【公开课】微生物的基本培养技术课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

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1、第第1 1章章 第第2 2节节发酵工程发酵工程微生物的基本培养技术微生物的基本培养技术思考讨论-从社会中来P9经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，在经过发酵就可以制成酸奶，由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶，自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事件屡见不鲜，主要原因是制作过程中有杂菌混入。解析：应做好无菌处理，控制发酵条件，避免杂菌混入。微生物培养条件：提供合适的营养和环境条件确保其它微生物无法混入培养基培养基无菌技术无菌技术微生物的基本培养技术纯培养纯培养1.培养基1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质。2)种类:（按物理性

2、质）培养基的配制加凝固剂琼脂液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基半固体培养基半固体培养基（用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物营养）分类标准培养基种类培养基特点作用物理性质固体培养基加凝固剂，如琼脂微生物的分离与鉴定，活菌计数，保藏菌种半固体培养基 容器放倒不致流出，剧烈震动则破散观察微生物的运动、分类鉴定液体培养基不加凝固剂用于扩大培养、工业生产功能选择培养基根据某种微生物的特殊营养要求配置选择分离鉴别培养基加入能与目的菌的代谢产物发生显色反应的指示剂鉴定成分来源天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基用已知的化学物质配制分类鉴定培养基的配制培养基的配制3)营养成

3、分：水、无机盐、碳源、氮源，此外还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的需求。营养要素来源功能碳源无机碳源 CO2、NaHCO3等含碳无机物构成细胞物质和一些代谢产物；有机碳既是碳源又是能源有机碳既是碳源又是能源有机碳源牛肉膏、糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油等氮源无机氮源 N2、NH3，氨盐、硝酸盐等将无机氮合成含氮的代谢产物有机氮源 蛋白胨、尿素、氨基酸等合成蛋白质、核酸和含氮的代谢废物*自养型微生物以无机营养为主，异养型微生物以有机营养为主；MS培养基培养基的配制组分分含量含量牛肉膏牛肉膏5g蛋白蛋白胨10gNaCl5gH2O定容至定容至1000ml牛肉膏蛋白胨培养基上表培养基培

4、养的微生物类型？表中营养成分共有几类？(1)微生物培养基是否都需要人工添加碳源或氮源？培养自养型微生物时不需加入碳源，分离自生固氮菌时不需加入氮源。培养自养型微生物时不需加入碳源，分离自生固氮菌时不需加入氮源。(2)所有碳源和氮源都可提供能量？有机碳源和有机氮源是异养微生物的能源物质。有机碳源和有机氮源是异养微生物的能源物质。(3)所有微生物的能源都是有机碳源？自养微生物的碳源一般是自养微生物的碳源一般是COCO2 2 光能自养微生物的能源是光能；化能自养微生物的能源是化学物质光能自养微生物的能源是光能；化能自养微生物的能源是化学物质(4)琼脂是一种多糖，是否能说明所有固体培养基都含有机碳源？

5、不能，绝大多数微生物并不能利用琼脂作碳源不能，绝大多数微生物并不能利用琼脂作碳源培养基的配制营养要素来源功能特殊营养生长因子(生长必不可少的微量有机物)维生素、氨基酸、碱基酶和核酸的组成成分;参与代谢过程中的酶促反应培养基的配制培养乳酸杆菌时,在培养基中添加_。维生素培养基的配制4)培养基特殊需求:(1)培养霉菌时,将培养基调至_。(2)培养细菌时,将培养基调至_。(3)培养厌氧微生物时,需要提供_。酸性中性或弱碱性无氧的条件（1）无菌技术的操作对象 实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接

6、触。注意：注意：为了避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净为了避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行。工作台并在酒精灯火焰附近进行。无菌技术类型类型适用范围适用范围操作方法操作方法消消毒毒灭灭菌菌较为较为温和温和理理化化或生物或生物方方法，杀死法，杀死部部分微生物分微生物（不不包括芽包括芽孢、孢子）孢、孢子）强烈强烈的理化的理化方法，杀死方法，杀死所有微生物所有微生物（包括（包括芽孢、芽孢、孢子孢子）煮沸消毒法煮沸消毒法100 100 煮沸煮沸5 56 min6 min巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高温的液体不耐高温的液体626265 65 煮煮30 min3

7、0 min或或80-90 80-90 煮煮30s-1 min30s-1 min化学药物化学药物如用如用70%酒精擦拭双手、酒精擦拭双手、用氯气消毒水源用氯气消毒水源紫外线紫外线紫外线照射紫外线照射30 min30 min灼烧灭菌灼烧灭菌接种的接种的金属工具金属工具、接种、接种时用的时用的试管口试管口或或瓶口瓶口等等直接在酒精灯火焰的充分燃烧直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧层灼烧干热灭菌干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物耐高温、需要保持干燥的物品品,如如玻璃器皿和金属用具玻璃器皿和金属用具等等物品放入干热灭菌箱物品放入干热灭菌箱,160,160170 170 加热加热2 23h3h湿热灭菌湿热灭菌

8、培养基培养基等等高压蒸高压蒸汽汽灭菌锅内灭菌锅内,100,100 kPa,kPa,温度温度121 121,15,1530 30 minmin接种室、接种箱，超净工作台接种室、接种箱，超净工作台生物活体、水源等生物活体、水源等火焰充分燃烧层火焰充分燃烧层无菌技术在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物获得纯培养物的过程就是纯培养纯培养步骤：包括配置培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。微生物的纯培养菌落采用平板划线法和稀释涂布平板法，能将单个微生物分散在固体培养基上之后，经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖

9、而形成的菌落。酵母菌的纯培养分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体原理制备培养基1）配制培养基称取去皮的马铃薯200g切成小块加水1000mL，加热煮沸至马铃薯软烂用纱布过滤滤液中加入20g葡萄糖，1520g琼脂用蒸馏水定容至1000mL得到滤液酵母菌的纯培养调节培养基的pH马铃薯琼脂培养基将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞包上牛皮纸，并用皮筋勒紧压力100kPa、温度为121的条件下，灭菌15 30min取5 8套培养皿培养皿叠成一束用几层牛皮纸包紧放入干热灭菌箱内，160 170灭菌2h酵母菌的纯培养制备培养基2）灭菌

10、拔出锥形瓶的棉塞拔出锥形瓶的棉塞将瓶口迅速通过火焰将瓶口迅速通过火焰用拇指和食指将培养皿打开用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（培养基（10 20mL）倒入）倒入培养皿，立即盖上皿盖。培养皿，立即盖上皿盖。等待培养基冷却凝固后，等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒转过来放置将培养皿倒转过来放置待培养基冷却至50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。倒置平板目的：防止冷凝水滴落在培养基上引发污染。倒置平板目的：防止冷凝水滴落在培养基上引发污染。酵母菌的纯培养制备培养基3）倒平板灼烧灭菌1.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能

11、用来培养微生物吗？为什么？最好不要用这个平板培养微生物。最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。将所倒平板放入将所倒平板放入3737的恒温箱中培养的恒温箱中培养12h12h24h24h，观察是否有菌落存在以确，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。定是否被污染或灭菌是否彻底。3.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？2.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？既可以防止培养基表面的水分挥发；既可以防止培养基表面的水分挥发；又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造

12、成污染。酵母菌的纯培养平板划线法:通过接种环在固体培养基表面连续划线操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。工具：接种环酵母菌的纯培养接种和分离培养基1）方法金属接种环灼烧灭菌酵母菌的纯培养2）操作(1)灼烧接种环后,要冷却后才能进行操作,以免温度太高杀死菌种。(2)第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始,能使微生物的数目随着划线次数的增加而逐渐减少,最终得到由单个细胞繁殖而来的菌落。(3)划线用力大小要适当,防止用力过大将培养基划破。(4)最后一次的划线不要与第一次的划线相连。酵母菌的纯培养灼烧时期目的第一次操作(取菌种前)杀死接种环上原有的微生物,避免污染培养物每次划线之前杀

13、死上次划线后接种环上残留的菌种,使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端,使每次划线菌种数目减少划线结束杀死接种环上残存的菌种,避免微生物污染环境和感染操作者酵母菌的纯培养3）几次灼烧的目的 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28左右(培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异)的恒温培养箱中培养24 48h。酵母菌的纯培养培养酵母菌培养未接种的培养基的目的？检查培养基制备是否合格。未接种的培养基表面若有菌落生长,则说明培养基被污染,应该重新制备;若无菌落生长,则说明未被污染。酵母菌的纯培养在接种酵母菌的培养基上可观察到独立的菌落,这些菌落在颜色、形状和大

14、小上相似,酵母菌菌落一般表面光滑,多呈乳白色。若在培养基中观察到不同形态的菌落,原因可能是菌液不纯,混入其他杂菌,或在实验操作过程中被杂菌污染。结果分析与评价酵母菌的纯培养果酒中酵母菌的分离与计数2019版_哔哩哔哩_bilibili某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为 210 r/min，230 r/min和250 r/min。培养时间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。请分析回答下列问题。（1）摇床转速不同,意味着培养条件有什么不同？意味着培养液中02含量不同。酵母菌的纯培养某生物兴趣小组将从葡萄皮

15、上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为 210 r/min，230 r/min和250 r/min。培养时间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。请分析回答下列问题。酵母菌的纯培养（2）从图中数据你可以得出什么结论?其原因是什么?培养液中02含量越高,酵母菌种群密度越大。某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为 210 r/min，230 r/min和250 r/min。培养时间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。请分析回答下列问题。酵母菌的纯培养（3）为什么培养8h后，其中2个锥形瓶中酵母菌的种群密度基本达到稳定?这时候已经达到了环境容纳量。