【课件】动物细胞工程课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

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1、1907年哈里森用一滴淋巴液成功培养了蝌蚪的神经元，首创了动物组织体外培养法1958年斯图尔德等发现胡萝卜的体细胞可以分化为胚，为细胞全能性理论提供了强有力的支持。1998年汤姆森和吉尔哈特获得可体外培养的人胚胎干细胞2006年山中伸弥获得诱导多能干细胞1975年米尔斯坦和科勒获得能稳定遗传的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。1971年卡森诱导烟草原生质体融合，培育出第一株体细胞杂交植物1960年科金用真菌的纤维素酶分解番茄根的细胞壁，成功获得了原生质体。1996年世界上第一只体细胞克隆羊多莉诞生，随后多种克隆动物相继问世。2017年我国科学家首次培育了体细胞克隆猴。2.2 动物细胞工程（第2课时）白

2、菜细胞紫甘蓝 细胞去壁B原生质体A原生质体正在融合的原生质体原生质体融合脱分化杂种细胞愈伤组织再生壁再分化再生出小植株去壁白菜-紫甘蓝动物细胞之间能不能融合，他们到底是怎样融合的？复习导入实例1：自然条件受精作用受精作用19701970年人工条件下的人年人工条件下的人-鼠细胞融合实验鼠细胞融合实验实例2：人工诱导二、动物细胞融合技术1、概念：指使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。4、结果：形成形成杂交细胞。即形成具有即形成具有原来两个或多个细胞原来两个或多个细胞遗传信息遗传信息的单核细胞。的单核细胞。2、原理：细胞膜的流动性3、诱导方式物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)

3、融合法生物法：灭活病毒诱导法突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。5、意义：（1）成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种的重要手段；（2）用于制造单克隆抗体。6、应用：二、动物细胞融合技术当堂巩固1.细胞融合在自然状态条件下和现代生物技术领域均可实现，具有广泛应用。如图表示细胞融合的过程。下列叙述正确的是（）A、由a和b形成c的过程必须依赖细胞膜的流动性B、植物细胞工程中诱导c形成的方法有物理法、化学法和生物法C、形成的d-定具有a和b的遗传物质，可以不进行筛选D、在细胞工程中，d最终都可以发育成个体A三、单克隆抗体及其应用1、传统抗体的获得：（1）方法：）方法：向动物体内反复注

4、射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。产量低、纯度低、特异性差。（2）缺陷：）缺陷：三、单克隆抗体及其应用 体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上每个B淋巴细胞只分泌一种特异性的抗体（3）存在的问题：如何获得大量、单一的抗体？（4）需解决问题：（5）解决思路：B淋巴细胞的特点：一种B淋巴细胞（浆细胞）只能产生一种抗体，但不能无限增殖骨髓瘤细胞的特点：能无限增殖，但不能产生抗体杂交瘤细胞的特点：既能迅速大量增殖，又能产生抗体将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合为杂交瘤细胞制备单克隆抗体三、单克隆抗体及其应用向小鼠注射特定的抗原培养骨髓瘤细胞多种B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱诱导导融融合合未融

5、合的细胞多种杂交细胞（包括B-B细胞、瘤-瘤细胞、杂杂交瘤细胞交瘤细胞）第第1 1次次筛筛选选杂杂交交瘤瘤细细胞胞（瘤-B1,瘤-B2,瘤-B3）第第2 2次筛选次筛选获得获得足够数量的能分泌足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞所需抗体的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内体外培养获取单克隆抗体单克隆抗体从小鼠腹水中从小鼠腹水中从细胞培养液中从细胞培养液中2、单克隆抗体的制备过程：（克隆化培养和抗体检测）（克隆化培养和抗体检测）（特定的选择培养基）（特定的选择培养基）抗体检测抗体检测呈阳性阳性的杂交瘤细胞杂交瘤细胞（分泌的抗体能与特定抗原结合）三、单克隆抗体及其应用向小鼠注射特定的抗原培养骨髓瘤细胞多种

6、B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱诱导导融融合合未融合的细胞多种杂交细胞（包括B-B细胞、瘤-瘤细胞、杂杂交瘤细胞交瘤细胞）2、单克隆抗体的制备过程：三、单克隆抗体及其应用（2）杂交瘤细胞的特点（重点）：（3）向小鼠注射特定抗原的目的：（1）骨髓瘤细胞的特点：既能迅速大量增殖，又能产生抗体得到能产生特定抗体的B淋巴细胞无限增殖，但不能产生抗体向小鼠注射特定的抗原培养骨髓瘤细胞多种B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱诱导导融融合合未融合的细胞多种杂交细胞（包括B-B细胞、瘤-瘤细胞、杂杂交瘤细胞交瘤细胞）2、单克隆抗体的制备过程：三、单克隆抗体及其应用（3）诱导B淋巴细胞和杂交瘤细胞融合的方法（重点）：5、诱导细胞融合后

7、，若考虑两两融合，得到几种细胞：电融合法；3种，PEG融合法；灭活病毒诱导法（动物特有）分别为：B细胞-B细胞、骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞2、杂交瘤细胞的特点（重点）：3、向小鼠注射特定抗原的目的：4、诱导B淋巴细胞和杂交瘤细胞融合的方法（重点）：5、诱导细胞融合后，若考虑两两融合，得到几种细胞：1、骨髓瘤细胞的特点：既能迅速大量增殖，又能产生抗体得到能产生特定抗体的B淋巴细胞电融合法；3种，无限增殖，但不能产生抗体PEG融合法；灭活病毒诱导法（动物特有）分别为：B细胞-B细胞、骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞小结：三、单克隆抗体及其应用6、第1次筛选：（重点）（1）方法：（2）目的

8、：（3）原理：特定的选择培养基获得杂交瘤细胞在选择培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。7、第2次筛选：（重点）（1）方法：（2）目的：（3）抗体检测的原理：克隆化培养和抗体检测获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞抗原-抗体特异性结合三、单克隆抗体及其应用克隆化培养和抗体检测每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞第二次筛选：检测原理：抗原和抗体能够特异性结合(分子水平的鉴定）拓展资料瘤-B1瘤-B2瘤-B3三、单克隆抗体及其应用能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备。8、如何获取大量所需杂交瘤细胞：体外培养；9

9、、如何获取单克隆抗体：体外培养：小鼠腹腔内培养：从细胞培养液中获取；从小鼠腹水中获取10、制备单克隆抗体应用的技术：动物细胞融合动物细胞培养（原理：细胞膜具有一定的流动性）（原理：细胞增殖）11、单克隆抗体的优点（重点）：注射到小鼠腹腔内增殖。12、单克隆抗体的应用：诊断试剂、运载药物、治疗疾病三、单克隆抗体及其应用（2020全国全国统考高考真题）统考高考真题）为研制抗病毒A的单克隆抗体，某同学以小鼠甲为实验材料设计了以下实验流程。回答下列问题：（1）上述实验前必须给小鼠甲注射病毒A，该处理的目的是_。（2）写出以小鼠甲的脾脏为材料制备单细胞悬液的主要实验步骤：_。_（答出2点即可）。诱导小鼠

10、甲产生能够分泌抗病毒A抗体的B淋巴细胞 取小鼠甲脾脏剪碎，用胰蛋白酶处理使其分散成单个细胞，加入培养液制成单细胞悬液当堂巩固（2020全国全国统考高考真题）统考高考真题）为研制抗病毒A的单克隆抗体，某同学以小鼠甲为实验材料设计了以下实验流程。回答下列问题：（3）为了得到能产生抗病毒A的单克隆抗体的杂交瘤细胞，需要进行筛选。图中筛选1所采用的培养基属于_，使用该培养基进行细胞培养的结果是_。图中筛选2含多次筛选，筛选所依据的基本原理是_。（4）若要使能产生抗病毒A的单克隆抗体的杂交瘤细胞大量增殖，可采用的方法有_（答出2点即可）。将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内增殖；将杂交瘤细胞在体外培养选择培养基

11、只有杂交瘤细胞能够生存抗原与抗体的反应具有特异性当堂巩固（1）诊断诊断试剂试剂最广泛应用最广泛应用抗原抗原-抗体杂交法抗体杂交法比原来诊断方法提前了比原来诊断方法提前了比原来诊断方法提前了比原来诊断方法提前了10d10d10d10d左左左左右，准确率在右，准确率在右，准确率在右，准确率在90909090以上。以上。以上。以上。三、单克隆抗体及其应用3、单克隆抗体的应用主要用于癌症治疗，如：主要用于癌症治疗，如：单克隆抗体单克隆抗体+药物药物=“=“生物导弹生物导弹”（2 2）用于治疗疾病和运载药物）用于治疗疾病和运载药物优点：位置优点：位置准确、疗效高、副作用小准确、疗效高、副作用小(“(“生物导弹生物导弹”单抗单抗导向，导向，药物为药物为弹头弹头)单克隆抗体注入人体内后可以自动跟踪抗原（病原体或癌变细胞），而绝不攻击任何正常细胞，而称之为“生物导弹”，这是利用抗原与抗体的特异性结合。三、单克隆抗体及其应用（2022山东高考真题）如图所示，将由2种不同的抗原分别制备的单克隆抗体分子，在体外解偶联后重新偶联可制备双特异性抗体，简称双抗。下列说法错误的是（）A双抗可同时与2种抗原结合B利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞C筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原D同时注射2种抗原可刺激B细胞分化为产双抗的浆细胞D当堂巩固