实验土壤中产淀粉酶菌株的筛选讲稿.ppt

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1、关于实验土壤中产淀粉酶菌株的筛选第一页，讲稿共二十七页哦实验需知实验需知o实验分组：实验分组：2个实验室，每个实验室分个实验室，每个实验室分6组（名单上组（名单上报）报），每次实验结束留，每次实验结束留1组同学值日组同学值日o实验成绩：实验成绩：占期末总成绩的占期末总成绩的20%，包括，包括实验出勤、实实验出勤、实验操作、实验结果及实验报告撰写验操作、实验结果及实验报告撰写o实验结束：实验结束：将实验用品收拾整齐，由将实验用品收拾整齐，由实验老师确认实验老师确认实验结束实验结束后方可离开后方可离开o实验报告：实验报告：实验目的、实验原理、实验步骤（注意事实验目的、实验原理、实验步骤（注意事项）

2、、实验结果、思考题项）、实验结果、思考题第二页，讲稿共二十七页哦系列实验内容系列实验内容o实验实验1土壤中产淀粉酶菌株的筛选土壤中产淀粉酶菌株的筛选（1、2）o实验实验2产淀粉酶菌株的诱变剂量选择产淀粉酶菌株的诱变剂量选择o实验实验3紫外诱变剂突变菌株的初筛紫外诱变剂突变菌株的初筛o实验实验4紫外诱变剂突变菌株的复筛紫外诱变剂突变菌株的复筛o实验实验5高产淀粉酶生产菌株的稳定性及淀粉酶活力测高产淀粉酶生产菌株的稳定性及淀粉酶活力测定定 第三页，讲稿共二十七页哦背景知识背景知识淀粉酶（淀粉酶（amylase,Amy,AMS）：）：o能水解淀粉、糖原和有关多糖中的能水解淀粉、糖原和有关多糖中的O-

3、葡萄糖键的酶葡萄糖键的酶o药物：助消化药，治疗功能性消化不良药物：助消化药，治疗功能性消化不良第四页，讲稿共二十七页哦背景知识背景知识o产淀粉酶微生物：产淀粉酶微生物：细菌、真菌细菌、真菌等等o菌种分离与筛选步骤：菌种分离与筛选步骤：采样采样培养培养分离分离筛选筛选o诱变育种步骤：诱变育种步骤：诱变诱变初筛初筛复筛复筛性能检测性能检测第五页，讲稿共二十七页哦背景知识背景知识第六页，讲稿共二十七页哦实验实验1土壤中产淀粉酶菌株的筛选（土壤中产淀粉酶菌株的筛选（1）第七页，讲稿共二十七页哦实验目的实验目的o掌握菌种分离与筛选的方法掌握菌种分离与筛选的方法o从土壤中筛选出能够合成分泌淀粉酶的微生物从

4、土壤中筛选出能够合成分泌淀粉酶的微生物第八页，讲稿共二十七页哦实验原理实验原理o自然界微生物种类繁多，有些微生物能够以自然界微生物种类繁多，有些微生物能够以淀粉淀粉作为碳源进行生长繁殖，这是因为它们能够合成分作为碳源进行生长繁殖，这是因为它们能够合成分泌泌淀粉酶淀粉酶。o当能合成淀粉酶的微生物在当能合成淀粉酶的微生物在含有淀粉的固体培养基含有淀粉的固体培养基中生长时，会将淀粉酶分泌到菌体周围，使菌落周围中生长时，会将淀粉酶分泌到菌体周围，使菌落周围的淀粉水解成为小分子量的糊精、聚糖和单糖。这些的淀粉水解成为小分子量的糊精、聚糖和单糖。这些水解产物水解产物不能与碘作用不能与碘作用，从而在菌体周围

5、形成，从而在菌体周围形成透明透明圈圈。第九页，讲稿共二十七页哦实验步骤实验步骤 1.筛选培养基的配制（已完成）筛选培养基的配制（已完成）o可溶性淀粉可溶性淀粉2g，NaCl5g，牛肉膏，牛肉膏5g，蛋白胨，蛋白胨10g，琼脂，琼脂20g，水，水1000mL。2.倒平板（每组倒平板（每组6个，每个平板个，每个平板10mL左右）左右）第十页，讲稿共二十七页哦实验步骤实验步骤3.土样的采集土样的采集o各实验室分别取各实验室分别取三种三种不同环境的土样并记录当时取样不同环境的土样并记录当时取样环境情况（环境情况（1-2、3-4、5-6每两小组在同一个地方进每两小组在同一个地方进行取样），通常取行取样）

6、，通常取离地面离地面515cm处的土壤处的土壤。4.稀释分离稀释分离o取土样取土样1g，加入，加入9mL无菌水，逐步稀释至无菌水，逐步稀释至105、106、107（单数组）或（单数组）或106、107、108（双数组）（双数组），每个，每个梯度涂梯度涂2个平板。个平板。第十一页，讲稿共二十七页哦10ml1g9ml9ml9ml9ml9ml9ml10-110-210-710-610-510-410-31ml1ml1ml1ml1ml稀 释1ml第十二页，讲稿共二十七页哦第十三页，讲稿共二十七页哦分离分离第十四页，讲稿共二十七页哦实验步骤实验步骤5.各组做好标记，置于各组做好标记，置于30恒温培养恒温

7、培养48h（倒置倒置培养？培养？）6.产淀粉酶菌株的鉴定产淀粉酶菌株的鉴定（下次课）（下次课）第十五页，讲稿共二十七页哦6.产淀粉酶菌株的鉴定产淀粉酶菌株的鉴定p倒平皿（注意倒平皿（注意培养基状态、体积、表面平整培养基状态、体积、表面平整）：）：3个个p用接种环挑取单菌落到无菌瓶皿上（用接种环挑取单菌落到无菌瓶皿上（点植法点植法：用接种环：用接种环在固体培养基表面接触几点），同时用签字笔在固体培养基表面接触几点），同时用签字笔按对应按对应顺序顺序对各单菌落进行标号。对各单菌落进行标号。p在原培养皿表面喷洒稀碘液，记录在原培养皿表面喷洒稀碘液，记录有水解圈有水解圈的单菌落，与的单菌落，与此对应找

8、出合成淀粉酶的菌株此对应找出合成淀粉酶的菌株1-2株株。p注意：未分离得到菌落的小组可与其他组合作，挑取其他组注意：未分离得到菌落的小组可与其他组合作，挑取其他组鉴定得到的菌落进行后续实验（鉴定得到的菌落进行后续实验（实验报告中注明使用哪一组实验报告中注明使用哪一组的菌落的菌落）。）。第十六页，讲稿共二十七页哦7.产淀粉酶菌株的增殖培养产淀粉酶菌株的增殖培养o液体培养基分装：液体培养基分装：10ml/瓶，每个菌株对应瓶，每个菌株对应1瓶（瓶（每组每组1-2瓶，参考鉴定结果瓶，参考鉴定结果）o液体培养基接种：用接种环从固体培养基表面上液体培养基接种：用接种环从固体培养基表面上沾取少沾取少许菌苔许

9、菌苔，将接种环在液体培养基内，将接种环在液体培养基内振摇几次振摇几次即可。即可。o做好标记，放入摇床中振荡培养做好标记，放入摇床中振荡培养24h。第十七页，讲稿共二十七页哦8.产淀粉酶菌株的纯化产淀粉酶菌株的纯化平板划线法平板划线法o灼烧接种环灼烧接种环，冷却后用接种环挑取少量菌苔，冷却后用接种环挑取少量菌苔o左手持平皿，将皿盖打开一条缝隙，右手将接种环伸左手持平皿，将皿盖打开一条缝隙，右手将接种环伸入皿中，划入皿中，划3-4条条平行线平行线o灼烧接种环灼烧接种环，60旋转平皿，划线（注意：旋转平皿，划线（注意：后一区要后一区要求与前一区首尾相连，但不得与其他区域搭在一起求与前一区首尾相连，但

10、不得与其他区域搭在一起）o灼烧接种环灼烧接种环，将划线平板倒置，于，将划线平板倒置，于30培养培养48h后观后观察。察。第十八页，讲稿共二十七页哦第十九页，讲稿共二十七页哦实验结果及分析实验结果及分析1.取样环境情况取样环境情况2.记录记录产淀粉酶菌株数量（比透明圈？）产淀粉酶菌株数量（比透明圈？）及对菌落及对菌落的的初步鉴定结果初步鉴定结果3.分析：从不同地点获得的结果为什么会出现差异？可分析：从不同地点获得的结果为什么会出现差异？可以初步得出什么样的结论？（以初步得出什么样的结论？（未分离出菌株的原因未分离出菌株的原因？）第二十页，讲稿共二十七页哦细菌菌落特征细菌菌落特征o较湿润、光滑、透

11、明、易挑取较湿润、光滑、透明、易挑取o菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致o质地均匀、小而突起（或大而平坦）质地均匀、小而突起（或大而平坦）o有臭味或酸败味有臭味或酸败味第二十一页，讲稿共二十七页哦酵母菌菌落特征（与细菌相似酵母菌菌落特征（与细菌相似)o圆形或卵圆形圆形或卵圆形o较湿润、较粘稠、光滑，易挑取较湿润、较粘稠、光滑，易挑取o菌落质地均匀菌落质地均匀o正反面、边缘和中心颜色一致正反面、边缘和中心颜色一致o比细菌菌落大而厚，较不透明，颜色多呈乳白色比细菌菌落大而厚，较不透明，颜色多呈乳白色o多带酒香味多带酒香味第二十二页，讲稿共二十七页哦霉菌菌落特点

12、霉菌菌落特点o大而疏松，呈绒毛状（曲霉）、絮状（毛霉）、地毯大而疏松，呈绒毛状（曲霉）、絮状（毛霉）、地毯状（青霉）或蜘蛛网状（根霉）状（青霉）或蜘蛛网状（根霉）o有的无固定大小，延至整个培养基中有的无固定大小，延至整个培养基中o产色素，使菌落显色产色素，使菌落显色第二十三页，讲稿共二十七页哦放线菌菌落特征放线菌菌落特征o干燥、不透明，小而紧密，呈放射状干燥、不透明，小而紧密，呈放射状o菌落初期表面光滑或呈致密的丝绒状，当产生孢子菌落初期表面光滑或呈致密的丝绒状，当产生孢子之后，其菌落表面呈粉状、颗粒状之后，其菌落表面呈粉状、颗粒状o菌落和培养基连接紧密，难以挑取，或者整个菌落被菌落和培养基连接紧密，难以挑取，或者整个菌落被挑起而不致破碎挑起而不致破碎o菌落颜色多样，菌落正反面颜色常不一致菌落颜色多样，菌落正反面颜色常不一致o带有泥腥味带有泥腥味第二十四页，讲稿共二十七页哦思考题思考题1.为什么要用淀粉作为碳源？为什么要用淀粉作为碳源？2.为什么同一个土样要稀释不同梯度进行涂平为什么同一个土样要稀释不同梯度进行涂平板？板？第二十五页，讲稿共二十七页哦实验报告实验报告o本次实验与上次实验合写一份实验报告即可本次实验与上次实验合写一份实验报告即可o实验报告在实验报告在本周六本周六实验课时上交实验课时上交第二十六页，讲稿共二十七页哦感感谢谢大大家家观观看看第二十七页，讲稿共二十七页哦