三代头孢菌素耐药。孢菌素酶导致对第三代头孢菌素耐药。n n耐耐耐耐药药药药性性性性可可可可通通通通过过过过接接接接合合合合、转转转转导导导导和和和和转转转转化化化化在在在在微微微微生生生生物物物物间间间间传传传传递递递递，外外外外源源源源性性性性相相相相关关关关的的的的DNADNA小小小小片片片片段段段段组组组组合合合合为为为为内内内内源源源源性性性性基基基基因因因因几几几几乎乎乎乎都

13、都都都通通通通过过过过自自自自然然然然转转转转化化化化和和和和重重重重组组组组形形形形成成成成，质质质质粒粒粒粒接接接接合合合合传传传传播播播播的的的的方方方方式式式式最最最最普普普普遍遍遍遍，但但但但宿宿宿宿主主主主范范范范围围围围局局局局限限限限，尚尚尚尚未未未未发发发发生生生生可可可可在在在在G+G+和和和和G-G-菌菌菌菌中中中中都都都都能能能能复复复复制制制制的的的的质质质质粒粒粒粒，而而而而转转转转座座座座子子子子的的的的宿宿宿宿主主主主范范范范围围围围较较较较广广广广，可可可可在在在在G+G+和和和和G-G-菌菌菌菌间间间间转转转转移移移移，如如如如染染染染色色色色体体体体内内内

14、内的的的的AmpCAmpC基基基基因因因因可可可可通通通通过过过过转转转转座座座座子子子子越越越越位位位位至至至至质质质质粒粒粒粒中中中中，使使使使某某某某些些些些细细细细菌菌菌菌获获获获得得得得诱诱诱诱导导导导产产产产生生生生能能能能力力力力极极极极强强强强的的的的I I型型型型酶酶酶酶，称称称称之之之之为为为为AmpCAmpC型型型型ESBLSESBLS株株株株（如如如如肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌、克克克克雷雷雷雷伯伯伯伯氏氏氏氏菌菌菌菌、某某某某些些些些肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌科的细菌），是耐药性传播的重要原因之一。科的细菌），是耐药性传播的重要原因之一。科的细菌），是耐药性传播的重要原因

15、之一。科的细菌），是耐药性传播的重要原因之一。生化方式生化方式细菌获得性耐药的生化机理主要有以下几种。细菌获得性耐药的生化机理主要有以下几种。细菌获得性耐药的生化机理主要有以下几种。细菌获得性耐药的生化机理主要有以下几种。1.1.酶酶酶酶的的的的灭灭灭灭活活活活作作作作用用用用 通通通通过过过过水水水水解解解解或或或或修修修修饰饰饰饰作作作作用用用用破破破破坏坏坏坏抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的活性。活性。活性。活性。（1 1）-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶 质质质质粒粒粒粒介介介介导导导导或或或或染染染染色色色色体体体体突突突突变变变变使使使使细细细细菌菌菌菌产产产产生生生生-内内内内

16、酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶，可可可可水水水水解解解解破破破破坏坏坏坏-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶，使使使使B-B-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺类类类类抗抗抗抗生生生生素素素素失失失失活活活活，这这这这是是是是大大大大多多多多数数数数致致致致病病病病菌菌菌菌对对对对此此此此类类类类抗抗抗抗生生生生素素素素产产产产生生生生耐耐耐耐药药药药性性性性的的的的主主主主要要要要机机机机制制制制。目目目目前前前前B-B-内内内内酶酶酶酶胺胺胺胺酶酶酶酶已已已已有有有有230230余余余余种种种种，包包包包括括括括TEMTEM系系系系列列列列酶酶酶酶、SHVSHV系系系系列列列列酶酶酶酶、OXAOXA系系系系

17、列列列列酶酶酶酶、PSEPSE系系系系列列列列酶酶酶酶、头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素酶酶酶酶等等等等，质质质质粒粒粒粒介介介介导导导导的的的的酶酶酶酶在在在在G-G-菌菌菌菌中中中中分分分分布布布布较较较较广广广广，以以以以TEM-1TEM-1最最最最普普普普遍遍遍遍，其次为其次为其次为其次为OXA-1OXA-1。根根根根据据据据分分分分子子子子量量量量、等等等等电电电电点点点点、被被被被抑抑抑抑制制制制谱谱谱谱、对对对对底底底底物物物物的的的的水水水水解解解解谱谱谱谱等等等等将将将将B-B-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶又又又又分分分分为为为为4 4类类类类，类类类类酶酶酶酶由由由由染

18、染染染色色色色体体体体的的的的AmpCAmpC基基基基因因因因诱诱诱诱导导导导产产产产生生生生，多多多多种种种种需需需需氧氧氧氧G-G-杆杆杆杆菌菌菌菌（如如如如大大大大肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌、弗弗弗弗氏氏氏氏枸枸枸枸橼橼橼橼酸酸酸酸杆杆杆杆菌菌菌菌、阴阴阴阴沟沟沟沟杆杆杆杆菌菌菌菌等等等等）可可可可产产产产生生生生此此此此酶酶酶酶；类类类类酶酶酶酶临临临临床床床床上上上上最最最最为为为为重重重重要要要要，分分分分5 5个个个个亚亚亚亚类类类类（2a2a、2b-2b2b-2b、2c2c、2d2d、2e2e），大大大大多多多多数数数数G+G+菌菌菌菌产产产产生生生生的的的的酶酶酶酶（如如如如

19、pc1pc1）属属属属 于于于于 2a2a亚亚亚亚 类类类类，2b2b亚亚亚亚 类类类类（如如如如 SHV-1SHV-1、TEM-1TEM-1），2b2b亚亚亚亚类类类类（如如如如TEM-3TEM-3、SHV-2SHV-2），2c2c亚亚亚亚类类类类（如如如如 PSE-1PSE-1，PSE-4PSE-4）,2d,2d亚亚亚亚 类类类类（如如如如 OXA-1OXA-1和和和和PSE-2PSE-2），2e2e亚亚亚亚类类类类（如如如如FEC-1FEC-1）少少少少见见见见，由由由由大大大大部部部部分分分分G-G-菌菌菌菌产产产产生生生生。随随随随着着着着新新新新的的的的-内内内内酶酶酶酶胺胺胺胺类

20、类类类抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的临临临临床床床床应应应应用用用用，由大部分由大部分由大部分由大部分G-G-菌产生。菌产生。菌产生。菌产生。随随随随着着着着新新新新的的的的-内内内内酶酶酶酶胺胺胺胺类类类类抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的临临临临床床床床应应应应用用用用，新新新新的的的的酶酶酶酶类类类类不不不不断断断断产产产产生生生生，近近近近年年年年报报报报道道道道的的的的ESBLESBL可可可可能能能能来来来来源源源源于于于于TEMTEM和和和和SHVSHV酶酶酶酶，由由由由于于于于其其其其有有有有有有有有序序序序列列列列的的的的基基基基因因因因点点点点突突突突变变变变导导导导致致致致

21、的的的的，该该该该酶酶酶酶最最最最早早早早发发发发现现现现于于于于肺肺肺肺炎炎炎炎克克克克雷雷雷雷伯伯伯伯氏氏氏氏菌菌菌菌中中中中，仅仅仅仅局局局局限限限限于于于于少少少少数数数数肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌和和和和肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌中中中中，可可可可水水水水解解解解头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素及及及及单单单单酰酰酰酰胺胺胺胺类类类类抗抗抗抗生生生生素素素素，特特特特别别别别表表表表现现现现为为为为相相相相应应应应的的的的产产产产酶酶酶酶菌菌菌菌对对对对头头头头孢孢孢孢噻噻噻噻肟肟肟肟、头头头头孢孢孢孢他他他他啶啶啶啶和和和和氨氨氨氨曲曲曲曲南南南南的的的的耐耐耐耐药药药药，并并并并可可

22、可可引引引引起起起起对对对对其其其其氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙类抗生素的耐药。甙类抗生素的耐药。甙类抗生素的耐药。甙类抗生素的耐药。新新新新近近近近研研研研究究究究发发发发现现现现，过过过过量量量量产产产产TEMTEM和和和和SHVSHV型型型型酶酶酶酶的的的的的的的的细细细细菌菌菌菌具具具具有有有有含含含含锌锌锌锌的的的的-内内内内酶酶酶酶胺胺胺胺金金金金属属属属酶酶酶酶，此此此此酶酶酶酶的的的的催催催催化化化化效效效效率率率率极极极极高高高高，不不不不仅仅仅仅存存存存在在在在于于于于窄窄窄窄食食食食假假假假单单单单胞胞胞胞菌菌菌菌中中中中，也也也也偶偶偶偶见见见见于于于于其其其其它它它它细

23、细细细菌菌菌菌，此此此此酶酶酶酶对对对对碳碳碳碳青青青青霉霉霉霉烯烯烯烯类类类类抗抗抗抗生生生生素素素素也也也也有有有有耐耐耐耐药药药药性性性性，且且且且不不不不易易易易受受受受酶酶酶酶抑抑抑抑制制制制剂剂剂剂的的的的影影影影响响响响。内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶阳阳阳阳性性性性的的的的嗜嗜嗜嗜血血血血杆杆杆杆菌菌菌菌属属属属、淋淋淋淋球球球球菌菌菌菌和和和和卡卡卡卡他他他他莫莫莫莫拉拉拉拉菌菌菌菌对对对对青青青青霉霉霉霉素素素素、氨氨氨氨苄苄苄苄西西西西林林林林和和和和阿阿阿阿莫莫莫莫西西西西林林林林耐耐耐耐药药药药；-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶阳阳阳阳性性性性的的的的葡葡葡葡萄萄

24、萄萄球球球球菌菌菌菌和和和和肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌对对对对青青青青霉霉霉霉素素素素和和和和乙乙乙乙酰酰酰酰氨氨氨氨基基基基青青青青霉霉霉霉素素素素、羧羧羧羧基基基基青青青青霉霉霉霉素素素素和和和和脲脲脲脲基基基基青青青青霉霉霉霉素素素素耐耐耐耐药药药药。注注注注：只只只只对对对对嗜嗜嗜嗜血血血血杆杆杆杆菌菌菌菌属属属属，淋淋淋淋球球球球菌菌菌菌，卡卡卡卡那那那那莫莫莫莫拉拉拉拉菌菌菌菌、葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌和和和和肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌测测测测定定定定-内内内内酶酶酶酶胺胺胺胺酶酶酶酶，不不不不要要要要对对对对肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌科科科科，假假假假单单单单胞胞胞胞菌菌菌菌属

25、属属属及及及及其其其其他他他他需需需需氧氧氧氧G-G-杆菌进行此试验。杆菌进行此试验。杆菌进行此试验。杆菌进行此试验。（2 2）ESBLsESBLs 19831983年年年年由由由由khothekhothe在在在在德德德德国国国国发发发发现现现现，19851985年年年年正正正正式式式式报报报报道道道道，该该该该酶酶酶酶为为为为丝丝丝丝氨氨氨氨酸酸酸酸蛋蛋蛋蛋白白白白酶酶酶酶的的的的衍衍衍衍生生生生物物物物，它它它它是是是是由由由由于于于于-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶上上上上1 14 4位位位位点点点点氨氨氨氨基基基基酸酸酸酸发发发发生生生生了了了了突突突突变变变变，并并并并可可可可以以

26、以以通通通通过过过过质质质质粒粒粒粒传传传传播播播播，由由由由质质质质粒粒粒粒介介介介导导导导的的的的耐耐耐耐药药药药比比比比由由由由染染染染色色色色体体体体介介介介导导导导的的的的耐耐耐耐药药药药多多多多，它它它它可可可可在在在在不不不不同同同同菌菌菌菌株株株株、菌菌菌菌种种种种或或或或菌菌菌菌属属属属间间间间转转转转移移移移扩扩扩扩散散散散。突突突突变变变变产产产产生生生生的的的的ESBLsESBLs抗抗抗抗药药药药性性性性广广广广，且且且且在在在在ESBLSESBLS的的的的质质质质粒粒粒粒上上上上常常常常携携携携带带带带对对对对其其其其它它它它抗抗抗抗生生生生素素素素如如如如氨氨氨氨基

27、基基基糖糖糖糖苷类及氟喹诺酮类的耐药基因，呈多重耐药性。苷类及氟喹诺酮类的耐药基因，呈多重耐药性。苷类及氟喹诺酮类的耐药基因，呈多重耐药性。苷类及氟喹诺酮类的耐药基因，呈多重耐药性。ESBLSESBLS的的的的分分分分类类类类：根根根根据据据据酶酶酶酶的的的的来来来来源源源源可可可可分分分分为为为为TEMTEM系系系系列列列列：为为为为TEM1TEM1、TEM2TEM2的的的的突突突突变变变变酶酶酶酶，此此此此系系系系列列列列酶酶酶酶等等等等电电电电点点点点一一一一般般般般介介介介于于于于5.16.55.16.5，绝绝绝绝大大大大多多多多数数数数酶酶酶酶分分分分子子子子量量量量（MWMW）为为

28、为为29KD29KD，从从从从TEM3TEM3起起起起已已已已发发发发现现现现有有有有TEM-70TEM-70，而而而而且且且且还还还还在在在在增增增增加加加加；SHVSHV系系系系列列列列：此此此此系系系系列列列列酶酶酶酶的的的的等等等等电电电电点点点点较较较较高高高高，介介介介于于于于7.08.27.08.2，分分分分子子子子量量量量主主主主要要要要为为为为29KD29KD，从从从从SHV-2SHV-2起起起起，现现现现已已已已发发发发现现现现SHV-12SHV-12；非非非非TEMTEM和和和和SHVSHV系系系系列列列列。如如如如确确确确认认认认为为为为ESBLsESBLs菌菌菌菌株株

29、株株，不不不不管管管管体体体体外外外外药药药药敏敏敏敏试试试试验验验验的的的的结结结结果果果果如如如如何何何何，对对对对所所所所有有有有青青青青霉霉霉霉素素素素类类类类、头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素类类类类和和和和氨氨氨氨曲曲曲曲南南南南均均均均应应应应报报报报告告告告耐耐耐耐药药药药。此此此此酶酶酶酶对对对对酶酶酶酶的的的的抑抑抑抑制制制制剂剂剂剂如如如如克克克克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦抑制。拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦抑制。拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦抑制。拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦抑制。（3 3）AmpCAmpC酶酶酶酶：19761976年年年年开开开开始始始始研研研研究究究究，但但但但直直直

30、直到到到到19901990年年年年由由由由PaPaniPaPani ColaollColaoll等等等等才才才才首首首首先先先先证证证证实实实实了了了了此此此此酶酶酶酶的的的的存存存存在在在在。由由由由染染染染色色色色体体体体介介介介导导导导的的的的AmpCAmpC酶酶酶酶已已已已发发发发现现现现5050多多多多种种种种，基基基基因因因因带带带带有有有有调调调调控控控控序序序序列列列列，呈呈呈呈诱诱诱诱导导导导型型型型表表表表达达达达，酶酶酶酶的的的的活活活活性性性性不不不不被被被被克克克克拉拉拉拉维维维维酸酸酸酸、EDTAEDTA抑抑抑抑制制制制，可可可可被被被被邻邻邻邻氯氯氯氯西西西西林林

31、林林、头头头头孢孢孢孢西西西西丁丁丁丁、BRL-42715BRL-42715、RO47RO47、RO48RO48等等等等抑抑抑抑制制制制剂剂剂剂抑抑抑抑制制制制。携携携携带带带带染染染染色色色色体体体体型型型型AmPCAmPC基基基基因因因因的的的的细细细细菌菌菌菌主主主主要要要要有有有有肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌科科科科、不不不不动动动动杆杆杆杆菌菌菌菌属属属属、绿绿绿绿脓脓脓脓杆杆杆杆菌菌菌菌等等等等，根根根根据据据据产产产产酶酶酶酶水水水水平平平平的的的的高高高高低低低低和和和和表表表表达达达达方方方方式式式式可可可可分分分分为为为为：野野野野生生生生型型型型，通通通通常常常常所所所所定定

32、定定义义义义的的的的AmpCAmpC酶酶酶酶属属属属于于于于此此此此型型型型；基基基基础础础础型型型型、低低低低水水水水平平平平非非非非诱诱诱诱导导导导型型型型表表表表达达达达，临临临临床床床床定定定定义义义义不不不不大大大大，如如如如E.ColiE.Coli的的的的染染染染色色色色体体体体型型型型AmpCAmpC酶酶酶酶；高高高高诱诱诱诱导导导导型型型型，诱诱诱诱导导导导后后后后的的的的产产产产酶酶酶酶水水水水平平平平远远远远高高高高于于于于野野野野生生生生型型型型；去去去去阻阻阻阻遏遏遏遏突突突突变变变变型型型型，持持持持续续续续或或或或半半半半持持持持续续续续高高高高水水水水平产酶。平产

33、酶。平产酶。平产酶。由由由由质质质质粒粒粒粒介介介介导导导导的的的的酶酶酶酶可可可可分分分分5 56 6组组组组：弗弗弗弗氏氏氏氏枸枸枸枸橼橼橼橼酸酸酸酸杆杆杆杆菌菌菌菌组组组组有有有有LATLAT型型型型和和和和某某某某些些些些CMYCMY型型型型，肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌属属属属有有有有MIR-1MIR-1型型型型和和和和ACT-ACT-1 1型型型型，摩摩摩摩根根根根摩摩摩摩根根根根组组组组有有有有DHA-1DHA-1型型型型和和和和DHA-2DHA-2型型型型，气气气气单单单单胞胞胞胞菌菌菌菌组组组组有有有有MOXMOX型型型型、FOXFOX型型型型和和和和其其其其他他他他CMYCMY

34、型型型型等等等等。质质质质粒粒粒粒上上上上的的的的AmpCAmpC酶酶酶酶基基基基因因因因大大大大小小小小从从从从7 7180kb180kb。酶酶酶酶分分分分子子子子大大大大小小小小约约约约383842KD42KD，具具具具有有有有378378386386个个个个氨氨氨氨基基基基酸酸酸酸。高高高高产产产产AmpCAmpC酶酶酶酶细细细细菌菌菌菌通通通通常常常常对对对对第第第第四四四四代代代代头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌（如如如如头头头头孢孢孢孢吡吡吡吡肟肟肟肟）敏敏敏敏感感感感，对对对对碳碳碳碳青青青青霉霉霉霉烯烯烯烯类类类类敏敏敏敏感感感感，对对对对头头头头霉霉霉霉素素素素类类类类（如如如如头头

35、头头孢孢孢孢西西西西汀汀汀汀）耐耐耐耐药药药药，不不不不被被被被酶酶酶酶抑抑抑抑制制制制剂剂剂剂所所所所抑抑抑抑制制制制。如如如如果果果果分分分分离离离离的的的的菌菌菌菌株株株株对对对对三三三三代代代代头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素耐耐耐耐药药药药，且且且且不不不不能能能能被被被被克克克克拉拉拉拉维维维维酸酸酸酸抑抑抑抑制制制制、对对对对泰泰泰泰能能能能敏敏敏敏感感感感、对对对对头孢西汀耐药可初步推断为高产头孢西汀耐药可初步推断为高产头孢西汀耐药可初步推断为高产头孢西汀耐药可初步推断为高产AmpCAmpC酶的细菌。酶的细菌。酶的细菌。酶的细菌。（4 4）氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类

36、类灭灭灭灭活活活活酶酶酶酶 双双双双功功功功能能能能的的的的氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类灭灭灭灭活活活活酶酶酶酶（6-N-6-N-氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类乙乙乙乙酰酰酰酰转转转转移移移移酶酶酶酶，2-O-2-O-氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类磷磷磷磷酶酶酶酶转转转转移移移移酶酶酶酶）是是是是葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌和和和和肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌高高高高水水水水平平平平耐耐耐耐氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类药药药药物物物物的的的的重重重重要要要要机机机机制制制制。此此此此酶酶酶酶在在在在分分分分子子子子不不不不同同同同的的的的区区区区域域

37、域域内内内内存存存存在在在在两两两两种种种种不不不不同同同同的的的的氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙改改改改造造造造因因因因子子子子，是是是是由由由由Th4100Th4100转转转转座座座座子子子子内内内内6-aac-a-26-aac-a-2基基基基因因因因编编编编码码码码合合合合成成成成，该该该该基基基基因因因因可可可可插插插插入入入入R R质质质质粒粒粒粒及及及及氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类抗抗抗抗生生生生素素素素染染染染色色色色体体体体基基基基因因因因中中中中，导导导导致致致致在在在在G+G+菌菌菌菌中中中中氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类抗抗抗抗性性性性的的的的快快

38、快快速速速速传传传传播播播播。这这这这种种种种双双双双功功功功能能能能酶酶酶酶与与与与其其其其它它它它抗抗抗抗生生生生素素素素抗抗抗抗性性性性因因因因子子子子无无无无任任任任何何何何基基基基因因因因关关关关联联联联，真真真真核核核核蛋蛋蛋蛋白白白白激激激激酶酶酶酶抑抑抑抑制制制制剂剂剂剂能能能能抑抑抑抑制制制制磷磷磷磷酸酸酸酸转转转转移移移移酶酶酶酶的的的的活活活活性性性性，提提提提示示示示这这这这种种种种双双双双功功功功能能能能酶酶酶酶可可可可能能能能是是是是蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质家家家家族族族族中中中中的的的的两两两两种种种种普普普普通通通通结结结结构构构构，为为为为临临临临床床床床提提

39、提提供供供供开开开开发发发发这这这这种种种种功功功功能能能能酶酶酶酶抑抑抑抑制制制制剂的可能。剂的可能。剂的可能。剂的可能。（5 5）乙乙乙乙酰酰酰酰基基基基转转转转移移移移酶酶酶酶 某某某某些些些些细细细细菌菌菌菌（如如如如金金金金黄黄黄黄色色色色葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌、表表表表皮皮皮皮葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌、肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌、肺肺肺肺炎炎炎炎球球球球菌菌菌菌及及及及流流流流感感感感嗜嗜嗜嗜血血血血杆杆杆杆菌菌菌菌等等等等）对对对对氯氯氯氯霉霉霉霉素素素素耐耐耐耐药药药药性性性性主主主主要要要要是是是是由由由由于于于于质质质质粒粒粒粒编编编编码码码码产产产产生生生

40、生的的的的乙乙乙乙酰酰酰酰基基基基转转转转移移移移酶酶酶酶所所所所致致致致，该该该该酶酶酶酶使使使使氯氯氯氯霉霉霉霉素素素素转转转转化化化化为为为为无无无无活活活活性的代谢产物，失去抗菌活性。性的代谢产物，失去抗菌活性。性的代谢产物，失去抗菌活性。性的代谢产物，失去抗菌活性。（6 6）拓拓拓拓扑扑扑扑异异异异构构构构酶酶酶酶 该该该该酶酶酶酶又又又又称称称称DNADNA旋旋旋旋转转转转酶酶酶酶，由由由由gyrAgyrA和和和和gyrBgyrB编编编编码码码码，基基基基因因因因的的的的突突突突变变变变引引引引起起起起靶靶靶靶酶酶酶酶DNADNA旋旋旋旋转转转转酶酶酶酶的的的的改改改改变变变变，使

41、使使使喹喹喹喹诺诺诺诺酮酮酮酮类类类类药药药药物物物物失失失失去去去去抑抑抑抑制制制制此此此此酶酶酶酶的的的的活活活活性性性性，而而而而使使使使细细细细菌菌菌菌获获获获得得得得耐耐耐耐药药药药。基基基基因因因因的的的的突突突突变变变变常常常常位位位位于于于于60-10660-106残残残残基基基基区区区区域域域域内内内内，在在在在大大大大肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌中中中中约约约约为为为为第第第第8383个个个个丝丝丝丝氨氨氨氨酸酸酸酸，金金金金黄黄黄黄色色色色葡萄球菌中为第葡萄球菌中为第葡萄球菌中为第葡萄球菌中为第8484个丝氨酸。个丝氨酸。个丝氨酸。个丝氨酸。2.2.菌菌菌菌膜膜膜膜通通通通透

42、透透透性性性性的的的的改改改改变变变变 由由由由于于于于药药药药物物物物的的的的作作作作用用用用，细细细细菌菌菌菌改改改改变变变变了了了了外外外外膜膜膜膜蛋蛋蛋蛋白白白白，使使使使菌菌菌菌体体体体外外外外膜膜膜膜通通通通透透透透性性性性降降降降低低低低，阻阻阻阻碍碍碍碍抗抗抗抗生生生生素素素素进进进进入入入入细细细细菌菌菌菌内内内内膜膜膜膜靶靶靶靶位位位位。外外外外膜膜膜膜通通通通透透透透性性性性降降降降低低低低主主主主要要要要由由由由于于于于膜膜膜膜孔孔孔孔蛋蛋蛋蛋白白白白缺缺缺缺陷陷陷陷、多多多多向向向向性性性性突突突突变变变变、特特特特异异异异性性性性通通通通道道道道的的的的改改改改变变

43、变变及及及及膜膜膜膜脂脂脂脂质质质质双双双双层层层层的的的的改改改改变变变变。常常常常见见见见于于于于假假假假单单单单胞胞胞胞菌菌菌菌、醋醋醋醋酸酸酸酸钙钙钙钙不不不不动动动动杆杆杆杆菌菌菌菌、肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌等等等等对对对对B-B-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺类类类类、氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类、氯霉素、喹诺酮类抗生素的耐药。氯霉素、喹诺酮类抗生素的耐药。氯霉素、喹诺酮类抗生素的耐药。氯霉素、喹诺酮类抗生素的耐药。3.3.改改改改变变变变抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的作作作作用用用用靶靶靶靶位位位位 细细细细菌菌菌菌在在在在抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的作作作作用用用用

44、下下下下通通通通过过过过产产产产生生生生诱诱诱诱导导导导酶酶酶酶对对对对菌菌菌菌体体体体成成成成分分分分进进进进行行行行化化化化学学学学修修修修饰饰饰饰，使使使使其其其其与与与与抗抗抗抗生生生生素素素素结结结结合合合合的的的的有有有有效效效效部部部部位位位位变变变变异异异异，使使使使药药药药物物物物不不不不敏敏敏敏感感感感，而而而而细细细细菌菌菌菌的的的的生生生生理理理理功功功功能能能能正正正正常常常常。常常常常见见见见的的的的药药药药物物物物有有有有甲甲甲甲氧氧氧氧苄苄苄苄胺胺胺胺嘧嘧嘧嘧啶啶啶啶、磺磺磺磺胺胺胺胺类类类类、氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类、氯氯氯氯霉霉霉霉素素素素、

45、喹喹喹喹诺诺诺诺酮酮酮酮类类类类药药药药物物物物。如如如如DNADNA中中中中A A位位位位点点点点基基基基因因因因的的的的突突突突变变变变导导导导致致致致回回回回旋旋旋旋改改改改变变变变造造造造成成成成喹喹喹喹诺诺诺诺酮酮酮酮类类类类耐耐耐耐药药药药；核核核核糖糖糖糖体体体体RNARNA甲甲甲甲基基基基化化化化抑抑抑抑制制制制红红红红霉霉霉霉素素素素结结结结合合合合；PBPPBP的的的的改改改改变变变变导导导导致致致致对对对对B-B-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺类类类类抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的耐耐耐耐药药药药，PBPPBP的的的的改改改改变变变变主主主主要要要要有有有有PBPPBP数数数

46、数量量量量改改改改变变变变或或或或缺缺缺缺失失失失、药药药药物物物物与与与与PBPPBP的的的的结结结结合合合合力力力力降降降降低低低低、细细细细菌菌菌菌产产产产生生生生诱诱诱诱导导导导型型型型PBPPBP或或或或缓慢结合的缓慢结合的缓慢结合的缓慢结合的PBPPBP。这这这这种种种种由由由由PBPPBP介介介介导导导导的的的的耐耐耐耐药药药药性性性性在在在在G+G+菌菌菌菌中中中中较较较较G-G-菌菌菌菌更更更更常常常常见见见见，最最最最常常常常见见见见于于于于耐耐耐耐甲甲甲甲氧氧氧氧西西西西林林林林的的的的葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌，主主主主要要要要与与与与PBP2aPBP2a的的的的

47、存存存存在在在在有有有有关关关关，该该该该蛋蛋蛋蛋白白白白是是是是一一一一种种种种转转转转肽肽肽肽酶酶酶酶，负负负负责责责责细细细细胞胞胞胞壁壁壁壁的的的的合合合合成成成成，且且且且由由由由mecAmecA基基基基因因因因编编编编码码码码，位位位位于于于于DNADNA外外外外区区区区域域域域mecmec内内内内，受受受受质质质质粒粒粒粒携携携携带带带带的的的的blaRI-blaIblaRI-blaI诱诱诱诱导导导导抑抑抑抑制制制制子子子子及及及及mecRI-mecImecRI-mecI基基基基因因因因所所所所编编编编码码码码的的的的蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质调调调调控控控控的的的的，在在在在抗抗

48、抗抗生生生生素素素素的的的的治治治治疗疗疗疗中中中中，mecAmecA基基基基因因因因编编编编码码码码产产产产生生生生OXAOXA系系系系列列列列酶酶酶酶，诱诱诱诱导导导导表表表表达达达达产产产产生生生生大大大大量量量量的的的的PBPPBP，使使使使药药药药物物物物不不不不易易易易与与与与胞胞胞胞壁壁壁壁结结结结合合合合，导导导导致致致致药药药药物物物物的的的的作作作作用降低或失活。用降低或失活。用降低或失活。用降低或失活。4.4.产产产产生生生生药药药药物物物物代代代代谢谢谢谢的的的的旁旁旁旁路路路路 抗抗抗抗生生生生素素素素可可可可与与与与靶靶靶靶位位位位结结结结合合合合，但但但但靶靶靶靶

49、位位位位的的的的生生生生理理理理作作作作用用用用已已已已被被被被某某某某种种种种新新新新生生生生成成成成份份份份代代代代替替替替，如如如如G+G+菌菌菌菌耐耐耐耐灰黄霉素的机制可能与其产生旁路有关。灰黄霉素的机制可能与其产生旁路有关。灰黄霉素的机制可能与其产生旁路有关。灰黄霉素的机制可能与其产生旁路有关。5.产产生生耐耐受受 对对-内内酰酰胺胺类类杀杀菌菌效效应应的的耐耐受受发发生生在在抗抗生生素素低低浓浓度度时时，细细菌菌的的生生长长状状态态被被抑抑制制，需需很很高高浓浓度度才才能能将将其其杀杀灭灭，呈呈最最低低仰仰菌菌与与最最低低杀杀菌菌浓浓度度分分离离，这这是是由由于于细细菌菌过过度度分

50、分泌泌自自溶溶抑抑制制因因子子而而降降低低了了细细菌菌的的自自溶溶性性，这这种种耐耐受受性性表表现现为为细细菌菌虽虽不不对对B-内内酰酰胺胺类类抗抗生生素素耐耐药药，但但仍仍不不被被杀杀灭灭，致致使使抗抗生生素素治治疗疗效效果果不不佳佳，噬噬菌菌体体可可能能与与非非耐耐受性转化有关，但其转染机理不明。受性转化有关，但其转染机理不明。6.6.产产产产生生生生导导导导出出出出泵泵泵泵 导导导导出出出出泵泵泵泵的的的的产产产产生生生生是是是是受受受受流流流流出出出出基基基基因因因因控控控控制制制制的的的的，此此此此基基基基因因因因存存存存在在在在于于于于质质质质粒粒粒粒上上上上，在在在在G-G-肠肠