第十一章 高效液相色谱法 (2)优秀PPT.ppt

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1、第十一章 高效液相色谱法2023/4/2第一页，本课件共有48页一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器第一节第一节 高效液相色谱的特点与仪器高效液相色谱的特点与仪器2023/4/2第二页，本课件共有48页2023/4/2第三页，本课件共有48页2023/4/2第四页，本课件共有48页二、二、高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 特点：高压、高效、高速特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。2023/4/2第五页，本课件共有48页三、流程及主要部件三、流程及主要部件1.流程流程2023/4/2第六页，本课件共有48

2、页2.主要部件主要部件(1)高压输液泵高压输液泵主要部件之一，压力：150350105 Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小)2023/4/2第三十三页，本课件共有48页4.选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。柱和使检测器噪声增加。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降

3、或损坏柱子。如使固）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。在柱中沉积。（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。动相不应有紫外吸收。2023/4/2第三十四页，本课件共有48页一、一、影响分离的因素影响分离的因素1.1.影影响响分分离离的的因因素素与与提提高高柱柱效效的的途途径径 在在高高效

4、效液液相相色色谱谱中中,速速率率方方程程中中的的分分子子扩扩散散项项B/U较较小小，可可以以忽忽略略不不计计，即：即：H=A+C u 故故液液相相色色谱谱H-u曲曲线线与与气气相相色色谱谱的的形形状不同，如图所示。状不同，如图所示。第四节第四节 影响分离的因素与操作条件的选择影响分离的因素与操作条件的选择2023/4/2第三十五页，本课件共有48页 液液体体的的黏黏度度比比气气体体大大一一百百倍倍，密密度度为为气气体体的的一一千千倍倍，故故降降低低传传质质阻阻力是提高柱效主要途径。力是提高柱效主要途径。由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。液相色谱中，不可

5、能通过增加液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。恒温柱温来改善传质。恒温 改变淋洗液组成、极性是改善分改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。离的最直接的因素。2023/4/2第三十六页，本课件共有48页 2.流速流速 流速大于流速大于0.5 cm/s时时,Hu曲线是一曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。选择参数。3.固定相及分离柱固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则

6、与气相色谱一样。气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。行制备。2023/4/2第三十七页，本课件共有48页二、分离类型选择二、分离类型选择2023/4/2第三十八页，本课件共有48页三、三、HPLC的应用的应用 1.环境中有机氯农药残留量分析环境中有机氯农药残留量分析 固定相固定相：薄壳型硅胶薄壳型硅胶(37 50 m)流动相：正己烷流动相：正己烷 流流 速：速：1.5 mL/min 色谱柱：色谱柱：50cm 2.5

7、mm(内径内径)检测器：差示折光检测器检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。留量进行分析。2023/4/2第三十九页，本课件共有48页2.稠环芳烃的分析稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。稠环芳烃多为致癌物质。固定相固定相：十八烷基硅烷化键合相十八烷基硅烷化键合相 流动相：流动相：20%甲醇甲醇-水水 100%甲醇甲醇 线性梯度淋洗，线性梯度淋洗，2%/min 流流 速：速：1mL/min 柱柱 温：温：50 C 柱柱 压：压：70 104 Pa 检测器：紫外检测器检测器：紫外检测器2023/4/2第四十页，本课件共有48页四、制备型液相色谱四

8、、制备型液相色谱 获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。半制备柱（内径半制备柱（内径8mm，长度长度15 30cm），），一次制备量一次制备量.1mg；1.色谱柱的柱容量（柱负荷）色谱柱的柱容量（柱负荷）对分析柱：不影响柱效时的最大进样量；对分析柱：不影响柱效时的最大进样量；对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量；对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量；超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低降低10%为宜。为宜。2

9、023/4/2第四十一页，本课件共有48页2.液相制备色谱的方法液相制备色谱的方法收集组分时，通常有以下情况：收集组分时，通常有以下情况：（1）可获得良好分离，主峰）可获得良好分离，主峰 使用制备柱，超载提高效率；使用制备柱，超载提高效率；（2）两主成分之间的小组分；）两主成分之间的小组分；超超载，分离切分使待分离组分成为主成载，分离切分使待分离组分成为主成分（富集）后，再次分离制备。分（富集）后，再次分离制备。2023/4/2第四十二页，本课件共有48页3.制备型液相色谱制备型液相色谱 制备型液相色谱：结构与分析型一样，但泵流量大、进样量制备型液相色谱：结构与分析型一样，但泵流量大、进样量大

10、、采用制备柱；柱后馏分收集器。大、采用制备柱；柱后馏分收集器。制备柱：内径制备柱：内径2050mm，柱长柱长50cm。2023/4/2第四十三页，本课件共有48页第五节第五节 案例分析案例分析 英国学者非常强调让学生获得解决实际问题英国学者非常强调让学生获得解决实际问题（problem-solving）、团队工作）、团队工作（teamwork）和与）和与人交往的能力人交往的能力（communication skills）的重要性。案例）的重要性。案例研究或病史研究在法学、心理学、医学教育中广泛采用。研究或病史研究在法学、心理学、医学教育中广泛采用。在仪器分析教学中可能有用，特别是在培养学生解决

11、实在仪器分析教学中可能有用，特别是在培养学生解决实际问题能力方面。际问题能力方面。2023/4/2第四十四页，本课件共有48页神秘的死亡案例神秘的死亡案例 情景设计为发现一情景设计为发现一48岁男性岁男性 在其床上死亡，怀疑在其床上死亡，怀疑是药物过量致死。作为是药物过量致死。作为HPLC实验，学生给予的试样实验，学生给予的试样是模拟死亡案件的血样。需根据是模拟死亡案件的血样。需根据HPLC分析结果判断分析结果判断死因，是误用或是自杀。死因，是误用或是自杀。2023/4/2第四十五页，本课件共有48页从色谱图可以看到，涉及到的药物有从色谱图可以看到，涉及到的药物有4 4种：利度卡因、异种：利度

12、卡因、异吡拉米得、普鲁卡因酰胺、奎尼定。吡拉米得、普鲁卡因酰胺、奎尼定。2023/4/2第四十六页，本课件共有48页利度卡因利度卡因奎尼定奎尼定 异吡拉米得异吡拉米得普鲁卡因酰胺普鲁卡因酰胺2023/4/2第四十七页，本课件共有48页让学生做让学生做HPLC的实验，表格也可以不给，让学生到网的实验，表格也可以不给，让学生到网上去查，查找这个药物允许的量是多少？致死的量是多上去查，查找这个药物允许的量是多少？致死的量是多少？根据实验判断这个人是自杀了？还是误用药物了？少？根据实验判断这个人是自杀了？还是误用药物了？Therapeutic and Toxic Drug Ranges.2023/4/2第四十八页，本课件共有48页