抗菌药物敏感性试验(药敏试验)课件.ppt

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1、关于抗菌药物敏感性试验(药敏试验)第1页，此课件共118页哦目的目的指导临床医生针对各类临床感染患者选择最佳指导临床医生针对各类临床感染患者选择最佳抗菌药物抗菌药物一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐药的微一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐药的微生物流行病学资料生物流行病学资料根据细菌对药物敏感谱进行菌种鉴定根据细菌对药物敏感谱进行菌种鉴定第2页，此课件共118页哦药敏试验原理药敏试验原理把把含含有有定定量量抗抗菌菌药药物物的的纸纸片片贴贴在在已已接接种种测测试试细细菌菌的琼脂平板上的琼脂平板上纸纸片片中中药药物物吸吸收收琼琼脂脂水水分分溶溶解解后后通通过过弥弥散散作作用用形成递减的浓度梯度

2、形成递减的浓度梯度纸片扩散法纸片扩散法第3页，此课件共118页哦纸纸片片周周围围一一定定距距离离范范围围内内试试验验菌菌生生长长受受抑抑制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌环。制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌环。抑抑菌菌环环大大小小反反映映测测试试菌菌对对测测定定药药物物的的敏敏感感程度程度抑抑菌菌环环大大小小除除与与细细菌菌的的敏敏感感性性有有关关外外还还与与其其它它诸因素相关。诸因素相关。第4页，此课件共118页哦定量测定抗菌药物活性定量测定抗菌药物活性抗抗菌菌药药物物与与肉肉汤汤或或琼琼脂脂培培养养基基混混合合稀稀释释后后种种入试验细菌，孵育过夜。入试验细菌，孵育过夜。以以能能抑抑制制细

3、细菌菌生生长长的的最最低低浓浓度度为为最最低低抑抑菌菌浓浓度度（MICMIC）将将MICMIC与与机机体体血血清清或或体体液液中中可可获获得得药药物物浓浓度度相相比较来确定恰当的临床疗效比较来确定恰当的临床疗效稀释法稀释法 第5页，此课件共118页哦MICMIC的对数与抑菌环直径关系的对数与抑菌环直径关系近似线性负相关近似线性负相关第6页，此课件共118页哦CLSICLSI药物选择原则药物选择原则A A组组 常规和首选药物，其结果应常规报告常规和首选药物，其结果应常规报告B B组组 首首选选试试验验选选择择性性报报告告。包包含含一一些些临临床床上上重要的、特别针对医院感染的药物重要的、特别针对

4、医院感染的药物C C组组 替代性和补充性药物替代性和补充性药物U U组组 补补充充性性试试验验，仅仅用用于于治治疗疗泌泌尿尿道道感感染染的的抗菌药物。抗菌药物。第7页，此课件共118页哦表表中中小小框框内内是是一一组组类类似似药药物物，其其结结果果解解释释和和临临床效力相似，不必个个试验。床效力相似，不必个个试验。“或或”字字表表示示一一群群相相关关药药物物，其其抗抗菌菌谱谱和和解解释释结结果果几几乎乎完完全全相相同同，交交叉叉耐耐药药性性和和交交叉叉敏敏感感性性也也完完全相同，通常只选择一种药进行试验。全相同，通常只选择一种药进行试验。药物选择第8页，此课件共118页哦 菌种菌种代表药物代表

5、药物苯唑西林苯唑西林苯唑西林苯唑西林葡萄球菌属葡萄球菌属葡萄球菌属葡萄球菌属所有所有所有所有-内酰胺类包括酶抑制剂内酰胺类包括酶抑制剂内酰胺类包括酶抑制剂内酰胺类包括酶抑制剂复合药和碳青霉烯类复合药和碳青霉烯类复合药和碳青霉烯类复合药和碳青霉烯类四环素四环素四环素四环素除葡萄球菌和除葡萄球菌和除葡萄球菌和除葡萄球菌和不动杆菌以外不动杆菌以外不动杆菌以外不动杆菌以外的所有菌属的所有菌属的所有菌属的所有菌属多西环素、米诺环素、金霉素、多西环素、米诺环素、金霉素、多西环素、米诺环素、金霉素、多西环素、米诺环素、金霉素、地美环素、土霉素、美他环素地美环素、土霉素、美他环素地美环素、土霉素、美他环素地美

6、环素、土霉素、美他环素红霉素红霉素红霉素红霉素革兰阳性球菌革兰阳性球菌革兰阳性球菌革兰阳性球菌罗红霉素、克拉霉素、阿齐霉罗红霉素、克拉霉素、阿齐霉罗红霉素、克拉霉素、阿齐霉罗红霉素、克拉霉素、阿齐霉素、地红霉素素、地红霉素素、地红霉素素、地红霉素药敏试验中常用试验药及其代表的药物药敏试验中常用试验药及其代表的药物所有菌属所有菌属所有菌属所有菌属试验药物试验药物林可霉素林可霉素林可霉素林可霉素克林霉素克林霉素克林霉素克林霉素第9页，此课件共118页哦青霉素青霉素青霉素青霉素GG葡萄球菌属葡萄球菌属葡萄球菌属葡萄球菌属淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌苯氧甲基青霉素、苯氧乙苯氧甲基青霉素、苯

7、氧乙苯氧甲基青霉素、苯氧乙苯氧甲基青霉素、苯氧乙基青霉素、氨苄西林、阿基青霉素、氨苄西林、阿基青霉素、氨苄西林、阿基青霉素、氨苄西林、阿莫西林、巴氨莫西林、巴氨莫西林、巴氨莫西林、巴氨 西林、氨西林、氨西林、氨西林、氨环己西林、海他西林、环己西林、海他西林、环己西林、海他西林、环己西林、海他西林、羧苄西林、美洛西林、阿羧苄西林、美洛西林、阿羧苄西林、美洛西林、阿羧苄西林、美洛西林、阿洛西林、替卡西林、哌拉洛西林、替卡西林、哌拉洛西林、替卡西林、哌拉洛西林、替卡西林、哌拉西林西林西林西林头孢噻吩头孢噻吩头孢噻吩头孢噻吩肠杆菌科肠杆菌科肠杆菌科肠杆菌科 头孢匹林、头孢拉啶、头头孢匹林、头孢拉啶、头

8、头孢匹林、头孢拉啶、头头孢匹林、头孢拉啶、头孢氨苄、头孢氨苄、头孢氨苄、头孢氨苄、头 孢克罗、头孢克罗、头孢克罗、头孢克罗、头孢羟氨苄孢羟氨苄孢羟氨苄孢羟氨苄氨苄西林氨苄西林氨苄西林氨苄西林所有菌属所有菌属所有菌属所有菌属阿莫西林、巴氨西林、氨阿莫西林、巴氨西林、氨阿莫西林、巴氨西林、氨阿莫西林、巴氨西林、氨环己西林、海他西林环己西林、海他西林环己西林、海他西林环己西林、海他西林第10页，此课件共118页哦磺胺异恶唑磺胺异恶唑磺胺异恶唑磺胺异恶唑所有菌属所有菌属所有菌属所有菌属所有磺胺类所有磺胺类所有磺胺类所有磺胺类萘啶酸（敏感）萘啶酸（敏感）萘啶酸（敏感）萘啶酸（敏感）肠杆菌科肠杆菌科肠杆菌

9、科肠杆菌科所有喹诺酮类敏感所有喹诺酮类敏感所有喹诺酮类敏感所有喹诺酮类敏感头孢噻吩头孢噻吩头孢噻吩头孢噻吩/头孢唑头孢唑头孢唑头孢唑啉（敏感）啉（敏感）啉（敏感）啉（敏感）肠杆菌科肠杆菌科肠杆菌科肠杆菌科所有头孢菌素敏感所有头孢菌素敏感所有头孢菌素敏感所有头孢菌素敏感万古霉素万古霉素万古霉素万古霉素革兰阳性杆菌革兰阳性杆菌革兰阳性杆菌革兰阳性杆菌替考拉宁替考拉宁替考拉宁替考拉宁氨苄西林氨苄西林氨苄西林氨苄西林肠球菌属肠球菌属肠球菌属肠球菌属青霉素青霉素青霉素青霉素第11页，此课件共118页哦B B组药物组药物细菌对细菌对A A组同类药物耐药，可组同类药物耐药，可选择性报告选择性报告报告指征报告

10、指征特定的标本来源特定的标本来源多种细菌感染多种细菌感染多部位感染多部位感染对对对对A A组药过敏、耐受或无效组药过敏、耐受或无效以流行病学调查为目的向感染控制部门报告以流行病学调查为目的向感染控制部门报告以流行病学调查为目的向感染控制部门报告以流行病学调查为目的向感染控制部门报告第12页，此课件共118页哦C C组药物组药物某某些些医医院院潜潜在在局局部部或或广广泛泛流流行行的的耐耐药药菌菌株株对对数数种种手手选选药药物物（特特别别是是同同类类的的如如-内内酰酰胺胺类类或或氨氨基基糖甙类）耐药糖甙类）耐药治疗对基本药物过敏的患者治疗对基本药物过敏的患者治疗少见菌的感染治疗少见菌的感染流行病学

11、调查为目的向感染控制部门报告流行病学调查为目的向感染控制部门报告第13页，此课件共118页哦试验方法试验方法纸片扩散法纸片扩散法改良改良Kirby-BauerKirby-Bauer法法(K-B(K-B法法)第14页，此课件共118页哦培养基培养基培养基培养基 非苛氧菌用非苛氧菌用非苛氧菌用非苛氧菌用Mueller-HintonMueller-HintonMueller-HintonMueller-Hinton（M-HM-HM-HM-H）琼脂）琼脂）琼脂）琼脂药物纸片药物纸片药物纸片药物纸片 直径直径直径直径6mm6mm6mm6mm纸片，每片吸水量约纸片，每片吸水量约纸片，每片吸水量约纸片，每片

12、吸水量约20202020l l l l菌菌菌菌液液液液比比比比浊浊浊浊管管管管 0.50.50.50.5号号号号麦麦麦麦氏氏氏氏（McFarlandMcFarlandMcFarlandMcFarland）标标标标准准准准比比比比浊浊浊浊管管管管，菌菌菌菌液液液液浓度为浓度为浓度为浓度为1.51.51.51.5101010108 8 8 8/ml/ml/ml/ml质控菌株质控菌株质控菌株质控菌株 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 ATCC ATCC ATCC ATCC 25923259232592325923大肠埃希菌大肠埃希菌大肠埃希菌大肠埃希菌 ATCC ATCC A

13、TCC ATCC 25922259222592225922铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 ATCC ATCC ATCC ATCC 27853278532785327853试验材料第15页，此课件共118页哦操作方法操作方法第16页，此课件共118页哦菌液制备菌液制备 挑取已纯化的挑取已纯化的挑取已纯化的挑取已纯化的4 4 4 4 5 5 5 5个菌落制备菌悬液个菌落制备菌悬液个菌落制备菌悬液个菌落制备菌悬液 挑选琼脂平板上挑选琼脂平板上3535个形态特征一致的菌落，个形态特征一致的菌落，用接种环接触每个菌落顶部用接种环接触每个菌落顶部 转移至转移至45mL 45mL 适宜的液

14、体培养基中（如胰酶适宜的液体培养基中（如胰酶消化大豆胨肉汤）消化大豆胨肉汤）生长法生长法 第17页，此课件共118页哦置置3535孵育孵育2-6 h 2-6 h 用用无无菌菌生生理理盐盐水水或或肉肉汤汤校校正正，使使其其浊浊度度至至0.50.5号麦氏管号麦氏管第18页，此课件共118页哦 从孵育从孵育16-24h 16-24h 的非选择性琼脂培养基上的非选择性琼脂培养基上用接种环挑取单个新鲜菌落，悬浮于生理用接种环挑取单个新鲜菌落，悬浮于生理盐水或肉汤中震荡混匀盐水或肉汤中震荡混匀与标准比浊管比浊，以有黑字的白纸为背景与标准比浊管比浊，以有黑字的白纸为背景调整其浊度相当于调整其浊度相当于0.5

15、0.5号麦氏管。号麦氏管。直接调制菌悬液法直接调制菌悬液法生长法的简便替代法生长法的简便替代法生长法的简便替代法生长法的简便替代法第19页，此课件共118页哦第20页，此课件共118页哦用无菌棉拭子蘸取菌液用无菌棉拭子蘸取菌液在管壁上方旋转挤压几次去掉过多水分在管壁上方旋转挤压几次去掉过多水分用拭子涂布整个用拭子涂布整个M-HM-H培养基表面，反复几培养基表面，反复几次，每次将平板旋转次，每次将平板旋转6060最后沿平皿周边绕两圈以保证涂布均匀最后沿平皿周边绕两圈以保证涂布均匀平板接种平板接种第21页，此课件共118页哦制备好的菌液必须在制备好的菌液必须在15min15min内使用内使用贴贴纸

16、纸片片前前可可将将培培养养皿皿盖盖半半开开3-5min3-5min以以使使表表面面过多水分被吸收但不超过过多水分被吸收但不超过15min15min第22页，此课件共118页哦将接种好的平板敞开盖子倒置在室温下干燥将接种好的平板敞开盖子倒置在室温下干燥3-5min 3-5min 使平板上的水分被琼脂完全吸收。使平板上的水分被琼脂完全吸收。用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面，轻用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面，轻压使其与琼脂完全接触。纸片中心间距压使其与琼脂完全接触。纸片中心间距24mm24mm,纸片中心距平皿边缘纸片中心距平皿边缘15mm15mm。直径。直径90mm90mm的平板最好贴的平板最好贴

17、6 6张。张。加贴纸片加贴纸片第23页，此课件共118页哦15min15min内将平板倒置放温箱孵育。内将平板倒置放温箱孵育。纸纸片片一一旦旦贴贴下下就就不不可可再再挪挪动动位位置置，因因纸纸片片中中的的药物已扩散到琼脂中。药物已扩散到琼脂中。需要时应在适当的地方贴新纸片需要时应在适当的地方贴新纸片注意第24页，此课件共118页哦 必必须须用用3535孵孵箱箱（苛苛氧氧菌菌药药敏敏平平板板应应置置于于5%5%COCO2 2 环境）环境）箱箱内内平平板板最最好好单单独独摆摆放放，不不超超过过两两个个叠叠在在一一起起，否否则则中中间间的的平平板板因因达达不不到到孵孵箱箱温温度度而而产产生预扩散的作

18、用。生预扩散的作用。孵育孵育 第25页，此课件共118页哦平平板板孵孵育育规规定定时时间间（一一般般为为18-24h18-24h）后后读读取取结结果果，葡葡萄萄球球菌菌和和肠肠球球菌菌必必须须孵孵育育24h24h以以检检测测苯苯唑西林和万古霉素的耐药性。唑西林和万古霉素的耐药性。第26页，此课件共118页哦孵育孵育16-18h 16-18h 后检查每一块平板后检查每一块平板如如果果划划线线满满意意，接接种种物物准准确确无无误误，抑抑菌菌圈圈应应为为正圆形，菌落应融合生长正圆形，菌落应融合生长出现明显单个菌落表示接种量太少出现明显单个菌落表示接种量太少 重复试验重复试验第27页，此课件共118页

19、哦可可用用直直尺尺或或游游标标卡卡尺尺，读读取取最最接接近近的的整整毫毫米米数数测测量量时时应应将将尺尺子子置置于于倒倒置置的的平平板板上上，置置平平板板在在黑黑色无反射光背景上方几厘米处并用反射光照明。色无反射光背景上方几厘米处并用反射光照明。含含血血的的药药敏敏琼琼脂脂 应应移移去去平平板板盖盖后后用用反反射射光光照照明平板，于表面上方测量抑菌环。明平板，于表面上方测量抑菌环。抑菌环直径测量抑菌环直径测量第28页，此课件共118页哦测测量量抑抑菌菌环环直直径径时时 抑抑菌菌环环边边缘缘以以见见不不到到细细菌菌明明显显生生长长为为限限，测测量量的的是是完完全全抑抑制制的的区区域域直直径径（包

20、包括纸片直径）括纸片直径）按按抑抑菌菌环环直直径径判判断断细细菌菌的的敏敏感感性性，应应依依据据CLSICLSI的的解解释释标标准准，报报告告细细菌菌对对测测试试药药物物敏敏感感、中中介、耐药。介、耐药。第29页，此课件共118页哦在清楚抑菌环内有独立的菌落生长提示在清楚抑菌环内有独立的菌落生长提示接接种种的的菌菌落落不不纯纯，需需要要重重新新分分离离、鉴鉴定定和和药药敏试验敏试验抗菌药物选择出的高频突变耐药株抗菌药物选择出的高频突变耐药株抗菌药物选择出的高频突变耐药株抗菌药物选择出的高频突变耐药株结果判断结果判断第30页，此课件共118页哦变变形形杆杆菌菌属属的的菌菌株株可可扩扩散散到到某某

21、些些抗抗菌菌药药物物的的抑抑菌菌环环内内，故故在在明明显显抑抑菌菌环环内内有有薄薄膜膜状状爬爬行行生长可以忽略。生长可以忽略。链球菌应检测其生长抑制圈而非溶血抑制圈。链球菌应检测其生长抑制圈而非溶血抑制圈。第31页，此课件共118页哦对对于于甲甲氧氧苄苄啶啶和和磺磺胺胺，拮拮抗抗物物使使细细菌菌轻轻微微生生长长故抑菌圈直径应忽略细微生长的菌落。故抑菌圈直径应忽略细微生长的菌落。来来自自血血琼琼脂脂菌菌落落可可能能带带有有足足够够的的甲甲氧氧苄苄啶啶或或磺磺胺胺拮拮抗抗物物，在在SXTSXT抑抑菌菌圈圈内内细细菌菌可可沿沿敏敏感感菌菌株株周周围产生模糊生长。围产生模糊生长。第32页，此课件共11

22、8页哦检检测测苯苯唑唑西西林林和和万万古古霉霉素素对对葡葡萄萄球球菌菌和和肠肠球球菌菌的的抑抑菌菌环环需需要要用用透透射射光光（平平板板对对着着光光源源），抑抑菌菌环的边缘用放大镜才可发现小菌落可以忽略。环的边缘用放大镜才可发现小菌落可以忽略。在在纸纸片片周周围围的的抑抑菌菌环环内内有有任任何何可可辨辨的的菌菌落落或或生生长薄膜（包括针尖样菌落）提示耐药。长薄膜（包括针尖样菌落）提示耐药。第33页，此课件共118页哦报告方式报告方式敏感敏感 菌菌株株能能被被使使用用推推荐荐剂剂量量在在感感染染部部位位达达到到的的抗菌药物浓度所抑制抗菌药物浓度所抑制常规报告常规报告第34页，此课件共118页哦中

23、介中介被被测测菌菌株株对对该该药药物物的的MICMIC接接近近于于血血液液、组组织织中中通通常常可可达达到到的的浓浓度度而而治治疗疗反反应应率率可可能能低低于于敏敏感感株株。意意味味着着可可通通过过提提高高剂剂量量或或在在药药物物被被生生理理浓浓集集的的部部位发挥临床效力。位发挥临床效力。第35页，此课件共118页哦被被测测菌菌不不能能被被该该抗抗菌菌药药物物的的常常用用剂剂量量在在组组织织或或血液内达到的浓度所抑制血液内达到的浓度所抑制其其MICMIC落落在在某某些些范范围围内内提提示示该该菌菌可可能能存存在在特特定定的的耐耐药药机机制制（如如-内内酰酰胺胺酶酶）而而且且治治疗疗研研究究表明

24、其临床疗效不可靠。表明其临床疗效不可靠。耐药耐药 第36页，此课件共118页哦当当药药物物对对菌菌株株的的MICMIC高高于于或或抑抑菌菌圈圈直直径径低低于于敏敏感折感折点时报告为非敏感。点时报告为非敏感。非敏感并不意味着菌株携带某种耐药机制。非敏感并不意味着菌株携带某种耐药机制。由由于于耐耐药药菌菌株株缺缺失失或或稀稀少少因因而而仅仅确确立立了了敏敏感感性性解解释标准。释标准。对对于于“不不敏敏感感”菌菌株株，鉴鉴定定和和药药敏敏结结果果需需再再次次确认。确认。不敏感（不敏感（NSNS）M100-S20定义定义第37页，此课件共118页哦解释性报告解释性报告 某某些些菌菌种种或或菌菌群群对对

25、抗抗菌菌药药物物的的选选择择和和报报告告有有特特殊殊要要求求大大肠肠埃埃希希菌菌和和克克雷雷伯伯菌菌属属中中产产ESBLsESBLsESBLsESBLs菌菌菌菌株株株株应应应应报报报报告告告告对所有青霉素类、头孢菌素类及氨曲南耐药。对所有青霉素类、头孢菌素类及氨曲南耐药。对所有青霉素类、头孢菌素类及氨曲南耐药。对所有青霉素类、头孢菌素类及氨曲南耐药。第38页，此课件共118页哦对沙门菌属和志贺菌属的分离株对沙门菌属和志贺菌属的分离株只只只只有有有有氨氨氨氨苄苄苄苄西西西西林林林林、一一一一种种种种喹喹喹喹诺诺诺诺酮酮酮酮类类类类药药药药物物物物和和和和磺磺磺磺胺胺胺胺异异异异恶恶恶恶唑唑唑唑/

26、甲氧苄啶可用于常规试验和报告甲氧苄啶可用于常规试验和报告甲氧苄啶可用于常规试验和报告甲氧苄啶可用于常规试验和报告第第第第一一一一、二二二二代代代代头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素和和和和氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类药药药药物物物物体体体体外外外外可可可可能能能能有有有有活性但临床无效故不应报告敏感活性但临床无效故不应报告敏感活性但临床无效故不应报告敏感活性但临床无效故不应报告敏感第39页，此课件共118页哦沙沙门门菌菌属属的的肠肠道道外外分分离离株株应应测测试试并并报报告告氯氯霉素和一种三代头孢菌素的敏感性霉素和一种三代头孢菌素的敏感性肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌对对对对头头头头孢孢孢

27、孢菌菌菌菌素素素素类类类类、氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类、磺磺磺磺胺胺胺胺甲甲甲甲恶恶恶恶唑唑唑唑/甲甲甲甲氧氧氧氧苄苄苄苄啶啶啶啶和和和和克克克克林林林林霉霉霉霉素素素素在在在在体体体体外外外外可可可可能能能能有有有有活活活活性性性性但临床耐药，不能报告敏感。但临床耐药，不能报告敏感。但临床耐药，不能报告敏感。但临床耐药，不能报告敏感。第40页，此课件共118页哦MRSMRSMRSMRS应应应应报报报报告告告告耐耐耐耐受受受受所所所所有有有有-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺类类类类药药药药物物物物（包包包包括括括括其复合药）其复合药）其复合药）其复合药）从从威威胁胁生生命命的的感感染染

28、（脑脑膜膜炎炎、菌菌血血症症、会会厌厌炎炎和和面面部部蜂蜂窝窝组组织织炎炎）患患者者的的血血和和脑脑脊脊液液中中分分离离的的流流感感嗜嗜血血杆杆菌菌常常规规应应报报告告氨氨苄苄西西林林、一种三代头孢菌素和氯霉素的药敏结果一种三代头孢菌素和氯霉素的药敏结果。第41页，此课件共118页哦“警警 告告”下列抗生素下列抗生素下列抗生素下列抗生素/微生物组合，在体外可出现活性微生物组合，在体外可出现活性微生物组合，在体外可出现活性微生物组合，在体外可出现活性但在临床上无效但在临床上无效但在临床上无效但在临床上无效 ，不应报告敏感，不应报告敏感，不应报告敏感，不应报告敏感细菌细菌细菌细菌不作为敏感报告的抗

29、微生物药不作为敏感报告的抗微生物药不作为敏感报告的抗微生物药不作为敏感报告的抗微生物药产产产产ESBLESBL肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、大肠埃希菌和奇异变形杆菌菌、大肠埃希菌和奇异变形杆菌菌、大肠埃希菌和奇异变形杆菌菌、大肠埃希菌和奇异变形杆菌青霉素类、头孢菌素类青霉素类、头孢菌素类青霉素类、头孢菌素类青霉素类、头孢菌素类 和氨曲南和氨曲南和氨曲南和氨曲南沙门菌属、志贺菌属沙门菌属、志贺菌属沙门菌属、志贺菌属沙门菌属、志贺菌属、代头孢菌素、头霉素和氨基代头孢菌素、头霉素和氨基代头孢菌素、头霉素和氨基代头孢菌素、头霉素和氨

30、基糖苷类糖苷类糖苷类糖苷类苯唑西林耐药葡萄球菌属苯唑西林耐药葡萄球菌属苯唑西林耐药葡萄球菌属苯唑西林耐药葡萄球菌属所有青霉素类，头孢菌素类、所有青霉素类，头孢菌素类、所有青霉素类，头孢菌素类、所有青霉素类，头孢菌素类、-内内内内酰胺酰胺酰胺酰胺/-/-内酰胺抑制剂、碳青霉烯类内酰胺抑制剂、碳青霉烯类内酰胺抑制剂、碳青霉烯类内酰胺抑制剂、碳青霉烯类肠球菌属肠球菌属肠球菌属肠球菌属氨基糖苷类氨基糖苷类氨基糖苷类氨基糖苷类(除外高浓度除外高浓度除外高浓度除外高浓度)、头孢菌素、头孢菌素、头孢菌素、头孢菌素类、克林霉素和甲氧苄啶类、克林霉素和甲氧苄啶类、克林霉素和甲氧苄啶类、克林霉素和甲氧苄啶/磺胺甲

31、噁磺胺甲噁磺胺甲噁磺胺甲噁唑唑唑唑第42页，此课件共118页哦苛养菌药敏试验苛养菌药敏试验第43页，此课件共118页哦培养基为培养基为HTMHTM（嗜血杆菌试验培养基）（嗜血杆菌试验培养基）常规试验并不推荐用常规试验并不推荐用M-HM-H巧克力琼脂巧克力琼脂巧克力琼脂巧克力琼脂过过高高的的接接种种浓浓度度对对某某些些-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺类类类类抗抗抗抗生生生生素素素素可可可可造成假耐药的结果造成假耐药的结果造成假耐药的结果造成假耐药的结果相当于相当于0.50.50.50.5号麦氏管含菌号麦氏管含菌号麦氏管含菌号麦氏管含菌1 1 4 410108 8CFUCFUCFUCFU/mL/mL/m

32、L/mL嗜血杆菌嗜血杆菌第44页，此课件共118页哦HTMHTM氯化血红素母液氯化血红素母液氯氯化化血血红红素素50mg50mg50mg50mg溶溶溶溶于于于于100ml 100ml 100ml 100ml 0.01mmol/L0.01mmol/L0.01mmol/L0.01mmol/L的的NaOHNaOHNaOHNaOH，加热搅拌至完全溶解。，加热搅拌至完全溶解。，加热搅拌至完全溶解。，加热搅拌至完全溶解。NADNAD母液母液NAD50mgNAD50mgNAD50mgNAD50mg溶解于溶解于溶解于溶解于10ml10ml蒸馏水，过滤除菌。蒸馏水，过滤除菌。第45页，此课件共118页哦HTMH

33、TM30ml30ml氯氯化化血血红红素素母母液液加加至至1L1L含含5g5g酵酵母母粉粉的的M-HM-H琼脂中琼脂中高压灭菌高压灭菌冷却后用无菌手续加入冷却后用无菌手续加入3ml3ml的的NADNAD母液母液第46页，此课件共118页哦淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌培养基培养基 GCGCGCGC琼脂琼脂+1%+1%+1%+1%的特定生长添加剂的特定生长添加剂的特定生长添加剂的特定生长添加剂不推荐用高营养的巧克力琼脂作药敏不推荐用高营养的巧克力琼脂作药敏若若1010g g青青霉霉素素纸纸片片抑抑菌菌圈圈19mm 19mm，表表示示产产生生-内酰胺酶。内酰胺酶。-内内酰酰胺胺酶酶试试验验更更为为迅迅速速，为

34、为确确认认质质粒粒介介导导耐药性的好方法。耐药性的好方法。第47页，此课件共118页哦培养基培养基 含含5%5%5%5%脱纤维羊血的脱纤维羊血的脱纤维羊血的脱纤维羊血的M-HM-H琼脂琼脂琼脂琼脂肺肺炎炎链链球球菌菌用用苯苯唑唑西西林林测测定定对对青青霉霉素素的的敏敏感感性性，抑抑菌菌环环直直径径19mm19mm应应测测其其MICMIC而而不不是是直直接接报报告告对青霉素中介或耐药对青霉素中介或耐药肺炎链球菌和其他链球菌肺炎链球菌和其他链球菌第48页，此课件共118页哦肺链以外的链球菌不推荐用苯唑西林试验肺链以外的链球菌不推荐用苯唑西林试验对对于于草草链链，青青霉霉素素（或或苯苯唑唑西西林林）

35、纸纸片片扩扩散散试试验验是是不不可可靠靠的的，无无菌菌部部位位分分离离的的草草链链应应测测其其青青霉素的霉素的MICMIC。第49页，此课件共118页哦适用于肠杆菌科细菌等快速生长的致病菌适用于肠杆菌科细菌等快速生长的致病菌无无论论哪哪种种接接种种方方式式，只只要要质质控控菌菌种种的的抑抑菌菌环环在在预预期范围内，均可按同一解释标准报告药敏结果期范围内，均可按同一解释标准报告药敏结果为为WHOWHO推荐药敏方法推荐药敏方法专专性性厌厌氧氧菌菌及及酵酵母母样样菌菌等等某某些些特特殊殊菌菌种种药药敏敏试试验验不不能用能用纸片法特点纸片法特点第50页，此课件共118页哦技技术术简简单单，试试剂剂量量

36、低低，不不需需要要特特殊殊设设备备，可可自自由由选选择择抗抗菌菌药药物物，可可重重复复，易易于于由由人人判判断断，故必须标准化。故必须标准化。纸片法药敏试验必须标准化纸片法药敏试验必须标准化第51页，此课件共118页哦影响因素第52页，此课件共118页哦M-H M-H 培养基培养基批间重复性较好批间重复性较好含有磺胺、甲氧苄啶和四环素的抑制物很少含有磺胺、甲氧苄啶和四环素的抑制物很少绝大多数非苛养菌生长良好绝大多数非苛养菌生长良好已积累大量的数据和经验已积累大量的数据和经验第53页，此课件共118页哦按商用脱水培养基说明制备按商用脱水培养基说明制备高压灭菌后水浴冷却至高压灭菌后水浴冷却至45-

37、5045-50水水平平台台面面上上倾倾注注平平皿皿，厚厚度度均均匀匀一一致致约约4mm4mm，150mm150mm平平皿皿倒倒 60-70mL60-70mL，100mm100mm平平皿皿倒倒 25-30mL25-30mL培养基配制培养基配制第54页，此课件共118页哦冷冷却却至至室室温温，若若当当天天不不使使用用应应贮贮存存于于 2-2-88冰箱冰箱制备后制备后7 7天内使用完毕天内使用完毕每每批批平平板板均均应应进进行行抽抽样样进进行行无无菌菌试试验验，30-30-3535孵育孵育24h24h或更长时间。或更长时间。第55页，此课件共118页哦检检查查每每批批 M-HM-H琼琼脂脂的的pHp

38、H，胶胶化化后后室室温温下下为为7.2-7.2-7.47.4过过低低、过过高高会会使使某某些些药药物物失失去去效效力力（如如氨氨基基糖糖甙甙类类和和大大环环内内酯酯类类）或或活活性性可可能能增增强强（如如青青霉霉素素类类）。pH第56页，此课件共118页哦若若使使用用前前琼琼脂脂表表面面过过分分潮潮湿湿，应应放放3535孵孵箱箱或或在在室室温温下下敞敞开开盖盖子子倒倒置置，直直至至多多余余水水分分蒸发。蒸发。琼脂表面应保持湿润琼脂表面应保持湿润在在接接种种后后琼琼脂脂表表面面或或平平板板的的盖盖子子表表面面不不应应有有可见的潮湿水珠可见的潮湿水珠湿度湿度第57页，此课件共118页哦过过量量胸胸

39、腺腺嘧嘧啶啶核核苷苷或或胸胸腺腺嘧嘧啶啶可可逆逆转转磺磺胺胺类类和和甲甲氧氧苄苄啶啶的的抑抑菌菌效效应应而而使使抑抑菌菌环环变变小小、模模糊糊甚甚至至消消失失而而导导致致假假耐耐药药的的报报告告，应应使使用用胸胸腺嘧啶核苷含量尽可能低的腺嘧啶核苷含量尽可能低的M-HM-H琼脂。琼脂。评评价价新新的的M-HM-H琼琼脂脂可可用用甲甲氧氧苄苄啶啶/SMZ/SMZ纸纸片片对对粪粪肠肠球菌球菌ATCC29212ATCC29212或粪肠球菌或粪肠球菌ATCC33186ATCC33186进行试验进行试验胸腺嘧啶核苷或胸腺嘧啶影响胸腺嘧啶核苷或胸腺嘧啶影响第58页，此课件共118页哦不合格培养基不合格培养基

40、没有抑菌圈没有抑菌圈抑菌圈内有菌生长抑菌圈内有菌生长抑菌圈内有菌生长抑菌圈内有菌生长抑菌环直径抑菌环直径20mm20mm20mm20mm合格培养基合格培养基培养基上出现边缘清楚的抑菌环培养基上出现边缘清楚的抑菌环培养基上出现边缘清楚的抑菌环培养基上出现边缘清楚的抑菌环直径为直径为20mm20mm20mm20mm或更大或更大第59页，此课件共118页哦主要指镁和钙主要指镁和钙影影响响氨氨基基糖糖甙甙类类、多多粘粘菌菌素素和和四四环环素素对对假假单单胞菌的试验结果胞菌的试验结果含量过高含量过高含量过高含量过高 抑菌圈变小抑菌圈变小抑菌圈变小抑菌圈变小含量过低含量过低 抑菌圈变大甚至不可接受抑菌圈变

41、大甚至不可接受锌离子主要影响细菌对碳青霉烯的敏感性锌离子主要影响细菌对碳青霉烯的敏感性二价阳离子含量的影响二价阳离子含量的影响第60页，此课件共118页哦培养条件培养条件非苛氧菌解释标准的基础是在空气中孵育。非苛氧菌解释标准的基础是在空气中孵育。某某些些药药物物（氨氨基基糖糖甙甙类类、大大环环内内酯酯类类和和四四环环素素）受受COCO2 2 影影响响抑抑菌菌环环直直径径会会有有较较大大改改变变，非非苛苛氧氧菌菌不能在不能在COCO2 2 浓度较高的环境中孵育。浓度较高的环境中孵育。苛氧菌应在苛氧菌应在COCO2 2 环境孵育中环境孵育中第61页，此课件共118页哦纸片的贮存纸片的贮存装装有有纸

42、纸片片的的容容器器应应置置于于非非无无霜霜冰冰箱箱中中，88冷藏或冷藏或-14-14冷冻至使用前冷冻至使用前某某些些不不稳稳定定药药物物（如如亚亚胺胺培培南南、头头孢孢克克洛洛、克克拉拉维维酸酸复复合合药药等等）也也应应冷冷冻冻保保存存直直至至使使用用当天，以尽量保持其稳定性。当天，以尽量保持其稳定性。第62页，此课件共118页哦装装装装有有有有纸纸纸纸片片片片的的的的密密密密封封封封容容容容器器器器应应应应于于于于使使使使用用用用前前前前1-2h1-2h1-2h1-2h移移移移出出出出冰冰冰冰箱箱箱箱，平平平平衡衡衡衡至至至至室室室室温温温温后后后后才才才才能能能能打打打打开开开开以以以以防

43、防防防热热热热空空空空气气气气接接接接触触触触冷冷冷冷纸纸纸纸片片片片时时时时产产产产生生生生冷冷冷冷凝凝凝凝水。水。水。水。装装装装有有有有纸纸纸纸片片片片的的的的塑塑塑塑胶胶胶胶管管管管从从从从密密密密封封封封包包包包装装装装中中中中取取取取出出出出后后后后应应应应置置置置于于于于密密密密封封封封的干燥容器中的干燥容器中的干燥容器中的干燥容器中-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺类类类类药药药药物物物物纸纸纸纸片片片片应应应应密密密密封封封封包包包包装装装装并并并并冷冷冷冷冻冻冻冻，少少少少量量量量正正正正在在在在使用的纸片可冷藏至少一周使用的纸片可冷藏至少一周使用的纸片可冷藏至少一周使用的纸片可冷

44、藏至少一周第63页，此课件共118页哦使使用用纸纸片片分分配配器器应应上上紧紧盖盖子子并并配配备备足足量量干干燥燥剂剂，分分配配器器打打开开前前应应平平衡衡至至室室温温；指指示示剂剂变变色色时应更换干燥剂以防过于潮湿。时应更换干燥剂以防过于潮湿。装有纸片的分配器不用时应冷藏装有纸片的分配器不用时应冷藏过期纸片不得使用，应废弃过期纸片不得使用，应废弃。第64页，此课件共118页哦接种物的浊度接种物的浊度使使用用BaSOBaSO4 4浊浊度度标标准准管管或或其其光光学学等等同同物物（如如乳乳胶颗粒悬液）胶颗粒悬液）相当于相当于0.50.5号麦氏标准管号麦氏标准管(配制方法见后）配制方法见后）第65

45、页，此课件共118页哦使使用用前前将将浊浊度度标标准准管管取取出出置置于于旋旋转转混混匀匀器器上上剧剧烈振动，目测其外观浊度应均匀一致烈振动，目测其外观浊度应均匀一致出现大颗粒浊度管应更换出现大颗粒浊度管应更换每月每月应更换硫酸钡浊度管或核实其浊度应更换硫酸钡浊度管或核实其浊度第66页，此课件共118页哦0.048mol/L0.048mol/L的的 BaCLBaCL2 2 0.5mL 0.5mL（1.175%1.175%w/v w/v BaClBaCl2 2 H H2 2O O）加加入入到到99.5mL 99.5mL 0.18mol/L0.18mol/L的的H H2 2SOSO4 4（1%v/

46、v1%v/v），并不断搅动以维持混悬状态。），并不断搅动以维持混悬状态。0.5号麦氏标准管配制第67页，此课件共118页哦按按每每管管4-6mL4-6mL分分装装于于带带螺螺帽帽的的试试管管，其其口口径径应应与与稀释菌所用一致。稀释菌所用一致。密封并贮存于室温黑暗处密封并贮存于室温黑暗处可可使使用用分分光光光光度度计计核核实实浊浊度度标标准准管管的的浊浊度度，光光径径1cm1cm，625nm625nm吸吸光光度度值值0.08-0.100.08-0.10者者即即为为0.50.5号麦氏标准管。号麦氏标准管。第68页，此课件共118页哦注意事项注意事项对对每每种种可可能能致致病病的的细细菌菌进进行行

47、药药敏敏试试验验时时，使使用用的单个菌落应选自原始琼脂平板的单个菌落应选自原始琼脂平板多多种种不不同同型型细细菌菌的的混混合合物物不不能能在在同同一一药药敏敏试试验验平皿上进行试验平皿上进行试验直直接接用用临临床床标标本本药药敏敏试试验验须须经经分分纯纯菌菌种种药药敏敏试试验验复核复核第69页，此课件共118页哦接种物浓度避免过浓或过稀接种物浓度避免过浓或过稀禁禁止止用用未未稀稀释释的的过过夜夜肉肉汤汤或或其其他他非非标标准准接接种种物物进行平板划线进行平板划线必必须须应应用用标标准准化化操操作作方方法法并并测测量量抑抑菌菌环环直直径径，绝绝对对不不允允许许只只凭凭环环的的有有无无而而不不考考

48、虑虑环环的的大大小小判判断断结果。结果。第70页，此课件共118页哦试验方法试验方法稀释法稀释法第71页，此课件共118页哦琼脂稀释法琼脂稀释法重复性好重复性好重复性好重复性好同时测定多种细菌同时测定多种细菌可观察被检菌落生长情况、发现污染菌可观察被检菌落生长情况、发现污染菌可观察被检菌落生长情况、发现污染菌可观察被检菌落生长情况、发现污染菌可应用机械化手段、提高效率可应用机械化手段、提高效率可应用机械化手段、提高效率可应用机械化手段、提高效率第72页，此课件共118页哦微量肉汤稀释法微量肉汤稀释法一块板可以同时测定多种抗菌药物一块板可以同时测定多种抗菌药物一块板可以同时测定多种抗菌药物一块板

49、可以同时测定多种抗菌药物操作规范、简便、结果可信操作规范、简便、结果可信药物不一定适合实际工作需要药物不一定适合实际工作需要第73页，此课件共118页哦试验方法试验方法E test第74页，此课件共118页哦是是一一种种抗抗菌菌药药物物浓浓度度梯梯度度法法直直接接测测量量MICMIC的的药药敏敏试验试验结结合合了了稀稀释释法法和和扩扩散散法法原原理理、特特点点并并克克服服两两者者缺缺点点结果准确、重复性好、操作简便结果准确、重复性好、操作简便第75页，此课件共118页哦原原 理理E E试试条条为为5mm*50mm5mm*50mm的的长长条条，一一面面固固定定有有预预先先制制备备的的稀稀释释度度

50、呈呈指指数数级级连连续续增增长长的的抗抗菌菌药药物物；另一面有读数和判别刻度。另一面有读数和判别刻度。抗菌药物梯度可覆盖抗菌药物梯度可覆盖2020个等倍稀释度个等倍稀释度试试条条贴贴在在涂涂有有细细菌菌的的琼琼脂脂平平板板上上孵孵育育后后其其周周围围可可见见椭椭圆圆形形抑抑菌菌环环，边边缘缘与与试试条条交交点点的的刻刻度称为抑制浓度（度称为抑制浓度（ICIC）。）。第76页，此课件共118页哦方方 法法培养基和菌种培养基和菌种 同纸片法同纸片法贴试条贴试条 确保已接种细菌的平板干燥确保已接种细菌的平板干燥确保已接种细菌的平板干燥确保已接种细菌的平板干燥用用镊镊子子将将试试条条刻刻度度面面朝朝上