化学发光免疫分析技术 (4)讲稿.ppt
《化学发光免疫分析技术 (4)讲稿.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《化学发光免疫分析技术 (4)讲稿.ppt(31页珍藏版)》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、关于化学发光免疫分析技术(4)第一页,讲稿共三十一页哦一、一、化学发光免疫技术的概念化学发光免疫技术的概念二、二、化学发光免疫分析基本原理化学发光免疫分析基本原理三、三、化学发光免疫分析的类型化学发光免疫分析的类型四、临床应用四、临床应用五、发展与展望五、发展与展望第二页,讲稿共三十一页哦一、化学发光免疫技术的概念 化学发光免疫技术化学发光免疫技术:化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光的强度来确定物化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光的强度来确定物质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光系统与免疫反应相结合,用质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光系统与免疫反应相结合,用化学
2、发光相关的物质标记抗体或抗原,与待测的抗原或抗体反应后,经过分离游化学发光相关的物质标记抗体或抗原,与待测的抗原或抗体反应后,经过分离游离态的化学发光标记物,加入化学发光系统的其它相关物产生化学发光,进行抗离态的化学发光标记物,加入化学发光系统的其它相关物产生化学发光,进行抗原或抗体的定量或定性检测。原或抗体的定量或定性检测。第三页,讲稿共三十一页哦 化学发光免疫测定是目前世界公认先进的标记免疫测定技术,化学发光免疫分析技术具有高度的准确性和特异性,成为检验方法中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析技术作为疾病诊断的主要手段已被广泛用于机体免疫功能、传染性疾病、内分泌功能、肿瘤标志物、性激素、
3、甲状腺功能等方面的体外诊断实验中。第四页,讲稿共三十一页哦化学发光免疫分析的优势灵敏度高灵敏度高灵敏度高是化学发光免疫分析关键的优越性,其灵敏度可达 10-22 mol/L(RIA 为 10-12 mol/L)。化学发光免疫分析能够检出放射免疫分析和酶联免疫分析等方法无法检出的物质,对疾病的早期诊断具有十分重要的意义。第五页,讲稿共三十一页哦宽的线性动力学范围宽的线性动力学范围 发光强度在 4 6 个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度(OD 值)为 2.0 的范围相比,优势明显。虽然 RIA 也有较宽的线性动力学范围,但放射性限制了其应用。光信号持续时间长光信号持续
4、时间长辉光型的 CLIA 产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实验操作及测量。第六页,讲稿共三十一页哦分析方法简便快速分析方法简便快速绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂(或复合试剂)的一步模式。结果稳定、误差小结果稳定、误差小样品系直接自己发光,不需要任何光源照射,免除了各种可能因素(光源稳定性、光散射、光波选择器等)给分析带来的影响,使分析结果灵敏稳定可靠。安全性好及使用期长安全性好及使用期长免除了使用放射性物质。到目前为止,还未发现其危害性;试剂稳定,保存期可达一年。第七页,讲稿共三十一页哦二、化学发光免疫分析基本原理 化学发光免疫分析包含两个部分,即免疫反应系统和化学发光分析
5、系统。免疫反应系统是将标记物质标记在抗原或抗体上,经过特异性免疫反应后,形成抗原2抗体复合物。然后进行对标记物进行检测,来测定待检物。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化,形成一个激发态的中间体,当这种激发态中间体回到稳定的基态时,同时发射出光子,利用发光信号测量仪器光量子产率。第八页,讲稿共三十一页哦2.1 免疫分析原理 免疫分析是利用抗原与抗体特异性结合形成抗原2抗体复合物而建立起来的一种高选择性的分析方法,根据其检测方法可分为非标记免疫分析和标记免疫分析。非标记免疫分析是利用抗原与抗体结合形成抗原2抗体复合物后,其理化性质发生改变,出现肉眼可见的沉淀、凝集等现象
6、,利用这些现象来检测待检物。标记免疫分析是在不影响抗原、抗体生物活性的基础上将标记物质标记在抗原或抗体上,然后进行免疫反应形成抗原2抗体复合物,再对标记质进行检测,从而间接检测待检物的方法。目前常用的标记物有放射性的125 I,非放射性的碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶,镧系稀土元素等。第九页,讲稿共三十一页哦2.2 化学发光原理 化学发光(Chemiluminescence,CL)是化学物质在特定化学反应中产生的光辐射。通过高能中间体的分解在化学反应中激发单态分子形成,分子被激发后是不稳定的,它要释放出多余的能量而回到基态,其中部分的能量以发光形式释放出来。因此,任何一个化学发光反应包括两个过程:
7、激发和发光过程。一些激发态分子能量也会通过系间串跃和系内串跃而消失。因此,化学发光反应的效率是:第十页,讲稿共三十一页哦 CL=CEEM (1)式中,CL为化学发光效率,CE为生成激发态的效率,EM为激发态的发光效率。CE和EM分别定义为:CE=生成激发态的分子数/参加反应的分子数 (2)EM=发光的分子数/生成激发态的分子数 (3)从(1)、(2)、(3)式得化学发光的效率CL等价于生成荧光和磷光的量子效率。即:CL=发光的分子数/参加反应的分子数 (4)第十一页,讲稿共三十一页哦2.3 化学发光免疫分析的原理 化学发光免疫分析法是化学发光和免疫分析结合的产物。它同时具有化学发光法的高灵敏度
8、和免疫分析法的高选择性。化学发光免疫分析是用化学发光反应的试剂标记抗原或抗体,标记后的抗原和抗体与待测物经过一系列的免疫反应和理化步骤,最后以测定发光强度形式测定待测物的含量。第十二页,讲稿共三十一页哦三、化学发光免疫分析的类型 化学发光免疫分析法根据其标记物的不同可分为三大类,即化直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。第十三页,讲稿共三十一页哦 用吖啶酯直接标记抗体用吖啶酯直接标记抗体(抗原抗原),与待测标本中相应的,与待测标本中相应的抗原抗原(抗体抗体)发生免疫反应后,形成固相包被抗体发生免疫反应后,形成固相包被抗体-待测抗待测抗原原-吖啶酯标记抗体复合物,这时只
9、需加入氧化剂(吖啶酯标记抗体复合物,这时只需加入氧化剂(H H2 2O O2 2)和和NaOHNaOH使成碱性环境,吖啶酯在不需要催化剂的情况使成碱性环境,吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、发光下分解、发光 。由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的光子能,由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的光子能,这部分光的积分与待测抗原的量成正比,可从标准曲线上计算出待这部分光的积分与待测抗原的量成正比,可从标准曲线上计算出待测抗原的含量。测抗原的含量。3.1 3.1 直接化学发光免疫分析直接化学发光免疫分析第十四页,讲稿共三十一页哦发光发光Y Y Y YY Y Y YY Y Y Y磁
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 化学发光免疫分析技术 4讲稿 化学 发光 免疫 分析 技术 讲稿
限制150内