叶绿体色素提取,分离及理化性质鉴定.ppt

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1、叶绿体色素的提取、分离及理叶绿体色素的提取、分离及理化性质的鉴定化性质的鉴定 实验原理 叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇提取。分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。纸层析是其中最简单的一种。当溶剂不断地从层析滤纸上流过时，由于混合色素中各种成分在两相(即流动相和固定相)间具有不同的分配系数，它们的移动速度不同，使样品中的各种成分得到分离。材料、器材与试剂材料、器材与试剂 植物材料根据季节从市场上购买新鲜的菠菜，芹菜或油

2、菜，选取其中之一新鲜绿叶作为实验材料。也可以从校园内采集其他植物新鲜绿叶。器材大试管（20*200）、台秤、研钵、剪刀、量筒、漏斗、分液漏斗、软木塞、烧杯、新华滤纸、小试管若干、分光计、酒精灯、吸耳球、移液管、电吹风、毛细管 试剂 95%乙醇、碳酸钙、石英砂、汽油、苯、KOH、甲醇、醋酸铜、盐酸 实验步骤叶绿体色素的提取与分离叶绿体色素的提取与分离称取新鲜去大叶脉的菠菜叶片（或其他植物叶）2g，剪碎放入研钵中，加入乙醇5ml、少许CaCO3(中和细胞中的酸防止Mg2+从叶绿素中心释放)和石英砂，研磨成匀浆，再加入适量的乙醇（5-10ml），然后用漏斗过滤，即得叶绿体色素液。取准备好的滤纸条（2

3、*20cm）,将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条。用毛细管吸取叶绿体色素提取液点于滤纸的下端窄条的上方中央，注意下一次所点溶液不可过多，如色素过淡，用电吹风吹干后再重复1-2次。在大试管中加入汽油5-10ml(或其它层析液，如石油醚:丙酮:苯为20:2:1的混合溶液可作层析液)。然后滤纸条上端固定在软木塞上，插入试管内，使窄条进入溶液中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处（或试管外套一黑纸套）。经0.5-1h后，观察分离后色素带的分布。最上端橙黄色的是胡萝卜素，其次为叶黄素，于下面蓝绿色为叶绿素a，最后的黄绿色为叶绿素b.胡萝卜

4、素叶黄素叶绿素a叶绿素b胡萝卜 素叶绿素b叶绿素a叶黄素叶绿体色素的理化性质叶绿体色素的理化性质叶绿素的荧光现象：取叶绿体色素提取液少许于1支试管中，用反射光和透射光观察提取液的颜色有何不同，反射光下观察到的提取液颜色即为叶绿素产生的荧光颜色。左：透射光下右：反射光下光对叶绿素的破坏作用：取叶绿体色素提取液少许，分装两支试管中，一支放在黑暗处（或用黑纸套包裹），另一支放在强光下（阳光下），经过2-3h后，观察两支试管中溶液的颜色有何不同？黄色素（胡萝卜素和叶黄素）与绿色素（叶绿素）的分离：取叶绿体色素提取液5ml,加到盛有2ml KOH甲醇溶液的分液漏斗中，摇动分液 漏 斗，加 入1mlDW，再 加 入5ml苯，轻轻摇动分液漏斗，静置片刻，溶液即分为两层。上层是黄色素，下层是绿色素，分别保存于试管中。类胡萝卜素叶绿素观察色素溶液的吸收光谱：a.调节分光计，观察日光的光谱。b.观察下层绿色部分的吸收光谱c.观察上层黄色部分的吸收光谱。类胡萝卜素吸收光谱叶绿素吸收光谱