兔氧化低密度脂蛋白6161.pdf

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1、兔氧化低密度脂蛋白（oxLDL）ELISA试剂盒使用说明 最近更新时间：2014-09-24 详细介绍：兔氧化低密度脂蛋白（oxLDL）ELISA试剂盒使用说明 本试剂仅供研究使用 标本：血清或血浆 试验原理：兔氧化低密度脂蛋白（oxLDL）ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知 oxLDL浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将 oxLDL和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的 HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物 A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中 oxLDL的浓度呈比例关系。试剂盒内

2、容及其配制 试剂盒成份（2-8保存）96孔配置 48孔配置 配制 96/48人份酶标板 1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖 1块 半块 即用型 标准品：400mmol/L 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀 空白对照 1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液 1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗 oxLDL抗体 1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液 1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释 底物 A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用

3、型 底物 B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 自备材料 1 兔氧化低密度脂蛋白（oxLDL）ELISA试剂盒蒸馏水。2 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3 振荡器及磁力搅拌器等。安全性 1 避免直接接触终止液和底物 A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项 1 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。2 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免

4、变质。3 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物 A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7 底物 A应挥发，避免长时间打开盖子。底物 B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取 OD 值。8 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。9 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法 1、兔氧化低密度脂

5、蛋白（oxLDL）ELISA试剂盒血清-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000g离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2、血浆-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000g离心 30 分钟去除颗粒。3、细胞上清液-1000g离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。4、保存-如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在 37或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备 1 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释

6、前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：400 mmol/L（6 号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul。200 mmol/L（5号标准品）100ul的原倍标准品加入 100ul的标准品稀释液 100 mmol/L（4号标准品）100ul的 5号标准品加入 100ul的标准品稀释液 50 mmol/L（3号标准品）100ul的 4号标准品加入 100ul的标准品稀释液 25 mmol/L（2号标准品）100ul的 3号标准品加入 100ul的标准品稀释液 12.5 mmol/L（1号标准品）100ul的 2号标准品加入 100ul的标准品稀释液 0 mmol/L（空白对照）原始浓度不用稀

7、释直接加入 50ul。2 洗涤缓冲液（50）的稀释：蒸馏水 50 倍稀释。操作步骤 1 兔氧化低密度脂蛋白（oxLDL）ELISA试剂盒使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3 加入稀释好后的标准品 50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入 50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37温育 1小时。4 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干

8、。重复此操作 3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5 每孔加入 80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37温育 30 分钟。6 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7 每孔加入底物 A、B各 50ul，轻轻振荡混匀，37温育10 分钟。避免光照。8 取出酶标板，迅速加入 50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。9 在 450nm波长处测定各孔的 OD 值。建议使用的实验方案 标准品浓度（mmol/L）A 400 400 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 B 200

9、 200 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 C 100 100 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 D 50 50 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 E 25 25 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 F 12.5 12.5 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 G 0 0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 H 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 局限 6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。试剂盒性能 1.兔氧化低密度脂蛋白（oxLDL）ELISA试剂盒灵敏度：最小的检测浓度小于 1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数 R值为 0.990。2.特异性：不与其它细胞因子反应。3.重复性：板内、板间变异系数均小于 10%。结 果 判 断 与 分 析 1、仪器值：于波长 450nm的酶标仪上读取各孔的 OD 值 2、以吸光度 OD 值为纵坐标（Y），相应的 oxLDL标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的 oxLDL含量可根据其 OD 值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围：0-400mmol/L 4、敏感度：1.0 mmol/L