医学专题—细胞凋亡.ppt

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1、细胞(xbo)(xbo)凋亡（APOPTOSIS）第一页，共七十页。一一.细胞细胞(xbo)(xbo)(xbo)(xbo)凋亡的研究历史凋亡的研究历史l1.1.凋凋亡亡概概念念的的形形成成和和形形态态学学的的研研究究(1972）l1972年Kerr等在英国癌症杂志发表论文，首次提出细胞(xbo)凋亡(apotosis)的概念。宣告了对细胞(xbo)凋亡的真正探索的开始。lKerr 等在研究肝缺血时注意到两种不同的细胞死亡形式。第一种,细胞膜解体、细胞器形态改变、溶酶体消失即坏死,而第二种则细胞膜完整、细胞器形态完整、染色质固缩、核碎裂。细胞最终自行分割为若干外膜完整的小体。lKerr根据这些表

2、现套用希腊语描写树叶凋落的名词apoptosis(凋亡)(apo:away,from 离开;ptosis:falling 落下)来命名这种细胞死亡形式。第二页，共七十页。l2 2DNADNA的的降降解解和和内内源源性性核核酸酸内内切切酶酶的的参参与与。(1987）l3.3.蛋白质水解酶活化的研究蛋白质水解酶活化的研究(1995)l4.4.细胞膜的变化细胞膜的变化(1997)l5.5.线粒体的变化和分子生物学的研究线粒体的变化和分子生物学的研究(1998-)l1)相关基因及调控l2）信号转导l3）各种分子(fnz)及其相互作用及相互关系l4）疾病机制的阐明，以及新疗法的探索及问世。第三页，共七十

3、页。l在发育过程(guchng)中及成熟细胞中，部分细胞死亡是正常过程(guchng)，(Glicksmann,1950)。这种正常的细胞死亡是动物细胞的基本特性，它发生在大部分发育中的组织，许多组织整个生命过程(guchng)中都存在正常的细胞死亡。1964年 Lockshin 和 Williams等在研究昆虫变态时便注意到一些细胞按明显的规律的预定程序死亡,从而提出程序性死亡(programmed cell death)这一概念。第四页，共七十页。二.概念 细胞凋亡是能量依赖的细胞内死亡程序活化而致的细胞自杀，由基因控制的细胞自主有序的主动死亡过程。细胞程序性死亡（programmed c

4、ell death，PCD）PCD最初是1956年发育生物学中提出的概念，是个功能性概念，强调的是其分子生物学和生理功能，一般指生理性细胞死亡。描述在一个多细胞生物体中某些细胞死亡是个体发育中的一个预定的，并受到严格程序控制的正常组成部分。近年来认为程序死亡是指发生(fshng)在部分正常生理性稳定的内环境，特别是在胚胎发生(fshng)中的死亡，这对正常细胞更新及在发育过程中重整模式是必要的。因此，程序性细胞死亡代表的不是细胞对外来损伤的效应，而是对激素、生长因子及离子内环境稳定改变的反应。第五页，共七十页。l Kerr等根据绝大部分哺乳类动物细胞的程序性死亡过程中其超微结构改变与凋亡相似,

5、认为所有程序性死亡都是通过凋亡实现的。他们这一假设后来被广泛接受。另外一些学者认为程序性细胞死亡是一种由细胞特定基因(jyn)调控的细胞自杀过程,是功能性概念,而细胞凋亡是形态学概念。细胞的主动性死亡都同时符合程序性细胞死亡和细胞凋亡的定义,以致许多学者把凋亡及程序性死亡两个名词等同使用。第六页，共七十页。l但Wylie（1984）观察到一些确定是程序性死亡的细胞(xbo)只表现少数目前已被公认的凋亡过程的特点,其后不少报告进一步证实某些细胞(xbo)表现出明显不同于凋亡过程的程序性死亡,虽然这两种不同类型的死亡都需要特殊信息启动,都需要有新的基因表达,但一旦细胞(xbo)开始进入死亡程序,其

6、过程便有差异,例如 T 细胞(xbo)的死亡属于凋亡,其特点是膜肿胀,染色质凝聚于边缘,染色质DNA断裂成碎片;但神经细胞(xbo)的程序性死亡却不出现这些特点,而是表现膜皱陷,核固缩,DNA保持不变。第七页，共七十页。l对这两种不同的表现有两种解释:一种认为凋亡可能包括若干不同的过程,而T细胞与神经元的凋亡可能各代表其中的一种;另一种解释是认为神经元并不进行凋亡,而是执行另一种不同的分子机制。还有一些学者认为可能存在(cnzi)一种以上的调控程序性死亡的途径,而凋亡可能是其中的主要途径。第八页，共七十页。l程序性细胞死亡的基因性程序的本质是特殊的定时自杀，而凋亡则可被多种外源因素及病理因素所

7、诱发，故弄清程序性细胞死亡与凋亡的关系是必要的。凋亡是指一种特殊形式的细胞死亡，并已从形态学和生物化学(shn w hu xu)角度对其特点予以界定，看来把细胞凋亡与程序性细胞死亡这两个名词完全等同是不恰当的,有必要对二者的异同及关系进一步深入研究。第九页，共七十页。三.细胞细胞(xbo)(xbo)(xbo)(xbo)凋亡的生物学特征凋亡的生物学特征l形态学变化l生物化学变化l DNA片段化l 大分子的合成l tTG（组织转谷氨酰胺酶）的积累并达到(d do)较高的水平。第十页，共七十页。细胞凋亡的形态(xngti)(xngti)特征l（1）凋亡的起始；微绒毛的消失，细胞间接触的消失，与周围的

8、细胞脱离，细胞质中，线拉体大体完整，染色质固缩，l（2）细胞质密度增加，线粒体膜电位消失，通透性改变，释放细胞色素C到胞浆，膜内侧磷脂酰丝氨酸外翻到膜表面，l（3）凋亡小体的形成。核膜核仁破碎，核染色质断裂为大小不等的片段，与某些细胞器如线粒体一起聚集，为反折的细胞膜所包围。l（4）凋亡小体逐渐被周围专职或非专职吞噬细胞(tn sh x bo)吞噬。第十一页，共七十页。细胞凋亡与细胞坏死的区别细胞凋亡与细胞坏死的区别特征特征 细胞凋亡细胞凋亡 细胞坏死细胞坏死诱导因素诱导因素 生理及弱刺激生理及弱刺激 强烈刺激强烈刺激受累范围受累范围 单个细胞丢失单个细胞丢失 成群细胞死亡成群细胞死亡膜完整性

9、膜完整性 保持到晚期保持到晚期 早期即丧失早期即丧失细胞体积细胞体积 减少、固缩减少、固缩 增大肿胀增大肿胀染色质染色质 凝聚成半月形凝聚成半月形 稀疏成网状稀疏成网状细胞器细胞器 无明显变化无明显变化 肿张破坏肿张破坏溶酶体溶酶体 保持完整保持完整 破坏外溢破坏外溢细胞形状细胞形状 形成凋亡小体形成凋亡小体 破裂成碎片破裂成碎片基因组基因组DNA DNA 有控降解有控降解 随机降解随机降解大分子合成大分子合成 一般需要一般需要 不需要不需要基因调控基因调控 有有 无无后果后果 不引起炎症不引起炎症(ynzhng)(ynzhng)反应反应 引起炎症引起炎症(ynzhng)(ynzhng)反应反

10、应意义意义 生理死亡方式生理死亡方式 病理死亡方式病理死亡方式第十二页，共七十页。第十三页，共七十页。第十四页，共七十页。l生物化学特征生物化学特征l胞浆内胞浆内Ca2+浓度浓度(nngd)升高。升高。l细胞内活性氧增多。细胞内活性氧增多。l质膜通透性变大。质膜通透性变大。lDNA内内切切酶酶活活性性被被激激活活升升高高，双双链链DNA在在核核小小体体之之间间切切断形成断形成180200bp为基数的有序片段。为基数的有序片段。l型谷氨酰胺转移酶和需钙蛋白酶（型谷氨酰胺转移酶和需钙蛋白酶（Calpain）活性升高。）活性升高。第十五页，共七十页。细胞凋亡细胞凋亡(dio wn)DNA的片段化的片

11、段化第十六页，共七十页。凋亡相关凋亡相关(xinggun)(xinggun)因素因素l诱导性因素：激素和生长因子失衡诱导性因素：激素和生长因子失衡l理化因素：高温、强酸、强碱、抗癌药物理化因素：高温、强酸、强碱、抗癌药物l免疫性因素免疫性因素l微生物学因素：细菌、病毒微生物学因素：细菌、病毒 抑制性因素抑制性因素:细胞因子：细胞因子：IL-2，神经生长因子，神经生长因子 某些激素某些激素 某些二价金属阳离子、药物某些二价金属阳离子、药物l凋亡的基因调控凋亡的基因调控(dio kn)l抑制凋亡基因：抑制凋亡基因：Bcl-2，EIB，IAPl促进凋亡基因：促进凋亡基因：P53，Bax，ICEl双向

12、调控基因：双向调控基因：c-myc，Bcl-x第十七页，共七十页。四.细胞凋亡(dio wn)(dio wn)的过程及机理l 接受凋亡信号(xnho)l 凋亡调控分子间的相互作用l 蛋白水解酶（caspases）的活化l 凋亡的级联反应第十八页，共七十页。细胞细胞(xbo)凋亡的两条通路：膜受体通路、线粒体通路凋亡的两条通路：膜受体通路、线粒体通路第十九页，共七十页。膜受体的信号转导l参与死亡受体信号转导的接头蛋白：（死亡结构域蛋白death domain protein）lTRADD：TNF受体相关死亡结构域蛋白lTNF+TNFRI（死亡结构域）+TRADD细胞凋亡lFADD：Fas相关死亡

13、结构域蛋白lFasL+Fas（死亡结构域）+FADD 细胞凋亡lRIP：受体相互作用蛋白lCRADD：含有死亡结构域的caspase和RIP接头蛋白lMADD：活化(huhu)MAP激酶的死亡结构域蛋白第二十页，共七十页。(一)细胞(xbo)(xbo)凋亡的膜受体通路lFASL+FAS +FADDl 凋亡诱导复合物（DISC）l 胞质中游离的caspase8聚集到这个复合物上l细胞有足够caspase8 细胞caspase8浓度不够l 死亡受体活化(huhu)，切割Bid tBid从胞质到线粒体l 细胞凋亡l CtyC 释放第二十一页，共七十页。第二十二页，共七十页。线粒体与细胞(xbo)(x

14、bo)凋亡l线粒体参与细胞凋亡或坏死(hui s)的途径l释放caspase活化因子l细胞色素C：细胞色素C+Apaf-1+caspase9凋亡体lAIF（凋亡诱导因子）lCaspase3lApaf-1：凋亡蛋白酶活化因子第二十三页，共七十页。(二)线粒体通路(tngl)第二十四页，共七十页。五五.凋亡凋亡(dio wn)(dio wn)(dio wn)(dio wn)的效应分子的效应分子l 细胞凋亡的分子机制分子机制虽然还不十分清楚，但Caspase即半胱天冬蛋白酶在凋亡过程中是起着必不可少的作用，细胞凋亡的过程实际上是Caspase不可逆有限水解底物的级联放大(fngd)反应过程。l 半胱

15、氨酸蛋白酶，水解底物天冬氨酸C端肽键，因此又称之为Caspases(取英文Cysteine C，aspartic acid，Asp，proteases的词头)第二十五页，共七十页。第二十六页，共七十页。lCaspase家族的结构(jigu)与分类lICE亚类Caspase蛋白酶：ICE是单核细胞来源的参与成熟的一种蛋白酶，参与凋亡但不起主要作用；Caspase1，Caspase4，Caspase5，Caspase11 Caspase12，lCaspase13，Caspase14。l凋亡启动亚类Caspase蛋白酶：Caspase8，Caspase2，Caspase 9，Caspase10。l凋

16、亡效应亚类Caspase蛋白酶：Caspase3，Caspase6，Caspase7第二十七页，共七十页。Caspase家族的特点(tdin)l 以酶原的形式存在，需要活化：同源活化和异源活化,活化后形成四聚体的蛋白水解酶，发挥生物学作用l C端同源区存在半光氨酸激活位点l Caspase分：启动酶和效应酶 l 第二十八页，共七十页。Caspase活化(huhu)(huhu)机制：l Caspase的活化是有顺序的多步水解(shuji)的过程，虽然分子各异，但是它们活化的过程相似。l 首先在caspase前体的N-端前肽和大亚基之间的特定位点被水解去除N-端前肽，然后再在大小亚基之间切割释放大

17、小亚基，并进而形成两两组成的有活性的四聚体,第二十九页，共七十页。第三十页，共七十页。Caspase的效应(xioyng)(xioyng)机制l 凋亡细胞的特征性表现，包括DNA裂解为200bp左右的片段，染色质浓缩，细胞膜活化(huhu)，细胞皱缩，最后形成由细胞膜包裹的凋亡小体，然后，这些凋亡小体被其他细胞所吞噬。l 破坏细胞抗凋亡因素l破坏细胞结构l影响核酸的结构与功能 第三十一页，共七十页。l破坏细胞抗凋亡因素l正常活细胞因核酸酶处于无活性状态，这是由于核酸酶和抑制物结合在一起，如抑制物被破坏，核酸酶即可激活，引起DNA片段化。现知caspase可以裂解这种抑制物而激活核酸酶，因而把这

18、种酶称为Caspase激活的脱氧核糖核酸酶（caspase-activated deoxyribonulease CAD），而把它的抑制物称为ICAD。有意义的是CAD只在ICAD存在时才能合成并显示(xinsh)活性，因而ICAD对CAD的活化与抑制是必需要的。破坏细胞结构l Caspase可直接破坏细胞结构，如裂解核纤层，核纤层（Lamin）是由核纤层蛋白通过聚合作用而连成头尾相接的多聚体，由此形成核膜的骨架结构，使染色质（chromatin）得以形成并进行正常的排列。在细胞发生凋亡时，核纤层蛋白作为底物被Caspase裂解，从而使核纤层蛋白崩解，导致细胞染色质的固缩。6l影响核酸的结构与

19、功能lCaspase可作用于多种与DNA，RNA功能有关的蛋白如灭活或下调与DNA修复有关的酶、mRNA剪切蛋白和DNA交联蛋白。由于DNA的作用，这些蛋白功能被抑制，使细胞的增殖与复制受阻并发生凋亡。第三十二页，共七十页。第三十三页，共七十页。六.细胞(xbo)(xbo)凋亡的调节l1.Bcl-21.Bcl-2家族家族（B cell lymphoma/leukemia-2B cell lymphoma/leukemia-2）B B细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤/白血病白血病-2)Bc1-2是一种原癌基因，是ced-9在哺乳类中的同源物。和一般(ybn)的癌基因不同，Bc1-2延长细胞的生存，能抑制细胞

20、凋亡,而不是促进细胞的增殖。Bcl-2家族已发现15个成员，所有Bcl-2家族成员均含有1个或多个BH结构域。蛋白含有4个Bcl-2同源结构域，依次命 名为BHl、BH2、BH3和BH4。可分为3个亚族：第三十四页，共七十页。第三十五页，共七十页。l Bcl-2 Bcl-2亚家族亚家族：Bcl-2 Bcl-xl Bcl-w、Mcl-1、A1。Bcl-2亚家族成员对细胞(xbo)凋亡起抑制作用 BaxBax亚家族：亚家族：Bax、Bak、Bok，它们的作用与Bcl-2亚家族的作用相反，可促进细胞凋亡。BH3BH3亚家族：亚家族：Bik、Blk、Hrk、BNIP3、Biml、Bad、Bid；仅有B

21、H3结构域。它们的作用也与Bcl-2亚家族的作用相反，可促进细胞凋亡。作用机制作用机制：影响APAF1的功能 影响线粒体的结构与功能第三十六页，共七十页。第三十七页，共七十页。第三十八页，共七十页。l2.VDAC 和和ANTl 是线粒体外膜上最为丰富的两种蛋白。最近有一些研究工作表明，WDAC和ANT可与Bc1-2家族蛋白相互作用，在细胞凋亡过程中介导对线粒体的损伤。VDAC本身是一种通道蛋白，它与Bax的结合可使共通道性能发生某种变化，这样一些凋亡蛋白如cytC就可通过。因为(yn wi)这两种蛋白在跨越线粒体膜的核苷酸和小分子转运中起作用，所以它们与Bax的结合可能与细胞凋亡过程中线粒体A

22、TP/ADP转化和磷酸肌酸外运的抑制有关。第三十九页，共七十页。l3.P53P53与细胞凋亡与细胞凋亡l P53是肿瘤抑制基因，其产物主要存在于细胞核内。P53基因是人类肿瘤有关(yugun)基因中突变频率最高的基因。在依赖P53蛋白的细胞凋亡中，P53基因是通过调节Bc1-2和Bax基因的表达来影响细胞凋亡的。P53蛋白能特异地抑制Bc1-2的表达，相反对Bax的表达则有明显的促进作用。研究表明，P53蛋白是Bax基因的直接的转录活化因子。在这些细胞中，P53蛋白的积累和活动引起了细胞凋亡。第四十页，共七十页。l4.IAP.IAP（inhibitor of apoptosisinhibito

23、r of apoptosis，细胞凋，细胞凋亡抑制因子）亡抑制因子）l IAP超家族的成员较多，如c-IAP1,c-IAP2,XIAP,NIAP 和Survivin，新的成员在不断的被发现。IAP家族成员有一个共同的特征，含有一个或多个个氨基酸的重复序列（BIR），类似(li s)于zinc指状的结构。c-IAP1、c-IAP2和 XIAP含有环指装结构。BIR功能域和之间的连接区域介导对caspase的抑制作用，而环指状结构则具有泛素化蛋白连接酶的作用，介导caspase和的泛素化降解作用。第四十一页，共七十页。第四十二页，共七十页。l5.Smac/Dablol 在细胞凋亡过程中它可以从线粒

24、体释放进入细胞质。成熟的Smac蛋白产生一个(y)新的N基端,这个N基端的前面4个氨基酸可以与lAP的BIR结构域结合。Smac的功能就是拮抗活化胱解酶9与lAP的结合。Smac 与BIR2的结合可以中和XlAP对胱解酶9的抑制，促进凋亡。第四十三页，共七十页。第四十四页，共七十页。七.细胞凋亡(dio wn)(dio wn)的生物学意义l细胞(xbo)凋亡与个体发育l细胞凋亡与免疫l细胞凋亡与人类疾病第四十五页，共七十页。免疫细胞免疫细胞(xbo)(xbo)凋亡凋亡l胸腺细胞成熟过程(guchng)中的凋亡 阳性选择l 阴性选择l激活诱导的细胞凋亡：（activation-induced c

25、ell death，AICD）l lCTL诱导靶细胞的凋亡：穿孔素介导的靶细胞死亡l Fas介导的靶细胞凋亡 lB细胞凋亡:经过基因重排,92%的细胞凋亡 第四十六页，共七十页。第四十七页，共七十页。细胞凋亡与人类(rnli)(rnli)疾病l细胞凋亡受抑制有关的疾病l 恶性肿瘤:滤泡性淋巴瘤、乳腺癌、等白血病l 自身免疫性疾病：系统性红斑狼疮、肾炎l 病毒感染性疾病：腺病毒病、庖疹病毒病l细胞凋亡增多有关的疾病l 艾滋病：l 神经(shnjng)变性性疾病：早老性迟呆、帕金森病、小脑退化病l 骨髓发育不全性疾病l 缺血性疾病l 酒精中毒性肝炎第四十八页，共七十页。八八.细胞细胞(xbo)(x

26、bo)凋亡的检测方法凋亡的检测方法.一、细胞凋亡的形态学检测一、细胞凋亡的形态学检测.二、磷脂酰丝氨酸外翻分析二、磷脂酰丝氨酸外翻分析(fnx)(fnx)（Annexin VAnnexin V法）法）三、线粒体膜势能（三、线粒体膜势能（mtmt）的检测）的检测四、四、DNADNA片断化检测片断化检测 五、五、TUNELTUNEL法法六、六、Caspase-3Caspase-3活性的检测活性的检测 七、七、WBWB检测检测八、凋亡相关蛋白八、凋亡相关蛋白TFAR19TFAR19的表达和细胞定位分析的表达和细胞定位分析 第四十九页，共七十页。细胞凋亡细胞凋亡(dio wn)的形态学检测的形态学检测

27、1 光学显微镜和倒置显微镜光学显微镜和倒置显微镜 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色、苏木精染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，呈新月状附在核膜周围。2 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变来评判细胞凋亡的进展情况(qngkung)。常用的DNA特异性染料有：HO,Hoechst 33342;HO,Hoechst 33258;DAPI。3 电子显微镜观察电子显微镜观察第五十页，共七十页。Nuclear morphological changes

28、of HeLa cells in apoptosis process （488nm 400）第五十一页，共七十页。电镜观察电镜观察凋亡细胞体积变小，细胞质浓缩。凋亡期的细胞核内染色质高度盘绕，出现(chxin)许多称为气穴现象的空泡结构。细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。第五十二页，共七十页。磷脂磷脂(ln zh)(ln zh)酰丝氨酸（酰丝氨酸（PSPS）外翻分析）外翻分析（Annexin VAnnexin V法）法）磷脂酰丝氨酸（磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine,PSPhosphatidylserine,PS）正常位于细胞膜的内侧，在凋亡早期，PS可从细胞膜

29、的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境(hunjng)中。Annexin-V是一种分子量为3536KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素（FITC、R-PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。第五十三页，共七十页。第五十四页，共七十页。Annexin V-FITC FluorescencePI Fluorescence Time course of apoptosis in TF-1 cells cultured in GM-CSF-fre

30、e medium第五十五页，共七十页。第五十六页，共七十页。Apoptotic HeLa cells were stained with FITC-AnnexinV+PI第五十七页，共七十页。线粒体膜势能线粒体膜势能(shnng)(shnng)（mtmt）的检测）的检测 线线粒粒体体荧荧光光染染料料：Rhodamine 123、DiOC6（3）、JC-1、TMRM等对线粒体膜电位非常敏感，其荧光的增强或减弱(jinru)说明线粒体内膜电负性的增高或降低。第五十八页，共七十页。DNA片段(pin dun)化分析 细胞凋亡(dio wn)时主要生物化学特征是其染色质发生浓缩,染色质DNA在核小体单

31、位之间的连接处断裂,形成180200bp整数倍的寡核苷酸片段,在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(DNA ladder)。第五十九页，共七十页。第六十页，共七十页。第六十一页，共七十页。第六十二页，共七十页。第六十三页，共七十页。第六十四页，共七十页。第六十五页，共七十页。第六十六页，共七十页。第六十七页，共七十页。凋亡相关蛋白凋亡相关蛋白TFAR19TFAR19蛋白的表达蛋白的表达 和细胞定位分析和细胞定位分析 TFAR19（PDCD5）是由本研究室在国际上首先报导的一个拥有自主知识产权的人类新基因，前期的功能(gngnng)研究表明，它是促进细胞凋亡的增强剂。利用荧光素（FITC）标记的TFA

32、R19单克隆抗体为探针，对细胞凋亡过程中TFAR19蛋白的表达水平及定位研究发现，凋亡早期TFAR19表达水平增高并出现快速核转位现象，伴随着细胞核形态学的变化，持续较长时间，在凋亡小体中仍然可见。方法：ELISA、Western blot 分析 a.TFAR19蛋白的细胞定位分析 b.TFAR19蛋白的表达与临床疾病 c.原发性肿瘤细胞和正常细胞的TFAR19蛋白的表达水平。第六十八页，共七十页。Double staining analysis of nuclear localization ofTFAR19 in K562 andHeLa cells treated with VP16(170m)第六十九页，共七十页。内容(nirng)总结细胞凋亡（APOPTOSIS）。细胞凋亡的两条通路：膜受体通路、线粒体通路。病毒感染性疾病：腺病毒病、庖疹病毒病。2 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜。Annexin-V是一种分子量为3536KD的Ca2+依赖性磷脂结合(jih)蛋白，能与PS高亲和力特异性结合(jih)。VP16(170m)第七十页，共七十页。