HAT培养基的筛选原则728.pdf

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1、 HAT 培养基的筛选原则 HAT 培养基的筛选原则 HAT系次黄嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤（aminopterin）和胸腺嘧啶脱氧核苷（thymidin）三种物质各英文首字之缀列，HAT 培养基也就是指含有这三种物质的细胞培养基。对具有合成 DNA 原料的核苷酸的形成上，在细胞内具有起始合成途径（de novo pathway）和中间合成途径（salvage pa-thway）。由于氨基蝶呤可阻碍起始合成途径，所以培养基中含有它时，细胞便只有中间合成途径，所以必须供给核苷酸。至于缺失中间合成途径的细胞，可失去增殖能力臻于死亡。根据这一点，不仅把混存于细胞群中的正常细胞，通过试管内

2、培养进行选择，例如嘌呤的中间合成途径缺失株和嘧啶的中间合成途径缺失株，由于可以互补，所以两者的杂种细胞，即使在氨基蝶呤的存在条件下也可以增殖。在这种情况下，利用 HAT 培养基可对杂种细胞进行选择。次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷可作为中间合成途径的原料而进行添加。单克隆抗体技术中也要选择有用的杂种细胞（即能产生抗体，又能无限传代）根据细胞特性，抑制一些细胞的生长，而促进另一些细胞的生长而达到选择的目的。HAT 即次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶脱氧核苷的首字母缩写。显然 HAT 培养基中含有以上三种物质。对于合成 DNA 的原料的核苷酸的形成上，在细胞内具有其实起始合成途径和中间合成途径。由于氨基蝶呤可以抑制起始合成途径，故在次培养基上的细胞只有中间合成途径，对于没有中间合成途径的细胞来说，就无法进行合成，而致其死亡，用此原理筛选出杂种细胞。例如嘌呤的中间产物缺失株和嘧啶中间合成缺失株，由于可以互补，所以两者的杂种细胞在 HAT 培养基中可以增殖，故可以达到筛选的目的。次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷可以作为中间合成途径的原料进行添加。