单细胞培养精选PPT.ppt
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1、关于单细胞培养第1页,讲稿共39张,创作于星期日单细胞培养单细胞培养细胞悬浮培养细胞悬浮培养细胞培养第2页,讲稿共39张,创作于星期日 第第5 5章章 单细胞培养及突变体筛选单细胞培养及突变体筛选 1 细胞培养细胞培养 2 单细胞的分离单细胞的分离 3 单细胞的培养方法单细胞的培养方法 4 突变体的筛选突变体的筛选第3页,讲稿共39张,创作于星期日1 细胞培养细胞培养1.1 细胞培养:细胞培养:将植物体或其培养物游离的细胞或小细胞团进行培养的方法。培养方式培养方式 单细胞培养单细胞培养 悬浮细胞培养悬浮细胞培养 培养对象培养对象 细胞个体细胞个体 细胞群体细胞群体 培养产物培养产物 单细胞克隆
2、系单细胞克隆系 次生代谢产物次生代谢产物 酶制剂、人工种子等酶制剂、人工种子等 应用领域应用领域 筛选突变体,筛选突变体,食品、药品、工业原料、食品、药品、工业原料、细胞学研究,细胞学研究,农业生产农业生产 进行遗传操作进行遗传操作 第4页,讲稿共39张,创作于星期日1.2细胞培养的意义:细胞悬浮培养植株人工种子原生质体有用次生代谢产物突变体的筛选第5页,讲稿共39张,创作于星期日2 单细胞的分离单细胞的分离分离的单细胞分离的单细胞平板培养平板培养看护培养看护培养饲养培养饲养培养微室培养微室培养单细胞无性系单细胞无性系第6页,讲稿共39张,创作于星期日2.1 由外植体直接分离由外植体直接分离物
3、理法:物理法:叶片叶片捣碎捣碎过滤、离心过滤、离心收集细胞收集细胞酶解法:酶解法:酶解酶解果胶酶、纤维素酶果胶酶、纤维素酶外植体外植体具有代谢活性的细胞具有代谢活性的细胞注:必须对细胞进行渗透压的保护第7页,讲稿共39张,创作于星期日2.2 由愈伤组织获得由愈伤组织获得固体培养固体培养液体培养液体培养过筛过筛单细胞体系单细胞体系外植体外植体获得愈伤组织,并获得愈伤组织,并多次继代多次继代悬浮细胞悬浮细胞高盐分、高生长素高盐分、高生长素第8页,讲稿共39张,创作于星期日要求:松散性好,增殖快,再生能力强。其外观一般是要求:松散性好,增殖快,再生能力强。其外观一般是鲜艳的乳白或淡黄色,呈细小颗粒状
4、,松散易碎。鲜艳的乳白或淡黄色,呈细小颗粒状,松散易碎。适于悬浮培养适于悬浮培养 适于再生植株适于再生植株第9页,讲稿共39张,创作于星期日将愈伤组织在液体培养基中培养,建立悬浮培养物将愈伤组织在液体培养基中培养,建立悬浮培养物优点:优点:细胞团成小细胞团或单细胞;在培养基中细胞团成小细胞团或单细胞;在培养基中均匀分布;有空气交流。均匀分布;有空气交流。注:注:由愈伤组织分离单细胞的关键是获得由愈伤组织分离单细胞的关键是获得均一、松均一、松散的散的适合悬浮培养的愈伤组织适合悬浮培养的愈伤组织第10页,讲稿共39张,创作于星期日第11页,讲稿共39张,创作于星期日2、单细胞培养方法:、单细胞培养
5、方法:2.1培养方法培养方法 1)平板培养法)平板培养法 2)看护培养法)看护培养法 3)饲喂层培养法)饲喂层培养法 4)微室培养法)微室培养法2.2 单细胞培养的影响因子单细胞培养的影响因子 1)细胞植板密度)细胞植板密度 2)培养基的成分)培养基的成分第12页,讲稿共39张,创作于星期日2.1 培养方法:培养方法:1)平板法)平板法(plating culture)(薄层培养)(薄层培养)1960年年Bergamann首创,是在固体培养基中首创,是在固体培养基中培养单细胞的一种方法。培养单细胞的一种方法。第13页,讲稿共39张,创作于星期日第14页,讲稿共39张,创作于星期日I I 细胞密
6、度细胞密度:指单位体积内的细胞数量,是影响细胞:指单位体积内的细胞数量,是影响细胞培养的关键因子。培养的关键因子。平板培养要求保证细胞密度为平板培养要求保证细胞密度为10 10 4 4-10 -10 5 5 个个/ml/ml 。II II平板培养的效果用平板培养的效果用植板率植板率来衡量。来衡量。细胞密度和植板率细胞密度和植板率植板率植板率(plate efficiency):能长出细胞团的单细能长出细胞团的单细胞在接种单细胞中所占的比例。胞在接种单细胞中所占的比例。PE=平板中新形成的细胞团数平板中新形成的细胞团数/平板中接种的细胞数平板中接种的细胞数100 第15页,讲稿共39张,创作于星
7、期日优点:单细胞在培养基中分布较均匀,便于定优点:单细胞在培养基中分布较均匀,便于定点观察,筛选效率高、量大,操作简便点观察,筛选效率高、量大,操作简便缺点:通气状况不佳,排泄物质易积累造成毒缺点:通气状况不佳,排泄物质易积累造成毒害或影响组织吸收。害或影响组织吸收。第16页,讲稿共39张,创作于星期日2)看护培养看护培养1954年,年,Muir首次创立首次创立此法是指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单此法是指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞,使其持续分裂和增殖的一种培养方法,个细胞,使其持续分裂和增殖的一种培养方法,这块愈伤组织被称为看护组织这块愈伤组织被称为看护组织.愈伤组织不仅愈伤组
8、织不仅为细胞提供了营养为细胞提供了营养,还提供了,还提供了促进促进细胞分裂的某些物质细胞分裂的某些物质第17页,讲稿共39张,创作于星期日第18页,讲稿共39张,创作于星期日优点:简便、成功率高优点:简便、成功率高缺点:不能在显微镜下直接观察缺点:不能在显微镜下直接观察第19页,讲稿共39张,创作于星期日3)饲养培养()饲养培养(feeder layer culture):):原理:平板法看护法原理:平板法看护法 评价:单细胞和原生质体培养的理想方法。评价:单细胞和原生质体培养的理想方法。注:注:饲养层细胞没有种属特异性。饲养层细胞没有种属特异性。第20页,讲稿共39张,创作于星期日4)微室培
9、养()微室培养(microchamberculture)人工制造一个小室,将单细胞培养在小室中人工制造一个小室,将单细胞培养在小室中的少量培养基上,使其分裂增殖形成细胞的少量培养基上,使其分裂增殖形成细胞团的方法,称为微室培养法。此法首先是团的方法,称为微室培养法。此法首先是由由Jones等(等(1960)设计)设计第21页,讲稿共39张,创作于星期日第22页,讲稿共39张,创作于星期日优点:可对细胞培养过程连续进行显微观察,优点:可对细胞培养过程连续进行显微观察,了解一个细胞经过生长、分裂、分化,形了解一个细胞经过生长、分裂、分化,形成细胞团的全部过程。成细胞团的全部过程。缺点:微室培养用的
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