简单染色实验报告.docx

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1、简单染色实验报告篇一：细菌简单染色法生物实验简单染色峰峰高中生物组适用微生物染色原理，简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方 法。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷 (酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷)，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着。染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。其它情况分析：常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。使用草酸铵结晶紫染色液，染色迅速，着色深，菌体呈紫色。一、步骤

2、 1、涂片1.取一块干净的载玻片，平放，在载玻片中央滴一小滴生理盐水；2.用接种环无菌操作从琼脂斜面上挑取适量菌苔；3.将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀并涂成薄膜。注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。2、干燥将涂好菌膜的载玻片平放在室温下自然干燥。也可用电吹风低温吹干。3、固定手持(木夹夹住)已干燥的涂有菌膜的载玻片，涂面朝上，在酒精灯火焰上通过 23 次。 原理：加热使细菌细胞的蛋 白质凝固，从而固定细菌细胞形态，并使之牢固附着在载玻 片上。注意：热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态。4、染色将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架上，滴

3、加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。染色时间：吕氏碱性美蓝染色 12min；石炭酸复红染色约 1min；草酸铵结晶紫染色约 1min。5、水洗将细菌涂片上染液倒入废液缸中；手持细菌染色涂片，置于废液缸上方，用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无色为止。注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急，过大，以免涂片薄膜脱落。6、干燥自然干燥：平放于室温，自然干燥； 吹干：用电吹风冷风或低温热风吹干；吸干：平放在一张吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细菌涂片两面水分吸干。二、配方1、吕氏碱性美蓝染液溶液 A 美蓝 0.6 克；95%乙醇 30 毫升溶液 B 氢氧化钾

4、 0.01 克；蒸馏水 100 毫升 分别配制溶液A 和B 配好后混合即可。2、石碳酸复红液：称取碱性复红 10g，研细，加 95乙醇 100ml，放置过夜，滤纸过滤。取该液 10ml，加 5石碳酸水溶液 90ml 混合，即为石碳酸复红液。再取此液 10ml加水 90ml 即为稀石碳酸复红液。3、草酸铵结晶紫染液A 液：结晶紫(crystal violet) 1g，95%酒精 20mlB 液：草酸铵(ammonium oxalate) 0.8g，蒸馏水 80ml混合 A、B 二液，静置 48 小时后使用。篇二：细菌的简单染色和革兰氏染色实验一、实验目的1.学习微生物涂片，染色的基本技术，掌握细

5、菌的单染色方法及无菌操作技术。2.巩固显微镜的使用方法。二、基本原理1.简单染色法:用单一染料对细菌进行染色的方法。此法操作简单，适用于一般形态的观察。在中性，碱性或酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，所以用碱性染料进行染色。碱性染料并不是碱，和其他染料 一样是一种盐，电离时染料离子带正电，易于带负电荷的细 菌结合而是细菌着色。带正电的染料离子可使细菌细胞染成 蓝色。通常的碱性染料除了美蓝外，还有结晶紫，碱性复红， 番红等。细菌体积较小，较透明，如未经染色常不易识别， 而经染色后与背景形成鲜明的对比，是易于在显微镜下观察。2.革兰氏染色法:将所有的细菌分成革兰氏阳性菌 G+)和革兰氏阴性菌(G-

6、)两大类，是细菌上最常用的鉴别染色法。该染色法所以将细菌分为 G+和 G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同决定的。 G-菌的细胞壁中含有较多易被乙酸溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄，交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使染色的结晶紫和碘的复合物易于渗透，结果细菌被脱色，在经复红染色后就成了红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时颜色。革兰氏染色需要四种不同的溶液，碱性染料初染液，煤染剂，脱色剂和复染液。碱性染料初染液的作用像在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色

7、的初染液一般是结晶紫。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或付着力，即已某种方式帮助染料固定在细胞上，是不易脱落，碘是常用的媒染剂。脱色剂是被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用 95%的酒精。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染剂，复染的目的是使被脱落的细胞染上不同于初染液的颜色，从而将细胞区分成 G+和 G-两大类群，常用的染色液是复红。三、器材1.活材料，培养 24 小时的大肠杆菌和葡萄球菌。2.染色液和试剂，碱性美兰，结晶紫，碘页，95%酒精，石炭酸复红，蒸馏水，乙醚-乙醇混合液，香柏油。3.器材，废液缸，洗瓶，载玻片，接种杯，酒

8、精灯，擦镜纸和显微镜。四、操作步骤1.涂片，取干净的载玻片与实验台上，在正面边角作记号，并滴一滴无菌蒸馏水与载玻片中央，灼烧接种杯，待冷却后从斜面挑取少量菌种与玻片上的水滴混均后，在载玻片上涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。2.干燥，干燥过程最好在空气中自然晒干，为了加速干燥，也可以在微小火焰上方烘干。烘干后再在火焰上方快速通过 3-4 次，使菌体完全固定在载玻片上。但不宜在高温下长时间烤干，否则急速失水会使菌体变形。3.染色，滴加草酸铵结晶紫染色 1-2min,染色液量以盖满菌膜为宜。4.水洗，倾去染液，斜置载玻片，用水冲去多余染液，直至流出的水呈无色为止。5.干燥，用微热烘干或自然晾干。

9、6.镜检，按显微镜的操作步骤观察细菌形态，及时记录，并进行形态图绘制。革兰氏染色各种细菌经革兰氏染色法染色后，能区分成两大类，一类最终染色成紫色，称为革兰氏阳性细菌 G+,另一类被染成红色，称革兰氏阴性细菌G-。五、操作步骤1.涂片，固定。同简单染色法。2.初染滴加草酸铵结晶紫染色 1-2min,水洗。3.媒染滴加革兰氏碘液，染 1-2min,水洗。4.脱色滴加体积分数为 95%的乙醇，约 45S 后水洗；或滴加体积分数为 95%的乙醇后将玻片摇晃几下即倾去乙醇，如此重复 2-3 次后即水洗。5.复染滴加沙皇液(番红)，染 2-3min,水洗并使之干燥。6.镜检同简单染色，并根据呈现的颜色判断

10、该菌属是 G+细菌还是G-细菌，也可与已知菌对照。观察时先用低倍镜观察，发现目的物后用油镜观察。六、注意事项1.涂片所用载玻片要洁净无油污迹，否则影响涂片。2.挑菌量应少些，涂片易薄，过厚重叠的菌体则不易观察清楚。3.染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应甩去玻片上的残水以免染色液被稀释而影响染色效果。4.革兰氏染色成败的关键是脱色时间时候合适，如果脱色过度，革兰氏阳性细菌也可以被脱色而被误认为是革兰氏阴性细菌。而脱色时间过短革 兰氏阴性细菌则会被误认为是革兰氏阳性细菌。脱色时间的 长短还受涂片的薄厚，脱色时玻片晃动的程度等因素的影响。篇三：显微镜的使用和简单染色一、实验目的：1.了解并掌握

11、细菌简单染色的机理及技术；2.学会用油镜观察细菌细胞的形态。二、实验原理：细菌小且透明，当把细菌悬浮于水滴内，由于菌体和背景没有显著的明暗差，用光学显微镜难以看清它们的形态结构。所以，先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用能更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。常用碱性染料进行简单染色，这是因为碱性染料电离后带有正电荷，很容易与带负电荷的菌体结合并着色。三、实验材料：1.菌种：枯草杆菌 Bacillus subtilis 、大肠杆菌 Escherichia coli、金黄色葡萄球菌 Staphyloccus aureus等培养好的细菌斜面。2.染

12、料和试剂：美蓝、石碳酸复红、无菌水、甘油。3.器材：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、洗瓶、吸水纸。四、实验步骤：1.涂片：在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴蒸馏水，用接种环以无菌操作从枯草芽孢杆菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜，涂布面积约 11.5cm2。2.干燥：室温自然干燥3.固定：手执载玻片一端，使涂菌一面向上，通过火焰 23 次。此操作也称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在玻片上。4.染色：将涂片置于水平位置，滴加结晶紫染色液（以刚好覆盖涂片薄膜为宜），染色 1min 左右。5.水洗：倾去染液，斜置载片，用自来水的细水流由载片上端流下，不得直

13、接冲洗在涂菌处，直至载片上流下的水无色为止。6.干燥：自然干燥，或用电吹风吹干，也可用滤纸吸干，注意不要檫掉菌体。7.镜检：待标本片完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，将典型部位移至视野中央，再用油镜观察。五、注意事项1.学生使用显微镜固定镜号、位置，填写使用卡，本学期一直使用本台显微镜。2.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。3.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。4.观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。5.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。6.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。7.染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。六、实验报告1.结果绘出枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的形态图，注明放大倍数、及观察到的颜色。2.思考题（任选两题）（1）使用油镜时，为什么必须用香柏油？应特别注意哪些问题？（2）油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？对同一微生物制片，用油镜观察比用低倍镜观察有何优、缺点？（3）镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？（4）涂片在染色前为什么要先进行固定？固定时应注意什么问题？