乙肝五项(2).pptx

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1、乙肝病毒五项检测乙肝病毒五项检测 第一页，共十七页。双抗体夹心法乙型肝炎病毒外表抗原乙型肝炎病毒外表抗原乙型肝炎病毒外表抗体乙型肝炎病毒外表抗体乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒e抗原抗原乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒e抗体抗体乙型肝炎病毒核心抗体乙型肝炎病毒核心抗体双抗体夹心法双抗原夹心法竞争抑制法竞争抑制法乙肝病毒五项检测乙肝病毒五项检测 第二页，共十七页。乙型肝炎病毒外表抗原乙型肝炎病毒外表抗原检验原理原理本本试剂盒采用双抗体盒采用双抗体夹心法心法酶联免疫吸附免疫吸附实验原理。在原理。在微孔条上微孔条上预包被包被纯化乙肝外表抗体化乙肝外表抗体HBsAb，配以，配以酶标记抗体抗体HBsAb-HRP及及TM

2、B显色色剂等其他等其他试剂，检测人血清或血人血清或血浆中的乙肝外表抗原中的乙肝外表抗原HBsAg。第三页，共十七页。乙型肝炎病毒外表抗原乙型肝炎病毒外表抗原样本要求本要求本本试剂使用使用样品品为人血清或血人血清或血浆，含有，含有EDTA、柠檬檬酸酸钠或肝素等抗凝或肝素等抗凝剂的的样品可用于本品可用于本实验。不能不能检测含叠氮含叠氮钠、悬浮浮纤维蛋白或聚集物、重度溶蛋白或聚集物、重度溶血的血的样品。品。样品中品中应无微生物，可在无微生物，可在28储存一周，存一周，长期期储存存应低温低温冻存，防止反复存，防止反复冻融。融。使用前使用前请将将样品室温平衡品室温平衡30分分钟以上，冷以上，冷冻样品品实

3、验前需混匀。前需混匀。第四页，共十七页。乙型肝炎病毒外表抗原检验方法方法配液：将配液：将浓缩洗洗涤液用蒸液用蒸馏水或去离子水水或去离子水20倍稀倍稀释。编号：将号：将样品品对应微孔板按序微孔板按序编号，每板号，每板应设阴性阴性对照孔照孔3孔，阳性孔，阳性对照孔照孔2孔和空白孔和空白对照照孔孔1孔。用双波孔。用双波长检测，可不，可不设空白空白对照孔。照孔。稀稀释：每孔参加：每孔参加样品稀品稀释液液20 L，空白，空白对照孔除外。照孔除外。加加样：分：分别在相在相对应孔中参加待孔中参加待测样品或阴性、阳性品或阴性、阳性对照照100L，轻轻振振荡混匀。非常重要混匀。非常重要温育：用封板膜封后，置温育

4、：用封板膜封后，置371温育温育602分分钟。如有。如有酶联反响加速反响加速仪温育温育时间可减半。可减半。加加酶：每孔参加：每孔参加酶标试剂50L，空白孔除外，空白孔除外，轻轻振振荡混匀。混匀。温育：用封板膜封后，置温育：用封板膜封后，置371温育温育301分分钟。如有。如有酶联反响加速反响加速仪温育温育时间可减半。可减半。洗版：小心揭掉封板膜，用洗板机洗洗版：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，拿出来在扣在洗版遍，拿出来在扣在洗版纸上重重拍干。上重重拍干。显色：每孔参加色：每孔参加显色色剂A、B液底物各液底物各50L，轻轻振振荡混匀，混匀，371避光避光显色色30分分钟。测定：每孔参加定：每孔

5、参加终止液止液50L，轻轻振振荡混匀，十分混匀，十分钟内内测定定结果。果。设定定酶标仪波波长于于450nm处建建议用双波用双波长450um/600650nm，用空白孔凋零点后，用空白孔凋零点后测定各孔定各孔A值。第五页，共十七页。乙型肝炎病毒外表抗原第六页，共十七页。乙型肝炎病毒外表抗原本卷本卷须知知本本样品品仅用于体外用于体外诊断，操作断，操作应按按说明明说严格格进行。封板膜不能重复使用，不同批号、行。封板膜不能重复使用，不同批号、酶标试剂和阴性和阴性对照不可混用，不能与其它厂家照不可混用，不能与其它厂家试剂混用。混用。防止在有防止在有挥发性物性物质及次及次氯酸酸类消毒液如消毒液如84消毒液

6、的消毒液的环境下操作。境下操作。使用前使用前请将将试剂平平稳至室温平衡至室温平衡30分分钟以上，以上，实验前将前将试剂轻轻振振荡混匀，使用混匀，使用后立即回放后立即回放28。未用完的微孔板条与枯燥。未用完的微孔板条与枯燥剂一起用自封袋密封一起用自封袋密封28保存。保存。过期期试剂请勿使用。勿使用。加液加液时必必须用加用加样器，并器，并经常校常校对加加样器的准确性。参加不同器的准确性。参加不同样品或不同品或不同试剂组份份时，应更更换加加样器的吸器的吸头和加和加样槽，以防止出槽，以防止出现交叉交叉污染。染。洗洗涤时各孔均匀需加各孔均匀需加满洗液，防止孔内有游离洗液，防止孔内有游离酶不能洗不能洗净。

7、使用洗板机。使用洗板机应设定定3060秒浸泡秒浸泡时间。在洗版。在洗版结束后，必束后，必须立即立即进行下一步，不可使用行下一步，不可使用酶标板枯燥。防止板枯燥。防止长时间的中断的中断实验步步骤，以确保每孔，以确保每孔实验条件的均一。条件的均一。结果判定必果判定必须以以酶标仪读数数为准。准。读取取结果果时，应擦干擦干酶标板底部，且孔内板底部，且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指引或划痕可能影响板孔的不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指引或划痕可能影响板孔的读值。所有所有样品、品、废液和液和废弃物都弃物都应按照按照传染物染物处理。理。终止液止液为硫酸，使用硫酸，使用时必必须注意平安。注意平安

8、。显色色时必必须先加先加显色色剂A液后再加液后再加显色色剂B液，以免液，以免显色色过低。低。由于由于ELISA反响原理的限制，本反响原理的限制，本试剂检测阴性并不排除阴性并不排除HBV乙型肝炎感染的可能。乙型肝炎感染的可能。检测的阳性的阳性结果必果必须结合合临床信息床信息进行分析。行分析。第七页，共十七页。乙型肝炎病毒外表抗体【检验原理】本试剂采用双抗原夹心酶联免疫吸附实验原理。在微孔条上预包被乙肝外表抗原HBsAg，参加待测样品及酶标抗原HBsAg-HRP试剂进行温育。样品中的HBsAb与包被抗原和酶标抗原形成“包被抗原-抗体-酶标抗原复合物。洗板后参加显色剂TMB，复合物上连接的HRP催化

9、显色剂反响，生成蓝色产物，终止反响后为黄色。假设样品中乙无型肝炎外表抗体时，不显色。第八页，共十七页。乙型肝炎病毒外表抗体【检验方法】配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20稀释。编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔用双波长检测，可不设空白对照孔。加样：分别在相应孔中参加待测样品及阴、阳性对照各50ul。加霉：每孔参加酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻震荡混匀。温育：用封板膜封板后，置于37温育30分钟。洗涤：小心揭掉封板莫，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。显色：每孔参加显色剂A、B液各50ul，轻轻震荡混匀，37避光显色15分钟。测定：每孔加终止

10、液50ul，轻轻震荡混匀，10分钟内测定结果。第九页，共十七页。乙型肝炎病毒e抗体检验原理：本试剂采用竞争抑制酶联免疫法吸附法实验原理，在微孔板上预包被乙肝e抗原，参加待测样品及酶标抗体HBeAb-HRP试剂进行温育，酶标抗体和样品中的HBeAb竞争酶标板上的包被抗原。假设样本中无乙型肝炎e抗体时，酶标抗体与包被抗原结合形成“包被抗原-酶标抗体复合物，洗板后参加显色剂TMB，复合物上连接的HRP催化显色剂反响，生产蓝色产物，终止反响后变为黄色。假设样本中存在乙型肝炎e抗体时，会与酶标抗体竞争形成“包被抗原-抗体复合物，不显色。第十页，共十七页。乙型肝炎病毒e抗体检验方法：配液：将浓缩洗涤液用蒸

11、馏水或去离子水20倍稀释。编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔用双波长检测，可不设空白对照孔。加样：分别在相应孔中参加待测样品及阴、阳性对照各50l。加酶：每孔加人酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻振荡混匀。温育：用封板膜封板后置37温育30min。洗涤：小心撕掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。显色：每孔加人显色剂A、B液各50l，轻轻振荡混匀，37避光显色15min。测定：每孔加终止液50l，轻轻振荡混匀，10min内测定结果。设定酶标仪波长于450nm处建议用双波长450nm/600-650nm检测，用空白孔调零点后测定各孔A值。第十

12、一页，共十七页。乙型肝炎病毒核心抗体乙型肝炎病毒核心抗体抗-HBc、e抗体抗-HBe检测1抗-HBc检测 先用生理盐水将待测血清作1:30稀释，然后取50l参加相应的包被板或条中，同时设阳性、阴性及空白对照各一孔对照血清不必稀释；再向每孔参加酶结合物50l空白孔不加，再进行同1的操作。但结果观察需反看：目测法是以不显色无色孔为阳性；比色法是以标本吸光度A值0.5N阴性对照值为阴性，标本吸光度A值0.5N者判为阳性。第十二页，共十七页。乙肝五项的32种组合第十三页，共十七页。第十四页，共十七页。第十五页，共十七页。谢谢第十六页，共十七页。内容总结乙肝病毒五项检测。加酶：每孔参加酶标试剂50L，空白孔除外，轻轻振荡混匀。参加不同样品或不同试剂组份时，应更换加样器的吸头和加样槽，以防止出现交叉污染。在洗版结束后，必须立即进行下一步，不可使用酶标板枯燥。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。加霉：每孔参加酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻震荡混匀。加酶：每孔加人酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻振荡混匀。谢谢第十七页，共十七页。