【课件】微生物的培养技术及应用第3课时课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

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1、第1章 发酵工程本节聚焦:l什么是培养基？如何配置培养基？l什么是无菌技术？l怎样进行酵母菌的纯化？（第（第3课时）第2节 微生物的培养技术及应用四、微生物的纯培养1.纯培养物：由单一个体繁殖所获得的微生物群体。2.纯培养：获得纯培养物的过程。3.微生物纯培养过程：配制培养基配制培养基灭菌灭菌接种接种分离分离培养培养计算称量溶化灭菌倒平板酵母菌的纯培养？酵母菌的纯培养？新知导学：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体 定义：特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。功能：菌落是鉴定菌种的重要依据。五、酵母菌的纯培养.菌落新知导学：2、常用方法

2、：法和 法。微生物群分散单个细胞单个菌落繁殖将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖而形成的菌落。3、原理：五、酵母菌的纯培养新知导学：4、步骤（1）制备培养基称取去皮的马铃薯200g切成小块加水1000mL，加热煮沸至马铃薯软烂得到滤液调节培养基的pH马铃薯琼脂培养基加入20g葡萄糖，1520g琼脂用蒸馏水定容至1000mL用纱布过滤配置培养基将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞包上牛皮纸，并用皮筋勒紧压力100kPa、温度为121的条件下，灭菌15 30min取5 8套培养皿培养皿叠成一束用几层牛皮纸包紧放入干热灭菌箱内，160 170灭菌2h灭菌4、

3、步骤（1）制备培养基拔出锥形瓶的棉塞拔出锥形瓶的棉塞将瓶口迅速通过火焰将瓶口迅速通过火焰用拇指和食指将培养皿打开用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（培养基（10 20mL）倒入）倒入培养皿，立即盖上皿盖。培养皿，立即盖上皿盖。等待培养基冷却凝固后，等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒转过来放置将培养皿倒转过来放置待培养基冷却至50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。灼烧灭菌4、步骤（1）制备培养基倒平板1.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在

4、皿盖与皿底之间的培养基上滋生。将所倒平板放入37的恒温箱中培养12h24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。3.如何确定所倒平板未被杂菌污染或灭菌是否彻底？2.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？防止培养基表面的水分过快挥发；防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染。酵母菌的纯培养合作研讨：2.接种和分离酵母菌单个细胞微生物群单个菌落连续划线培养12345平板划线法:通过接种环在固体培养基表面连续划线操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。工具：接种环连续划线连续划线法法分区划线法分区划线法灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞试管口通过

5、火焰在火焰附近用接种环蘸取一环菌液试管口通过火焰，并塞上棉塞将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照）2.接种和分离酵母菌3）操作 分区划线法分区划线法平板划线法注意事项:接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次划线首尾不能相接每次划线前对接种环进行灼烧灭菌划线后,培养皿倒置培养（）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？灼烧时期灼烧时期目的目的取菌种前取菌种

6、前每次划线前每次划线前接种结束后接种结束后杀死接种环上原有微生物。杀死接种环上原有微生物。杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端上次划线的末端杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。（）在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因？以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。（）在作第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线的原因？使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，以便获得单个菌落。使细菌的数目随着划线次数的增

7、加而逐步减少，以便获得单个菌落。合作研讨：下图是平板划线操作的示意图，据图回答下列问题：合作研讨：(1)用字母和箭头表示平板划线操作的正确步骤。提示：dbfaechg。(3)在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？提示：以免接种环温度太高，杀死菌种。(4)在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？提示：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，(5)接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养，未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？提示：培养未接种培养

8、基的作用是对照，未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的。若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。1倒平板时的注意事项(1)琼脂是一种多糖，在98 以上熔化，在44 以下凝固。倒平板时高于50 则会烫手，低于50 时若不及时操作，琼脂会凝固。(2)可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2平板划线操作的注意事项平板划线操作的注意事项(1)灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。(2)第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使微生物的数目随着划线次数的增加而

9、逐渐减少，最终得到由单个菌种繁殖而来的菌落。(3)划线时最后一区不要与第一区相连。完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28左右(培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异)的恒温培养箱中培养24 48h。（3）培养酵母菌思考：思考：培养未接种的培养基的目的？1.检查培养基制备是否合格。2.未接种的培养基表面若有菌落生长,则说明培养基被污染,应该重新制备;若无菌落生长,则说明未被污染。4、步骤1下列有关微生物的分离与培养的叙述，错误的是()A获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染 B倒置平板可防止培养皿皿盖上的冷凝水滴落造成污染 C倒平板时将培养皿的皿盖拿开，以便

10、于将锥形瓶中的 培养基倒入培养皿 D检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是将未接种 的培养基放在恒温培养箱中培养2在分离、纯化酵母菌实验中，划线接种(甲)、培养结果(乙)如 图所示，且甲、乙的对应位置不变。有关叙述错误的是()A配制培养基时需进行高压蒸汽灭菌 B甲中a区域为划线的起始位置 C连续划线的目的是获得单个微生物繁殖形成的菌落 D图示接种过程中接种环灼烧了5次BC训练巩固：一、概念检测1.微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。判断下列相关表述是否正确。（1）培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利。（）（2）消毒和灭菌的杀菌程度存在差异。（）（3）微生物的纯培养物

11、就是不含有代谢废物的微生物培养物。（）2.日常生活中保存食品的方法有哪些？这些方法是如何阻止或抑制微生物生长的？干制干制可以降低食品的水分含量；可以降低食品的水分含量；腌制腌制可以通过食盐、糖等制造高渗环境，从而抑制微生物的生长和繁殖；可以通过食盐、糖等制造高渗环境，从而抑制微生物的生长和繁殖；低温低温则是通过降低微生物的代谢速率来抑制微生物的生长和繁殖。则是通过降低微生物的代谢速率来抑制微生物的生长和繁殖。二、拓展应用1 1.某同学将某同学将5 5个手指尖在贴有个手指尖在贴有“洗手前洗手前”标签的培养基上轻轻按一下。然后标签的培养基上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将用肥皂将该手洗干净

12、，再将5 5个指尖在贴有个指尖在贴有“洗手后洗手后”标签的同种标签的同种培养基培养基上上轻轻按一下。将这两个轻轻按一下。将这两个培养皿培养皿放入放入3737恒温培养箱中培养恒温培养箱中培养24h24h后，发现贴有后，发现贴有“洗手后洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。(1)这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有_。培养皿和培养基(2)“将指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的哪一步操作？接种（3）从实验结果来看,洗手后我们就能进行无菌操作了吗？操作时，我们可以采用 什么方法来避免手上微生物的污染？通过实验结果可以看到，通过实验

13、结果可以看到，洗手后手上还有一些微生物洗手后手上还有一些微生物，不能直接进，不能直接进行无菌操作。行无菌操作。可以通过用可以通过用酒精棉球擦拭酒精棉球擦拭双手，或双手，或戴消过毒的手套戴消过毒的手套等方法来避免手等方法来避免手上微生物的污染。上微生物的污染。2 2.某某生生物物兴兴趣趣小小组组将将从从葡葡萄萄皮皮上上成成功功分分离离来来的的野野生生酵酵母母菌菌分分别别接接种种于于3 3个个盛盛有有等等量量同同种种液液体体培培养养基基的的锥锥形形瓶瓶中中，并并放放置置在在摇摇床床上上培培养养，摇摇床床转转速速分分别别为为 210 210 r/minr/min，230 230 r/minr/min

14、和和250 250 r/minr/min。培培养养时时间间与与酵酵母母菌菌种种群群密密度度的的关关系系如如下图所示。请分析回答下列问题。下图所示。请分析回答下列问题。（1 1）摇床转速不同）摇床转速不同,意味着培养条件有什么不同意味着培养条件有什么不同？二、拓展应用意味着培养液中02含量不同。（2 2）从图中数据你可以得出什么结论）从图中数据你可以得出什么结论?其原因是其原因是 什么什么?培养液中02含量越高,酵母菌种群密度越大。（3 3）为什么培养）为什么培养8h8h后，其中后，其中2 2个锥形瓶中酵母菌个锥形瓶中酵母菌 的种群密度基本达到稳定的种群密度基本达到稳定?这时候已经达到了环境容纳量。