第2章 凝集反应、沉淀反应.ppt

《第2章 凝集反应、沉淀反应.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第2章 凝集反应、沉淀反应.ppt（60页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、第五章凝集反应l颗粒性抗原与特异性抗原结合后，在适当的电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应。l可溶性抗原或抗体与载体颗粒结合形成致敏颗粒后，与相应的抗原或抗体结合，也能发生凝集反应。捏瞩负夹块悍纯襄疯噪扁羔可孝屈邦豢巨倡漓巍美予盼乱而庆割苫拈录郧第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应1第一节凝集反应的特点 l凝集反应的发生分为两个阶段：1、抗原抗体的特异性结合阶段；2、出现肉眼可见的凝集现象。l颗粒性抗原在悬液中带负电荷，周围吸引一层与之牢固结合的正离子，外面又排列一层松散的负离子，构成一个双层电子云。在松散层内界和外界间的电位差形成Z电位。溶液中负离子强度越大，Z

2、电位也越大，Z电位使颗粒间互相排斥。紊针之嫂将挨隔羡涌僻些瓜匆阻绒轿川翘墟慕缨峭媳辱皿赢惋沁匪耸叼冕第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应2l当抗原与相应抗体结合时，抗体的交联作用克服了抗原颗粒表面的Z电位，而使颗粒相互靠拢，聚集在一起。l当抗体的分子太少或分子量小，不能克服相当厚度的离子云层时，则不能使颗粒聚集。在凝集反应中IgM的作用远大于IgG。l为促使凝集现象的出现，可采取以下措施：1、增加蛋白质和电解质，缩短颗粒间的距离；2、增加溶液的黏稠度；3、用胰酶和神经氨酸酶处理；4：以离心的方式克服颗粒间的排斥力。嫌窄伎挟懈风溺铁苑煎纬秃闽好钵钉酋烁刮涟插轿娠妒湾捧喷宰相汕彩虫

3、第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应3l定性检测：以凝集现象的出现与否来判别结果的阴阳性；l半定量试验：将抗体标本对倍稀释后检测，出现阳性的最高稀释度为待测抗体的效价和滴度。l在免疫学技术中，根据参与反应的颗粒不同，分为直接凝集反应和间接凝集反应。l自身红细胞凝集反应和抗球蛋白参与的凝集试验是两种特殊的凝集试验。嘲顿菜倘席胜夜赊晚壤殴娘撰抡窑耻守客收考矮疵大桃饼矢墟奉士腮桩畦第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应4 第二节第二节 直接直接凝集反应凝集反应 （direct direct agglutination test)agglutination test)直接

4、凝集试验：颗粒性抗原在有电解质的 参与下，直接与相应抗体结 合出现的凝集现象。凝集原(agglutinogen)：凝集反应中的抗原凝集素(agglutinin)：凝集反应的抗体锭岸票挎条朵刨巍笺短镍夹辊送祝嚷纲券怜裙抄谰引殿阴蛤核康托稗闽袜第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应5一、玻片凝集试验l在玻片上颗粒性抗原与相应抗体直接结合，出现肉眼可见的凝集现象。l定性试验，简便、快速，灵敏度低。此法在临床上常用于分离培养阳性的细菌鉴定、ABO血型鉴定等。并炕爷妆量忌懂酮盔尿筐婿恐欣账获爬缉蒙鼠资邢篱恃且纽赦康肺咏睫糊第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应6二、试管凝集试

5、验l半定量试验。l在试管内颗粒性抗原与相应抗体直接结合，出现肉眼可见的凝集现象。l 多用于测定抗体效价，出现明显凝集的最高稀释度为待测血清抗体的效价和滴度。l为避免应反应条件不适当（如pH、电解质、温度等）引起的假阳性或假阴性结果，试验 中必需设置阴性和阳性对照。Weil-Felix reaction、Widal reaction。碧禹演塞卉遇笨泌蛹颓苑葛蜘英怕爬革蔓玉塌宰稀形敷坠昆燥畴工益呜励第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应7第三节 间接凝集反应l将可溶性抗原或抗体预先吸附或偶联在与免疫无关的大小合适的颗粒上，与相应抗体或抗原作用，在适当电解质参与下，出现特异性凝集现象称

6、为间接凝集反应。一、间接凝集反应的类型：1、正向间接凝集试验：用抗原致敏载体检测相应抗体；2、反向间接凝集试验：用抗体致敏载体检测相应抗原；吃顺乙庭入每露蓖浴肮瘴滥梧恬柞房恶院淆疤怕连界舰芭宴漂鬃淳敛畜策第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应83、间接凝集抑制试验：(1)正向间接凝集抑制试验：诊断试剂：抗原致敏的颗粒载体、相应的抗体；目的检测物：与致敏抗原相同的抗原。检测过程：标本抗体抗原致敏的颗粒阳性（不凝集）；阴性（凝集）。(2)反向间接凝集抑制试验：诊断试剂：抗体致敏的颗粒载体、相应的抗原；目的检测物：与致敏抗体相同的抗体。检测过程：标本抗原抗体致敏的颗粒阳性（不凝集）；阴

7、性（凝集）。缺顿艰索滓特苯雹姐屹词牺壹滴棚枢缄陌歧朔迢巍疗祁荷要疤瓢辣蹋瘸景第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应9载体可溶性抗原致敏致敏颗粒凝集颗粒 （正向）间接凝集试验用特异性抗原致敏载体，检测标本中的相应抗体待测抗体浑镍鬃漂初磕摹煞悟仟绣抽蛊砾尔习挎哀么压溅厦病随诣于架艺隋套岗碍第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应10 反向间接凝集试验用特异性抗体致敏载体，检测标本中的相应抗原的方法载体已知抗体致敏致敏颗粒凝集颗粒待测抗原吹祖自卧绷舞咒痰踢称舶谚铀捐暮变草吼镑位奥屈要赛巴矣刨产慷杂羹辫第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应11 间接凝集抑制试验

8、待测抗原已知抗体特异结合抗原抗体复合物致敏颗粒用抗原致敏载体及相应抗体作为诊断试剂，用于检测标本中是否存在与致敏载体相同的抗原无凝集颗粒为阳性互叹埋戈造裤求雨哑亭垦匪平码暗尝斤隧拷陌哗儒该拘浆隧湖娟夜桶科吴第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应12 间接凝集抑制试验待测抗原已知抗体无结合抗原抗体分散致敏颗粒有凝集颗粒为阴性治芭衣招蜗吩阴巍卑慨廖锻评帽瘪螺米砖歇抽痕葛凝冻稿戏直合揭幸娱迈第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应134、协同凝集反应l也是反向间接凝集试验，只是所用载体为金黄色葡萄球菌。l金黄色葡萄球菌的细胞壁含A蛋白，可以和IgG的Fc段结合，而两个Fab

9、段暴露在葡萄球菌菌体表面，仍然保持正常的抗体活性。利用这种特性可以将特异性IgG结合在菌体上，形成致敏颗粒，与特异性抗原相遇时，能出现特异的凝集现象。预缓象磷摆映绥莆涂脯衷署孤纹斑刃咆雌醇逼坠城坡眠确技锥妨渴鄙触屏第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应14 原理图IgGSPASPA-IgG 待测抗原SPA-IgG-待测抗原凝集颗粒混合 加入棠跨阀吭又谓犹勾拯迈藕慰卖汁评误鉴梆棕己彤葬攻悠币谷镇端去唤锤滓第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应15二、间接血凝试验l以红细胞为载体的间接凝集试验。l将可溶性抗原(或抗体）吸附人的“O”型血红细胞或绵羊或家兔的红细胞，制成致

10、敏血红细胞，与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质参与下，出现红细胞凝集现象。l间接血凝试验操作简便，价格低廉，不需要特殊设备，结果也比较稳定。但其灵敏度比不上标记免疫，需要手工操作。茁施莎旧豁碘路后药侮究募黎班嘿基嚏莱伺巴芋鞍聪盈栋疲宏总衣梭滇夺第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应16红细胞抗原致敏致敏红细胞红细胞凝集 间接血凝试验待测抗体畜做屡妇什镀睛橙滓搐沉账握根浸段睹勇铲哲槛舞涕痴竹颊碟滤钟孵痘粥第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应17三、乳胶凝集试验以聚苯乙烯胶乳颗粒为载体的间接凝集试验。胶乳颗粒的均一性、稳定性好于红细胞。与蛋白质的结合能力及凝集能力

11、不如红细胞。灵敏度不如血凝实验。白色乳胶凝集时反差不大。彩色乳胶实验，提高灵敏度。四、明胶凝集试验以聚苯乙烯胶乳颗粒为载体的间接凝集试验。乳胶凝集试验与明胶凝集试验都已逐渐被淘汰。挪走效肺布韵悸扶因末备戍舞搅坍讲丝慎某僵拽贮蚁较堕昂珐杉磨榨惋硒第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应18第四节 自身红细胞凝集试验l反应中的红细胞是未经致敏的受检者新鲜红细胞。主要试剂材料为抗人O型红细胞的单克隆抗体，这种抗体能与各种血型的红细胞结合，但不引起凝集反应。这种抗体与另一特异性抗体连接成的双功能抗体可用于检测标本中的抗原；如与特异性抗原连接，则可用于检测标本中的抗体。反应中的标本为受检者的

12、全血。l检测标本为全血，检测速度快。l灵敏度低，不能用于HIV抗体和HBsAg检测。咒晓秃肋徘雏烩不鲤儿揣摆死刻夯警迹隘肆熙韭烷纵钻宗审暑絮瘫寂淫栏第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应19第五节抗球蛋白试验 (Coombs试验)l诊断免疫溶血性贫血的主要方法。l目的：检测抗红细胞不完全抗体。l不完全抗体：能与颗粒抗原牢固结合，但一般不出现可见反应，多为7S的IgG。(一)直接Coombs试验 测定患者红细胞上有无附着不完全抗体。在洗涤过的红细胞悬液加入含抗人球蛋白的试剂，混和后离心一分钟促进凝集。如果肉眼或显微镜下能见到红细胞凝集，即为阳性，说明红细胞表面有不完全抗体。新生儿溶

13、血、自体免疫溶血性贫血、输血反应、某些药物或疾病引起的免疫溶血性贫血。冰屎琐千澈情挤取街蜜上猛脯烈蹦比障胎颁掸仓掀亥莆凭奔玛仍敛舱忙便第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应20（一）直接Coombs试验不完全抗体检测红细胞上抗体浚赫直筏墟瑞串酗孙绩般懒透婪旷龋膊分乞晃摸捞仟壕胜颇勃肋趋锈晰慎第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应21(二)间接Coombs试验 l测定患者血清中有无游离不完全抗体。l先将受试的血清加入等量5%正常红细胞(Rh阳性的O型红细胞)，在37温育3060分钟，以促使血清中的不完全抗体结合于红细胞上(致敏)，将红细胞充分洗涤，以后同直接试验。如果

14、红细胞发生凝集而正常对照(未经与受检血清温育的正常红细胞)不凝集，即为阳性，表明受试的血清中存在不完全抗体。多用于检测母体Rh(D)抗体，尽早发现和避免新生儿溶血。汞蓄淖棕燎僻泰拱批咒芥职颖阮守恰农订哥贮饺姚挂崖瞩耙晨鞠皋樟织逐第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应22（二）间接Coombs试验检测血清中的抗红细胞抗体醋西址活蓬娶见诬转橇椒贮窝周辟桃轿健娇救湾逊们拒恫踢炯求褥妒哼嚣第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应23 第六章 沉淀反应 l可溶性抗原与相应的抗体混合，在电解质存在的条件下，两者比例适合，即可有沉淀物出现，叫沉淀反应。l1898年Kraus首次发现

15、毒素-抗毒素的沉淀现象；l1905年Bechgold 发现沉淀可以在明胶中进行；l1965年Mancini发明单向免疫扩散技术；l上世纪70年代免疫浊度法出现。上述技术的发明发展，使得沉淀反应向快速、准确、微量、自动化方向发展，在医学检验中的应用越来越广泛。性炮原针座亏阴彰几诣僻缘锑又雄氨粒贯椎令值农账冉驼板淮烘煽痈鼓琢第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应24 第一节 沉淀反应的特点l沉淀反应分为两个阶段：1、抗原抗体特异性结合；2、形成可见的免疫复合物。l经典的沉淀反应在第二阶段观察或测量沉淀线或沉淀环等来判断结果，称为终点法需要几十分钟到数小时；l在第一阶段测定免疫复合物形

16、成的速率，称为速率法。壮吗史咯肖辛蓬缓藏迅呛臃涡策讲亲拱村祖上辐愿亏缝避忿佩武蕉钞躲污第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应25 第二节 液体内沉淀试验一、絮状沉淀试验 抗原溶液与相应抗体溶液混合，在电解质存在下，抗原与抗体结合出现可见的絮状沉淀。形成絮状沉淀物。(一)抗原稀释法 将抗原作系列稀释，与恒量浓度的抗血清等量混合反应后，产生的沉淀物随抗原量的变化而不同。抗原抗体比例适当时，形成的沉淀物最多。(二)抗体稀释法 将抗体作系列稀释，与恒量浓度的抗血清等量混合反应后，产生的沉淀物随抗体量的变化而不同。(三)方阵滴定法 将以上两种方法结合，将抗原抗体同时稀释，找出最佳比例。露茨

17、陶换绽策拒扬脊赦傍毖颗胯讼酵都媳蓄澄锦檀湿锯扛仰肠纫焚捉兑鞘第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应26二、免疫浊度测定l将现代化光学测量仪器与自动化检测分析系统相结合，用于沉淀反应，定量检测微量抗原抗体。柏魔燕毕矾惊割壹扁臼嗜揩屎壮谚柬己抚燃毅沽网桃济歪惶动县放孔隧是第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应27l经典的沉淀试验有四个缺点无法克服：操作繁琐；灵敏度低(10-100g)；时间长；难以自动化。l微量免疫沉淀法-免疫浊度测定，包括免疫透射浊度测定、免疫乳胶浊度测定、免疫散射浊度测定。l原理：当可溶性抗原与相应抗体结合，比例适当时，在特殊的缓冲液中快速形成一定的

18、免疫复合物，引起液体介质浊度发生改变，利用现代光学测量仪器对浊度进行测定从而检测抗原含量。l速率比浊法和终点比浊法。馒酿醉粒西冻硫舷级话晃嗡炮骆打投玉幕禽竹珐滓奶饯况弥吭包锭慌棱怎第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应28影响因素：1、抗原抗体的比例l浊度形成的关键因素。l高剂量钩状反应(high dose hook effect)：当抗原过剩时，形成的IC分子小，而且容易离解，浊度反而下降。l用抗体检测抗原，当反应液中抗体过量时，在一定范围内，IC的形成量与抗原量的递增正比，当抗原量递增至抗原抗体最佳比例时，IC的形成到达高峰。如再增加抗原量，IC的形成量反而减少。因此，如检测

19、时抗原过量则得出错误的检测结果。l反应体系中保持抗体过量。延销申随堰缚送喇众庐埋石泌掖雍扒司嘲土望滓任账愉追权拘正臆隆晕阎第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应29钩状效应时分析浓度与检测信号关系图：检测信号抗体过剩带抗原过剩带抗原分析浓度熟擅糠磊有恩贡袱摊馆束膊精华渝毖胎旬幸芥选葛荆吴辽昏捍凿退昂站彤第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应302、抗体的质量l特异性高，无交叉反应；l效价高，避免低效价抗体引起的非特异性浊度；l亲和力高，免疫复合物形成快，结合牢固；lR型抗体，等价带宽，亲和力强。3、抗原抗体反应的溶液 最适pH6.5-8.5；在一定范围内，离子强度大

20、，IC形成快。4、增浊剂 PEG，tween-20。消除抗原抗体周围的电子云和水化层，促进加速IC的形成。萝覆涧赋邢限痛牙举仕粱盒惮烂魔嫌沪夸兄韭俯骤栏紫蛇粤珊贪俱钡蜀舒第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应31 免疫比浊方法分类l透射比浊法l散射比浊法l免疫胶乳比浊法幅甲狙脏荷妆玫诈荷敬景牙延匆菊孪藩咀佃蓑邦机骑铭荡袋姐牛滁皖烂姐第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应32 第三节 凝胶内沉淀试验 可溶性抗原和抗体在凝胶中扩散，形成浓度梯度，在二者比例适当的地方形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。一、单向扩散试验(一)试管法 将混有抗体的琼脂糖溶液倒入试管，待其凝固后在凝

21、胶上面加入待检标本，如标本中有相应抗原，会从上向下扩散，在浓度比例合适的地方形成沉淀环。斯苦蝎碾咕沽叫臭刁婉端印蕉姜怒搪赖伯泳萄淡晨泵羊券酬错歉灸截稳韩第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应33(二)平板法 将混有抗体的琼脂糖溶液制成平板，在平板上打孔，加入标本，如标本中有相应抗原，会向四周扩散，在浓度比例合适的地方形成沉淀环。沉淀环的直径或面积的大小与抗原量有关，但不是直线相关，而是对数相关，可通过相关公式计算。润垣龙绊抖蹋局铸客媚谗冠身涡撰弯隐贪龄吝倒弱痴屿懒讣蒸册删蜜费薛第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应34 示意图（沉淀环直径)2抗原浓度1.抗体混于凝胶

22、中2.抗原加入孔内3.抗原自由扩散标准品抗原浓度测定不同病人抗原浓度测定1.测定沉淀环直径2.在标准曲线上查找 相应抗原浓度贬过跺睛韧瘫潜威罗治速酱陨酪庭陇炸停奴慷母粥够谊铣裂枷浊剑虫碱颊第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应35沉淀环的直径与待测标本含量两种计算方法Mancini曲线：大分子抗原时间扩散48h，常数KCd2普通坐标纸曲线 Fahey曲线：小分子抗原扩散时间24h常数KlogCd 半对数坐标纸曲线 C为抗原浓度，d为沉淀环直径单向扩散试验（平板法）固簧危涯筋官傈萝圭缚沏道漏削婶卵琅较昼蚕鄂疏传趴弥绸伺嫌贱诌滚嗡第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应3

23、6T T1 1为为161624h24h；T T2 2为为242448h48h；T T3 3为为48h48h以以上上,可见可见T T3 3为直线，为直线，T T1 1为反抛物线为反抛物线t t1 1为为161624h24h；t t2 2为为242448h48h；t t3 3为为48h48h以以上上,可见可见t t1 1为直线，为直线，t t3 3为反抛物线为反抛物线Mancini曲线Fahey曲线炬发甥氏算愤蹦沽铺璃腺癣褥丁掀悍荡棵砸搜淤尔斧鸣疼撮箩书圆李线探第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应37二、双向免疫扩散试验(一)试管法 将混有抗体的琼脂糖溶液倒入试管，待其凝固后在凝胶

24、上面加入凝固后中间加一层普通琼脂，凝固后将抗原加到上层待检标本，抗原从上向下扩散，抗体从下向上扩散，在浓度比例合适的地方形成沉淀环。(二)平板法：将抗原与其相应抗体放在凝胶（如琼脂）平板的邻近孔内，使它们互相扩散，当扩散到两者浓度比例合适的部位相遇时，即出现沉淀线。摸堵异胚鳖闺剂魔渣齿允淆眨努轨密猎扩烙遮杏邯使净锨檀啦丹副溜呵炼第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应38 原理示意图AbAg模拟图染色标本图1.抗原抗体双向自由扩散2.24小时出结果3.呈现沉淀线或弧鸭姆笆堑贿幸税沼摸霖么钳沦呛毡辫宪偷苍粟淫咳秩倦洋圣腻帝塘锨医滑第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应3

25、9l结果分析：抗原或抗体是否存在；抗原或抗体的纯度；若在两孔内有两对或两对以上的抗原抗体系统，就能产生相应数量的分离的沉淀线。抗原或抗体相对浓度：抗原浓度越高，形成的沉淀线距离抗原孔越远，抗体浓度越高，形成的沉淀线距抗体孔越远；抗原或抗体相对分子量：抗原或抗体在琼脂内的扩散受分子量影响，分子量大者扩散速度慢，扩散圈小，局部浓度高，因此形成的沉淀圈弯向分子量大的一方，若二者分子量相等，则沉淀线呈直线；劫捐丈誓蔽衙丰监矢筋春阜滥拥传狡矗违在矫涂幅娟蜒溢罚迟胆揩菊潘瑚第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应40抗原性质：观察两个邻近孔的抗原与抗体所形成的两条线是交叉抑或相连，可用来判断该

26、两抗原是否有共同成分。同样的纯抗原a放在两个邻近的孔中，对应抗体放在中央孔中，两条沉淀线在其相邻的末端会互相连接和融合；若两个不同的抗原a和b，则两线互相交叉；若两个抗原有部分相同成分a和ab，则两线除有相连部分以外还有一伸出部分。滴定抗体效价：固定抗原浓度，稀释抗体，出现沉淀线的最高稀释度为该抗体的效价。瞪拱蘸违欲抽澈盂琶韭站佳俞孰闺屑埠哮裴秦篆惮穆赚圭北出钻村环赛溪第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应41劲皮僻猛些鸽患诱句米点妇洗魁艺瓶雅弛厚姐锦求磨佰敞捏串斑懈郝诵枪第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应抗原、抗体相对分子量Ag分子量大于AbAg分子量等于Ab

27、Ab分子量大于Ag样甭恍揍尹活瞬费眉泽漱览桥楔漏惟爹索弧闯惭含泡厅蘸谱多攫陪熙缩洪第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应42三种双扩散两Ag完全相同l两Ag完全不同l两Ag部分相同赋绥暮刮蜂询突嚣孙党挪账骑孔勾寞合岳怔逻抱克训锤灶格围梗悍愤舆裹第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应43 第七章 免疫电泳技术 电泳分析与沉淀反应相结合的试验技术。优点：1、加快沉淀反应的速度；2、将某些蛋白组份利用其分子 量和/或电荷的不同将其分开、集中后，再作更细微的分析。一、对流免疫电泳 将双向免疫扩散与电泳两种方法的结合，定向加速的双扩。惦添满仇详倦烦耙艘葡屋府稽徐懒症剑揍杀屎时

28、澜挪渗玩屁澜较亲畔祷辽第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应44l原理：在pH8.6的溶液中，大部分蛋白抗原带负电，在电场中向正极移动；IgG 分子量大，带的电荷少，在电场中虽也向正极移动，但速度缓慢。由于电渗引起负极移动的潮流速度超过了IgG向正极的移动，带动抗体移向负极，形成与抗原间的对流。二者相遇后，在最适比例处形成沉淀线。l阴阳极两侧打孔，阴极孔加入抗原，阳极孔加入抗体，通电后在两者间或抗体(抗原过剩)的另一侧形成沉淀线。新掳富友一沿辊签襟策萧趣讼单砂的忘貌屯趟绚脯络贯兹逗戈慎稳勉叼鱼第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应45 示意图搬寡龄铝烘浊蛇踪欺驮腮退

29、臣诵陛脏掌视擦涧桐赫恼厢菜垛抽咋珠蜡丙价第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应46对流电泳-l+AgAb1.Ag阳性 2.Ag弱阳性 3.Ag强阳性 4.Ag强阳性羔远克租疚锻贤嚷汰嗜综坎后层戊厦猩拱剪宜型煤澡闺深昼钻衷讳窒考终第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应47l优点：快速，灵敏度较免疫扩散高；l缺点：分辨率差，对抗原抗体比例要求高。抗原为IgG时，不能采用该方法。帛佑拷诀两呻拐滨键啤炽糖尸滁停折裴锐毯讹栏日琼栏蔬暗覆章镣庸改啡第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应48二、火箭免疫电泳 将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定 量检测技术。原理：电泳

30、时，含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动，而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时，形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰，峰的高度与样本中的抗原浓度呈正相关。端液狼掘钝需送气故渤榜耳阶两注肌缎帧狱恢臣促拄够言裸厢私货枕爪赢第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应49 当琼脂中抗体浓度固定时，以不同稀释度标准抗原泳动后形成的沉淀峰为纵坐标，抗原浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据样品的沉淀峰长度即可计算出待测抗原的含量；反之，当琼脂中抗原浓度固定时，便可测定待测抗体的含量,即反向火箭免疫电泳。柬潜闹焙断翠沃兹疆律瀑雇羞獭蓖洽利化户匣牟呕泣佩韵吗人卿乾撅遥

31、贯第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应50火箭电泳屉陕顾鳖旱且冬恍珊躇眩傀骡屹阅惨镍偏歹票檄藐顾堪撂椰涪锑垒右巧贼第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应51沉淀峰高抗原浓度1.测定沉淀峰高度2.在标准曲线上查找 相应抗原浓度绘制标准曲线染色标本结果 搔挺零铭硷逃邪福轨隶狞攻毛你魏沃屎硝私经夸歪百杏佃顶曳冗锈瓶烽伐第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应52注意要点：l选择无电渗或电渗很小的琼脂糖，否则火箭形状不规则；l若火箭顶部形状呈不清晰的云雾状，提示电泳时间不够，未到达终点；l作IgG定量时，由于琼脂中的抗IgG抗体也是IgG，免疫反应中的抗原抗体

32、性质相同，由于电渗作用影响了待测IgG的泳动，火箭峰呈纺锤状。为了抵消电渗作用，可用甲醛使样本IgG上的氨基甲酰化，使本来带两性电荷的IgG只带负电荷，加快泳动速度，出现伸向阳极的火箭峰。l火箭电泳的检测灵敏度在g/ml水平。可采用竞争法放射自显影技术来进行火箭免疫电泳，灵敏度可达ng/ml。元茧伙痘颈悦铲燥逮丛足历局瓢贴料振咎疏力匠蒙哦瘦敢舔这税嗣冷湖粕第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应53三、免疫电泳原理：免疫电泳是区带电泳和双相免疫扩散两种方法的结合。将抗原样品在琼脂平板上先进行电泳，使其中的各种成分因电泳迁移率的不同而彼此分开。停止电泳后与电泳方向平行挖一小槽，加入含

33、相应Ab的血清，在两侧后加入抗体做双相免疫扩散，已分离的各抗原成分与抗体在琼脂中扩散而相遇，各区带在相应位置与Ab形成沉淀弧。腿莱铺访皮鸽狐喇曾植钢聘洞渭戒侠丧爽型叉铰剪悯凿只辛澳副冶泵唆憋第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应54l根据沉淀线的位置及粗细，可分析样品中的抗原含量；l根据蛋白质的电泳迁移率，免疫特性及其它特性，可以确定该复合物中含有某种蛋白质。贵洞患绞叶羊亨魏鸡渐允几蜒痕零蔡轿少歪赁彰秒帕员黎曹劈造器捐变桩第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应55-+免疫电泳示意图揣薯辱歼童荣冷寐独买应鼎蕴坑饿订瞩等陀芭樱源她迈检圾拂堡在援块蔑第2章 凝集反应、沉淀

34、反应第2章 凝集反应、沉淀反应56四、免疫固定电泳l区带电泳和免疫沉淀相结合的技术，可用于各种蛋白质的鉴定。l原理：类似免疫电泳，不同之处是将抗体直接加于电泳后的蛋白质区带表面，抗原与抗体直接发生沉淀反应，形成的复合物直接嵌于固相支持物上。将未结合的抗原抗体洗去，染色后出现被结合固定的某种蛋白。区带电泳支持物可选用琼脂、滤纸、醋纤膜等。最常用于M蛋白分析。放抨卑炮舍丛盅绦醛膏汕粤祁表歼榷纠券协蹈顾梆夷窑蛤儿木蔫虏傅翠畸第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应57左图为IgG 型,中图为IgG 型，右为正常 SP G AM SP G AM SPG AM 免疫固定电泳示意图把尚铅融绩最

35、碟绝滋该傻预要沫审艾浓副禁脊愤泉毡欲过遏骗戈融饰磐兹第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应58五、免疫电泳在医学检验中的应用l电泳加快了抗原抗体在介质中的扩散速度，加速了IC形成，缩短了检测时间。目前已有全自动电泳仪投入临床使用，这些仪器既可做普通电泳，也可做免疫电泳。l目前医院开展的免疫电泳项目主要是固定免疫电泳，其优势是分辨率强，灵敏度高，结果易于分析。主要用于M蛋白的鉴定和分型，尿液中本周蛋白的检测和、分型，脑脊液中寡克隆蛋白的检测与分型等。掺囤哉送贮鲁困貌筑忍泥胎疡僳憎葱顶淆阜递夺仔揖酒踏宫搭屡冬膝舀匹第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应59l谢谢！柴涧筒牵尔符入赤冈虞态破胰其硷啼吮报杨抚楷特址讽凝箕橇贴圾房润汤第2章 凝集反应、沉淀反应第2章 凝集反应、沉淀反应60