【课件】2023届高三生物一轮复习课件：发酵工程复习.pptx

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1、重点：重点：制作制作原理原理？各发酵菌种的代谢类型、来源、温度？各发酵菌种的代谢类型、来源、温度？制作流程制作流程？画出一套可以不用开盖放气的画出一套可以不用开盖放气的果酒、果醋制作装置果酒、果醋制作装置，并分析。，并分析。注意事项注意事项：见后面课件，见后面课件，最常考事项如下：最常考事项如下：泡菜制作中盐水煮沸的原因？用水密封泡菜坛的目的？泡菜制作中盐水煮沸的原因？用水密封泡菜坛的目的？P6P6 泡菜坛装八成满的原因？泡菜坛装八成满的原因？P6P6 果酒发酵罐发酵液不可装满，要留出果酒发酵罐发酵液不可装满，要留出1/31/3的原因？的原因？P7P7 该补充课本的补充课本，该补充课本的补充课

2、本，整理整理+背诵背诵+做题做题理解通透、活学活用理解通透、活学活用区分概念：区分概念：发酵发酵：指人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过：指人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过微生物的代谢微生物的代谢转化为人类所需要的产物的过程。转化为人类所需要的产物的过程。（1 1）传统发酵技术）传统发酵技术：直接利用：直接利用原材料中天然存在的微生物原材料中天然存在的微生物，或或利用前一次发酵保存下来的面团、卤汁等利用前一次发酵保存下来的面团、卤汁等发酵物中的微生物发酵物中的微生物进行发酵、进行发酵、制作食品制作食品的技术一般称为传统发酵技术。的技术一般称为传统发酵技术。P5P5P5P5（2

3、2）发酵工程）发酵工程：利用微生物的特定功能，通过：利用微生物的特定功能，通过工程技术，工程技术，对人类有用的对人类有用的，它涉及，它涉及、等方面等方面（章首页（章首页（章首页（章首页P1P1P1P1）一、发酵菌种比较一、发酵菌种比较二、发酵原理二、发酵原理P5需氧型需氧型水果果皮表面附着的野生酵母菌空气中的毛霉孢子整理在课本整理在课本向坛盖边缘的水槽中注满水目的向坛盖边缘的水槽中注满水目的:腌制过程会出现溶液量增多现象，原因？腌制过程会出现溶液量增多现象，原因？1.1.泡菜泡菜制作流程：制作流程：4 4步步配制盐水配制盐水用清水和食盐配制用清水和食盐配制 质量质量百分比百分比为为5%5%-2

4、0%20%的盐水的盐水盐水盐水煮沸煮沸冷却冷却待用待用原料处理、原料处理、蔬菜装坛蔬菜装坛新鲜蔬菜新鲜蔬菜洗净洗净切条块、切条块、混匀混匀晾干；晾干；装至装至半坛半坛加调味料加调味料继续加菜至继续加菜至八成满八成满调味；抑制其他微生物生长调味；抑制其他微生物生长a.a.杀灭盐水中的微生物杀灭盐水中的微生物b.b.去除水中的溶解氧去除水中的溶解氧装八成满原因：装八成满原因：a.a.防止其他微生物发酵产生防止其他微生物发酵产生COCO2 2而导致而导致发酵液溢出坛外发酵液溢出坛外(发酵初期，发酵初期，酵母菌、大肠杆菌等较为活跃，发酵产物中有较多酵母菌、大肠杆菌等较为活跃，发酵产物中有较多COCO2

5、 2)b.b.防止因装太满使盐水未完全淹没菜料而导致菜料防止因装太满使盐水未完全淹没菜料而导致菜料腐烂变质腐烂变质加盐水加盐水封坛发酵封坛发酵将将冷却好的冷却好的盐水缓缓倒入坛中，盐水缓缓倒入坛中，盐水盐水没过全部没过全部菜料菜料盖好盖好坛盖坛盖向向坛盖边缘坛盖边缘的的水槽中注满水水槽中注满水发酵过程中发酵过程中经常经常向水槽中向水槽中补充水补充水根据室内温度控制发酵时间根据室内温度控制发酵时间抑菌、无氧环境抑菌、无氧环境防止高温杀死菜料表面的乳酸菌防止高温杀死菜料表面的乳酸菌增加乳酸菌的含量增加乳酸菌的含量，使其在短时间内形成菌种优势使其在短时间内形成菌种优势保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境

6、保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境选用新鲜蔬菜的原因选用新鲜蔬菜的原因调味料、香辛料作用：调味料、香辛料作用：调味、抑菌调味、抑菌新鲜蔬菜亚硝酸盐含量少，营养物质丰富新鲜蔬菜亚硝酸盐含量少，营养物质丰富外界溶液浓度高，使蔬菜渗透失水外界溶液浓度高，使蔬菜渗透失水整理在课本P6过高：乳酸发酵将受抑制；过高：乳酸发酵将受抑制；过低：杂菌易繁殖，导致泡菜变质过低：杂菌易繁殖，导致泡菜变质1.1.泡菜制作中泡菜制作中，哪些操作制造，哪些操作制造的的“无氧环境无氧环境”？a.a.选择的泡菜坛要有很好的选择的泡菜坛要有很好的气密性气密性；b.b.盐水盐水煮沸煮沸后冷却待用；后冷却待用；c.c.加入蔬菜后要加

7、入蔬菜后要注入盐水并没过全部菜料注入盐水并没过全部菜料；d.d.盖上坛盖盖上坛盖，并用水密封泡菜坛，并用水密封泡菜坛。2.2.泡菜泡菜发酵初期，泡菜坛的水槽内会有间歇性的气泡冒出，试分析产生气泡的原因。发酵初期，泡菜坛的水槽内会有间歇性的气泡冒出，试分析产生气泡的原因。3.3.泡菜坛内有时会长一层白膜，白膜的形成原因？泡菜坛内有时会长一层白膜，白膜的形成原因？4.4.制出的泡菜制出的泡菜“咸而不酸咸而不酸”，最可能原因？，最可能原因？P8-2P8-2 食盐过多（、温度过低）抑制了乳酸菌的发酵。食盐过多（、温度过低）抑制了乳酸菌的发酵。5.5.泡菜发酵时间是否越长越好？泡菜发酵时间是否越长越好？

8、不是，一方面不是，一方面,发酵时间过长，可能产生其他有害物质；发酵时间过长，可能产生其他有害物质；另一方面，发酵时间过长，乳酸含量过高，口味不佳。另一方面，发酵时间过长，乳酸含量过高，口味不佳。酵母菌等微生物进行细胞呼吸产生酵母菌等微生物进行细胞呼吸产生COCO2 2思考思考泡菜泡菜制作制作的其他问题：的其他问题：白白膜膜是是由由于于产产膜膜酵酵母母的的繁繁殖殖。酵酵母母菌菌是是兼兼性性厌厌氧氧菌菌，泡泡菜菜发发酵酵液液营营养养丰丰富富，表表面面O2O2含含量量丰丰富富，适适合合酵酵母母菌繁殖。菌繁殖。整理在课本P64.4.腌制中乳酸菌、乳酸和亚硝酸盐含量的变化腌制中乳酸菌、乳酸和亚硝酸盐含量

9、的变化发酵时期发酵时期乳酸菌乳酸菌乳酸乳酸亚硝酸盐亚硝酸盐发酵前期发酵前期发酵中期发酵中期发酵后期发酵后期变化曲线变化曲线 增加增加 (蔬菜中的硝酸盐蔬菜中的硝酸盐 -亚硝酸盐亚硝酸盐)达到最多后开始下降达到最多后开始下降原因：原因：缺氧和酸性环境缺氧和酸性环境抑制硝酸盐还原菌抑制硝酸盐还原菌 生长，使生长，使亚硝酸盐产生量降低亚硝酸盐产生量降低 部分亚硝酸盐被分解部分亚硝酸盐被分解 下降至保持相对稳定下降至保持相对稳定（硝酸盐还原菌被完全抑制）（硝酸盐还原菌被完全抑制）少少（坛内有坛内有O O2 2，乳酸菌活动受抑制。大肠杆菌、，乳酸菌活动受抑制。大肠杆菌、酵母菌等进行有氧呼吸，消耗酵母菌等

10、进行有氧呼吸，消耗O O2 2，为乳酸菌，为乳酸菌提供无氧环境，乳酸菌开始繁殖，产生乳酸）提供无氧环境，乳酸菌开始繁殖，产生乳酸）乳酸菌最多；乳酸积累增多，乳酸菌最多；乳酸积累增多，PHPH下降下降（由于前期由于前期乳酸的积累乳酸的积累、无氧环境的形成无氧环境的形成，乳酸菌逐渐占据优势，乳酸积累增多，乳酸菌逐渐占据优势，乳酸积累增多，其其他微生物受到抑制他微生物受到抑制）乳酸菌数量下降；乳酸菌数量下降；乳酸含量继续增加乳酸含量继续增加（乳酸增加，（乳酸增加，PHPH下降下降，当，当达到一定程度时，达到一定程度时，抑制了乳酸菌的活性抑制了乳酸菌的活性，发酵速度逐渐变缓，发酵速度逐渐变缓甚至停止）

11、甚至停止）整理在课本P8硝酸盐还原菌硝酸盐还原菌泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有有哪些？哪些？P6 腌制方法、腌制时间长短、温度高低等腌制方法、腌制时间长短、温度高低等量的变化：菌种的（先增后稳定（占优势）、减少（营养物质、PH下降、代谢物积累等）、杂菌的（先增后减，不占优势）、产物的、亚硝酸盐的充气口：充气口：排气口：排气口：出料口：出料口：取样取样检测、放出发酵液检测、放出发酵液2.2.考察重点考察重点果酒、果醋的发酵装置果酒、果醋的发酵装置改良改良 P8-3P8-3作用：作用：酒精发酵时酒精发酵时，排出排出COCO2 2。排气口要通过排气口要通过

12、曲颈管曲颈管与瓶身连接目的与瓶身连接目的？防止空气中防止空气中杂菌杂菌的污染的污染。改进：充气口塞入棉花或安装其他过滤装置，防止杂菌污染改进：充气口塞入棉花或安装其他过滤装置，防止杂菌污染密封：泡菜密封，无氧环境果酒密封但要排气、果醋通气泡菜坛泡菜坛：要有很好的要有很好的气密性气密性；盖上坛盖盖上坛盖，并用水密封泡菜坛，并用水密封泡菜坛。盐水盐水煮沸煮沸后冷却待用；后冷却待用；盐水没过全部菜料盐水没过全部菜料下面是家庭酿造甜米酒的具体操作过程：先将米加热煮至七成熟，待其冷却至30左右，加少许的水和一定量的“酒药”（实际是酵母菌菌种），与米饭混合后置于一瓷坛内，在米饭中央挖一小洞，加盖后置于适当

13、地方保温（约20)即可。请从以下几个方面对此发酵过程进行简单的分析。（1)先将米煮一煮的目的主要是（2)为什么要冷却到30左右后才能加入“酒药”？（3)在米饭中央挖一小洞的原因是（4)发酵坛并没有完全密封，坛内无氧发酵的环境是如何形成的？（5)家庭酿酒的关键是保温和放“酒药”，如果米的量很多而放的“酒药”太少，常常导致甜米酒变质而使酿造失败，其主要原因是杀灭其他杂菌，并使淀粉易于利用杀灭其他杂菌，并使淀粉易于利用过高的温度会抑制或杀死酵母菌过高的温度会抑制或杀死酵母菌有利于透气，保证酵母菌在开始生长时有足够的氧气，以便短时间内能够迅速繁殖有利于透气，保证酵母菌在开始生长时有足够的氧气，以便短时

14、间内能够迅速繁殖酵母菌进行有氧呼吸消耗了大量氧气，同时产生一部分水，使容器中发酵液增多，淹没米饭，从而酵母菌进行有氧呼吸消耗了大量氧气，同时产生一部分水，使容器中发酵液增多，淹没米饭，从而形成无氧环境形成无氧环境加的加的“酒药酒药”太少，造成酵母菌起始密度过低，不能迅速增殖形成生长优势，从而导致杂菌污染太少，造成酵母菌起始密度过低，不能迅速增殖形成生长优势，从而导致杂菌污染学习活动1.结合教材和合教材和课件梳理件梳理发酵工程的基酵工程的基础知知识，边梳理梳理边进行构建，行构建，构建内容重点构建内容重点为第二第二节内容内容2.参考参考课件件11-21页，提交到第十六，提交到第十六单元元发酵工程酵

15、工程电子学程重构拓展子学程重构拓展-单元知元知识重构的提交卡中重构的提交卡中重点内容提示：重点内容提示：（1）培养基的）培养基的类型、成分、特殊要求型、成分、特殊要求（2）消毒）消毒灭菌的具体方法、适用范菌的具体方法、适用范围（3）微生物）微生物纯培养的培养的过程，尤其程，尤其灭菌、倒平板操作，平板划菌、倒平板操作，平板划线操作及注意事操作及注意事项（4）选择培养的原理、稀培养的原理、稀释涂布平板法注意事涂布平板法注意事项、微生物数量、微生物数量测定中定中为什么用菌落数可以推什么用菌落数可以推测活菌数、活菌数、选平板的原平板的原则、计数的原数的原则公式、菌落数少于活菌数的原因、公式、菌落数少于

16、活菌数的原因、显微微镜直接直接计数工具和数工具和误差分析差分析（5）土壤中分解尿素的）土壤中分解尿素的细菌分离与菌分离与计数、数、课后后题分解分解纤维素的微生物的分离素的微生物的分离类型类型适用范围适用范围操作方法操作方法消消毒毒灭灭菌菌较为较为温和温和理化理化或或生物生物方法，杀死方法，杀死部分微生物部分微生物（不不包括芽孢、孢子）包括芽孢、孢子）强烈强烈的理化方法，的理化方法，杀死杀死所有微生物所有微生物（包括（包括芽孢、孢子芽孢、孢子）煮沸消毒法煮沸消毒法100 100 煮沸煮沸5 56 min6 min巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高温的液体不耐高温的液体626265 65 煮煮30 min

17、30 min或或80-90 80-90 煮煮30s-1 min30s-1 min化学药物化学药物如用如用70%70%酒精擦拭双酒精擦拭双手、用氯气消毒水源手、用氯气消毒水源紫外线紫外线紫外线照射紫外线照射30 min30 min灼烧灭菌灼烧灭菌接种的接种的金属工具金属工具、接种时用、接种时用的的试管口试管口或或瓶口瓶口等等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物耐高温、需要保持干燥的物品品,如如玻璃器皿和金属用具玻璃器皿和金属用具等等物品放入干热灭菌箱物品放入干热灭菌箱,160,160170 170 加加热热2 23h3h湿热灭菌

18、湿热灭菌培养基培养基等等高压蒸高压蒸汽汽灭菌锅内灭菌锅内,100 kPa,100 kPa,温度温度121 121,15,1530 min30 min接种室、接种箱，超净工作台接种室、接种箱，超净工作台一、无菌技术一、无菌技术生物活体、水源等生物活体、水源等可以可以杀死微生物的死微生物的营养养细胞和一部分芽胞和一部分芽孢。酒精灯外焰酒精灯外焰 充分燃烧层充分燃烧层 人们按照人们按照_，配制出供其，配制出供其生长繁殖生长繁殖的的营养基质营养基质，即培养基。，即培养基。二、培养基的配制二、培养基的配制1.1.概念：概念：微生物对营养物质的不同需求微生物对营养物质的不同需求2.2.作用：作用：用以用以

19、培养、分离、鉴定、保存微生物培养、分离、鉴定、保存微生物或或积累其代谢物积累其代谢物。在液体的选择培养基中培养（选择培养、扩大培养）的目的？分离筛选出特定的微生物并富集培养增加培养液中O2含量，有利于充分利用营养物质2.按功能 分类：完全培养基：牛肉膏蛋白胨培养基完全培养基：牛肉膏蛋白胨培养基P10牛肉膏、蛋白胨分别提供什么营养？牛肉膏、蛋白胨分别提供什么营养？选择培养基：选择培养基：P16 鉴别培养基：鉴别培养基：（鉴别不同微生物）（鉴别不同微生物）概念：概念：允许允许特定种类的微生物生长，特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止（不是杀死）同时抑制或阻止（不是杀死）其他其他种类微生物生长种类微

20、生物生长（分离出一种或一类微生物）（分离出一种或一类微生物）以以尿素尿素为唯一氮源的培养基为唯一氮源的培养基P18：分离分离尿素分解菌尿素分解菌添加添加某种抗生素某种抗生素的培养基：的培养基：分离筛选某抗生素抗性菌株分离筛选某抗生素抗性菌株以以纤维素纤维素为唯一碳源的培养基为唯一碳源的培养基P20：分离分离纤维素分解菌纤维素分解菌不加氮源不加氮源的无氮培养基：分离的无氮培养基：分离固氮菌固氮菌不加含碳有机物不加含碳有机物的培养基：分离的培养基：分离自养自养型微生物型微生物鉴别鉴别纤维素分解菌纤维素分解菌：纤维素为唯一碳源的选择培养基：纤维素为唯一碳源的选择培养基+刚果红染色刚果红染色鉴别鉴别大

21、肠杆菌大肠杆菌P30：伊红：伊红-亚甲蓝琼脂培养基亚甲蓝琼脂培养基鉴别鉴别醋酸菌醋酸菌：制备醋酸菌初筛平板时，灭菌后须在未凝固的培养基中加：制备醋酸菌初筛平板时，灭菌后须在未凝固的培养基中加入无菌碳酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入碳酸钙的目的？入无菌碳酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入碳酸钙的目的？使培养基不透明，从而使醋酸菌菌落周围出现透明圈p14摇床、振荡、搅拌的目的？对物质的降解能力检测指标？（选择培养基？液体培养？）挑选透明圈直径与菌落直径比值大的菌落4、培养基的营养构成:（1 1）基本成分：）基本成分：碳源、氮源、水、无机盐。碳源、氮源、水、无机盐。碳源：碳源：无机碳源：无机碳源：CO

22、CO2 2、COCO3 32 2-、HCOHCO3 3-有机碳源：有机碳源：葡萄糖、葡萄糖、牛肉膏、蛋白牛肉膏、蛋白胨等等（自养微生物的碳源）（自养微生物的碳源）（异养微生物的碳源）（异养微生物的碳源）氮源：氮源：无机氮源：无机氮源：NH4（铵盐）、）、NO3-（硝酸（硝酸盐）、NHNH3 3、NHNH2 2等等等等有机氮源：有机氮源：牛肉膏、蛋白牛肉膏、蛋白胨、尿素、尿素、氨基酸氨基酸氨基酸氨基酸等等注：注：含含含含C C C C、H H H H、O O O O、N N N N的的的的有机物有机物有机物有机物是异养型微生物的是异养型微生物的是异养型微生物的是异养型微生物的碳源、氮源、能源。碳

23、源、氮源、能源。碳源、氮源、能源。碳源、氮源、能源。无机盐：无机盐：Ca、K、Mg为 大量元素大量元素 Zn、Cu、Mn、Co、Mo等等微量元素微量元素凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供C C C C、N N N N等元素的营养物质。等元素的营养物质。等元素的营养物质。等元素的营养物质。思考：思考：是否一定要加入是否一定要加入“碳源碳源”？除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 自养型微生物，不需要额外自养型微生物，不需要额外的加碳源的加碳源错，如无机碳源、无机氮源错，如无机碳源、无机氮源乳酸杆菌乳酸杆菌：培养基中添加维生素：培养

24、基中添加维生素 霉菌霉菌：pHpH调调至酸性至酸性 厌氧微生物厌氧微生物：提供无氧的条件：提供无氧的条件 细菌细菌：pHpH调调至中性或弱碱性至中性或弱碱性 （2 2）还需满足微生物对）还需满足微生物对 的需求的需求pH、特殊营养物质特殊营养物质、氧气KH2PO4、K2HPO4、（NH4）2SO4、MgSO4、CaCl2、Ca(NO3)2、NaCl、FeSO4等（1）参与酶的组成；为细胞生命活动提供能量为细胞生命活动提供能量为其他有机物的合成提供原料为其他有机物的合成提供原料提供无机营养提供无机营养 作为缓冲剂，作为缓冲剂，调节调节PH PH 调节渗透压调节渗透压1.1.培养物：培养物：在微生

25、物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种特定种类微生物类微生物的群体称为培养物；的群体称为培养物；2.2.纯培养物、纯培养：纯培养物、纯培养：由由单一个体单一个体繁殖所获得的微生物群体称为繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物纯培养物，获，获得纯培养物的过程就是得纯培养物的过程就是纯培养纯培养。（一）相关概念：（一）相关概念：微生物群微生物群分散分散或或稀释稀释单个细胞单个细胞单个菌落单个菌落繁殖繁殖三、微生物的纯培养三、微生物的纯培养酵母菌酵母菌（二（二）纯培养培养的步的步骤包括包括 配置培养基灭菌接种分离和培养灭菌灭菌时避免水蒸气

26、浸湿棉塞，取出培养基时避免水蒸气浸湿棉塞，取出培养基时，也起到隔绝空气中杂菌的作用时，也起到隔绝空气中杂菌的作用称取去皮称取去皮马铃薯马铃薯200g200g，切成小块，加水，切成小块，加水1000ml1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布纱布过滤过滤。向滤液中加入。向滤液中加入20g20g葡萄糖葡萄糖、15-20g15-20g琼脂琼脂，用，用蒸馏水蒸馏水定容至定容至1000ml1000ml（定容）（定容）。1.制制备培养基培养基2.2.灭菌菌将配制好的将配制好的培养基培养基转移到锥形瓶中，加转移到锥形瓶中，加棉塞棉塞，包上，包上牛皮纸牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入，

27、并用皮筋勒紧，再放入高高压蒸汽灭菌锅压蒸汽灭菌锅中，在压力为中，在压力为100kPa100kPa、温度为、温度为121121的条件下，灭菌的条件下，灭菌15-30min15-30min。将。将5-85-8套套培养皿培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱干热灭菌箱内，在内，在160-170160-170灭菌灭菌2h2h。培养基：用高压蒸汽灭菌锅培养基：用高压蒸汽灭菌锅湿热灭菌湿热灭菌培养皿：在干热灭菌箱内培养皿：在干热灭菌箱内干热灭菌干热灭菌防止污染和挥发防止污染和挥发干干热灭菌箱菌箱高高压蒸汽蒸汽灭菌菌锅思考：思考：若要调节培养基的若要调节培养基的pH

28、pH，应在何时进行？，应在何时进行？判断：判断：指示剂和染料不需要灭菌指示剂和染料不需要灭菌灭菌之前灭菌之前3.3.倒平板倒平板待培养基冷却到待培养基冷却到5050左右时，在左右时，在酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近倒平板倒平板。左手拔出锥形瓶的左手拔出锥形瓶的棉塞棉塞目的：既可以防止培养基表面的水分挥目的：既可以防止培养基表面的水分挥发；又可以防止皿盖上的水珠落入培养发；又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。基，造成污染。将瓶口迅速通过火将瓶口迅速通过火焰，灼烧灭菌焰，灼烧灭菌用拇指和食指将培养皿用拇指和食指将培养皿打开一条稍大打开一条稍大于瓶口的缝隙于瓶口的缝隙，将培养基（，将培养基（1

29、0 10 20 20 mLmL）倒入培养皿，立即盖上皿盖。）倒入培养皿，立即盖上皿盖。等待培养基等待培养基冷却凝冷却凝固后固后，将培养皿倒过，将培养皿倒过来放置。来放置。灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。1.1.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？吗？为什么？最好不要用这个平板培养微生

30、物。最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。将所倒平板放入将所倒平板放入3737的恒温箱中培养的恒温箱中培养12h12h24h24h，观察是否有菌落存在确定是否被污染或灭菌是否彻底。，观察是否有菌落存在确定是否被污染或灭菌是否彻底。2.2.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？怎么确定所倒平板未被杂菌污染？4.接种和分离酵母菌接种和分离酵母菌通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线

31、后培养可以分离得到单菌落。表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。(1)(1)原理：原理：单个个细胞胞微生物群微生物群单个菌落个菌落连续划划线分散分散或或稀稀释生生长繁殖繁殖(2)(2)“平板划线法平板划线法”实验操作实验操作（+稀释涂布平板法稀释涂布平板法灼烧灼烧接种环，直至接接种环，直至接种环金属丝烧红种环金属丝烧红在火焰旁在火焰旁冷却冷却接种环，拔接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞出酵母菌培养液试管的棉塞试管口通过火焰试管口通过火焰在在火焰附近火焰附近用接种环用接种环蘸取一环菌液蘸取一环菌液试管口通试管口通过火焰过火焰，并，并塞上棉塞塞上棉塞将皿盖打开一条将皿盖打开一条缝隙，缝隙，用

32、用接种环接种环在在培养基表面迅速培养基表面迅速划划三至五三至五条平行线条平行线，盖上皿盖盖上皿盖灼烧灼烧接种环，待其接种环，待其冷冷却却后，从第一次划线的后，从第一次划线的末端末端开始作第二次划线。开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、重复以上操作，作第三、四、五次划线四、五次划线不要将最不要将最后一次划线与第一次划后一次划线与第一次划线相连线相连培养酵母菌培养酵母菌制备培养基（配制培养基、灭菌、制备培养基（配制培养基、灭菌、倒平板倒平板）接种和分离酵母菌接种和分离酵母菌（1 1）划）划3 3个平板个平板（重复实验）（重复实验）1 1个不划线个不划线（空白对照）（空白对照）（2 2）观察接）

33、观察接种平板上菌落的颜色、形状和大小是否一致种平板上菌落的颜色、形状和大小是否一致接种的平板和一个接种的平板和一个未接种未接种的平板的平板倒置倒置，2828左右左右(酵母菌酵母菌)、恒温培养箱中恒温培养箱中接种方法：平板划接种方法：平板划线法和稀法和稀释涂布平板法涂布平板法1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,为何仍需灼烧接种环？为何仍需灼烧接种环？2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？避免接种环温度太高，杀死菌种避免接种

34、环温度太高，杀死菌种3.3.在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？线条末端细菌的数目比线条起始处要少，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终线条末端细菌的数目比线条起始处要少，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。4.4.全过程均在酒精灯火焰旁、培养皿打开一条缝、平板倒置全过程均在酒精灯火焰旁、培养皿打开一条缝、平板倒置灼灼烧次数次数？如何检测是否有杂菌污染？如何检测是否有杂菌污染？1 1、实例：例：寻找耐高温的找

35、耐高温的DNA聚合聚合酶微生物的选择培养和计数微生物的选择培养和计数2.概念：概念：在微生物学中，将在微生物学中，将允允许特定种特定种类的微生物生的微生物生长，同，同时抑制或阻止其他种抑制或阻止其他种类微生物生微生物生长的的培养基称培养基称为选择培养基培养基。3.原理：原理：人人为提供提供_的条件（包括的条件（包括_、_和和_等），同等），同时_。有利于目的菌生有利于目的菌生长抑制或阻止其他微生物的生抑制或阻止其他微生物的生长营养养温度温度pHpH4.实验室中微生物的室中微生物的筛选：分离酵母菌、霉菌等真菌分离固氮菌分离自养型微生物不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基不加氮源的

36、无氮培养基不加氮源的无氮培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基高高浓度食度食盐的培养基的培养基 分离金黄色葡萄球菌二、微生物的选择培养二、微生物的选择培养土壤取样：土壤取样：土壤取样：土壤取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm3cm左右，再取样，将样品装入事先左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。准备好的信封中。注：取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌注：取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌1 1 1 1、稀释涂布平板法、稀释涂布平板法、稀释涂布平板法、稀释涂布平板法:是将菌液进行一系列是将菌液进行一系列梯度稀

37、释梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。培养基的表面，进行培养。样品梯度稀释：样品梯度稀释：在火焰旁称取土壤在火焰旁称取土壤在火焰旁称取土壤在火焰旁称取土壤10g10g10g10g，加入，加入，加入，加入90909090mlml无菌水中，摇匀，制成稀释无菌水中，摇匀，制成稀释1010倍的土壤菌液。倍的土壤菌液。分别取分别取1ml1ml上清液，上清液，加入盛有加入盛有加入盛有加入盛有9 9 9 9mlml无菌水的试管中，制成不同稀释倍数的菌液。无菌水的试管中，制成不同稀释倍数的菌液。取取6 6支试管，分别加入支试管，分

38、别加入9ml9ml无菌水。无菌水。将涂布将涂布器浸在盛器浸在盛有酒精的有酒精的烧杯中烧杯中 滴滴取少量稀释液（不超过取少量稀释液（不超过0.1ml0.1ml），滴加到培养基表，滴加到培养基表面面 灼灼将沾有少量酒精将沾有少量酒精的涂布器在火焰上的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽引燃，待酒精燃尽后，冷却后，冷却8-10s8-10s。涂涂用涂布器将菌用涂布器将菌液均匀地涂布在液均匀地涂布在培养基表面。涂培养基表面。涂布时可转动培养布时可转动培养皿，使涂布均匀。皿，使涂布均匀。注：注：各梯度分各梯度分别涂布别涂布3 3个平个平板板,1,1个不涂布个不涂布作空白对照作空白对照浸浸取样涂布取样涂布取样涂布

39、取样涂布平板：平板：（5 5）培养与观察：）培养与观察：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入303037 37 的恒温培养的恒温培养箱中培养箱中培养1 12 d2 d。二、计数二、计数1.1.稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：2.2.显微镜直接计数：显微镜直接计数：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，

40、来源于样品稀释液中的一个活菌通常选用一定通常选用一定稀释范围稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为的样品液进行培养，以保证获得菌落数为3030300300、适于计数的平板。、适于计数的平板。选择选择3030 300300个菌落的平板进行计数；个菌落的平板进行计数；每个稀释度至少取每个稀释度至少取3 3个平板取其平均值；个平板取其平均值；统计的菌落往往比活菌的实际数目低（统计的菌落往往比活菌的实际数目低（原因：原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落）是一个菌落）间接间接计数法计数法统计结果一般用果一般用菌落数菌落数而不是用活

41、菌数来表示；而不是用活菌数来表示；快速直快速直观三、三、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1.1.基础原理：基础原理：只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作为唯一氮源尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌从土壤中分离出分解尿素的细菌2.2.实验流程：实验流程：土壤取样土壤取样培养基的制备培养基的制备样品稀释样品稀释涂布平板涂布平板培养、观察培养、观察富含有机质、酸碱度接近中性的潮湿土壤；距地表富含有机质、酸碱度接近中性的潮湿土壤；距地表3-8cm3-8cm土壤层土壤层u制

42、备选择培养基（尿素为唯一氮源）制备选择培养基（尿素为唯一氮源）u制备牛肉膏蛋白胨培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基另外还需两个对照组：不涂布的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，另外还需两个对照组：不涂布的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，验证培养基是否有杂菌污染验证培养基是否有杂菌污染1.1.不同种类的微生物，往往需要不同的不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间培养温度和培养时间。细菌细菌一般在一般在30-3730-37的温度下培养的温度下培养1-2d1-2d。2.2.每隔每隔24h24h统计一次菌落数统计一次菌落数目，选取目，选取菌落数目稳定菌落数目稳定时的记录作为结果，防止因培养时间不足

43、而导致遗漏时的记录作为结果，防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目菌落的数目3.3.一般来说，在相同的培养条件下，一般来说，在相同的培养条件下，同种同种微生物表现出微生物表现出稳定的菌落特征稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。，如形状、大小和颜色等。4.4.鉴定：以尿素为唯一氮源的培养基中加入鉴定：以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂酚红指示剂，若指示剂变红，说明该细菌能分解尿素，若指示剂变红，说明该细菌能分解尿素不是表层土选择培养基是否具有筛选作用选择培养基是否具有筛选作用牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白胨胨培养基上培养基上 的菌落数目明显多于选的菌落数目明显多于选择培养基上的菌落数目择培养基上的

44、菌落数目细菌合成的脲酶将尿素分解为细菌合成的脲酶将尿素分解为氨气氨气，氨会使培养基的，氨会使培养基的碱性增强碱性增强，pHpH升高，因此可以通过升高，因此可以通过检测培养基检测培养基pHpH的变化的变化来判断是否发生了该化学反应，进而判断该菌是否为尿素分解细菌来判断是否发生了该化学反应，进而判断该菌是否为尿素分解细菌样品的稀释与涂布平板样品的稀释与涂布平板每个浓度至少设置每个浓度至少设置4 4个平板，个平板，1 1、2 2、3 3平板是选择培养基平板是选择培养基（实验组，三个重复实验组，三个重复）4 4为牛肉膏蛋白胨培养基为牛肉膏蛋白胨培养基（用以判断选择培养基是否具有选择作用）（用以判断选择

45、培养基是否具有选择作用）如何如何验证培养基中是否含有杂菌？验证培养基中是否含有杂菌？设置设置2 2个平板作为对照：个平板作为对照：不涂布稀释液的选择培养基和不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基进一步探究一步探究分解尿素分解尿素细菌的菌的进一步一步鉴定定可以观察可以观察菌落周围是否出现红色环带，菌落周围是否出现红色环带，红红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越解能力越强强。液体培养基：液体培养基：可以直接看液体的变色情况；可以直接看液体的变色情况；固体培养基：固体培养基：内容内容 现象现象结果分结果分析析是否有杂菌污染是否有杂

46、菌污染对照组培养基上无菌落生长对照组培养基上无菌落生长未被杂菌污染未被杂菌污染对照组培养基上有菌落生长对照组培养基上有菌落生长被杂菌污染被杂菌污染实验组选择培养基上菌落形态多样，菌落数偏高实验组选择培养基上菌落形态多样，菌落数偏高有杂菌生长，培养基上可能有杂菌生长，培养基上可能 混入其他氮源混入其他氮源选择培养基是否具有筛选作用选择培养基是否具有筛选作用牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白胨胨培养基上培养基上 的菌落数目明显多于选的菌落数目明显多于选择培养基上的菌落数目择培养基上的菌落数目选择培养基是具有筛选作用选择培养基是具有筛选作用样品的稀释操样品的稀释操 作是否成功作是否成功得到得到2 2个或个或2 2

47、个以上菌个以上菌 落数为落数为30 30030 300的平板的平板操作成功操作成功重复组的结果重复组的结果若选取的是同一种土样若选取的是同一种土样,统计的结果应该接近统计的结果应该接近A A3 3号试管的稀释倍数为号试管的稀释倍数为1101103 3倍倍B B4 4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰为号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰为5 5号试管的号试管的1010倍倍C C5 5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7101.7108 8个个D D该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌

48、数目要低下下图图为为“土土壤壤中中分分解解尿尿素素的的细细菌菌的的分分离离与与计计数数”实实验验中中样样品品稀稀释释示示意意图图。据据图图分分析析正正确确的是的是()D D解解析析：3 3号号试试管管的的稀稀释释倍倍数数为为1101104 4倍倍，A A错错误误；4 4号号试试管管中中稀稀释释液液进进行行平平板板培培养养，稀稀释释倍倍数数比比5 5号号试试管管的的低低1010倍倍，如如果果稀稀释释倍倍数数适适当当，得得到到的的菌菌落落平平均均数数可可能能是是5 5号号试试管管的的1010倍倍，B B错错误误；5 5号号试试管管进进行行稀稀释释涂涂布布平平板板法法计计数数的的结结果果表表明明每每

49、克克土土壤壤中中的的菌菌株株数数为为(168(168175175167)30.110167)30.1105 510010010101.71.710109 9个个，C C错错误误；稀稀释释涂涂布布平平板板法法培培养养得得到到的的菌菌落落可可能能存存在在两两个个或或多多个个细细菌菌细细胞胞长长成成一一个个菌菌落落，使使该该实实验验方方法法统统计计得得到到的的结结果果往往往往会会比比实实际际活活菌菌数数目低目低，D D正确。正确。23（3）刚果果红可以与可以与纤维素、淀粉等多糖形成素、淀粉等多糖形成红色复合物。在色复合物。在CMC-Na（羧甲基甲基纤维素素钠）为唯一碳源唯一碳源的固体培养基上，微生物

50、繁殖的速度很慢，加入适量土豆汁后繁殖速度加快。的固体培养基上，微生物繁殖的速度很慢，加入适量土豆汁后繁殖速度加快。这是由于微生物本身是由于微生物本身酶系系统的影响，一般情况下，微生物会的影响，一般情况下，微生物会优先利用淀粉，淀粉耗尽才会利用先利用淀粉，淀粉耗尽才会利用纤维素。从利于素。从利于筛选纤维素分解菌的角素分解菌的角度考度考虑，添加土豆汁的，添加土豆汁的浓度不宜太度不宜太_（填（填高高或或低低）。）。实验结果果显示，示，相相对于只能分解淀粉于只能分解淀粉的菌落，的菌落，纤维素分解菌的菌落周素分解菌的菌落周围有更明有更明显的透明圈，原因？的透明圈，原因？随着淀粉的耗尽，纤维素分解菌还能继