03_实验三_植物DNA的提取及纯度浓度鉴定.ppt

《03_实验三_植物DNA的提取及纯度浓度鉴定.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《03_实验三_植物DNA的提取及纯度浓度鉴定.ppt（11页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、 实验三实验三 植物植物DNA的提取的提取 实验原理实验原理l真核生物真核生物DNADNA与蛋白质结合，以核蛋白的形式存与蛋白质结合，以核蛋白的形式存在于细胞核内在于细胞核内l在提取在提取DNADNA时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，释放出核蛋白释放出核蛋白 实验原理实验原理l在在浓浓氯化钠溶液（氯化钠溶液（12 molL）中，）中，DNA核核蛋白的溶解度很大，蛋白的溶解度很大，RNA核蛋白的溶解度很核蛋白的溶解度很小。小。l在在稀稀氯化钠溶液（氯化钠溶液（0.14 molL）中，）中，DNA核核蛋白的溶解度很小，蛋白的溶解度很小，RNA核蛋白的溶解度很核蛋白的溶

2、解度很大。大。l利用利用不同浓度氯化钠溶液不同浓度氯化钠溶液将将DNA核蛋白或核蛋白或RNA核蛋白从样品中分别抽提出来。核蛋白从样品中分别抽提出来。在核蛋白溶液加入在核蛋白溶液加入氯仿异戊醇氯仿异戊醇，振荡，使蛋，振荡，使蛋白质乳化变性，再离心除去变性蛋白质。白质乳化变性，再离心除去变性蛋白质。用用十二烷基硫酸钠（十二烷基硫酸钠（SDSSDS）等去污剂使蛋白质变等去污剂使蛋白质变性，与核酸分离，从材料中提取出性，与核酸分离，从材料中提取出DNADNA。用用苯酚苯酚处理，然后离心分层，蛋白变性后则停处理，然后离心分层，蛋白变性后则停留在酚层内。留在酚层内。实验原理实验原理-去除蛋白质的方法去除蛋

3、白质的方法 化学因素化学因素 核酸在核酸在pH4.011.0稳定，稳定，否则否则就变性降解。就变性降解。物理因素物理因素 DNA是长链线状分子，强机械是长链线状分子，强机械作用会使作用会使DNA分子断裂。分子断裂。酶的作用酶的作用 DNA酶会降解酶会降解DNA分子。分子。实验原理实验原理-破坏破坏DNA完整结构的因完整结构的因素素1、10mL CTAB分离缓冲液加入分离缓冲液加入50mL 小烧杯中，小烧杯中，在在65水浴中预热。水浴中预热。2、剪碎小白菜叶片，、剪碎小白菜叶片，2组同学称取组同学称取6g，置于预冷的研钵中，置于预冷的研钵中，倒入液氮，尽快将叶片研碎。倒入液氮，尽快将叶片研碎。3

4、、每组称约、每组称约3g叶片粉末，加入预热的叶片粉末，加入预热的CTAB分离缓冲液，研分离缓冲液，研 磨混匀，再把混合液装入磨混匀，再把混合液装入50ml离心管，离心管，65保温保温30分钟。分钟。4、加、加10mL氯仿氯仿-异戊醇（异戊醇（24：1），轻轻混匀。），轻轻混匀。室温，室温，6000 rpm离心离心8分钟。分钟。实验步骤实验步骤5、用、用1ml微量移液器将上层水相吸入另一干净的微量移液器将上层水相吸入另一干净的50mL 小烧杯中，加入小烧杯中，加入2/3体积的异丙醇，轻轻混匀，使核酸体积的异丙醇，轻轻混匀，使核酸 沉淀下来。沉淀下来。6、用玻璃棒将丝状、用玻璃棒将丝状DNA搅起，

5、转移至搅起，转移至10mL70乙醇中，乙醇中，浸泡洗涤浸泡洗涤10分钟。分钟。7、用玻璃棒取出、用玻璃棒取出DNA沉淀，室温下干燥。沉淀，室温下干燥。8、将、将DNA沉淀溶于沉淀溶于1.0 mL TE缓冲液中缓冲液中实验步骤实验步骤试试 剂剂CTAB分离缓冲液分离缓冲液2%CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）（十六烷基三甲基溴化铵）1.4 mol/L NaCl 100 mmol/L Tris-HCl(pH8.0)异丙醇异丙醇氯仿氯仿-异戊醇（异戊醇（24：1）液氮液氮70%乙醇乙醇CTABCTAB（十六烷基三甲基溴化铵）（十六烷基三甲基溴化铵）阳离子去污剂阳离子去污剂,它不仅能使蛋白质变性，还能与它不仅能使蛋白质变性，还能与核酸形成特异的核酸形成特异的核酸核酸CTAB复合物。复合物。核酸核酸CTAB复合物可溶于复合物可溶于0.7mol/L NaCl的高的高盐缓冲液。盐缓冲液。TE 缓冲液10mmol/L Tris-HCl（pH7.4）1mmol/L EDTA思考题思考题1、本实验中、本实验中CTAB、EDTA、异丙醇的作用、异丙醇的作用 是什么？是什么？2、吸取样品、抽提应注意什么？为什么？、吸取样品、抽提应注意什么？为什么？3、提取、提取DNA时除去蛋白质的方法有哪些？时除去蛋白质的方法有哪些？