(4.4.1)--奈瑟菌属微生物学检验.ppt

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1、微生物检验奈瑟菌属鉴定知识目标：掌握奈瑟菌属的生物学性状(形态结构，培养特性、生化反应抗原构造、分类、抵抗力)和微生物学检验(程序及方法)能力目标：能进行奈瑟菌的形态、培养特性，感染标本的采集，检验程序，检验方法和鉴定，并正确填发报告单。任务目标任务目标 患者，男童，9岁，因发热、头痛7天，伴皮肤瘀斑及喷射状呕吐2天入院。7天前无明显诱因出现高热、伴剧烈头痛，体温最高达40，予以抗感染治疗后发热及其他症状加重。实验室验检查结果白细胞和中性粒细胞增高。脑脊液直接涂片革兰染色见少量革兰阴性双球菌，抗酸和墨汁染色均阴性。将进一步做血培养和脑脊液培养。案例引入案例引入1.该患者感染了什么菌？诊断依据？

2、2.常规治疗药物是什么？问问概述概述p奈瑟菌属(Neisseria)是一群专性需氧革兰阴性球菌。奈瑟菌属中对人致病的只有脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌，引起流行性脑脊髓膜炎和性病淋病。共同点：革兰阴性球菌、单个或成双排列、无芽孢、无鞭毛、有菌毛触酶试验（+）氧化酶试验（+）种类：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等9种致病菌：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌概述概述第一节第一节 脑膜脑膜炎奈瑟菌炎奈瑟菌u脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)的病原菌。人类是脑膜炎奈瑟菌的唯一宿主。本菌可定殖在人类的鼻咽部的黏膜上。在健康成人和儿童中，本菌携带率可达5 15，流行期间可高达20一90。概述概述u荚膜多糖抗原具有群特

3、异性，据此抗原不同，将本菌分为多个血清群，对人类致病的多属于A、B、C群。我国流行的菌株以A群为主，95以上病例由它引起。抗原构造和分类抗原构造和分类 u无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿刺液等标本u采集后立即送往实验室u用血平板进行床边接种后置35孵育u血液标本接种在血液培养瓶中置35孵育u标本运送时需要35保温微生物学检验微生物学检验1.分离培养（1）认识形态与染色 u革兰阴性双球菌u直径0.61.5mu形似双肾或咖啡豆样，凹面相对u无动力，无芽胞，u某些菌种形成荚膜2.标本直接镜检微生物学检验微生物学检验微生物学检验微生物学检验（2）直接涂片检查u脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片u皮

4、肤瘀点渗出液涂片u革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈瑟菌”。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断脑脊液分泌物涂片，脑膜炎奈瑟菌微生物学检验微生物学检验营养要求高，属苛养菌，在含有血清、血液或多种氨基酸、无机盐培养基上才能生长。初次培养须供给5一10CO2，并要保持一定湿度。40均不能生长，最适生长温度3537，最适pH 74-76。3分离培养微生物学检验微生物学检验在卵黄双抗(EPV)平板(含多黏菌素B和万古霉素，可抑制一些G+和G-菌)上菌落较大。在血清肉汤中呈混浊生长，培养时间过长，可因产生自溶酶而发生自溶现象。3分离培养微生物学检验微生物学

5、检验脑膜炎奈瑟菌在SBA,24h微生物学检验微生物学检验脑膜炎奈瑟菌在巧克力琼脂上的菌落形态微生物学检验微生物学检验u脑脊液标本 接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板u咽拭子或鼻咽拭子 接种在选择性培养基上如改良的(MTM)、(NCY)等培养基u血液标本 经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力琼脂或羊血琼脂平板上 置5%7%CO2 35孵育，每隔24h观察平板微生物学检验微生物学检验3分离培养u氧化酶阳性，触酶阳性，分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气。4.生化反应微生物学检验微生物学检验u荚膜多糖抗原直接凝集试验阳性。用脑膜炎奈瑟菌群抗体血清与待检菌进行直接凝集试验，再用单价血清鉴定型别。5.血清学试验微生

6、物学检验微生物学检验p初步确定为奈瑟菌属 直径12mm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落 涂片革兰染色见阴性双球菌p氧化酶试验阳性p进一步进行葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖类发酵阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌p用分型血清确定血清型别p平板上没有发现菌落需继续观察72h后无菌生长可报告为阴性鉴定微生物学检验微生物学检验与脑膜炎奈瑟菌生物学特性不符的是 菌体如咖啡豆样，呈双排列革兰染色阴性有荚膜、有菌毛有鞭毛，能运动ABCD提交单选题能用于脑膜炎奈瑟菌培养的培养基是血琼脂平板巧克力平板卵黄双抗平板普通琼脂平板ABCD提交单选题对脑膜炎奈瑟氏菌的标本采送，哪一种是错误的？低温保温防干燥快速ABCD提交

7、单选题初次分离脑膜炎奈瑟菌必须有：含5新鲜红血球的培养基510%的CO2气体环境含10小牛血清的培养基营养琼脂培养基ABCD提交单选题导致新生儿败血症和脑膜炎的主要病原菌为：A群链球菌B群链球菌肺炎链球菌脑膜炎奈瑟菌ABCD提交单选题脑膜炎奈瑟菌一般定植于人体的哪个部位：鼻咽部脑膜血脑屏障口腔黏膜ABCD提交单选题脑膜炎奈瑟菌的致病物质有：荚膜菌毛外毒素内毒素ABCD提交多选题第二节第二节 淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌 淋病奈瑟菌简称淋球菌，是人类淋病的病原体，主要引起人类泌尿系统急、慢性化脓性感染。人类是唯一的天然宿主和传染源。淋病是我国目前发病率最高的性传播疾病。概述概述p阴道和宫颈分泌物 用无菌

8、塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1cm停留1015秒时间，蘸取p采集尿道分泌物 弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本微生物学检验微生物学检验1.标本采集：p尿液p直肠肛拭标本 废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物p新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物微生物学检验微生物学检验2.涂片革兰染色镜检：u男性尿道分泌物标本中可见中性多形核细胞内、外较多革兰阴性双球菌，有助于男性淋病早期诊断u女性宫颈或直肠拭子标本涂片中可见胞内、胞外大量革兰阴性双球菌，由于女性阴道和直肠有许多正常菌群寄居，故对涂片所见结果必须由培养结果得以证实方可报告微生物学检验微生物学检验淋病奈瑟菌培养物涂片微生物学检

9、验微生物学检验尿道分泌物涂片，淋病奈瑟菌（细胞内吞噬）微生物学检验微生物学检验尿道分泌物涂片，淋病奈瑟菌（细胞外散在分布）微生物学检验微生物学检验尿道分泌物涂片，淋病奈瑟菌（细胞外菌团）微生物学检验微生物学检验u选择培养基如MTM，Martin-Lewis（ML），或NYC置于5%CO2气体条件下3537孵育每隔24h观察平板3.分离培养微生物学检验微生物学检验p氧化酶阳性，触酶阳性，分解葡萄糖产酸p分子生物学方法：核酸探针杂交技术或核酸扩增技术检测淋病奈瑟菌，用于快速诊断和流行病学调查。p血清学试验：用协同凝集试验、直接荧光免疫显微技术可检测标本中的淋病奈瑟菌。4.生化反应微生物学检验微生物

10、学检验u可疑菌落 直径0.51mm，灰褐色、光滑、半 透明呈露滴状凸起的菌落u确认 将菌落涂片，革兰染色见革兰阴性双球菌 氧化酶和触酶试验阳性 葡萄糖发酵试验阳性，其它糖类阴性 培养需观察72h后无菌生长可报告为阴性。5.鉴定总结微生物学检验微生物学检验抵抗力抵抗力对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒剂敏感对青霉素敏感但近年来由质粒介导的内酰胺酶所致的耐药在淋病奈瑟菌中产生较多u综合性预防措施u隔离病人、检查带菌者、预防性投药，室内通风。u流脑疫苗：6个月-2岁接种两次，间隔1月A群脑膜炎球菌多糖抗原。制备疫苗青霉素、磺胺大剂量治疗。防治原则防治原则脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌防治原则防治原则淋

11、病奈瑟菌淋病奈瑟菌p取缔娼妓，加强性病知识的教育 p婴儿出生时，1%硝酸银滴眼，目前常用红霉素或四环素眼药膏 p对患者应早期用药，彻底治疗治疗时加大青霉素用量采用新型青霉素族抗生素临床意义临床意义-脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌p寄居于人的鼻咽腔、口腔粘膜上，通过呼吸道分泌物或空气而传播。p流行性脑脊髓膜炎 冬末春初，多为学龄儿童、青少年 感染后多为隐性感染，少数可发展为菌血症或败血症，进而累及脑、脊髓膜，形成化脓性脑膜炎可出现严重的临床症状如发热、头痛、脑膜刺激症阳性、甚至休克和DIC等；菌血症和细菌的损伤作用使约半数患者出现皮下瘀斑儿童和成人的脑膜炎症状临床意义临床意义-脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌临床意义临床意义-淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌主要通过性接触直接感染在分娩时通过产道感染新生儿临床表现为：单纯性淋病 盆腔炎 口咽部和肛门直肠淋病 淋菌性结膜炎 播散性淋病致病物质包括菌毛、外膜蛋白、蛋白水解酶、脂多糖和铁调节蛋白与淋病奈瑟菌无关的性状是 革兰阴性肾形双球菌营养要求较高初次分离需5%10%CO2普通营养琼脂上即可生长ABCD提交单选题淋病奈瑟菌可引起：阴道炎淋菌性结膜炎子宫颈炎梅毒ABCD提交多选题思考题1.脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有哪些异同？两者标本采集做细菌检验应注意什么问题？2.脑膜炎奈瑟菌的鉴定依据有哪些？