【课件】2023届高三生物一轮复习课件：发酵工程.pptx

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1、发酵工程发酵工程探索发酵工程在生活中的应用探索发酵工程在生活中的应用链接高考链接高考课标要求：课标要求：概念概念3 3 发酵工程利用微生物的特定功能规模化生产对人类有用的产品发酵工程利用微生物的特定功能规模化生产对人类有用的产品3.13.1获得纯净的微生物培养物是发酵工程的基础获得纯净的微生物培养物是发酵工程的基础 3 3.1 1.1 1阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提 3.13.1.2 2阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技

2、术 3.1.33.1.3举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物 3.1.43.1.4概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法 3.1.53.1.5概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法3.23.2发酵工程为人类提供多样的生物产品发酵工程为人类提供多样的生物产品 3.2.1 3.2.1举例说明日常生活中的某些食品是运用传统发酵技术生产的举例说明日常生活中的

3、某些食品是运用传统发酵技术生产的 3.22 3.22阐明发酵工程利用现代工程技术及微生物的特定功能，工业化生产人类所需产品阐明发酵工程利用现代工程技术及微生物的特定功能，工业化生产人类所需产品 3.2.33.2.3举例说明发酵工程在医药、食品及其他工农业生产上有重要的应用价值举例说明发酵工程在医药、食品及其他工农业生产上有重要的应用价值核心素养考察：核心素养考察：理解各菌种用于发酵的原理理解各菌种用于发酵的原理分析培养基的成分及作用，比较微生物纯培养两种方法的异同分析培养基的成分及作用，比较微生物纯培养两种方法的异同设计实验探究微生物培养的条件，培养实验探究能力设计实验探究微生物培养的条件，培

4、养实验探究能力概述发酵工程，举例说明发酵工程在生产上有重要的应用价值概述发酵工程，举例说明发酵工程在生产上有重要的应用价值（20222022年山东高考年山东高考2020）.啤酒的工业化生产中，大麦经发芽、焙烤、碾磨、糖化、啤酒的工业化生产中，大麦经发芽、焙烤、碾磨、糖化、蒸煮、发酵、消毒等工序后，最终过滤、调节、分装。下列说法正确的是（蒸煮、发酵、消毒等工序后，最终过滤、调节、分装。下列说法正确的是（）A.A.用赤霉素处理大麦，可使大麦种子无须发芽就能产生用赤霉素处理大麦，可使大麦种子无须发芽就能产生-淀粉酶淀粉酶B.B.焙烤是为了利用高温杀死大麦种子胚并进行灭菌焙烤是为了利用高温杀死大麦种子

5、胚并进行灭菌C.C.糖浆经蒸煮、冷却后需接种酵母菌进行发酵糖浆经蒸煮、冷却后需接种酵母菌进行发酵D.D.通过转基因技术可减少啤酒酵母双乙酰的生成，缩短啤酒的发酵周期通过转基因技术可减少啤酒酵母双乙酰的生成，缩短啤酒的发酵周期ACDACD【学习目标】【学习目标】1.1.根据情境材料分析自制啤酒和发酵工程酿制啤酒的异同，归纳传统发酵技术和发根据情境材料分析自制啤酒和发酵工程酿制啤酒的异同，归纳传统发酵技术和发酵工程的区别和联系，构建思维导图，厘清发酵工程的发展脉络。酵工程的区别和联系，构建思维导图，厘清发酵工程的发展脉络。2.2.构建酵母菌纯培养过程模型，总结微生物的获取、纯培养及计数的一般方法及

6、步构建酵母菌纯培养过程模型，总结微生物的获取、纯培养及计数的一般方法及步骤，说明微生物培养技术是发酵工程发展的基础。骤，说明微生物培养技术是发酵工程发展的基础。3.3.举例说明发酵工程在食品工、医药工、农牧业方面的应用。举例说明发酵工程在食品工、医药工、农牧业方面的应用。先创造条件让毛先创造条件让毛霉生长霉生长再加盐控制毛再加盐控制毛霉的生长霉的生长 控制毛霉的生长，控制毛霉的生长，同时增加风味和口感同时增加风味和口感前期发酵前期发酵后期发酵后期发酵让让豆豆腐腐上上长长出出毛霉毛霉加盐腌制加盐腌制加卤汤装瓶加卤汤装瓶密封腌制密封腌制（一）腐乳制作流程制作原理:蛋白质蛋白酶小分子的肽+氨基酸脂肪

7、脂肪酶甘油+脂肪酸一.传统发酵技术食盐的作用：食盐的作用：（1）析出豆腐水分）析出豆腐水分 （2）调味）调味（3）食盐又能防止毛霉继续生长和污染的杂菌繁殖）食盐又能防止毛霉继续生长和污染的杂菌繁殖卤汤中的酒卤汤中的酒可抑制微生物的生长可抑制微生物的生长（二）制作泡菜1.菌种：乳酸菌（原核生物）来源：植物体表面2.发酵原理：在无氧的情况下能将葡萄糖分解成乳酸3.制作流程及注意事项C6H12O6 2C3H6O3（乳酸）+能量酶质量分数5-20；煮沸（除氧；杀灭盐水中其他细菌），冷却待用八成满（初期酵母菌较活跃，产物有CO2，装满容易使发酵液溢出）封坛（坛盖边沿水槽中注满水，保证坛内乳酸菌的发酵所需

8、的无氧环境）腌制条件:温度不能过高温度不能过高食盐含量不能过低食盐含量不能过低腌制时间不能过短腌制时间不能过短 细菌污染大量繁殖后，细菌污染大量繁殖后，亚硝酸盐含量增加亚硝酸盐含量增加腌制过程中，亚硝酸盐含量先增多，后减少。制作泡菜的注意事项思考：为什么含有抗生素的牛奶不能发酵为酸奶？思考：为什么含有抗生素的牛奶不能发酵为酸奶？牛奶发酵为酸奶主要依靠乳酸菌的发酵作用，而牛奶发酵为酸奶主要依靠乳酸菌的发酵作用，而抗生素能够杀死或抑制乳酸菌抗生素能够杀死或抑制乳酸菌。认识亚硝酸盐测定亚硝酸盐的含量测定亚硝酸盐的含量1 1、测定方法：、测定方法：比色法比色法2 2、测定原理：、测定原理：在在盐酸酸化

9、盐酸酸化条件下，条件下，亚硝酸盐亚硝酸盐与与对氨基苯磺酸对氨基苯磺酸发生发生重氮化重氮化反应后，反应产反应后，反应产物再与物再与N-1N-1萘基乙二胺盐酸盐萘基乙二胺盐酸盐结合生成结合生成玫瑰红玫瑰红溶液。将经过反应显色后溶液。将经过反应显色后的待测样品与标准液的待测样品与标准液比色比色，即可计算出样品中的亚硝酸盐含量。，即可计算出样品中的亚硝酸盐含量。（三）果酒和果醋的制作1.1.制作原理制作原理1 1、酵母菌：真核、出芽生殖、异养兼性厌氧、酵母菌：真核、出芽生殖、异养兼性厌氧、2828出出出出芽芽芽芽生生生生殖殖殖殖2 2、原理：、原理：C6H12O6 2C2C2 2H H5 5OH+2C

10、OOH+2CO2 2+能量能量能量能量酶酶果酒果醋1 1、醋酸菌：原核、分裂生殖（二分裂）、醋酸菌：原核、分裂生殖（二分裂）异养异养好氧好氧、30-3530-35二二二二分分分分裂裂裂裂生生生生殖殖殖殖2 2、原理：、原理：氧气、糖源充足时氧气、糖源充足时氧气、糖源充足时氧气、糖源充足时酶酶 C6H12O6+2O+2O2 2 2CH3COOH（醋酸）（醋酸）+2H+2H2 2O+2O+2COO2 2+能量能量能量能量氧气充足、糖源不充足时氧气充足、糖源不充足时氧气充足、糖源不充足时氧气充足、糖源不充足时C2H5OH+O2 CH3COOH（醋酸）（醋酸）+H2O+能量能量酶酶醋酸菌将乙醇变为乙醛

11、，再将乙醛变为醋酸器具消毒 体积分数为70%的酒精消毒冲洗 先清洗后去除枝梗和腐烂的籽粒，从而避免除去枝梗时，引起葡萄 损坏，增加被杂菌感染的机会。榨汁装瓶 留大约1/3的空间：有利于酵母菌有氧呼吸，快速繁殖 防止产生的CO2使发酵液溢出 防止瓶内压强过大导致发酵瓶炸裂酒精发酵 18-30；每隔12h左右将瓶盖拧松一次（排气）此后再拧紧瓶盖乙酸发酵 30-35；打开瓶盖，盖上一层纱布（提供氧气）2.制作流程及注意事项思考：制作果酒时除了酵母菌是否还有其他微生物生长，如果有，如何避免它们对果酒发酵的影响？制作果醋时，酵母菌是否还会持续发酵？发酵技术发酵技术果酒发酵果醋发酵腐乳发酵泡菜发酵所用菌种

12、酵母菌酵母菌醋酸菌主要为毛霉主要为毛霉乳酸菌生物学分类生物学分类真核生物真核生物原核生物真核生物真核生物原核生物代谢类型异养兼性厌氧异养兼性厌氧异养需氧异养需氧异养需氧异养厌氧适宜温度适宜温度181830 30 3035 151518 18 室温主要生殖方式出芽生殖出芽生殖二分裂生殖孢子生殖孢子生殖二分裂生殖主要用途主要用途酿酒、发面酿酒、发面酿醋制作腐乳制作腐乳制作酸奶、泡菜几种传统发酵技术所用菌种比较（一）、（一）、培养基的类型培养基的类型划分标准划分标准培养基种类培养基种类特点特点用途用途物理物理性质性质液体培养基液体培养基不加凝固剂不加凝固剂工业生产工业生产固体培养基固体培养基加加凝固

13、剂凝固剂，如琼脂如琼脂微生物分离、鉴定、微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种活菌计数、保藏菌种二、微生物的培养技术划分标准划分标准培养基种类培养基种类特点特点用途用途化学化学成分成分天然培养基天然培养基含化学成分不明确含化学成分不明确的天然物质（的天然物质（如：牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基）工业生产工业生产合成培养基合成培养基培养基成分明确培养基成分明确(如查氏培养基)分类、鉴别分类、鉴别划分划分标准标准培养基培养基种类种类特点特点用途及几种常见培养基用途及几种常见培养基用途用途基础培基础培养基养基含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基选择培选择培养基

14、养基允许允许特定种类特定种类的微生的微生物生长，同时物生长，同时抑制或抑制或阻止其他微生物阻止其他微生物生长生长培养、分离出特定微生物，如培养酵母菌和霉培养、分离出特定微生物，如培养酵母菌和霉菌（加入菌（加入青霉素青霉素），培养金黄色葡萄球菌（加），培养金黄色葡萄球菌（加入高浓度入高浓度食盐食盐），），以尿素作为唯一氮源，培养分解尿素的细菌，不添加氮源，培养固氮微生物鉴别培鉴别培养基养基根据微生物的代谢特根据微生物的代谢特点，在培养基中加入点，在培养基中加入某种指示剂或化学药某种指示剂或化学药品品鉴别不同种类的微生物，如用鉴别不同种类的微生物，如用伊红美蓝培养基伊红美蓝培养基鉴别大肠杆菌鉴别大

15、肠杆菌(带有金属光泽的紫黑色菌落带有金属光泽的紫黑色菌落)；用；用酚红指示剂酚红指示剂鉴别尿素分解菌（变红）；鉴别尿素分解菌（变红）；刚果红刚果红培养基培养基鉴别纤维素分解菌（透明圈）鉴别纤维素分解菌（透明圈）培养基的营养构成（一）碳源无机碳源：有机碳源：CO2、HCO3-等，适于自养生物。葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等，适于异养生物。（二）氮源无机氮源：有机氮源：N2、NH4、NH3、NO3-等，适于固氮微生物牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等（三）无机盐KH2PO4、K2HPO4、（NH4）2SO4、MgSO4、CaCl2、Ca(NO3)2、NaCl、FeSO4等。（四）水（五）pH、特殊营养物质、

16、氧气等培养的微生物需要满足的其他要求乳酸杆菌培养基中添加维生素霉菌将pH调至酸性细菌将pH调至中性或弱碱性厌氧微生物需要提供无氧条件 消毒：较为温和理化生方法，杀死物体表面或内部部分微生物 灭菌：强烈的理化方法，杀死物体内外所有微生物（包括芽孢、孢子）（二）（二）、无菌技术、无菌技术1.煮沸100煮沸5 6min可以杀死微生物细胞和部分芽孢 3.化学药物 酒精擦拭双手；氯气消毒水源；石炭酸、煤酚皂溶液等2.巴氏消毒法6265消毒30min或8090处理30s-1min；适用于不耐高温的液体，如牛奶、啤酒。4.紫外线消毒 适用于空气及物体表面消毒方法160170、23h；适用于耐高温、需保持干燥

17、的物品（吸管、培养皿）和金属用具等2.干热灭菌1.湿热灭菌（高压蒸汽灭菌效果最好）100KPa、121、1530min；适用于培养基灭菌。注意：灭菌开始前排净锅内冷空气，否则锅内温度达不到121压力降到0时才能打开，否则培养基会冲出锥形瓶，造成污染灭菌方法3.灼烧灭菌在酒精灯火焰充分燃烧层上灼烧，适用于接种环、接种针、接种钩等金属用具以及试管口、三角瓶口灭菌。三、酵母菌的纯培养、酵母菌的纯培养 分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体就是菌落。菌落具有大小、形状、光泽度、颜色、透明度等基本特征，是鉴定菌种的重要依据。纯培养的方法：平板划线法、稀释涂

18、布平板法纯培养的方法：平板划线法、稀释涂布平板法（1 1）配置培养基）配置培养基马铃薯琼脂培养基马铃薯琼脂培养基:去皮马铃薯去皮马铃薯200g200g，葡萄糖（或蔗糖），葡萄糖（或蔗糖）20g20g，琼脂，琼脂1520g1520g，水，水1000mL1000mL（2 2）灭菌）灭菌培培养养基基装装入入锥锥形形瓶瓶，加加棉棉塞塞（防防止止污污染染和和挥挥发发），包包上上牛牛皮皮纸纸扎扎紧紧（灭灭菌菌时时避避免免水水蒸蒸气气浸浸湿湿棉棉塞塞，取出培养基时，隔绝空气中杂菌）取出培养基时，隔绝空气中杂菌），高压蒸汽灭菌；培养皿，高压蒸汽灭菌；培养皿5 58 8套一包，放入干热灭菌箱内灭菌套一包，放入干

19、热灭菌箱内灭菌1.1.制备培养基制备培养基（一）方法步骤（一）方法步骤（3 3）倒平板）倒平板培养基冷却至约培养基冷却至约5050左右时，在酒精灯火焰附近倒平板左右时，在酒精灯火焰附近倒平板 瓶口灼烧灭菌拔出棉塞倒入培养基盖上皿盖冷却倒置（减少水分蒸发；防止形成水滴落到培养基上影响菌落形态）2.接种和分离酵母菌对照组：未接种的培养基（用于检验培养基的灭菌是否成功）平板划线问题讨论（1）、为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种

20、直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到由单个细菌形成的菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。（2）、在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？避免接种环温度太高，杀死菌种。（3）.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？线条末端细菌的数目比线条起始处要少，这样能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。（4）

21、.平板划线时不能划破培养基的原因？3.培养酵母菌平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28左右的恒温培养箱中培养2428h。探究学习探究学习1.1.稀释涂布平板法稀释涂布平板法（1）稀释涂布平板法的操作步骤是什么？（2）操作过程中的注意事项有哪些？2.2.微生物的数量测定微生物的数量测定（1）微生物的数量测定有哪些方法？（2）为了保证结果更为准确有哪些注意事项？（3）统计结果是否有误差？3.3.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 （1）选择培养基的配方与一般培养基有什么不同？（2）如何设置对照组证明培养基的制备是否有杂菌污染以及

22、选择培养基是否具有选择作用？实验过程设计2.培养基制备（配制、灭菌、倒平板）分别制备以尿素为唯一氮源的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基（几乎适应所有微生物）。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 对照组：（1）未接种的选择培养基（用于检验选择培养基的灭菌是否成功）（2）接种牛肉膏蛋白胨培养基（用于对比证明选择培养基的选择作用）1.土壤取样（取土样用的小铁铲和盛土样的信封等用具在使用前都要灭菌，铲去表层土）（二）微生物的选择培养和计数3.土样稀释（稀释范围选取宽泛11031107倍，每一次从试管中吸取稀释液前都要充分摇匀）4.平板涂布（每个稀释浓度要涂布至少3个选择培养

23、基和1个牛肉膏蛋白胨培养基，实验时要对培养皿作好标记，注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。）101102103104105106稀释涂布平板法：先将菌液进行系列梯度稀释后涂布平板，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单菌落，实现菌种的纯培养。稀释涂布平板法将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布6.菌落计数稀释涂布平板法：选用菌落数30-300的平板（数值偏小，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到一个菌落）显微镜直接计数：细菌计数板或血细胞计数板（数值偏大，因为死菌也被计数）5.微生物培养与观察（每隔24h统计一

24、次菌落数，选取菌落数目稳定时的记录作为结果）7.实验结果分析鉴别：酚红指示剂，变红的是尿素鉴别：酚红指示剂，变红的是尿素分解菌分解菌刚果红刚果红鉴别纤维素分解菌鉴别纤维素分解菌，有透明，有透明圈的是圈的是纤维素分解菌纤维素分解菌每克样品中的菌株数=某一稀释度下平板上生长的平均菌落数目涂布平板时所用稀释液的体积稀释倍数四、发酵工程的基本环节一般包括：菌种的选育，一般包括：菌种的选育，扩大培养，扩大培养，培养基的配制、灭菌，培养基的配制、灭菌，接种、发酵，接种、发酵，产品的分离、提纯等方面。产品的分离、提纯等方面。发酵工程的基本环节选育菌种:可以从自然界中筛选可以从自然界中筛选,也也可通过诱变育种

25、或基因工程获得可通过诱变育种或基因工程获得扩大培养大培养发酵罐内发酵:发酵工程的中心环节。在了发酵工程的中心环节。在了解发酵进程的同时解发酵进程的同时,还要控制发酵条件。如还要控制发酵条件。如环境条件不仅会影响微生物的生长繁殖环境条件不仅会影响微生物的生长繁殖,而而且会影响微生物代谢物的形成且会影响微生物代谢物的形成接种灭菌灭菌:不能有杂菌污染。如在不能有杂菌污染。如在青霉素生产过程中如果污染青霉素生产过程中如果污染了杂菌了杂菌,某些杂菌会分泌青霉某些杂菌会分泌青霉素酶将青霉素分解掉素酶将青霉素分解掉分离、提纯产物:(1)(1)若产品是微生物本身若产品是微生物本身,可采用过滤、沉淀等方法可采用

26、过滤、沉淀等方法;(2)(2)若产品是代谢物若产品是代谢物,可根据产物性质采取适当的措施可根据产物性质采取适当的措施获得产品 中心中心环节环节电动机排气管pH计冷却水排出口冷却夹层发酵液搅拌叶轮生物传感器装置空气入口放料管阀门培养物或营养物质的加入口观察孔取样管温度传感器和控制装置冷却水进入口发酵罐内发酵中心中心环节环节在发酵过程中，要随时检测培养液中的微生物数量、产物浓度等，以了解发酵进程。还要及时添加必需的营养组分，要严格控制温度、pH和溶解氧等发酵条件。环境条件不仅会影响微生物的生长繁殖，而且会影响微生物代谢物的形成。如谷氨酸的发酵生产：在中性和弱碱性条件下会积累谷氨酸；在酸性条件下则容

27、易形成谷氨酰胺和N-乙酰谷氨酰胺。发酵罐示意图各环节需要注意的地方环节目的目的菌种菌种选育育扩大培养大培养培养基的配制培养基的配制灭菌菌产品的分离、提品的分离、提纯性状优良菌种可从性状优良菌种可从自然界自然界筛选，也可通过筛选，也可通过诱变育种诱变育种或或基因工程基因工程育种获得。育种获得。工业发酵罐体积大，接种菌种总体积大。发酵前需对菌种扩大培养。工业发酵罐体积大，接种菌种总体积大。发酵前需对菌种扩大培养。选原料制备培养基。生产实践中，培养基配方要经过反复实验才能确定。选原料制备培养基。生产实践中，培养基配方要经过反复实验才能确定。发酵工程所用大多为单一菌种，有杂菌污染影响产量，培养基和设备

28、需严格灭菌现代发酵工程的大型发酵罐有计算机控制系统，能对温度、PH、溶解氧、罐压、通气量、搅拌、泡沫和营养进行监测和控制。还可以进行反馈控制，使发酵全过程处于最佳状态。发酵工程的发酵工程的中心环节中心环节，发酵过程中，要随时检测培养液中微生物数量、产品浓度等，以了解，发酵过程中，要随时检测培养液中微生物数量、产品浓度等，以了解发酵进程发酵进程。还要及时添加必需的营养组分，严格控制温度、。还要及时添加必需的营养组分，严格控制温度、PHPH和溶解氧等发酵条件。环境条和溶解氧等发酵条件。环境条件不仅影响微生物件不仅影响微生物生长繁殖生长繁殖，还影响微生物，还影响微生物代谢物的形成代谢物的形成。如果发

29、酵产品是微生物细胞本身，可在发酵结束后，采用过滤、沉淀方法将菌体分离和干燥，即可得到产品。如果产品是代谢物，可据产物性质采取适当提取、分离纯化措施来获得产品。接种发酵罐发酵啤酒的工业化流程 发芽发芽焙烤焙烤碾磨碾磨糖化糖化蒸煮蒸煮发酵发酵主发酵消毒消毒终止终止后发酵完成酵母菌的繁殖，大部分糖的分解和代谢物的生成。完成酵母菌的繁殖，大部分糖的分解和代谢物的生成。主发酵结束后，发酵液还不适合饮用，要在低温、密闭的环境下主发酵结束后，发酵液还不适合饮用，要在低温、密闭的环境下 储存一段时间进行后发酵，这样才能形成澄清、成熟的啤酒。储存一段时间进行后发酵，这样才能形成澄清、成熟的啤酒。课前背诵课前背诵1.1.微生物纯培养的两种方法；接种和分离的方法微生物纯培养的两种方法；接种和分离的方法2.2.培养基的分类，重点记按照培养基的分类，重点记按照用途用途划分划分3.3.消毒和灭菌的具体方法及适用对象消毒和灭菌的具体方法及适用对象4.4.平板划线法平板划线法为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？5.5.微生物数量测定的两种方法微生物数量测定的两种方法 误差及原因误差及原因