分光光度分析讲稿.ppt

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1、仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析关于分光光度分析第一页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析学习要求1、掌握紫外-可见分光光度分析的特点、基本原理、测定条件的选择、测定实验技术、定性和定量分析方法及有关术语。2、掌握紫外-可见分光光度计的结构，使用、维护和保养方法。第二页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析 基基于于物物质质光光学学性性质质而而建建立立起起来来的的分分析析方方法法称称之之为为光光学学分分析析法法，分分为为:光光谱谱分分析析法法和和非非光光谱谱分分析析法法（如如比比色色法法、旋旋光光

2、测定法）。测定法）。光光谱谱分分析析法法是是指指在在光光（或或其其它它能能量量）的的作作用用下下，通通过过测测量量物物质质产产生生的的发发射射光光、吸吸收收光光或或散散射射光光的的波波长长和和强强度来进行分析的方法。度来进行分析的方法。光学分析法概述光学分析法概述第三页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析 在在光光谱谱分分析析中中，依依据据物物质质对对光光的的选选择择性性吸吸收收而而建建立立起起来来的的分分析析方方法法称称为吸光光度法，按所用光的波长不同分为为吸光光度法，按所用光的波长不同分为:原原子子吸吸收收光光谱谱：利利用用物物质质的的气气态态原原子子

3、对对特特定定波波长长的的光光的的吸吸收收来来进进行行分分析析的方法。的方法。红红外外吸吸收收光光谱谱：分分子子振振动动光光谱谱，吸吸收收光光波波长长范范围围2.5 1000 m（红红外外光光区），主要用于有机化合物结构鉴定和定量分析。区），主要用于有机化合物结构鉴定和定量分析。紫紫外外吸吸收收光光谱谱：电电子子跃跃迁迁光光谱谱，吸吸收收光光波波长长范范围围200 400nm（近近紫紫外外区）区），可用于结构鉴定和定量分析。，可用于结构鉴定和定量分析。可可见见吸吸收收光光谱谱：电电子子跃跃迁迁光光谱谱，吸吸收收光光波波长长范范围围400 760nm（可可见光区），主要用于有色物质的定量分析。见光

4、区），主要用于有色物质的定量分析。本章主要讲授紫外本章主要讲授紫外-可见吸光光度法。可见吸光光度法。主要光谱分析法主要光谱分析法第四页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析第一节第一节 分光光度分析的基本原理分光光度分析的基本原理1、物质对光的选择性吸收物质对光的选择性吸收 光是一种电磁波，具有波粒二象性。光的波动性可用波长、频率、光速c、波数（cm-1）等参数来描述：=c ；波数=1/=/c 光是由光子流组成，光子的能量：E=h =h c/（h=6.626 10-34 J S h-Planck常数)光的波长越短（频率越高），其能量越大。光的波长越短（频率越

5、高），其能量越大。一、朗伯一、朗伯-比耳定律比耳定律1.1 光的特性光的特性第五页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析 白光（400-760 nm，日光、白炽灯光等）是一种复合光，它是由各种颜色的光按一定比例混合而得的。利用棱镜等分光器可将它分解成红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等不同颜色的单色光。波长波长/nm400430430480480500500560560590590620620760颜色颜色紫色蓝色青色绿色黄色橙色红色可见光波谱单色光：单波长的光(由具有相同能量的光子组成)。第六页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度

6、分析白光除了可由所有波长的可见光复合得到外，还可由适当的两种颜色的光按一定比例复合得到。能复合成白光的两种颜色的光叫互补色光。/nm颜色互补光400-450紫黄绿450-480蓝黄480-490绿蓝橙490-500蓝绿红500-560绿红紫560-580黄绿紫580-610黄蓝610-650橙绿蓝650-760红蓝绿黄 绿 青橙 白光 青蓝红 紫红 蓝 互补色光示意图互补色光示意图第七页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析 当白光照射到物质上时，如果物质对白光中某种颜色的光产生了选择性的吸收，则物质就会显示出一定的颜色。物质所显示的颜色是吸收光的互补色。物

7、质吸收黄光，透过蓝光：物质吸收黄光，透过蓝光：CuSO4吸收吸收黄光黄光，显显蓝色蓝色。物质吸收物质吸收蓝光蓝光，透过透过黄光黄光互补光互补光:蓝光和黄光蓝光和黄光1.2 物质的颜色物质的颜色第八页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析2、透射比、透射比(透过度、透光率透过度、透光率)T和吸光度和吸光度（T：01）透射比透射比T:描述入射光透过溶液的程度。描述入射光透过溶液的程度。吸光度吸光度A与透光率与透光率T 的关系的关系:A lg T第九页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析 布格尔布格尔(Bouguer)和朗伯和

8、朗伯(Lambert)先后于先后于1729年和年和1760年阐明年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度的关系：了光的吸收程度和吸收层厚度的关系：Al 1852年，比耳年，比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也又提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也具有类似的关系：具有类似的关系：Ac 综合考虑，即一束综合考虑，即一束平行单色光平行单色光通过有色溶液，溶液的通过有色溶液，溶液的吸光度吸光度与溶液的与溶液的浓浓度度和和厚度厚度成正比。成正比。3、朗伯、朗伯比耳定律比耳定律第十页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析 Alg（I0/It)=klc A：吸光

9、度，描述溶液对光的吸收程度；：吸光度，描述溶液对光的吸收程度；l：液层厚度：液层厚度(光程长度光程长度)，通常以，通常以cm为单位；为单位；c：溶液的浓度，单位：溶液的浓度，单位gL-1 k：吸光系数，单位：吸光系数，单位Lg-1cm-1 朗伯朗伯比耳定律数学表达式比耳定律数学表达式吸光系数吸光系数k(Lg-1cm-1）相当于浓度为）相当于浓度为1 g/L、液层厚度为、液层厚度为1cm时该溶液时该溶液在某一波长下的吸光度。在某一波长下的吸光度。第十一页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析 Alg（I0/It)=l c 式中式中 c：溶液的物质的量浓度，单位

10、：溶液的物质的量浓度，单位molL-1；：摩尔吸光系数，单位：摩尔吸光系数，单位Lmol-1cm-1；与与k的关系为：的关系为：k=/M （M为摩尔质量）为摩尔质量）4、摩尔吸光系数、摩尔吸光系数 摩尔吸光系数摩尔吸光系数在数值上等于浓度为在数值上等于浓度为1 mol/L、液层厚度为、液层厚度为1cm时该溶液在时该溶液在某一波长下的吸光度。摩尔吸光系数是物质吸光能力的量度，可作为定性某一波长下的吸光度。摩尔吸光系数是物质吸光能力的量度，可作为定性分析的参考。其值越大，方法的灵敏度越高。分析的参考。其值越大，方法的灵敏度越高。第十二页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析

11、分光光度分析 朗伯朗伯比耳定律是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据。应用于各比耳定律是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据。应用于各种光度法的吸收测量；种光度法的吸收测量；吸收定律的适用条件吸收定律的适用条件1必须是使用单色光为入射光；必须是使用单色光为入射光；2溶液为稀溶液；溶液为稀溶液；3吸收定律能够用于彼此不相互作用的多组分溶液。它们的吸光度吸收定律能够用于彼此不相互作用的多组分溶液。它们的吸光度具有加合性，且对每一组分分别适用，即：具有加合性，且对每一组分分别适用，即：A总总=A1+A2+A3+An =k1lc1+k2lc2+k3lc3+knlcn4吸收定律对紫外光、可见光、红外光都

12、适用。吸收定律对紫外光、可见光、红外光都适用。第十三页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析 标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：标准曲线常发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），这种现象称为对朗伯比耳定律的偏离。5、偏离朗伯、偏离朗伯比耳定律的因素比耳定律的因素第十四页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析（1）单色光不纯引起的偏离）单色光不纯引起的偏离实际上，分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导致对朗伯比耳定律的正或负偏离。（2）介质不均匀引起的偏离）介质不均匀引起的偏离当溶液中含有悬浮物或胶粒等散射质点时，入

13、射光通过溶液时就会有一部分光因散射而损失掉，使透过光强度减小，测得的吸光度增大，从而引起偏离吸收定律。第十五页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析（3）与测定溶液有关的因素）与测定溶液有关的因素 朗伯比耳定律的假定：所有的吸光质点之间不发生相互作用。这只有在稀溶液(c0.7时，稀释后时，稀释后测量；测量；A0.7时，选择光时，选择光程小的吸收池；程小的吸收池；A 105：超高灵敏；：超高灵敏；(610）104：高灵敏；：高灵敏；2104 ：不灵敏。：不灵敏。三、显色条件的选择三、显色条件的选择第二十四页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光

14、光度分析分光光度分析灵敏度高灵敏度高-max 最大；最大；选择性好选择性好-显色剂只与被测物质反应。显色剂只与被测物质反应。有色化合物组成固定有色化合物组成固定-有定量关系。有定量关系。显色产物稳定显色产物稳定-便于测定。便于测定。1、显色剂的选择、显色剂的选择无机显色剂：硫氰酸盐、钼酸铵、过氧化氢等几种。无机显色剂：硫氰酸盐、钼酸铵、过氧化氢等几种。有机显色剂：种类繁多。有机显色剂：种类繁多。偶氮类显色剂：本身是有色物质，生成配合物后，颜色发生明显偶氮类显色剂：本身是有色物质，生成配合物后，颜色发生明显变化；具有性质稳定、显色反应灵敏度高、选择性好、对比度大变化；具有性质稳定、显色反应灵敏度

15、高、选择性好、对比度大等优点，应用最广泛。偶氮胂等优点，应用最广泛。偶氮胂、PAR等。等。三苯甲烷类：铬天青三苯甲烷类：铬天青S、二甲酚橙等、二甲酚橙等第二十五页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析 吸光度A与显色剂用量CR的关系会出现如图所示的情况。2、显色剂用量、显色剂用量对一系列浓度相同的试液，加入不同量的显色对一系列浓度相同的试液，加入不同量的显色剂，分别测定其吸光度，如果在某一浓度范围剂，分别测定其吸光度，如果在某一浓度范围内所测得的吸光度不变，就可以在此范围内确内所测得的吸光度不变，就可以在此范围内确定显色剂的用量。定显色剂的用量。显色反应的速

16、度有快有慢，快的几乎是瞬间完成，颜色很快达到稳定状态，并且能保持较长时间。大多数显色反应的速度是比较慢的，需要一定时间才能达到稳定。而且有些有色化合物放置过久也会褪色。适宜的显色时间要由实验来确定。3、显色时间、显色时间第二十六页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析1、对溶液中待测组分状态的影响、对溶液中待测组分状态的影响很多高价金属离子都会水解，酸度较低时，不利于显色反应的进行。2、对显色剂本身颜色的影响、对显色剂本身颜色的影响很多显色剂都是有机弱酸，如果控制不好酸度，就会使指示剂颜色与有色化合物的颜色相近而影响测定。四、四、pH的选择的选择酸度对显色反

17、应的影响很大，因为溶液酸度直接影响着金属离子、显色剂的存在形式和有色化合物的组成、稳定性等。比如：用二甲酚橙为显色剂，它与金属离子形成的配合物为红色，它本身在pH6.3时为柠檬黄色，而在PH6.3时为红紫色。所以在pH6.3时，就无法进行测定。第二十七页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析3、对显色剂反应的影响、对显色剂反应的影响许多显色反应是配位反应，伴随酸效应，故酸度对显色反应影响较大。在相同实验条件下，分别测定不同pH值条件下显色溶液的吸光度。选择曲线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的pH范围。一般显色反应在室温下进行，但是也有一些反应要加热到一定温

18、度下才能进行。而且还有一些有色配合物在室温下会分解。五、温度的选择五、温度的选择第二十八页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析 选择掩蔽剂的原则是：掩蔽剂不与待测组分反应；掩蔽剂本身及掩选择掩蔽剂的原则是：掩蔽剂不与待测组分反应；掩蔽剂本身及掩蔽剂与干扰组分的反应产物不干扰待测组分的测定。蔽剂与干扰组分的反应产物不干扰待测组分的测定。例：测定例：测定Ti4，可加入可加入H3PO4掩蔽剂使掩蔽剂使Fe3+(黄色黄色)成为成为Fe(PO)23-(无色无色)，消除，消除Fe3+的的干扰；又如用铬天菁干扰；又如用铬天菁S光度法测定光度法测定Al3+时，加入抗坏血酸

19、作掩蔽剂将时，加入抗坏血酸作掩蔽剂将Fe3+还原为还原为Fe2+，消除，消除Fe3+的干扰。的干扰。1、控制酸度、控制酸度2、加入掩蔽剂、加入掩蔽剂3、选择合适的条件（浓度、波长）、选择合适的条件（浓度、波长）4、分离干扰离子、分离干扰离子 六、干扰离子的影响及清除方法六、干扰离子的影响及清除方法第二十九页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析 参比溶液用来调节仪器的零点，并可以消除某些比色分析的误差，测得的的吸光度真正反映待测溶液吸光强度。参比溶液的选择一般遵循以下原则：参比溶液的选择一般遵循以下原则：若仅待测组分与显色剂反应产物在测定波长处有吸收，其它所

20、加试剂均无吸收，用纯溶剂（水)作参比溶液；若显色剂或其它所加试剂在测定波长处略有吸收，而试液本身无吸收，用“试剂空白”(不加试样溶液)作参比溶液；若待测试液在测定波长处有吸收，而显色剂等无吸收，则可用“试样空白”(不加显色剂)作参比溶液；若显色剂、试液中其它组分在测量波长处有吸收，则可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂，作为参比溶液。七、选择合适的参比溶液七、选择合适的参比溶液第三十页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析第四节第四节 分光光度计的基本构造和使用流程分光光度计的基本构造和使用流程一、基本构造一、基本构造0.575光源光源单色器单

21、色器吸收池吸收池检测器检测器显示显示第三十一页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析1、光源、光源-有热辐射光源和气体放电光源两类有热辐射光源和气体放电光源两类要求：在可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在3501250 nm。它是比色计和分光光度计的光源。紫外区：氢、氘灯。发射150400 nm的连续光谱。它是紫外分光光度计的光源。仪器自动控制或手动选择单色光波长。仪器自动控制或手动选择单色光波长。第三十二页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度

22、分析 常用的色散元件有棱镜和光栅棱镜和光栅两种。棱镜有玻璃和石英两种材料。它们的色散原理是依据不同的波长光通过棱镜时有不同的折射率而将不同波长的光分开。由于玻璃可吸收紫外光，所以玻璃棱镜只能用于350 3200 nm的波长范围，即只能用于可见光域内。石英棱镜可使用的波长范围较宽，可从185 4000nm，即可用于紫外、可见和近红外三 个光区。光栅是利用光的衍射与干涉作用制成的，它可用于紫外、可见及红外光域，而且在整个波长区具有良好的、几乎均匀一致的分辨能力。2、单色器、单色器单色器是能从光源辐射的复合光中分出单色光的光学装置，其主要功能：产生光谱纯度高的光波且波长在紫外可见区域内任意可调。通常

23、由准直镜（聚光镜）、色散元件、狭缝准直镜（聚光镜）、色散元件、狭缝组成。第三十三页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。（注意；每次使用要清洗干净，或者润洗。）（注意；每次使用要清洗干净，或者润洗。）3、吸收池、吸收池第三十四页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。4、检测器、检测器光电池光电池-用半导体材料制成

24、的光电转换器。用得最多的是硒光电池。第三十五页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析光电管的工作原理光电管的工作原理-将光强度信号转换成电信号将光强度信号转换成电信号 当一定强度的光照射到阴极上时，光敏物质要放出电子，放出电子的多少与照射到它的光的大小成正比，而放出的电子在电场的作用下要流向阳极，从而造成在整个回路中有电流通过。而此电流的大小与照射到光敏物质上的光的强度的大小成正比。这就是光电管产生光电效应的原理。光电倍增管光电倍增管-非常灵敏的光电器件，可以把微弱的光转换成电流。其灵敏度比前2种都要高得多。它是利用二次电子发射以放大光电流，放大倍数可达到1

25、08倍。第三十六页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析5、信号指示系统（检流计、数字显示或自动记录装置）、信号指示系统（检流计、数字显示或自动记录装置）很多型号的分光光度计装配有微处理机，一方面可对分光光度计进行操作控制，另一方面可进行数据处理。第三十七页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析二、分光光度计类型二、分光光度计类型1、简易分光光度计721型分光光度计722型分光光度计第三十八页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析 2、紫外-可见分光光度计第三十九页，讲稿共五十九页哦仪器

26、分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析紫外分光光度法紫外分光光度法-利用被测物质的分子、离子以及有机化合物中的官能团（主要为具有不饱和键和未成对 电子的基团。如：CC；CO；CN；NN）对紫外光选择性吸收的特性而建立起来的方法。第四十页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析1、光源、光源 钨灯或卤钨灯钨灯或卤钨灯可见光源可见光源 3501000nm。氢灯或氘灯氢灯或氘灯紫外光源紫外光源 200360nm。第四十一页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析2、吸收池、吸收池 玻璃玻璃能吸收能吸收UV光，仅适用于可

27、见光区。光，仅适用于可见光区。石英石英不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区。不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区。要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）第四十二页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析3、单色器、单色器色散元件色散元件 棱镜棱镜对不同波长的光折射率不同分出光波长（不等距）。对不同波长的光折射率不同分出光波长（不等距）。光栅光栅衍射和干涉分出光波长（等距）。衍射和干涉分出光波长（等距）。4检测器检测器将光信号转变为电信号的装置。光电池、光电管（红敏和蓝敏）、光将光信号转变为电信号的装置。光电池、光电管（红敏

28、和蓝敏）、光电倍增管、二极管阵列检测器。电倍增管、二极管阵列检测器。第四十三页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析三、仪器使用基本流程三、仪器使用基本流程1、检查仪器停止状态、检查仪器停止状态2、接通电源，打开仪器开关、接通电源，打开仪器开关3、调节波长、调节波长 稳定约稳定约20min4、仪器调零和调满、仪器调零和调满5、选择合适的吸收池、参比溶液、选择合适的吸收池、参比溶液6、试样放入、试样放入7、测量、读数、记录、测量、读数、记录8、关机、关机第四十四页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析第五节第五节 分光光度分

29、析方法分光光度分析方法二、定量分析方法二、定量分析方法一、定性分析方法一、定性分析方法1、标准曲线法、标准曲线法2、比较法、比较法3、增量法（标准加入法）、增量法（标准加入法）4、示差法、示差法第四十五页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析测量有色溶液的吸光度后，常用工作曲线或比较法确定其浓度。1、标准曲线法、标准曲线法 绘制绘制A-C工作曲线工作曲线 配制一系列不同含量的待测组分的标准溶液，以不含待测组分的空白溶液为参比，测定标准溶液的吸光度。并绘制吸光度浓度曲线，得到标准曲线（工作曲线），然后再在相同条件下测定试样溶液的吸光度。由测得的吸光度在曲线上查

30、得试样溶液中待测组分的浓度，最后计算得到试样中待测组分的含量。此法适合所测吸光度皆在此法适合所测吸光度皆在0.2-0.7范围内的有色溶液范围内的有色溶液第四十六页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析0.710mg/25mL0.710mg/25mL芦丁含量测定：取样品3mg稀释至25mL。第四十七页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析2、比较法、比较法 同一强度的单色光，通过两个厚度相同而浓度不同的有色溶液时，则两溶液浓度之比等于其吸光度之比。若标准溶液的浓度是已知的，通过计算，可以得到试样的浓度。设：待测溶液浓度为设：

31、待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为，标准溶液浓度为cs。则：则：Ax=b cx As=b cs得：得：x/s=bcx/b cs=cx/cs此法适用于所测此法适用于所测 溶液浓度与标准溶液浓度相近时溶液浓度与标准溶液浓度相近时第四十八页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析 把未知试样溶液分成体积相同的若干份，除其中的一份不加入待测组分的标准物质外，在其它几份中都分别加入不同量的标准物质。然后测定各份试液试液的吸光度并绘制吸光度对加入的标准物质的浓度（增量）作图，得一标准曲线：由于每份溶液中都含有待测组分，因此，标准曲线不经过原点。将标准曲线外推延长至与横坐标

32、交于一点，则此点到原点的长度所对应的浓度值就是待测组分的浓度。3、增量法（标准加入法）、增量法（标准加入法）此法的优点是：自动扣除背景吸收此法的优点是：自动扣除背景吸收第四十九页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析y2=k(x+x0)+bx0 xy第五十页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析 普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为cs(cs cx)。则：Ax=b

33、 cx As=b cs x s=b(cx cs）=bc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差。4、示差法、示差法此法适合组分含量高的有色溶液此法适合组分含量高的有色溶液第五十一页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析示差法测得的吸光度与示差法测得的吸光度与c呈直线关系。由标准曲线上查得相应的呈直线关系。由标准曲线上查得相应的c值，则待测溶液浓度值，则待测溶液浓度cx：cx=cs+c 普通法：普通法：cs的的T=10%；cx的的T=5%示差法：示差法：cs 做参比，调做参比，调T=100%则：则：cx的的T=50%；标尺扩展；标尺扩展10倍

34、倍第五十二页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析第六节第六节 分光光度计的维护与保养分光光度计的维护与保养第七节第七节 数据处理数据处理-线性回归分析法简介线性回归分析法简介一、标准曲线回归法一、标准曲线回归法使用最小二乘法确定的直线称为回归线，表达式为：y=ax+b第五十三页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析二、相关系数二、相关系数相关系数（相关系数（r）表示数据与直线之间的符合程度。）表示数据与直线之间的符合程度。若若r=1，则表示所有数据点都完全落在这条直线上；，则表示所有数据点都完全落在这条直线上；实际测定中

35、，要求实际测定中，要求r0.9970。第五十四页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析第八节第八节 吸光光度法的应用吸光光度法的应用一、磷的测定一、磷的测定用磷钼蓝法，max=660nm，C=0.05-2.0ug/ml PO43-+12MoO42-+27H+=H7P(Mo2O7)6+10H2O二、铁的测定二、铁的测定邻二氮菲法，max=510nm,pH=2-9,Fe2+3 =Fe32+第五十五页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析若铁以Fe3+形式存在，可以用盐酸羟胺（或对苯二酚）将其还原：2Fe3+2NH2OH.HCl

36、=2Fe2+N2 +2H2O+4H+2Cl-相当于含铁量40倍的Sn2+，Al3+，Ca2+,Mg2+，Zn2+，SiO32-；20倍的Cr3+，Mn2+,PO43-；5倍的Co2+,Cu2+均不干扰测定。第五十六页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析三、硝酸盐和亚硝酸盐的测定三、硝酸盐和亚硝酸盐的测定（一）亚硝酸盐的测定（一）亚硝酸盐的测定亚硝酸盐与对氨基苯磺酸在弱碱性条件下重氮化，生成重氮化合物，再与盐酸萘乙二胺偶联，形成红色偶氮染料，颜色的深浅与亚硝酸根含量成正比，在540nm处有最大吸收。（二）硝酸盐的测定（二）硝酸盐的测定pH=9的氨性缓冲溶液通

37、过镉柱，使硝酸根还原成亚硝酸根，用盐酸萘乙二胺显色，可测硝酸根的含量；后用空白试验测定原有的NO2-，两者的差值为硝酸盐真实含量。Cd +NO3-=CdO +NO2-第五十七页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析摩尔比法(饱和法)设配合物的显色反应为：测得n就得到了配合物的组成。具体做法：固定cM，增加cR，并测定一系列MRn的吸光度A，以cR/cM比值对A作图，得如图所示曲线。其中，曲线拐点处对应的值为配合比 n。四、配合物组成测定四、配合物组成测定第五十八页，讲稿共五十九页哦仪器分析仪器分析 第一章第一章 分光光度分析分光光度分析感感谢谢大大家家观观看看第五十九页，讲稿共五十九页哦