【生物】微生物的选择培养与计数高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

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1、1.2.21.2.2微生物的选择培养和计数微生物的选择培养和计数高压蒸汽灭菌液体培养基 自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合菌群中生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群不是优势种群时，更时，更难实现，仅通过一般的难实现，仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。该怎么办很难实现。该怎么办？选择培养基应运而生。问题探讨 聚合酶链式反应（聚合酶链式反应（PCRPCR）是一种在体外扩增）是一种在体外扩增DNADNA片段片段的技

2、术，此项技术要求使用的技术，此项技术要求使用耐高温的耐高温的DNADNA聚合酶聚合酶。19731973年，科学家从美国黄石国家公园的年，科学家从美国黄石国家公园的热泉热泉中筛选出水中筛选出水生栖生栖热菌热菌，进而提取出，进而提取出耐高温的耐高温的DNADNA聚合酶聚合酶。这种酶目前已。这种酶目前已被广泛用于聚合酶链式反应（被广泛用于聚合酶链式反应（PCRPCR）讨论：讨论：1.1.筛选水生栖热菌的思路是什么样的？筛选水生栖热菌的思路是什么样的？2.2.为什么水生栖热菌能从热泉中筛选出来呢？为什么水生栖热菌能从热泉中筛选出来呢？根据微生物对生存环境的要求，到相应的环根据微生物对生存环境的要求，到

3、相应的环境中去寻找境中去寻找耐高温的酶耐高温的酶耐高温生物体耐高温生物体高温环境高温环境（热泉、火山口）（热泉、火山口）寻找寻找寻找寻找 这是因为水生栖热菌能在这是因为水生栖热菌能在70-8070-80的高温条件的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。培养基中加培养基中加氨苄青霉素氨苄青霉素具有具有抗氨苄抗氨苄青霉素能力青霉素能力的菌落的菌落长出各种各长出各种各样的细菌样的细菌培养基培养基+氨苄青霉素氨苄青霉素 没没有有抗抗氨氨苄苄青青霉霉素能力素能力的菌落的菌落被淘汰被淘汰怎样怎样选择选择出出抗氨苄青霉素能抗氨苄青霉素能力力的细菌的细

4、菌?培养基培养基一、选择培养基一、选择培养基怎么证明一个选择培养基具怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？有选择性呢？思考：思考：怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？应该设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作应该设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性；养基，则该选择培养基具有选择性；根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。筛选原则：耐寒微生物石油分解菌被石油污染的土壤被石油污

5、染的土壤冰川冻土层冰川冻土层实验室筛选微生物原理：实验室筛选微生物原理：人为提供人为提供_的条件（包括的条件（包括_、_和和_等），同时等），同时_有利于目的菌生长有利于目的菌生长抑制或阻止其他微生物的生长抑制或阻止其他微生物的生长营养营养温度温度pHpH6.1 细胞的增殖-课件【新教材】人教版（2019）高中生物必修一(共42张PPT)一、选择培养基概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。一、选择培养基一、选择培养基类型类型条件条件分离得到的菌种分离得到的菌种（1 1）改变培养条件）改变培养条件（2 2）添加某种化学物质）添加某

6、种化学物质（3 3）营养缺陷）营养缺陷70708080的高温的高温水生栖热菌水生栖热菌类型类型加入青霉素加入青霉素酵母菌、霉菌等真菌酵母菌、霉菌等真菌高浓度食盐高浓度食盐金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌不加碳源不加碳源不加氮源不加氮源自养型微生物自养型微生物固氮菌固氮菌2 2.实例实例（1 1）目的：目的：分离酵母菌、霉菌等真菌，防止细菌生长分离酵母菌、霉菌等真菌，防止细菌生长 原理：原理：青霉素能抑制细菌生长，对真菌无作用青霉素能抑制细菌生长，对真菌无作用 配制：配制：使用使用 _的培养基的培养基（2 2）目的：目的：分离固氮菌分离固氮菌 原理：原理：固氮微生物能利用空气中的氮气固氮微生物能利用

7、空气中的氮气 配制：配制：使用使用 _ _的培养基的培养基（3 3）目的：目的：分离自养型微生物分离自养型微生物 原理：原理：自养型微生物能利用无机碳源自养型微生物能利用无机碳源 配制配制：使用：使用_ _ _的培养基的培养基（4 4）目的：目的：分离耐酸菌分离耐酸菌 原理：原理：耐酸菌能在耐酸菌能在pHpH为酸性的条件下生长为酸性的条件下生长 配制：配制：使用使用 _ _的培养基的培养基加入青霉素加入青霉素不加氮源（以不加氮源（以N N2 2为氮源）为氮源）不加有机碳源（以不加有机碳源（以COCO2 2为碳源）为碳源）将将pHpH调至酸性调至酸性思考-讨论尿素的立体结构 尿素尿素尿素尿素CO

8、(NHCO(NHCO(NHCO(NH2 2 2 2)2 2 2 2含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的重要的重要的重要的氮肥。氮肥。氮肥。氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成尿素被土壤中某些细菌分解成尿素被土壤中某些细菌分解成尿素被土壤中某些细菌分解成NHNHNHNH3 3 3 3,再被转化为再被转化为再被转化为再被转化为NONONONO3 3 3 3-、NHNHNHNH4 4 4 4+等等等等被植物吸收。被植物吸收。被植物吸收。被植物吸收。这些细菌之所

9、以能分解尿素，是因为能合成这些细菌之所以能分解尿素，是因为能合成这些细菌之所以能分解尿素，是因为能合成这些细菌之所以能分解尿素，是因为能合成脲酶脲酶脲酶脲酶，来催化尿素，来催化尿素，来催化尿素，来催化尿素分解。分解。分解。分解。讨论：1 1、你如何设计培养基配方，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来？、你如何设计培养基配方，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来？培养基添加培养基添加尿素作唯一氮源尿素作唯一氮源，只有能合成，只有能合成脲酶脲酶的微生物才能的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素、分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素、缺乏氮源缺乏氮源而不能生长发育繁殖，所以

10、用此培养基就能够选择出分解尿而不能生长发育繁殖，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。素的微生物。那么如果让你分离土壤中分解尿素的细菌，你应该怎么设计呢？牛肉膏牛肉膏5.0g5.0g蛋白胨蛋白胨10.0g10.0gNaClNaCl5.0g5.0g琼脂琼脂20.0g20.0g蒸馏水蒸馏水定容到定容到1000ml1000mlKHKH2 2POPO4 41.4g1.4gNaHNaH2 2POPO4 42.1g2.1gMgSOMgSO4 47H7H2 2O O0.2g0.2g葡萄糖葡萄糖10.0g10.0g尿素尿素CO(NHCO(NH2 2)2 21.0g1.0g琼脂琼脂15.0g15.0g蒸馏

11、水蒸馏水定容到定容到1000ml1000ml配方一：配方一：培养培养细菌细菌配方二：配方二：培养可以培养可以分解尿素的细菌分解尿素的细菌 补充资料补充资料补充资料补充资料2 2 2 2-普通培养基与选择培养基的比较普通培养基与选择培养基的比较1 1 1 1、从从从从物理性质物理性质物理性质物理性质看此培养基属于哪类？从看此培养基属于哪类？从看此培养基属于哪类？从看此培养基属于哪类？从用途用途用途用途上属于哪类培养基？上属于哪类培养基？上属于哪类培养基？上属于哪类培养基？固体培养基固体培养基固体培养基固体培养基配方二是配方二是以尿素作唯一氮源的以尿素作唯一氮源的以尿素作唯一氮源的以尿素作唯一氮源

12、的选择培养基选择培养基2 2、此培养基中共有哪些、此培养基中共有哪些成分成分？在此培养基中哪些作为？在此培养基中哪些作为碳源、氮源碳源、氮源？成分：成分：碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐2 2、该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？、该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？6.1 细胞的增殖-课件【新教材】人教版（2019）高中生物必修一(共42张PPT)项目选择培养基鉴别培养基原理加入不影响甚至促进目标微生物生长，而抑制或阻止其他种类微生物生长的化学物质加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养

13、基中的特定指示剂或化学药品发生反应用途培养、分离出目标微生物鉴别目标微生物举例培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素，抑制细菌的生长；利用以尿素为唯一氮源的培养基来培养可分解尿素的细菌可用伊红美蓝培养基鉴定饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌(若有，则菌落呈黑紫色，且带有金属光泽)尿素分解菌大肠杆菌选择培养基二、微生物的选择培养 如果想知道如果想知道1g1g土壤中有多少能分解尿素的细菌，还需对土壤菌液进行土壤中有多少能分解尿素的细菌，还需对土壤菌液进行稀释稀释及科学的微生物及科学的微生物数量测定数量测定方法方法-稀释涂布平板法。稀释涂布平板法。2、实验的具体操作：实验的具体操作：2 2 2 2

14、）土壤取样）土壤取样）土壤取样）土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm3cm左右，左右，再取样，将样品装入事先准备好的纸袋中。再取样，将样品装入事先准备好的纸袋中。注意：取土样用的小铁铲和盛土样的的纸袋在使用前都要灭菌注意：取土样用的小铁铲和盛土样的的纸袋在使用前都要灭菌1 1 1 1）制备培养基：）制备培养基：）制备培养基：）制备培养基：制备以尿素为唯一氮源的制备以尿素为唯一氮源的选择培养基选择培养基1 1、稀释涂布平板法、稀释涂布平板法是将菌液进行一系列是将菌液进行一系列梯度稀释梯度稀释，然后将不同稀释度的菌，然后将不同稀释度的菌液分别液

15、分别涂布涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。到琼脂固体培养基的表面，进行培养。6 6支试管，分别加入支试管，分别加入9ml9ml无菌水无菌水1ml1021ml1031ml1041ml1051ml1061073 3）样品梯度稀释：）样品梯度稀释：微量微量 移液器移液器稀释稀释10倍倍菌液菌液101土壤土壤土壤土壤10g10g10g10g 在火焰旁称取土壤在火焰旁称取土壤在火焰旁称取土壤在火焰旁称取土壤10g10g10g10g，加入，加入，加入，加入90909090ml无菌水中，摇无菌水中，摇匀，制成稀释匀，制成稀释10倍的土壤菌液。倍的土壤菌液。分别取分别取1ml1ml上清液，上清液，加入盛有

16、加入盛有加入盛有加入盛有9 9 9 9mlml无菌水的试管中，无菌水的试管中，制成不同稀释倍数的菌液。制成不同稀释倍数的菌液。取取6 6支试管，分别加入支试管，分别加入9ml9ml无菌水。无菌水。1ml1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 滴滴2、取少量稀释液（不超过0.1ml），滴加到培养基表面 灼灼3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8-10s。涂涂4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照浸浸4 4 4 4）取样涂布）取样涂布）取样涂布）取样涂布平板：平板：设置空白对照组的目的设置空白对照组的目的：

17、检测培养基灭菌是否彻底，保证实验结果的准确性。：检测培养基灭菌是否彻底，保证实验结果的准确性。（5）培养与观察：稀释稀释10103 3倍倍稀释稀释10104 4倍倍稀释稀释10105 5倍倍空白对照空白对照恒温培养箱待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入3037 的恒温培养箱中培养12 d。稀释涂布平板法除可以分离微生物外，也稀释涂布平板法除可以分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。常用来统计样品中活菌的数目。小结：两种接种方法的比较平板划线法稀释涂布平板法纯化原理接种工具单菌落的获得用途接种效果图相同点通过连续划线的操作，将通过连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散聚集的菌种逐

18、步稀释分散将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释程度的菌液分别涂布到固体培不同稀释程度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养，以得到单菌落养基的表面，进行培养，以得到单菌落接种环接种环涂布器涂布器从最后划线的区域挑取从最后划线的区域挑取稀释度合适，整个平板上都可找到稀释度合适，整个平板上都可找到单菌落单菌落分离纯化菌种，获得单菌落分离纯化菌种，获得单菌落分离纯化菌种，获得单菌落分离纯化菌种，获得单菌落用于计数用于计数都能分离纯化菌种；都能分离纯化菌种；都是在固体培养基上进行的。都是在固体培养基上进行的。2023/3/27操作示范视频：间接间接计数法计数

19、法1.稀释涂布平板法（1 1）原理：原理：当样品的稀释度足够当样品的稀释度足够_时，时，培养基表面生长的一个培养基表面生长的一个_，来源于，来源于_中的一个中的一个_；通过计数平；通过计数平板上的板上的_数，就能推测出样品中大约数，就能推测出样品中大约含有多少含有多少_。高高菌落菌落样品稀释液样品稀释液活菌活菌菌落菌落活菌活菌（2 2）计数原则计数原则选择菌落数为选择菌落数为_的平板计数的平板计数30-30030-300同一同一稀释度下，应稀释度下，应至少至少对对_个平板进行重复计数，然后个平板进行重复计数，然后求出求出_；3 3平均值平均值样品的样品的_将直接影响平板上的菌落数目；将直接影响

20、平板上的菌落数目；稀释度稀释度三、微生物的数量测定（3）结果分析：统计的菌落数往往比活菌的实际数目_；原因：_ _统计结果一般用_而不是用活菌数来表示；少当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落菌落数（4）计算公式：每g样品中的菌落数(CV)MC代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)M代表稀释倍数例：某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每g样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)()A.2.34108 B.2.34109 C.234 D.23.4 B2.显微镜直接计数 直接计数法（1

21、）方法：利用特定的_或_在_下观察、计数，然后再计算_的样品中微生物的数量；细菌计数板血细胞计数板显微镜一定体积血细胞计数板常用于_等的计数相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子细菌计数板可对_进行观察和计数；细菌等较小的细胞（2）优点：快速直观（3）缺点：统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和，不能区分死菌与活菌。个体小的细菌在显微镜下难以观察。不适于对运动细菌的计数。内容内容直接计数法直接计数法间接计数法间接计数法主要用具主要用具显微镜、细菌计数板或血细显微镜、细菌计数板或血细胞计数板胞计数板涂布器涂布器计数依据计数依据细菌个数细菌个数培养基上菌落数培养基上菌落数优点优点计数方便、操作简单计数方便、

22、操作简单计数的是活菌计数的是活菌缺点缺点不能区分死菌与活菌不能区分死菌与活菌操作较复杂且有一定误操作较复杂且有一定误差差计算公式计算公式每毫升原液含菌株数每毫升原液含菌株数4001 00004001 0000每小格平均菌每小格平均菌株数株数稀释倍数稀释倍数每毫升原液含菌株数每毫升原液含菌株数平均菌落数平均菌落数/所用涂布液所用涂布液体积体积稀释倍数稀释倍数3.比较直接计数法与间接计数法四、探究实践：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1.提出问题（实验目的）（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌。（2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。2.实验原理 绝大多数微生物都能利用葡萄糖，绝大多数微

23、生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成但是只有能合成_的微生物才能分的微生物才能分解尿素，利用解尿素，利用_的的_培养基，可以从土壤中分离出培养基，可以从土壤中分离出_的细菌。的细菌。组分分含量含量KHKH2 2POPO4 41.4g1.4gNaNa2 2HPOHPO4 42.1g2.1gMgSOMgSO4 47H7H2 2O O0.2g0.2g葡萄糖葡萄糖10.0g10.0g尿素尿素1.0g1.0g琼脂脂15.0g15.0gH H2 2O O定容至定容至1000mL1000mL脲酶脲酶以尿素作为唯一氮源以尿素作为唯一氮源选择选择分解尿素分解尿素CO(NHCO(NH2 2)2 2+H+H2 2O

24、O脲酶脲酶2 2NHNH3 3+CO+CO2 23.实验步骤（1）土壤取样取样地点要求：取样地点要求：酸酸碱碱度度接接近近中中性性的的潮潮湿湿土土壤壤。细细菌菌适适宜宜在在该该环环境境中生长中生长。取样过程：取样过程：铲去铲去表表层层土土（一般（一般3cm3cm左右）左右）。细菌绝大部分分布在细菌绝大部分分布在距地表距地表3 38cm8cm的土壤层的土壤层。注意事项：注意事项：取取土土样样时时用用的的铁铁铲铲和和取取样样袋袋在在使使用用前前都都需需要要灭灭菌菌。操作完成后，操作完成后，一定要洗手一定要洗手。（2）制备培养基选择培养基：选择培养基：以尿素为唯一氮源。以尿素为唯一氮源。葡萄糖葡萄糖

25、10.0g10.0g尿素尿素1.0g1.0gKHKH2 2POPO4 41.4g1.4gNaNa2 2HPOHPO4 42.1g2.1gMgSOMgSO4 47H7H2 2O O0.2g0.2g琼脂琼脂15.0g15.0g蒸馏水蒸馏水1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏蛋白胨培养基：作为对照组，来判断选择培养基是否具有作为对照组，来判断选择培养基是否具有选择作用。选择作用。KH2PO4和Na2HPO4的作用是：提供无机盐；提供无机盐；调节调节pHpH。（3）样品的稀释与涂布平板（稀释涂布平板法稀释涂布平板法）注注：测测细细菌菌时时，一一般般选选用用10104 4、10105 5、

26、10106 6倍倍稀稀释释的的稀稀释释液液进进行行平板培养平板培养 在在初初次次实实验验中中，对对于于稀稀释释的的范范围围没没有有把把握握，应应选选择择一一个个比比较较宽宽的的范范围围，将将1101103 31101107 7倍倍稀稀释释的的稀稀释释液液分分别别涂涂布布到到平平板板上上培培养养，以以保保证证能能从从中中选选择择出出菌菌落落数数在在3030300300的的平板进行计数平板进行计数。每个浓度至少设置每个浓度至少设置4 4个平板，个平板，1 1、2 2、3 3平板是选择培养基（平板是选择培养基（实验组，三个重复实验组，三个重复），），4 4为牛肉膏蛋白胨培养基为牛肉膏蛋白胨培养基（用

27、以判断选择培养基是否具有选择作用）（用以判断选择培养基是否具有选择作用）如何如何验证培养基中是否含有杂菌？验证培养基中是否含有杂菌？设置设置2 2个平板作为对照：个平板作为对照：不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基细菌：一般用104、105、106稀释液。放线菌：一般用103、104、105稀释液。真菌：一般用102、103、104稀释液。（2）样品的稀释与涂布平板以保证获得菌落数在30300之间适于计数的平板。四、土壤中分解尿素的细菌的分离和计数（4）微生物的培养与观察培养条件：培养条件：不同种类不同种类的微生物，往往需要的微生物，往往需要

28、不同不同的培养的培养温度温度和培养和培养时间时间。（细菌（细菌一般在一般在30-3730-37的温度下培养的温度下培养1-2d1-2d）观察：观察：每隔每隔24h24h统计一次菌落数目，选取菌落数目统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定稳定时的记录时的记录作为结果。（一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现作为结果。（一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色如形状、大小和颜色等）等）（5）结果分析现象现象分析分析未涂布培养基上无菌落生长未涂布培养基上无菌落生长未涂布培养基上有菌落生长未涂布培养基上有菌落生长牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目

29、牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显多于选择培养基上的菌落数目明显多于选择培养基上的菌落数目培养基未被杂菌污染培养基未被杂菌污染培养基被杂菌污染培养基被杂菌污染选择培养基具有选择作用选择培养基具有选择作用结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。出一些菌落。你是否获得了某一稀释度下菌落数为你是否获得了某一稀释度下菌落数为3030300300的平板的平板?在这一稀释度下，在这一稀释度下，是否至少有是否至少有2 2个平板的菌落数接近个平板的菌落数接近?你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少你统计的每克

30、土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少?与其他同学与其他同学统计的结果接近吗统计的结果接近吗?如果差异很大，可能是什么原因引起的如果差异很大，可能是什么原因引起的?如果没有接种的培养基上如果没有接种的培养基上没有菌落生长没有菌落生长，说明说明培养基没有被杂培养基没有被杂菌污染菌污染。如果接种后的完全培养基上的菌落数如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于明显多于选择培选择培养基上的菌落数，说明养基上的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。如果得到了两个或多个菌落数为如果得到了两个或多个菌落数为3030300300的平板，说明稀释度合适，的平板，说明稀释度合

31、适，操作比较成功，能够进行菌落的计数。操作比较成功，能够进行菌落的计数。如果是用同一土样进行的操作，数据应该比较接近。如果差异很大，如果是用同一土样进行的操作，数据应该比较接近。如果差异很大，就需要从就需要从操作是否规范、培养基配制是否合理操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因。等方面查找原因。(6)操作提示 无菌操作做好标记本实验使用的平板和试管比较多，为避免混淆，使用前要做好标记。例如，在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。制定计划对于耗时较长的生物实验，要事先规划时间，对于耗时较长的生物实验，要事先规划时间，以便提高工作效率，在操作时更加有条不紊以便提高

32、工作效率，在操作时更加有条不紊。不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。a a、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。b b、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入 锥形瓶中，塞好棉塞。锥形瓶中，塞好棉塞。c c、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。可以观察可以观察菌落周围是否出现红色环带，菌落周围是否出现红色环带，红色环带红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越直径与菌落直径比值越大，说明分解能力

33、越强强。（6）进一步探究分解尿素细菌的进一步鉴定原理：原理：细菌合成的脲酶将尿素分解为细菌合成的脲酶将尿素分解为氨氨，氨会使培养基的，氨会使培养基的碱性增碱性增强强，pHpH升高，因此可以通过升高，因此可以通过检测培养基检测培养基pHpH的变化的变化来判断是否发生来判断是否发生了该化学反应，进而判断该菌是否为尿素分解细菌。了该化学反应，进而判断该菌是否为尿素分解细菌。方法：方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂酚红指示剂，培养，培养某种细菌后，如果某种细菌后，如果pHpH升高升高，指示剂将，指示剂将变红变红：液体培养基：液体培养基：可以直接看液体的变色

34、情况；可以直接看液体的变色情况；固体培养基：固体培养基：思考：在思考：在初次初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在证从中选择出菌落数在3030300300的平板进行计数？的平板进行计数？选用稀释范围更大的稀释液进行平板培养；选用稀释范围更大的稀释液进行平板培养；例如例如可以可以将将1 110103 3-1-110107 7倍稀释的稀释液分别涂布平板上培倍稀释的稀释液分别涂布平板上培养，以保证能从中选择出菌落数为养，以保证能从中选择出菌落数为30-30030-300的平板进行计算。的平板进行计算。学以致用学以致用说出下列各

35、组培养基的目的：说出下列各组培养基的目的：3 3组接种得选择培养基：组接种得选择培养基：_ 1 1组接种的牛肉膏蛋白胨培养基：组接种的牛肉膏蛋白胨培养基：_ 不接种的选择培养基：不接种的选择培养基：_ 不接种的牛肉膏蛋白胨培养基：不接种的牛肉膏蛋白胨培养基：_对土壤中分解尿素的细菌分离和计数对土壤中分解尿素的细菌分离和计数判断选择培养基是否具有选择作用判断选择培养基是否具有选择作用验证选择培养基中是否含有杂菌验证选择培养基中是否含有杂菌验证牛肉膏蛋白胨培养基中是否含有杂菌验证牛肉膏蛋白胨培养基中是否含有杂菌微生物的数量测定微生物的数量测定选择培养基的作用选择培养基的作用微生物选择培养获取纯培养

36、物的方法微生物选择培养获取纯培养物的方法-稀释涂布平板法稀释涂布平板法微微生生物物的的选选择择培培养养和和计计数数选择培养基选择培养基微生物的选择培养微生物的选择培养科学实例科学实例筛选原则筛选原则选择培养基的概念及举例选择培养基的概念及举例稀释涂布平板法的操作过程稀释涂布平板法的操作过程间接计数法间接计数法 稀释涂布平板法稀释涂布平板法直接计数直接计数 计数板计数法计数板计数法土壤中分解尿素的细土壤中分解尿素的细菌的分离与计数菌的分离与计数培养基的制备培养基的制备实验设计实验设计（1 1）土壤取样）土壤取样（2 2）样品的稀释）样品的稀释（3 3）稀释涂布平板法稀释涂布平板法接种接种（4 4

37、）微生物的培养与观察）微生物的培养与观察实验设计实验设计【课堂小结课堂小结】1 1.研究人员用无机盐、琼脂和石油配制的培养基从被石油污染研究人员用无机盐、琼脂和石油配制的培养基从被石油污染的土壤中筛选出了一种的土壤中筛选出了一种石油降解菌石油降解菌。判断下列相关表述是否正确。判断下列相关表述是否正确。（1 1）这种培养基是一种选择培养基。（）这种培养基是一种选择培养基。（）（2 2）利用这种石油降解菌可以降解石油。修复土壤。）利用这种石油降解菌可以降解石油。修复土壤。（）（3 3）相对于未被污染的土壤）相对于未被污染的土壤,从被石油污染的土壤中更容易分离从被石油污染的土壤中更容易分离到石油降解

38、菌。到石油降解菌。（）练习与应用一、概念检测2 2.用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数上的菌落数就能推测出样品中的活菌数,原因是原因是（）A A.菌落中的细菌数目是固定的菌落中的细菌数目是固定的 B.B.平板上的一个菌落就是一个细菌平板上的一个菌落就是一个细菌 C.C.通过此方法统计的菌落数与活菌的实际数目相同通过此方法统计的菌落数与活菌的实际数目相同 D.D.平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌D D练习与应用一、概念检测1.1.

39、反刍（反刍（chch）动物，如牛和羊具有特殊的器官一瘤胃。在瘤）动物，如牛和羊具有特殊的器官一瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。请你设胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。请你设计一个实验从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物。计一个实验从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物。反刍动物的瘤胃中有大量的微生物，其中就有分解尿素的反刍动物的瘤胃中有大量的微生物，其中就有分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基，因此分离其中能分解尿素的微生物

40、除了需要准备选择培养基，还应该参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。还应该参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。二、拓展应用练习与应用2 2.地球上的植物每年产生的纤维素超过地球上的植物每年产生的纤维素超过7070亿吨，其中亿吨，其中 40%40%60%60%能被土壤中某些微能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用精杆等生产酒精，用纤维索酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染人们能够利用精杆等生产酒精，用纤维索酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多

41、糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维索被纤维素分解菌分解后，红与纤维素形成红色复合物；而当纤维索被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈(如如下图所示下图所示)。请回答下列问题。请回答下列问题。（1 1）现在要从土壤中分离纤维素分解菌，请）现在要从土壤

42、中分离纤维素分解菌，请你给出详细的实验方案。你给出详细的实验方案。提示：提示：可以参考本节可以参考本节“探究探究实践实践”中的设中的设计思路进行设计。计思路进行设计。二、拓展应用练习与应用（2 2）你打算到什么环境中去寻找纤维素分解菌？为什么？）你打算到什么环境中去寻找纤维素分解菌？为什么？提示：提示：纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中，采集土样时，纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中，采集土样时，可以选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土等。可以选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土等。（3 3）有同学说）有同学说,可以把滤纸埋在土壤中可以把滤纸埋在土壤中,经过经过一段时间后一段时间后,再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。请你评价这一做法。分解菌。请你评价这一做法。提示：提示：这是人工设置适合纤维素分解菌生存这是人工设置适合纤维素分解菌生存的环境的环境,腐烂的滤纸上很可能有纤维素分解菌。腐烂的滤纸上很可能有纤维素分解菌。二、拓展应用练习与应用