第十章吸光光度法优秀PPT.ppt

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1、第十章吸光光度法第十章吸光光度法第一页，本课件共有78页Al3+Cu2+KMnO4Ni2+Fe3+n n通过比较溶液颜色深浅而求得其浓度的分析通过比较溶液颜色深浅而求得其浓度的分析方法称为比色分析法方法称为比色分析法第二页，本课件共有78页n n比色分析的基本依据是有色物质对光的选择比色分析的基本依据是有色物质对光的选择性吸收作用。性吸收作用。n n光吸收的本质：光吸收的本质：第三页，本课件共有78页n n吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。n n原子吸收光谱是由原子（而不是分子

2、）外层电子选择性地吸收某些原子吸收光谱是由原子（而不是分子）外层电子选择性地吸收某些原子吸收光谱是由原子（而不是分子）外层电子选择性地吸收某些原子吸收光谱是由原子（而不是分子）外层电子选择性地吸收某些波长的电磁波而引起的，原子吸收分光光度法就是根据原子的这种波长的电磁波而引起的，原子吸收分光光度法就是根据原子的这种波长的电磁波而引起的，原子吸收分光光度法就是根据原子的这种波长的电磁波而引起的，原子吸收分光光度法就是根据原子的这种性质建立起来的。性质建立起来的。性质建立起来的。性质建立起来的。n n分子吸收光谱是分子轨道中外层电子吸收某一波长范围的能量而引分子吸收光谱是分子轨道中外层电子吸收某一

3、波长范围的能量而引分子吸收光谱是分子轨道中外层电子吸收某一波长范围的能量而引分子吸收光谱是分子轨道中外层电子吸收某一波长范围的能量而引起的，通常吸收的是紫外及可见光部分。这种价电子跃迁而产生的起的，通常吸收的是紫外及可见光部分。这种价电子跃迁而产生的起的，通常吸收的是紫外及可见光部分。这种价电子跃迁而产生的起的，通常吸收的是紫外及可见光部分。这种价电子跃迁而产生的分子光谱又称为电子光谱。分子光谱又称为电子光谱。分子光谱又称为电子光谱。分子光谱又称为电子光谱。n n电子跃迁时必须伴有分子的振动和转动能级的变化，所以分子光谱不是线电子跃迁时必须伴有分子的振动和转动能级的变化，所以分子光谱不是线电子

4、跃迁时必须伴有分子的振动和转动能级的变化，所以分子光谱不是线电子跃迁时必须伴有分子的振动和转动能级的变化，所以分子光谱不是线光谱而是带状光谱。若用红外光照射，不能引起电子的跃迁，只能引起振光谱而是带状光谱。若用红外光照射，不能引起电子的跃迁，只能引起振光谱而是带状光谱。若用红外光照射，不能引起电子的跃迁，只能引起振光谱而是带状光谱。若用红外光照射，不能引起电子的跃迁，只能引起振动和转动能级的变化，这样引起的吸收光谱称为振动转动光谱或红外光动和转动能级的变化，这样引起的吸收光谱称为振动转动光谱或红外光动和转动能级的变化，这样引起的吸收光谱称为振动转动光谱或红外光动和转动能级的变化，这样引起的吸收

5、光谱称为振动转动光谱或红外光谱。它的吸收与分子结构密切相关，用于研究分子结构。谱。它的吸收与分子结构密切相关，用于研究分子结构。谱。它的吸收与分子结构密切相关，用于研究分子结构。谱。它的吸收与分子结构密切相关，用于研究分子结构。第四页，本课件共有78页第五页，本课件共有78页电磁波电磁波波长范围波长范围跃迁类型跃迁类型分析方法分析方法X-X-射线射线1010-1-1-10nm-10nmK K、L L层电子层电子X X射线光谱法射线光谱法远紫外光远紫外光10-200nm10-200nm中层电子中层电子真空紫外光度法真空紫外光度法近紫外光近紫外光200-400nm200-400nm价电子价电子紫外

6、光度法紫外光度法可见光可见光400-750nm400-750nm比色及可见光度法比色及可见光度法近红外光近红外光0.75-2.50.75-2.5 mm分子振动分子振动红外光谱法红外光谱法中红外光中红外光 2.5-502.5-50 mm第六页，本课件共有78页第一节、吸光光度法概述第一节、吸光光度法概述n n吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，起来的分析方法，n n包括：包括：n n比色分析法，比色分析法，比色分析法，比色分析法，n n可见光度法，可见光度法，可见光度法，可见光度法，n n紫外分光光度法，紫外分光光度法，紫外分光光度

7、法，紫外分光光度法，n n红外分光光度法。红外分光光度法。红外分光光度法。红外分光光度法。第七页，本课件共有78页比色分析法和分光光度法特点比色分析法和分光光度法特点:n n(1)(1)、灵敏度高、灵敏度高n n 测定的最低浓度可达测定的最低浓度可达测定的最低浓度可达测定的最低浓度可达1010-5-51010-6-6 mol/Lmol/L，相当于含量，相当于含量，相当于含量，相当于含量0.0010.0001%0.0010.0001%的微量组分的微量组分的微量组分的微量组分.n n(2)、准确度较高、准确度较高、准确度较高、准确度较高n n 分光光度法的相对误差为分光光度法的相对误差为分光光度法

8、的相对误差为分光光度法的相对误差为 25%.25%.n n(3)(3)、操作简便，测定速度快、操作简便，测定速度快、操作简便，测定速度快、操作简便，测定速度快 n n(4)(4)、应用广泛、应用广泛、应用广泛、应用广泛第八页，本课件共有78页第二节、吸光光度法的基本原理第二节、吸光光度法的基本原理n n一、互补色光一、互补色光n n白光：复合光白光：复合光n n复合光复合光 单色光单色光n n 单色器单色器单色器单色器n n单色光单色光1 单色光单色光2 白光白光n n 互补色光互补色光第九页，本课件共有78页第十页，本课件共有78页第十一页，本课件共有78页白白 光光第十二页，本课件共有78

9、页第十三页，本课件共有78页二、物质的颜色和对光的选择吸收二、物质的颜色和对光的选择吸收n n(1)(1)、光吸收程度最大处的波长，、光吸收程度最大处的波长，、光吸收程度最大处的波长，、光吸收程度最大处的波长，称为最大吸收波长，常用称为最大吸收波长，常用称为最大吸收波长，常用称为最大吸收波长，常用 maxmax表示表示表示表示.n n(2)(2)、光吸收曲线与物质特性有关，、光吸收曲线与物质特性有关，、光吸收曲线与物质特性有关，、光吸收曲线与物质特性有关，这些特性客作为物质定性鉴定的这些特性客作为物质定性鉴定的这些特性客作为物质定性鉴定的这些特性客作为物质定性鉴定的依据依据依据依据.n n(3

10、)(3)、组成量度不同的同种物质的、组成量度不同的同种物质的、组成量度不同的同种物质的、组成量度不同的同种物质的溶液，在一定波长处吸光度随溶溶液，在一定波长处吸光度随溶溶液，在一定波长处吸光度随溶溶液，在一定波长处吸光度随溶液的组成量度增加而增大，这个液的组成量度增加而增大，这个液的组成量度增加而增大，这个液的组成量度增加而增大，这个特性可作为物质定量分析的依据特性可作为物质定量分析的依据特性可作为物质定量分析的依据特性可作为物质定量分析的依据.第十四页，本课件共有78页IoItIaIo=Ia+It+IrIrn n设入射光，吸收光，透射光和反射光的强度依次为设入射光，吸收光，透射光和反射光的强

11、度依次为设入射光，吸收光，透射光和反射光的强度依次为设入射光，吸收光，透射光和反射光的强度依次为I I o o，I I a a，I I t t，I I r r，则他们之间的关系为，则他们之间的关系为，则他们之间的关系为，则他们之间的关系为:第三节第三节 光吸收的基本定律光吸收的基本定律第十五页，本课件共有78页一、朗伯定律一、朗伯定律n n溶液对光的吸收程度与液层厚度的成正比。溶液对光的吸收程度与液层厚度的成正比。第十六页，本课件共有78页二、比耳定律二、比耳定律溶液对光的吸收程度与浓度成正比。溶液对光的吸收程度与浓度成正比。第十七页，本课件共有78页n nKK为比例常数，它与入射光的波长，有

12、色物质的性质和溶液的为比例常数，它与入射光的波长，有色物质的性质和溶液的为比例常数，它与入射光的波长，有色物质的性质和溶液的为比例常数，它与入射光的波长，有色物质的性质和溶液的温度等因数有关温度等因数有关温度等因数有关温度等因数有关.n n上式表示当一束平行单色光通过均匀的溶液时，溶液对光的吸收程上式表示当一束平行单色光通过均匀的溶液时，溶液对光的吸收程上式表示当一束平行单色光通过均匀的溶液时，溶液对光的吸收程上式表示当一束平行单色光通过均匀的溶液时，溶液对光的吸收程度与溶液的组成量度和液层厚度的乘积成正比度与溶液的组成量度和液层厚度的乘积成正比度与溶液的组成量度和液层厚度的乘积成正比度与溶液

13、的组成量度和液层厚度的乘积成正比.这一定律称为朗伯这一定律称为朗伯这一定律称为朗伯这一定律称为朗伯-比耳定律，也称为比耳定律，也称为比耳定律，也称为比耳定律，也称为光吸收定律光吸收定律光吸收定律光吸收定律.三、朗伯三、朗伯-比耳定律比耳定律第十八页，本课件共有78页四、透光率，吸光度，吸光系数，摩四、透光率，吸光度，吸光系数，摩尔吸光系数尔吸光系数n n当液层厚度当液层厚度当液层厚度当液层厚度b b的单位为的单位为的单位为的单位为cmcm，组成量度组成量度组成量度组成量度c c的单位为的单位为的单位为的单位为g/Lg/L时，时，时，时，则常数则常数则常数则常数KK用用用用a a表示，它的单位表

14、示，它的单位表示，它的单位表示，它的单位为为为为L L g g-1-1 cmcm-1-1，a a称为吸光称为吸光称为吸光称为吸光系数系数系数系数.n n当当当当b b的单位为的单位为的单位为的单位为cmcm，组成量，组成量，组成量，组成量度度度度c c的单位为的单位为的单位为的单位为mol/Lmol/L时，则时，则时，则时，则常数常数常数常数KK用用用用 表示，它的单位表示，它的单位表示，它的单位表示，它的单位为为为为L L molmol-1-1 cmcm-1-1，称为摩尔称为摩尔称为摩尔称为摩尔吸光系数吸光系数吸光系数吸光系数.第十九页，本课件共有78页n n摩尔吸光系数摩尔吸光系数摩尔吸光

15、系数摩尔吸光系数 时有色物质在一定波长下的特征常数，它时有色物质在一定波长下的特征常数，它时有色物质在一定波长下的特征常数，它时有色物质在一定波长下的特征常数，它可以衡量显色反应的灵敏度可以衡量显色反应的灵敏度可以衡量显色反应的灵敏度可以衡量显色反应的灵敏度.n n 值越大，表示该有色物质对该波长光的吸收能力越强，显色值越大，表示该有色物质对该波长光的吸收能力越强，显色值越大，表示该有色物质对该波长光的吸收能力越强，显色值越大，表示该有色物质对该波长光的吸收能力越强，显色反应越灵敏反应越灵敏反应越灵敏反应越灵敏.第二十页，本课件共有78页第二十一页，本课件共有78页第四节、吸光光度法的仪器部件

16、第四节、吸光光度法的仪器部件n n一、目视比色法一、目视比色法n n用肉眼比较被测溶液同标准溶液颜色深浅，以确定被用肉眼比较被测溶液同标准溶液颜色深浅，以确定被用肉眼比较被测溶液同标准溶液颜色深浅，以确定被用肉眼比较被测溶液同标准溶液颜色深浅，以确定被测物质含量的方法，称为玛纳斯比色法测物质含量的方法，称为玛纳斯比色法测物质含量的方法，称为玛纳斯比色法测物质含量的方法，称为玛纳斯比色法.n n最常用的目视比色法是标准系列法最常用的目视比色法是标准系列法最常用的目视比色法是标准系列法最常用的目视比色法是标准系列法.第二十二页，本课件共有78页n n标准系列法的优点是仪器简单，操作简便，而且可在复

17、合光下标准系列法的优点是仪器简单，操作简便，而且可在复合光下标准系列法的优点是仪器简单，操作简便，而且可在复合光下标准系列法的优点是仪器简单，操作简便，而且可在复合光下进行测定进行测定进行测定进行测定.其缺点是配制标准色阶比较费时，由于某些有色溶液不其缺点是配制标准色阶比较费时，由于某些有色溶液不其缺点是配制标准色阶比较费时，由于某些有色溶液不其缺点是配制标准色阶比较费时，由于某些有色溶液不够稳定，常常现用现配够稳定，常常现用现配够稳定，常常现用现配够稳定，常常现用现配.C C1 C C2 2 C C3 C C4 C5 5 C Cx x第二十三页，本课件共有78页二、光电比色法与分光光度法二、

18、光电比色法与分光光度法n n(一一)、基本原理和特点、基本原理和特点n n1、标准曲线法、标准曲线法n n光度法与目视法比较，其优点光度法与目视法比较，其优点光度法与目视法比较，其优点光度法与目视法比较，其优点是是是是:用用用用光电池光电池光电池光电池代替肉眼进行代替肉眼进行代替肉眼进行代替肉眼进行测量，消除了肉眼的主观测量，消除了肉眼的主观测量，消除了肉眼的主观测量，消除了肉眼的主观误差，提高了分析结果的误差，提高了分析结果的误差，提高了分析结果的误差，提高了分析结果的准确度准确度准确度准确度.第二十四页，本课件共有78页第二十五页，本课件共有78页2、比较法、比较法.第二十六页，本课件共有

19、78页(二二)光度计的基本部件光度计的基本部件n n一般光度计是由光源，滤光片，比色皿，光电池和检流一般光度计是由光源，滤光片，比色皿，光电池和检流一般光度计是由光源，滤光片，比色皿，光电池和检流一般光度计是由光源，滤光片，比色皿，光电池和检流计等五大部件组成计等五大部件组成计等五大部件组成计等五大部件组成.第二十七页，本课件共有78页1、光源、光源第二十八页，本课件共有78页2、单色器、单色器n n1、滤色片、滤色片n n目前普遍使用的是国产型目前普遍使用的是国产型目前普遍使用的是国产型目前普遍使用的是国产型光电比色计，有三种配套光电比色计，有三种配套光电比色计，有三种配套光电比色计，有三种

20、配套的滤光片（红色的滤光片（红色的滤光片（红色的滤光片（红色650650，绿色，绿色，绿色，绿色530530，蓝色，蓝色，蓝色，蓝色440440）n n2、棱镜、棱镜第二十九页，本课件共有78页第三十页，本课件共有78页n n3 3、光栅、光栅、光栅、光栅n n1000 1000 条条条条/mm/mm第三十一页，本课件共有78页3、比色皿、比色皿(吸收池吸收池)第三十二页，本课件共有78页4、光电池或光电管、光电池或光电管第三十三页，本课件共有78页第三十四页，本课件共有78页5、检流计、检流计第三十五页，本课件共有78页第三十六页，本课件共有78页第三十七页，本课件共有78页第三十八页，本课

21、件共有78页第三十九页，本课件共有78页第四十页，本课件共有78页n n(二二)、分光光度计、分光光度计n n1、72型风光光度计型风光光度计n n2、75型分光光度计型分光光度计第四十一页，本课件共有78页721型可见分光光度计型可见分光光度计n n特点：特点：特点：特点：n n棱镜单色器。棱镜单色器。棱镜单色器。棱镜单色器。n nT.AT.A直读。直读。直读。直读。n n使用消光片，可供高含量比使用消光片，可供高含量比使用消光片，可供高含量比使用消光片，可供高含量比色测定。色测定。色测定。色测定。n n技术指标：技术指标：技术指标：技术指标：n n波长范围：波长范围：波长范围：波长范围：3

22、60800nm360800nmn n波长精度：波长精度：波长精度：波长精度：3nm(360600nm)3nm(360600nm)n n表面刻度：（表面刻度：（表面刻度：（表面刻度：（T T）01000100（A A）0202第四十二页，本课件共有78页第四十三页，本课件共有78页722型可见分光光度计型可见分光光度计n n特点：特点：特点：特点：n n能在可见光谱区域内对能在可见光谱区域内对能在可见光谱区域内对能在可见光谱区域内对物质作定性定量分析。物质作定性定量分析。物质作定性定量分析。物质作定性定量分析。n n采用光栅单色器、具采用光栅单色器、具采用光栅单色器、具采用光栅单色器、具有波长精

23、度高，单色有波长精度高，单色有波长精度高，单色有波长精度高，单色性好等优点。性好等优点。性好等优点。性好等优点。n n采用采用采用采用3 3 位位位位LEDLED数字显示，数字显示，数字显示，数字显示，T.A.CT.A.C直读。直读。直读。直读。n n波长范围：波长范围：波长范围：波长范围：330330800nm800nmn n波长准确度：波长准确度：波长准确度：波长准确度：2nm2nm第四十四页，本课件共有78页第四十五页，本课件共有78页752型紫外可见分光光度计型紫外可见分光光度计n n特点：特点：特点：特点：n n采用全息闪耀光栅单色器，具有采用全息闪耀光栅单色器，具有采用全息闪耀光栅

24、单色器，具有采用全息闪耀光栅单色器，具有波长精度高，单色性好，杂散光波长精度高，单色性好，杂散光波长精度高，单色性好，杂散光波长精度高，单色性好，杂散光低等优点。低等优点。低等优点。低等优点。n n能自动切换钨卤灯和氘灯。能自动切换钨卤灯和氘灯。能自动切换钨卤灯和氘灯。能自动切换钨卤灯和氘灯。n n采用采用采用采用3 3 位位位位LEDLED数字显示，具有数字显示，具有数字显示，具有数字显示，具有T.A.CT.A.C直读能。直读能。直读能。直读能。n n技术指标技术指标技术指标技术指标:n n波长范围：波长范围：波长范围：波长范围：200200800nm800nmn n稳定性：暗电流漂移稳定性

25、：暗电流漂移稳定性：暗电流漂移稳定性：暗电流漂移0.50.5()3min()3min第四十六页，本课件共有78页第四十七页，本课件共有78页754型紫外可见分光光度计型紫外可见分光光度计n n特点特点:n n自动调整自动调整”0”和调整和调整”100”具有超群的测具有超群的测量读数重现性和稳定量读数重现性和稳定性性.n n由微处理机控制的打由微处理机控制的打印机可作实时记录印机可作实时记录.n n可使用直线回归测量可使用直线回归测量线线,具有高准确度的浓具有高准确度的浓度运算程序度运算程序.第四十八页，本课件共有78页732型可见分光光度计型可见分光光度计n n自动调整自动调整自动调整自动调整

26、“0 0”“”“100100”，可直，可直，可直，可直接消除比色皿配对误差。接消除比色皿配对误差。接消除比色皿配对误差。接消除比色皿配对误差。n n测量读数准确性高，重现性和测量读数准确性高，重现性和测量读数准确性高，重现性和测量读数准确性高，重现性和稳定性佳。稳定性佳。稳定性佳。稳定性佳。n n有浓度直读，线性回归，定有浓度直读，线性回归，定有浓度直读，线性回归，定有浓度直读，线性回归，定时打印，时打印，时打印，时打印，GOTOGOTO以及光谱扫以及光谱扫以及光谱扫以及光谱扫描等高级功能。描等高级功能。描等高级功能。描等高级功能。第四十九页，本课件共有78页7230g型可见分光光度计型可见分

27、光光度计n n自动调零、自动调满度、自自动调零、自动调满度、自自动调零、自动调满度、自自动调零、自动调满度、自动建立线性方程、动建立线性方程、动建立线性方程、动建立线性方程、A A、C C自动切换，浓度直读。自动切换，浓度直读。自动切换，浓度直读。自动切换，浓度直读。n n比色室能放置比色室能放置比色室能放置比色室能放置100nm100nm比色皿，比色皿，比色皿，比色皿，并配有托架。并配有托架。并配有托架。并配有托架。n n具有自动调节的波长调整具有自动调节的波长调整具有自动调节的波长调整具有自动调节的波长调整机构，调整时无须打机构，调整时无须打机构，调整时无须打机构，调整时无须打 开机开机开

28、机开机壳。壳。壳。壳。n n灯源采用固定电压、灵敏度在灯源采用固定电压、灵敏度在灯源采用固定电压、灵敏度在灯源采用固定电压、灵敏度在全波长范围内由微机自动控制。全波长范围内由微机自动控制。全波长范围内由微机自动控制。全波长范围内由微机自动控制。第五十页，本课件共有78页第五节第五节 显色反应和显色条件的选择显色反应和显色条件的选择n n一、显色反应一、显色反应一、显色反应一、显色反应n n FeFe3+3+3NCS+3NCS-=Fe(NCS)=Fe(NCS)3 3 (血红色血红色血红色血红色)n n应用于比色分析的显色反应必须符合下列要求应用于比色分析的显色反应必须符合下列要求应用于比色分析的

29、显色反应必须符合下列要求应用于比色分析的显色反应必须符合下列要求:n n(1)(1)、显色反应的灵敏度要高、显色反应的灵敏度要高、显色反应的灵敏度要高、显色反应的灵敏度要高.n n(2)(2)、有色化合物组成要固定、有色化合物组成要固定、有色化合物组成要固定、有色化合物组成要固定.n n(3)(3)、有色化合物稳定性要高、有色化合物稳定性要高、有色化合物稳定性要高、有色化合物稳定性要高.n n(4)(4)、反应选择性要高、反应选择性要高、反应选择性要高、反应选择性要高.第五十一页，本课件共有78页二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择n n1 1、显色剂用量、

30、显色剂用量、显色剂用量、显色剂用量第五十二页，本课件共有78页二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择n n2 2、溶液的酸度、溶液的酸度、溶液的酸度、溶液的酸度n npHpHA第五十三页，本课件共有78页二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择n n3 3、显色时间、显色时间、显色时间、显色时间n nt mint minA第五十四页，本课件共有78页二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择n n4 4、显色温度、显色温度、显色温度、显色温度n nT T A第五十五页，本课件共有78页第六节、吸光光

31、度法的误差及测第六节、吸光光度法的误差及测量条件的选择量条件的选择n n一、偏离朗伯一、偏离朗伯-比耳定比耳定律所引起的误差律所引起的误差n n1 1、不同波长的入射光，有的物、不同波长的入射光，有的物、不同波长的入射光，有的物、不同波长的入射光，有的物质的吸光系数质的吸光系数质的吸光系数质的吸光系数a a是不同的是不同的是不同的是不同的.n n2 2、由于介质不均匀而造成的、由于介质不均匀而造成的、由于介质不均匀而造成的、由于介质不均匀而造成的.n n3 3、由于化学变化所致、由于化学变化所致、由于化学变化所致、由于化学变化所致.第五十六页，本课件共有78页二、仪器测量误差二、仪器测量误差n

32、 n当当当当A=0.434A=0.434时，测量值时，测量值时，测量值时，测量值相对误差最小相对误差最小相对误差最小相对误差最小.第五十七页，本课件共有78页第五十八页，本课件共有78页第五十九页，本课件共有78页三三.测量条件的选择测量条件的选择n n1 1、入射光波长的选择、入射光波长的选择、入射光波长的选择、入射光波长的选择第六十页，本课件共有78页2、吸光度读数范围的选择、吸光度读数范围的选择T最小最小最小最小=0.368,A=-logT=0.434=0.368,A=-logT=0.434，第六十一页，本课件共有78页3、参比溶液的选择、参比溶液的选择n n(1)(1)、当试液，显色剂

33、及所用的其他试剂在测定波长处无吸收、当试液，显色剂及所用的其他试剂在测定波长处无吸收、当试液，显色剂及所用的其他试剂在测定波长处无吸收、当试液，显色剂及所用的其他试剂在测定波长处无吸收时，可用纯溶剂时，可用纯溶剂时，可用纯溶剂时，可用纯溶剂(或蒸馏水或蒸馏水或蒸馏水或蒸馏水)作参比作参比作参比作参比;n n(2)(2)、如果显色剂无吸收，而待测试液在此波长处有吸收，那、如果显色剂无吸收，而待测试液在此波长处有吸收，那、如果显色剂无吸收，而待测试液在此波长处有吸收，那、如果显色剂无吸收，而待测试液在此波长处有吸收，那么采用不加显色剂的待测试液作参比溶液么采用不加显色剂的待测试液作参比溶液么采用不

34、加显色剂的待测试液作参比溶液么采用不加显色剂的待测试液作参比溶液.n n(3)(3)、如果显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液，加入适当、如果显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液，加入适当、如果显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液，加入适当、如果显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液，加入适当的掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂反应，然后按的掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂反应，然后按的掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂反应，然后按的掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂反应，然后按操作步骤加入显色剂及其它试剂，以此作参比溶液操作步骤加入显色剂及其它试剂，以

35、此作参比溶液操作步骤加入显色剂及其它试剂，以此作参比溶液操作步骤加入显色剂及其它试剂，以此作参比溶液.第六十二页，本课件共有78页试液试液显色剂显色剂参比液参比液无色无色无色无色蒸馏水蒸馏水有色有色无色无色不加显色剂的试液不加显色剂的试液有色有色无色无色(将将 被被 测测 组组 分分 掩掩 蔽蔽)显色剂试液显色剂试液第六十三页，本课件共有78页第六十四页，本课件共有78页第七节、吸光光度法的应用第七节、吸光光度法的应用n n一、示差分光光度法一、示差分光光度法一、示差分光光度法一、示差分光光度法n n在分光光度法中，当被测组分含量高时，常常偏离朗伯在分光光度法中，当被测组分含量高时，常常偏离朗

36、伯在分光光度法中，当被测组分含量高时，常常偏离朗伯在分光光度法中，当被测组分含量高时，常常偏离朗伯-比耳定律比耳定律比耳定律比耳定律.为了克服这一缺点，改用标准溶液代替空白溶为了克服这一缺点，改用标准溶液代替空白溶为了克服这一缺点，改用标准溶液代替空白溶为了克服这一缺点，改用标准溶液代替空白溶液来调节仪器的液来调节仪器的液来调节仪器的液来调节仪器的100%100%透光度，以提高方法准确度透光度，以提高方法准确度透光度，以提高方法准确度透光度，以提高方法准确度.这种方这种方这种方这种方法称为示差分光光度法，简称为示差法法称为示差分光光度法，简称为示差法法称为示差分光光度法，简称为示差法法称为示差

37、分光光度法，简称为示差法.n n示差分光光度法与普通分光光度法在具体操作步骤上主要示差分光光度法与普通分光光度法在具体操作步骤上主要示差分光光度法与普通分光光度法在具体操作步骤上主要示差分光光度法与普通分光光度法在具体操作步骤上主要不同之处是不同之处是不同之处是不同之处是:普通分光光度法采用试剂的空白溶液作参比溶液，普通分光光度法采用试剂的空白溶液作参比溶液，普通分光光度法采用试剂的空白溶液作参比溶液，普通分光光度法采用试剂的空白溶液作参比溶液，而示差分光光度法则采用一个组成量度与试样接近的标准溶液而示差分光光度法则采用一个组成量度与试样接近的标准溶液而示差分光光度法则采用一个组成量度与试样接

38、近的标准溶液而示差分光光度法则采用一个组成量度与试样接近的标准溶液(组成量度已知组成量度已知组成量度已知组成量度已知)代替空白溶液作参比溶液，根据测得的吸代替空白溶液作参比溶液，根据测得的吸代替空白溶液作参比溶液，根据测得的吸代替空白溶液作参比溶液，根据测得的吸光度进行含量计算光度进行含量计算光度进行含量计算光度进行含量计算.第六十五页，本课件共有78页第六十六页，本课件共有78页第六十七页，本课件共有78页第六十八页，本课件共有78页n n二、多组分的分析二、多组分的分析二、多组分的分析二、多组分的分析n n1.1.吸收曲线不重叠吸收曲线不重叠吸收曲线不重叠吸收曲线不重叠第六十九页，本课件共

39、有78页n n2.2.吸收曲线单向重叠吸收曲线单向重叠吸收曲线单向重叠吸收曲线单向重叠第七十页，本课件共有78页n n3.3.吸收曲线双向重叠吸收曲线双向重叠吸收曲线双向重叠吸收曲线双向重叠第七十一页，本课件共有78页本章小结本章小结n n1 1吸光光度法的原理吸光光度法的原理吸光光度法的原理吸光光度法的原理n n知道朗伯知道朗伯知道朗伯知道朗伯 比耳定律是吸光光度法的定量依据，掌握朗伯比耳定律是吸光光度法的定量依据，掌握朗伯比耳定律是吸光光度法的定量依据，掌握朗伯比耳定律是吸光光度法的定量依据，掌握朗伯 比耳比耳比耳比耳定律的数学表达式及其意义，正确理解摩尔吸光系数的意义及单定律的数学表达式

40、及其意义，正确理解摩尔吸光系数的意义及单定律的数学表达式及其意义，正确理解摩尔吸光系数的意义及单定律的数学表达式及其意义，正确理解摩尔吸光系数的意义及单位，并会有关计算，掌握互补色光的原理和影响朗伯位，并会有关计算，掌握互补色光的原理和影响朗伯位，并会有关计算，掌握互补色光的原理和影响朗伯位，并会有关计算，掌握互补色光的原理和影响朗伯 比耳定律比耳定律比耳定律比耳定律偏离的因素。掌握吸收曲线在吸光光度分析中的作用。偏离的因素。掌握吸收曲线在吸光光度分析中的作用。偏离的因素。掌握吸收曲线在吸光光度分析中的作用。偏离的因素。掌握吸收曲线在吸光光度分析中的作用。2 2吸光光度法和测量条件的选择吸光光

41、度法和测量条件的选择吸光光度法和测量条件的选择吸光光度法和测量条件的选择n n了解各种吸光光度法的原理、特点、区别及应用，掌握标准曲线的制作了解各种吸光光度法的原理、特点、区别及应用，掌握标准曲线的制作了解各种吸光光度法的原理、特点、区别及应用，掌握标准曲线的制作了解各种吸光光度法的原理、特点、区别及应用，掌握标准曲线的制作方法，并能根据标准曲线方法，并能根据标准曲线方法，并能根据标准曲线方法，并能根据标准曲线(工作曲线工作曲线工作曲线工作曲线)计算分析结果。知道吸光光度法仪计算分析结果。知道吸光光度法仪计算分析结果。知道吸光光度法仪计算分析结果。知道吸光光度法仪器的主要部件，掌握吸光光度法测

42、量条件的选择和仪器的测量误差。器的主要部件，掌握吸光光度法测量条件的选择和仪器的测量误差。器的主要部件，掌握吸光光度法测量条件的选择和仪器的测量误差。器的主要部件，掌握吸光光度法测量条件的选择和仪器的测量误差。n n3 3显色反应显色反应显色反应显色反应n n了解显色反应，掌握显色反应的要求和显色反应条件。了解显色反应，掌握显色反应的要求和显色反应条件。了解显色反应，掌握显色反应的要求和显色反应条件。了解显色反应，掌握显色反应的要求和显色反应条件。n n4 4吸光光度法的应用吸光光度法的应用吸光光度法的应用吸光光度法的应用n n了解吸光光度法的应用，掌握单一组分的测量方法。了解吸光光度法的应用

43、，掌握单一组分的测量方法。了解吸光光度法的应用，掌握单一组分的测量方法。了解吸光光度法的应用，掌握单一组分的测量方法。第七十二页，本课件共有78页综合练习题：综合练习题：n n一、填空题：一、填空题：一、填空题：一、填空题：n n1 1可见分光光度法主要用于对试样溶液进行可见分光光度法主要用于对试样溶液进行可见分光光度法主要用于对试样溶液进行可见分光光度法主要用于对试样溶液进行_；以不同波；以不同波；以不同波；以不同波长单色光作为入射光测得的某一溶液的吸光度为纵坐标，入射光波长单色光作为入射光测得的某一溶液的吸光度为纵坐标，入射光波长单色光作为入射光测得的某一溶液的吸光度为纵坐标，入射光波长单

44、色光作为入射光测得的某一溶液的吸光度为纵坐标，入射光波长为横坐标作图，所得曲线称为长为横坐标作图，所得曲线称为长为横坐标作图，所得曲线称为长为横坐标作图，所得曲线称为_。n n2 2为提高测定的准确度，溶液的吸光度应调节在为提高测定的准确度，溶液的吸光度应调节在为提高测定的准确度，溶液的吸光度应调节在为提高测定的准确度，溶液的吸光度应调节在_范范范范围，这可通过控制溶液的围，这可通过控制溶液的围，这可通过控制溶液的围，这可通过控制溶液的_和选用和选用和选用和选用_来实现。来实现。来实现。来实现。n n3 3常用的参比溶液常用的参比溶液常用的参比溶液常用的参比溶液(空白溶液空白溶液空白溶液空白溶

45、液)有有有有_、_和和和和_。n n4 4当温度和溶剂种类一定时，溶液的吸光度与当温度和溶剂种类一定时，溶液的吸光度与当温度和溶剂种类一定时，溶液的吸光度与当温度和溶剂种类一定时，溶液的吸光度与_和和和和_成正比，这称为成正比，这称为成正比，这称为成正比，这称为_定律。定律。定律。定律。n n5 5摩尔吸光系数摩尔吸光系数摩尔吸光系数摩尔吸光系数 是物质的是物质的是物质的是物质的_，其值越大，表，其值越大，表，其值越大，表，其值越大，表明溶液对入射单色光明溶液对入射单色光明溶液对入射单色光明溶液对入射单色光_，测定的，测定的，测定的，测定的_ _ _愈高。一愈高。一愈高。一愈高。一般般般般 大

46、于大于大于大于_就可进行分光光度法测定。就可进行分光光度法测定。就可进行分光光度法测定。就可进行分光光度法测定。第七十三页，本课件共有78页n n二、是非题：二、是非题：二、是非题：二、是非题：n n1 1分光光度法是根据溶液对光有选择性吸收及朗伯比耳定分光光度法是根据溶液对光有选择性吸收及朗伯比耳定分光光度法是根据溶液对光有选择性吸收及朗伯比耳定分光光度法是根据溶液对光有选择性吸收及朗伯比耳定律对物质进行定性和定量分析的一种方法。律对物质进行定性和定量分析的一种方法。律对物质进行定性和定量分析的一种方法。律对物质进行定性和定量分析的一种方法。n n2 2分光光度法灵敏度高，特别适用常量组分的

47、测定。分光光度法灵敏度高，特别适用常量组分的测定。分光光度法灵敏度高，特别适用常量组分的测定。分光光度法灵敏度高，特别适用常量组分的测定。n n3 3在分光光度分析中，吸光度愈大，测量的误差愈小。在分光光度分析中，吸光度愈大，测量的误差愈小。在分光光度分析中，吸光度愈大，测量的误差愈小。在分光光度分析中，吸光度愈大，测量的误差愈小。n n4 4当溶液中无干扰物质存在时，应选择波长为当溶液中无干扰物质存在时，应选择波长为当溶液中无干扰物质存在时，应选择波长为当溶液中无干扰物质存在时，应选择波长为maxmax的光作为入的光作为入的光作为入的光作为入射光进行分光光度法测定。射光进行分光光度法测定。射

48、光进行分光光度法测定。射光进行分光光度法测定。n n5 5可见分光光度计使用的吸收池是用石英制造的。可见分光光度计使用的吸收池是用石英制造的。可见分光光度计使用的吸收池是用石英制造的。可见分光光度计使用的吸收池是用石英制造的。第七十四页，本课件共有78页n n三、选择题：三、选择题：三、选择题：三、选择题：1 1符合比耳定律的有色溶液浓度改变时，其最大的吸收峰位置有符合比耳定律的有色溶液浓度改变时，其最大的吸收峰位置有符合比耳定律的有色溶液浓度改变时，其最大的吸收峰位置有符合比耳定律的有色溶液浓度改变时，其最大的吸收峰位置有何变化何变化何变化何变化()()a a、向长波移动、向长波移动、向长波

49、移动、向长波移动b b、向短波移动、向短波移动、向短波移动、向短波移动c c、不改变，峰高也不改变、不改变，峰高也不改变、不改变，峰高也不改变、不改变，峰高也不改变d d、不改变，峰高改变、不改变，峰高改变、不改变，峰高改变、不改变，峰高改变2 2对显色反应产生影响的因素是下面哪一种对显色反应产生影响的因素是下面哪一种对显色反应产生影响的因素是下面哪一种对显色反应产生影响的因素是下面哪一种()()a a、显色酸度、显色酸度、显色酸度、显色酸度b b、比色皿、比色皿、比色皿、比色皿c c、测量波长、测量波长、测量波长、测量波长d d、仪器精密度、仪器精密度、仪器精密度、仪器精密度第七十五页，本课

50、件共有78页n n5 5在光度法测定中，当试剂和显色剂均有颜色时，参比溶液可选在光度法测定中，当试剂和显色剂均有颜色时，参比溶液可选在光度法测定中，当试剂和显色剂均有颜色时，参比溶液可选在光度法测定中，当试剂和显色剂均有颜色时，参比溶液可选用哪种溶液用哪种溶液用哪种溶液用哪种溶液()()a a、水、水、水、水b b、加了试剂和显色剂的溶液、加了试剂和显色剂的溶液、加了试剂和显色剂的溶液、加了试剂和显色剂的溶液c c、将、将、将、将1 1份试液加入掩蔽剂掩蔽被测组分，再加试剂与显色剂份试液加入掩蔽剂掩蔽被测组分，再加试剂与显色剂份试液加入掩蔽剂掩蔽被测组分，再加试剂与显色剂份试液加入掩蔽剂掩蔽被