生物化学简明教程第四版04核酸.ppt

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1、3 3 核酸核酸主要内容：主要内容：主要介绍碱基、主要介绍碱基、核苷、核苷酸和核核苷、核苷酸和核酸的结构、性质和酸的结构、性质和功能，核酸的分离、功能，核酸的分离、提纯、鉴定等。提纯、鉴定等。1核酸的概述核酸的概述 核酸英文名核酸英文名nucleic acid（NA）1868年瑞士年瑞士F.Miescher（米歇尔）发现了核酸。（米歇尔）发现了核酸。2作业345678类别类别 nucleic acid ribonucleic acid,RNA deoxyribonucleic acid,DNA 9 DNA（deoxyribonucleic acid）：）：大部分在大部分在核核中中 RNA（ri

2、bonucleic acid）：）：核核,质质均有分布均有分布 三种三种 RNA：tRNA,mRNA,rRNA （15%（5%）（）（80%）分布分布10 98 98 核中（染色体中）核中（染色体中）真核真核 线粒体（线粒体（mDNA mDNA）核外核外 叶绿体（叶绿体（ctDNA ctDNA）DNA DNA 拟核拟核 原核原核 核外：质粒（质体）核外：质粒（质体）病毒：病毒：DNA DNA 病毒病毒 11核蛋白核蛋白 磷酸磷酸 核苷核苷 碱基碱基 戊糖戊糖 蛋白质蛋白质 核酸是由几十个甚至几千万个核酸是由几十个甚至几千万个核苷酸核苷酸聚合聚合而成的而成的具有一定空间结构具有一定空间结构的大分

3、子化合物。的大分子化合物。核酸核酸核苷酸核苷酸 3.1 3.1 核酸的组成成分核酸的组成成分 123.1.1 碱基（碱基（base）：又称含氮碱）：又称含氮碱（1）嘧啶碱（）嘧啶碱（pyrimidine,Py）1314（2）嘌呤碱（）嘌呤碱（purine,Pu）其它嘌呤（核酸的代谢产物）：其它嘌呤（核酸的代谢产物）：黄嘌呤、次黄嘌呤、尿酸等黄嘌呤、次黄嘌呤、尿酸等 153.1.2 3.1.2 戊糖（戊糖（pentosepentose）（1 1）结构）结构 -D-核糖核糖-D-2-脱氧核糖脱氧核糖-D-2-O-甲基核糖甲基核糖163.1.3 3.1.3 核苷核苷 核苷：含核苷：含N N苷，苷，-

4、苷苷 17核苷中戊糖与碱基的连接方式：核苷中戊糖与碱基的连接方式：腺嘌呤核苷（adenosine）胞嘧啶脱氧核苷（deoxycytidne）18核苷核苷 核糖核苷（核苷）：核糖核苷（核苷）：A A、G G、C C、U U 脱氧核糖核苷（脱氧核苷）：脱氧核糖核苷（脱氧核苷）：dAdA、dGdG、dCdC、dT dT 19修饰核苷或稀有核苷修饰核苷或稀有核苷20修饰核苷包括三种情况修饰核苷包括三种情况:（1）由）由修饰碱基修饰碱基和糖组成的核苷和糖组成的核苷（2）由非修饰碱基和）由非修饰碱基和2-O-甲基核糖甲基核糖组成的核苷组成的核苷（3）由碱基与糖）由碱基与糖连接方式特殊连接方式特殊的核苷的核

5、苷 21（1）（2）22()23修饰核苷的简写符号修饰核苷的简写符号 少数修饰核苷用单字符号如少数修饰核苷用单字符号如D、I；但大多数；但大多数修饰核苷是将碱基取代基、取代位置和取代数目写在修饰核苷是将碱基取代基、取代位置和取代数目写在核苷单字符号的左边，用小写英文字母代表取代基。核苷单字符号的左边，用小写英文字母代表取代基。24取代基用下列小写英文字母表示取代基用下列小写英文字母表示:甲基甲基m 乙酰基乙酰基ac 氨基氨基n 甲硫基甲硫基ms 羟基羟基o或或h 硫基硫基s 异戊烯基异戊烯基i 羧基羧基c 25例：例：26注意：注意：例例:2-O-甲基腺苷甲基腺苷 Am 含修饰核糖的核苷即含修

6、饰核糖的核苷即2-O-甲基核苷的表示方法，甲基核苷的表示方法，在核苷符号的右下方注上一个小写在核苷符号的右下方注上一个小写m。272，3，5一核糖核苷酸一核糖核苷酸(2-AMP)(3-AMP)(5-AMP)3.1.4 核苷酸核苷酸（1）核苷酸的结构和功能）核苷酸的结构和功能2829303，5一脱氧核糖核苷酸一脱氧核糖核苷酸Deoxyadenosine 3-monphosphate (3-dAMP)Deoxyadenosine 5-monphosphate (5-dAMP)313233核苷酸的重要衍生物核苷酸的重要衍生物 ATP类的高能磷酸化合物类的高能磷酸化合物 AMPADPATP3435核苷

7、酸是许多酶的辅因子的结构成分核苷酸是许多酶的辅因子的结构成分 NADNAD、NADPNADP、CoACoA、FADFAD36环状核苷酸环状核苷酸 37细胞内细胞内:ATP cAMP+PPi 磷酸二酯酶磷酸二酯酶 5-AMP 腺苷酸环化酶腺苷酸环化酶 （AC）38核苷多磷酸类核苷多磷酸类 39(2)核苷酸性质核苷酸性质 核苷酸紫外吸收性质核苷酸紫外吸收性质 40核苷酸两性解离性质核苷酸两性解离性质 4142OC H2HHO HHO HHONNON H2POOH OC M PpKa2=4.5-OC H2HHO HHO HHONNON H2POOOC M PpKa3=6.4-pI =C MPpKa1

8、+pKa22=0.8+4.52=2.65pI =C MPpKa1+pKa22=0.8+4.52=2.65pI =C MPpKa1+pKa22=0.8+4.52=2.65OC H2HHO HHO HHONNON H2POOH OC M PpKa1=0.80H+-OC H2HHO HHO HHONNON H2POOH OC M PpKa1=0.80H+-OC H2HHO HHO HHONNON H2POO HH OC M P+H+（4核苷酸的两性解离和等电点核苷酸的两性解离和等电点4344453.2 核酸的一级结构核酸的一级结构 1核酸分子中核苷酸的连接方式核酸分子中核苷酸的连接方式 3,5 磷酸

9、二酯键磷酸二酯键46RNA475-5-磷酸端（常用磷酸端（常用5 5-P-P表示）；表示）；3-3-羟基端（常用羟基端（常用3 3-OH-OH表示）表示）方向性方向性:注明它的方向是注明它的方向是5353或是或是3535。多聚核苷酸的表示方式多聚核苷酸的表示方式DNA RNA 5pdApdCpdGpdTOH 3 5pApCpGpUOH 5pACGTGCGT 3 5pACGUAUGU 3 d（pACGTGCGT）pACGUAUGUT553U553 OH OH OH OH 3.3 DNA的二级结构的二级结构 3.3.1 提出提出DNA双螺旋结构模型的根据双螺旋结构模型的根据（1）x-光衍射分析光衍

10、射分析 49（2）DNA碱基组成的定量分析碱基组成的定量分析 DNA碱基组成有种的特异性，但没有组织、器官特异性。碱基组成有种的特异性，但没有组织、器官特异性。A=T；G=C；A+G=T+C 20世纪世纪40年代年代chargaff规则规则 50（3）DNA的滴定曲线的滴定曲线513.3.2 DNA双螺旋结构模型的要点双螺旋结构模型的要点1953年年Watson和和Crick提出了提出了DNA双螺旋结构。双螺旋结构。52DNA DNA 双螺旋结构的形成双螺旋结构的形成53535353磷酸磷酸核糖核糖碱基碱基54DNA 双螺旋模型主要特征双螺旋模型主要特征1.1.两两条条反反向向平平行行的的多多

11、聚聚核核苷苷酸酸链链沿沿同同一一中中心心轴轴右右旋旋相互盘绕而形成相互盘绕而形成。2.2.磷磷酸酸和和脱脱氧氧核核糖糖单单位位作作为为不不变变的的骨骨架架组组成成位位于于外外侧侧，糖糖环环平平面面与与中中轴轴平平行行，作作为为可可变变成成分分的的碱碱基基位位于于内内侧侧，碱碱基基平平面面与与中中轴轴垂垂直直链链间间碱碱基基按按A AT T，G GC C配配对对（碱碱基基配配对对原原则则，ChargaffChargaff定定律律），形成碱基堆积力。形成碱基堆积力。3.3.螺螺旋旋直直径径2nm2nm，相相邻邻碱碱基基平平面面垂垂直直距距离离0.34nm,0.34nm,两两核核苷苷酸酸夹夹角角为为

12、3636，每每一一圈圈1010个个核核苷苷酸酸，螺螺距距为为3.4nm3.4nm。55DNA 双螺旋模型主要特征双螺旋模型主要特征4.DNA4.DNA分子表面形成大沟和小沟。分子表面形成大沟和小沟。5.5.大大多多数数天天然然DNADNA属属双双链链DNADNA（dsDNAdsDNA），某某些些病病毒毒为为单链单链DNA(ssDNA)DNA(ssDNA)。6.6.双双链链DNADNA分分子子主主链链上上的的化化学学键键受受碱碱基基配配对对等等因因素素影影响响旋旋转转受受到到限限制制，使使DNADNA分分子子比比较较刚刚硬硬，呈呈比比较较伸展的结构。伸展的结构。561.1.氢键氢键 DNA的双螺

13、旋结构稳定因素的双螺旋结构稳定因素2.2.碱基堆集力碱基堆集力（base-stacking forces）3.3.磷酸基上负电荷被胞内组蛋白或正离子磷酸基上负电荷被胞内组蛋白或正离子中和中和4.4.碱基处于疏水环境中碱基处于疏水环境中DNA DNA 双螺旋结构的意义双螺旋结构的意义 该该模模型型揭揭示示了了脱脱氧氧核核糖糖核核酸酸作作为为遗遗传传物物质质的的稳稳定定性性特特征征，最最有有价价值值的的是是确确认认了了碱碱基基配配对对原原则则，这这是是脱脱氧氧核核糖糖核核酸酸复复制制、转转录录和和反反转转录录的的分分子子基基础础，亦亦是是遗遗传传信信息息传传递递和和表表达达的的分分子子基基础础。该

14、该模模型型的的提提出出是是2020世世纪纪生生命命科科学学的的重重大大突突破破之之一一，它它奠奠定定了了生生物物化化学学和和分分子子生生物物学学乃乃至至整整个个生生命命科科学学飞飞速速发发展展的的基石。基石。583.3.3 DNA二级结构的其他类型二级结构的其他类型 Watson Crick DNA双螺旋结构（双螺旋结构（B-DNA）当当DNA钠盐纤维钠盐纤维相对湿度相对湿度和和盐的种类盐的种类改变时，改变时，DNA的构象发生改变。的构象发生改变。不同不同DNA纤维的空间结构纤维的空间结构 类型类型结晶状态结晶状态ANa盐，相对湿度盐，相对湿度75%时结晶时结晶BNa盐，相对湿度盐，相对湿度9

15、2%时结晶时结晶C锂盐，相对湿度锂盐，相对湿度66%时结晶时结晶59Z-DNA 1979年美国年美国ARich等人发现了左旋等人发现了左旋DNA（左手（左手DNA双螺旋结构）双螺旋结构）晶体晶体X-光衍射分析光衍射分析 d(CpGpCpGpCpGp)6061三种三种 DNA 双螺旋构象比较双螺旋构象比较A B Z外型外型 粗短粗短 适中适中 细长细长螺旋方向螺旋方向 右手右手 右手右手 左手左手螺旋直径螺旋直径 2.3nm 2.0nm 1.8nm 2.3nm 2.0nm 1.8nm碱基直升碱基直升 0.26nm 0.34nm 0.38nm 0.26nm 0.34nm 0.38nm每圈碱基数每圈

16、碱基数 11 10 12 11 10 12螺距螺距 2.8nm 3.4nm 4.5nm碱基倾角碱基倾角 20 1 7 20 1 7大沟大沟 很窄很深很窄很深 很宽较深很宽较深 平坦平坦小沟小沟 很宽、浅很宽、浅 窄、深窄、深 较窄很深较窄很深Z-DNA的生物功能：的生物功能：与基因表达、基因调控有关。与基因表达、基因调控有关。63二重对称结构（回文结构也称反向重复）二重对称结构（回文结构也称反向重复）6465镜像重复与三螺旋镜像重复与三螺旋DNA 66673.4 DNA的高级结构的高级结构 噬菌体噬菌体T2DNA长约长约50m E-coli DNA 长约长约1mm 人生殖细胞人生殖细胞DNA长

17、约长约1m 68动态中DNA超螺旋结构69生物中，生物中，DNA与组蛋白八聚体形成核小体结构时，存在着负超螺旋。与组蛋白八聚体形成核小体结构时，存在着负超螺旋。DNA拓扑异构酶可导致产生拓扑异构酶可导致产生DNA超螺旋或消除超螺旋。超螺旋或消除超螺旋。不同形状的不同形状的DNA分子在琼脂糖中的迁移率分子在琼脂糖中的迁移率DNA分子的琼脂糖凝胶电泳图谱3.4.1 环状DNA的超螺旋结构70生物中，生物中，DNA与组蛋白八聚体形成核小体结构时，存在着负超螺旋。与组蛋白八聚体形成核小体结构时，存在着负超螺旋。DNA拓扑异构酶可导致产生拓扑异构酶可导致产生DNA超螺旋或消除超螺旋。超螺旋或消除超螺旋。

18、不同形状的不同形状的DNA分子在琼脂糖中的迁移率分子在琼脂糖中的迁移率3.4.1 环状DNA的超螺旋结构71螺螺旋旋和和超超螺螺旋旋电电话话线线螺旋螺旋超螺旋超螺旋超螺旋状态的定量描述超螺旋状态的定量描述公式公式1 1：L=T+WL=T+W L L连环数（连环数（linking numberlinking number），），DNADNA双螺旋中一双螺旋中一条链以右手螺旋与另一条链缠绕的次数。条链以右手螺旋与另一条链缠绕的次数。T TDNADNA分子中的螺旋数（分子中的螺旋数（twisting numbertwisting number）W W超螺旋数或缠绕数（超螺旋数或缠绕数（writhin

19、g numberwrithing number）L=25,T=25,W=0松弛环形松弛环形1152010523L=23,T=25,W=2负超螺旋负超螺旋12148231613L=25,T=25,W=0松弛环形松弛环形1152010523L=23,T=23,W=0解链环形解链环形15101520231510152025L=23,T=25,W=2负超螺旋负超螺旋121482316131510152023右手旋转拧松两匝后的线形右手旋转拧松两匝后的线形DNADNA 超螺旋的形成超螺旋的形成超螺旋的拓超螺旋的拓扑学公式：扑学公式：L=T+W或或=+例1不切开不切开DNADNA分子的拓扑学参数的变化。分

20、子的拓扑学参数的变化。n假定某环状分子的长度为5500个碱基对，在B-DNA的松弛状态下，则nT=5500/10=550nL=T+W L=T=550n当分子转入70%酒精溶液时，分子由B DNA转为A DNAn L=550 T=5500/11=500nW=L-T=+50例275763.4.2 3.4.2 真核生物染色体结构真核生物染色体结构777879DNA（2nm）核小体链（核小体链（11nm，每个核小体，每个核小体200bp）纤丝（纤丝（30nm，每圈，每圈6个核小体）个核小体）突环（突环（150nm，每个突环大约，每个突环大约75000bp）玫瑰花结（玫瑰花结（300nm，6个突环）个突

21、环）螺旋圈（螺旋圈（700nm，每圈，每圈30个玫瑰花）个玫瑰花）染色体（染色体（1400nm，每个染色体单体含每个染色体单体含10个螺旋圈）个螺旋圈）3.5 DNA和基因组和基因组3.5.1 基因和基因组的概念基因（Gene）：也称为遗传因子。是指携带有遗传信息的DNA序列，是控制性状的基本遗传单位。（结构基因，调节基因，间隔序列）基因组（Genome）：一般的定义是单倍体细胞中的全套染色体为一个基因组，或是单倍体细胞中的全部基因为一个基因组。813.5 DNA和基因组和基因组3.5.2 病毒和细菌基因组的特点（1）共同点基因组较小，只有一个环状或线形的DNA分子。基因组的大部分序列是用来编

22、码的，基因之间的间隔序列很短。功能相关的基因常常串联在一起，由共同的调控元件调控，并转录成同一mRNA分子，指导多种蛋白质的合成。823.5 DNA和基因组和基因组3.5.3 真核生物基因组的特点基因组较大，复制有多个起始点。不存在操纵子结构。存在大量的重复序列。83OHOHOH53 RNA与与DNA的差异的差异 DNA RNA糖糖 脱氧核糖脱氧核糖 核糖核糖碱基碱基 AGCT AGCU 不含稀有碱基不含稀有碱基 含稀有碱基含稀有碱基3.6 RNA的结构和功能的结构和功能RNA的概述的概述3,5-磷酸二酯键磷酸二酯键 84RNA 的类别的类别u信使信使 RNA（mRNA）：）：在蛋白质合成中起

23、模板作用；在蛋白质合成中起模板作用；u核糖体核糖体 RNA（rRNA）：）：与蛋白质结合构成核糖体，核与蛋白质结合构成核糖体，核糖体是蛋白质合成的场所；糖体是蛋白质合成的场所；u转移转移 RNA（tRNA）：）：在蛋白质合成时起着携带活化氨在蛋白质合成时起着携带活化氨基酸的作用。基酸的作用。hnRNA(核内不均一RNA);snRNA(小核RNA);scRNA（细胞质小RNA）;asRAN(反义RNA)85Ala（1）氨基酸臂氨基酸臂（3）反密码环）反密码环（4）T C 环环（5）额外环）额外环DHU环环IGC反密码子反密码子反密码环反密码环氨基酸臂氨基酸臂可变环可变环TC环环CCA（2）二氢尿

24、嘧啶环（）二氢尿嘧啶环（DHU 环）环）3.6.1 tRNA863.6.1 tRNA87tRNA 的三级结构的三级结构883.6.2 rRNA原核细胞原核细胞真核细胞真核细胞(哺乳动物细胞哺乳动物细胞)沉降常数沉降常数近似分子量近似分子量沉降常数沉降常数近似分子量近似分子量核蛋白体核蛋白体70S2.710680S4.6106小亚基小亚基30S0.910640S1.5106rRNA16S0.610618S0.7106蛋白质蛋白质21种种0.3106约约30种种0.78106大亚基大亚基50S2.010660S3.0106rRNA23S1.210628S1.71065.8S4.01045S3.21

25、045S3.2104蛋白质蛋白质34种种0.7106约约50种种1.37104原核细胞和真核细胞的核糖体组成8990913.6.3 mRNA和和 hnRNA原核细胞原核细胞mRNA真核细胞真核细胞mRNA5端无帽子结构端无帽子结构5端有帽子结构端有帽子结构（翻译活性有关翻译活性有关）3端没有或仅有少于端没有或仅有少于10个个聚腺苷酸聚腺苷酸3端有约端有约200个聚腺苷酸个聚腺苷酸（转移到核糖体的过程有关转移到核糖体的过程有关）92 mRNA 的分子结构的分子结构原核生物 mRNA 特征：先导区先导区+翻译区（多顺反子）翻译区（多顺反子）+末端序列末端序列真核生物真核生物 mRNA 特征：特征：

26、帽帽子子（m7G-5 ppp5-N-3 p）+单单顺顺反反子子+尾巴尾巴（polyA）93原核细胞原核细胞 mRNA mRNA 的结构特点的结构特点53顺反子顺反子顺反子顺反子顺反子顺反子插入顺序插入顺序插入顺序插入顺序先导区先导区末端顺序末端顺序真核细胞真核细胞 mRNA mRNA 的结构特点的结构特点AAAAAAA-OH5“帽子帽子”PolyA 3 顺反子顺反子m7G5 ppp5 Nm-3 p3.7 核酸及核苷酸的性质核酸及核苷酸的性质分子大小分子大小:DNA Mr:106 109 或更大或更大性状：性状：DNA 为白色纤维状固体，而为白色纤维状固体，而 RNA 为白色粉末。为白色粉末。溶

27、解度：溶解度：DNA 和和 RNA 均不溶于一般的有机溶剂，微溶均不溶于一般的有机溶剂，微溶于水，但它们的钠盐在水中溶解度较大。于水，但它们的钠盐在水中溶解度较大。RNA Mr:104 106 或更大或更大3.7.1 一般的理化性质一般的理化性质黏度：黏度：DNA的的极高，极高，RNA的的黏度较小黏度较小。水解性：水解性：RNA 能被稀碱水解（与能被稀碱水解（与2-OH 有关）；在酸）；在酸性条件下，磷酸酯键比糖苷键更稳定，酸水解性条件下，磷酸酯键比糖苷键更稳定，酸水解DNA首先首先生成无嘌呤酸生成无嘌呤酸。963.7.2 3.7.2 紫外吸收性质紫外吸收性质 由于核酸中碱基的共轭双键，所以对

28、紫外光有强由于核酸中碱基的共轭双键，所以对紫外光有强烈吸收，最大吸收峰在烈吸收，最大吸收峰在260nm260nm附近，利用这一特性可附近，利用这一特性可进行核酸的定量测定。进行核酸的定量测定。97首先根据首先根据A260/A280的比值判断核酸样品的纯度的比值判断核酸样品的纯度纯纯DNA：A260/A280=1.8 纯纯RNA：A260/A280=2.0（若样品中含有杂蛋白或苯酚，则（若样品中含有杂蛋白或苯酚，则A260/A280比值明显降低）比值明显降低）纯的核酸样品可根据纯的核酸样品可根据260nm的光吸收值算出其含量的光吸收值算出其含量若若260nm光吸收值为光吸收值为1相当于相当于:5

29、0g/ml双螺旋双螺旋DNA40g/ml单链单链DNA或或RNA20g/ml寡核苷酸。寡核苷酸。981cm光径比色杯，光径比色杯，260nm光吸收值光吸收值:1g/mL DNA:0.0201g/mL RNA:0.024991.1.氢键氢键 2.2.碱基堆集力碱基堆集力（base-stacking forces）3.3.磷酸基上负电荷被胞内组磷酸基上负电荷被胞内组蛋白或正离子中和蛋白或正离子中和4.4.碱基处于疏水环境中碱基处于疏水环境中3.7.3 核酸结构的稳定性核酸结构的稳定性3.7.4 变性作用变性作用 1变性（变性（denaturation）核酸变性核酸变性:是指核酸的空间构象被破坏是指

30、核酸的空间构象被破坏,氢键断裂氢键断裂,生物活性丧失的现象。生物活性丧失的现象。DNA分子变性：分子变性：DNA分子由双链结构解链成单链的过程。分子由双链结构解链成单链的过程。引起核酸变性的因素引起核酸变性的因素：热、酸碱和光辐射等热、酸碱和光辐射等热变性：热变性：因加热而导致核酸的变性。因加热而导致核酸的变性。化学变性：化学变性：因加入化学试剂而引起的变性。因加入化学试剂而引起的变性。101（1）热变性）热变性 结构：结构：螺旋螺旋线团线团 理化性质：理化性质：紫外吸收紫外吸收 黏度黏度浮力密度浮力密度生物活性：生物活性：生物活性生物活性或丧失或丧失 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂变性的

31、本质是双链间氢键的断裂102（2）熔点（）熔点（Tm）Tm:熔点，熔解温度，熔点，熔解温度，变性温度，解链温度变性温度，解链温度 Tm:DNA双链解开一半时的温度。双链解开一半时的温度。增色效应：增色效应：当当DNA从双螺旋结构变从双螺旋结构变为单链的无规卷曲状态时，它在为单链的无规卷曲状态时，它在260nm处的吸收便增加的现象。处的吸收便增加的现象。103 DNA中中G-C对的含量对的含量;盐离子强度盐离子强度;pH值值(5.0脱嘌呤脱嘌呤,11.3DNA完全变性完全变性);变性剂（甲酰胺、尿素、甲醛等）。变性剂（甲酰胺、尿素、甲醛等）。(3)影响影响Tm值的因素值的因素 104 经验式经验

32、式:(G+C)%=(Tm-69.3)2.44 1053.7.5 核酸的复性（核酸的复性（renaturation）（1）复性）复性 理化性质理化性质:减色效应减色效应 粘度粘度高于高于Tm值值5 复性复性 也称退火也称退火 生物活性得到部分恢复生物活性得到部分恢复 106（2）影响复性的因素）影响复性的因素 温度（温度（T-25）单链片段的浓度单链片段的浓度 单链片段的长度单链片段的长度 单链片段的复杂性单链片段的复杂性 溶液的离子强度溶液的离子强度 1071083.7.6 3.7.6 核酸的杂交及应用核酸的杂交及应用定义定义定义定义 在退火后，不同来源的在退火后，不同来源的在退火后，不同来源

33、的在退火后，不同来源的DNADNADNADNA互互互互补区形成双链，或补区形成双链，或补区形成双链，或补区形成双链，或DNADNADNADNA单链和单链和单链和单链和RNARNARNARNA单单单单链的互补区形成链的互补区形成链的互补区形成链的互补区形成DNA-RNADNA-RNADNA-RNADNA-RNA杂合双链杂合双链杂合双链杂合双链的过程的过程的过程的过程称分子杂交。称分子杂交。称分子杂交。称分子杂交。DNA-DNADNA-DNADNA-RNADNA-RNARNA-RNARNA-RNA109探针（探针（probeprobe）指能与特定靶分子发生特异性相互作用，并能指能与特定靶分子发生特

34、异性相互作用，并能被特殊方法所检测的分子。被特殊方法所检测的分子。例如抗原例如抗原-抗体、生物素抗体、生物素-亲和素等均可看成是亲和素等均可看成是探针与靶分子的相互作用。探针与靶分子的相互作用。基因探针基因探针 指能与特定核苷酸序列发生特异互补杂交，杂指能与特定核苷酸序列发生特异互补杂交，杂交后又能被特殊方法检测的已知被标记（同位素或交后又能被特殊方法检测的已知被标记（同位素或非同位素标记）的核苷酸链非同位素标记）的核苷酸链。SouthernSouthern印迹法印迹法NorthernNorthern印迹法印迹法DNADNA芯片芯片1103.8 3.8 核酸的序列测定核酸的序列测定3.8.1 链终止法测序技术111（1）酶法（双脱氧法、末端终止法）酶法（双脱氧法、末端终止法）1121133.8 3.8 核酸的序列测定核酸的序列测定3.8.2 焦磷酸测序技术（略）114