双酶切体系38122.pdf

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1、精品文档.Double Digestion(双酶切反应)时 Universal Buffer(通用缓冲液)的使用表 说明 使用二种酶同时进行 DNA 切断反应(Double Digestion)时，为了节省反应时间，通常希望在同一反应体系内进行。TaKaRa 采用 Universal Buffer 表示系统，并对每种酶表示了在各 Universal Buffer 中的相对活性。尽管如此，在进行 Double Digestion 时，有时还会难以找到合适的 Universal Buffer。本表以在 pUC 系列载体的多克隆位点处的各限制酶为核心，显示了在 Double Digestion 可使

2、用的最佳 Universal Buffer 条件。在本表中，各 Universal Buffer之前表示的 数字 是指各 Universal Buffer 的反应体系中的最终浓度。TaKaRa 销售产品中添附的 Universal Buffer 全为 10 倍浓度的缓冲液。终浓度为 0.5时反应体系中的缓冲液则稀释至 20 倍，1时稀释至 10 倍，2时稀释至 5 倍进行使用。注意 1 g DNA 中添加 10 U 的限制酶，在 50 l 的反应体系中，37下反应 1 小时可以完全降解 DNA。为防止 Star 活性的产生，请将反应体系中的甘油含量，尽量控制在 10%以下。根据 DNA 的种类，各 DNA 的立体结构的差别，或当限制酶识别位点邻接时，有时会发生 Double Digestion 不能顺利进行的可 能。精品文档.精品文档.