人免疫球蛋白GIgG酶联免疫分析.pdf

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1、人免疫球蛋白G(IgG)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T 2.5g/ml-80g/ml 使用目：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中免疫球蛋白G(IgG)含量。实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人免疫球蛋白 G(IgG)水平。用纯化抗-IgG 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗微孔中依次加入免疫球蛋白 G(IgG)，再和 HRP 标记羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶催化下转化成蓝色，并在酸作用下转化成最终黄色。颜色深浅和样品中免疫球蛋白 G(IgG)呈正相关。

2、用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人免疫球蛋白G(IgG)浓度。试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml1 瓶 7 终止液 6ml1 瓶 2 酶标试剂 6ml1 瓶 8 标准品（160g/ml）0.5ml1 瓶 3 酶标包被板 12 孔8 条 9 标准品稀释液 1.5ml1 瓶 4 样品稀释液 6ml1 瓶 10 说明书 1 份 5 显色剂 A 液 6ml1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 6ml1/瓶 12 密封袋 1 个 标本要求 1标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于

3、-20保存，但应避免反复冻融 2不能检测含 NaN3 样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶（HRP）活性。操作步骤 1.标准品稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。80g/ml 5 号标准品 150l 原倍标准品加入 150l 标准品稀释液 40g/ml 4 号标准品 150l5 号标准品加入 150l 标准品稀释液 20g/ml 3 号标准品 150l4 号标准品加入 150l 标准品稀释液 10g/ml 2 号标准品 150l3 号标准品加入 150l 标准品稀释液 5g/ml 1 号标准品 150l2 号标准品加入 150l 标准品稀释液 2.加样：分

4、别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50l，待测样品孔中先加样品稀释液 40l，然后再加待测样品10l（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置 37温育 30 分钟。4.配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外。7.温育：操作同 3。8.洗涤：操作同 5。9.显色：每孔先加入显色剂A

5、50l，再加入显色剂 B50l，轻轻震荡混匀，37避光显色 15 分钟.10.终止：每孔加终止液 50l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。操作程序总结：计算 以标准物浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品OD 值由标准曲线查出相应浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物浓度和OD 值计算出标准曲线直线回归方程式，将样品OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品实际浓度。注意事项 1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包

6、被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4 请每次测定同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（n5）。5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物请避光保存。7严格按照说明书操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9本试剂不同批号组分不得混用。10.如和英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期 1试剂盒保存：；2-8。2有效期：6 个月