液相色谱流动相介绍279.pdf

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1、1、水相 水：最常用的水系了。使用的是二次及以上蒸馏水或来自纯水机蒸馏水酸水：磷酸，甲酸，乙酸，三氟乙酸，高氯酸等。目的：通过加入酸，调节易电离样品（pH=2-7）的解离度。2、弱碱水：一般色谱柱 pH 在 2-8 或 9 之间。因碱会导致键合相的共价键断裂，造成对色谱柱柱效的损害。弱碱水一般用于生物碱类等碱性成分的分析，在流动相中加入(二)三乙胺调节，由于(二)三乙胺对色谱柱伤害较大，现色谱柱大多采用末端封尾技术，避免了(二)三乙胺的使用。常用于三乙胺缓冲体系。3、缓冲盐：常用缓冲盐体系有磷酸缓冲盐体系，三乙胺缓冲体系(一般用乙酸或磷酸调整其pH)，乙酸铵缓冲体系，柠檬酸缓冲体系等。离子对：

2、分析碱性物质常用烷基磺酸盐，如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠，十四烷基磺酸钠等。另外高氯酸、三氟乙酸也可与多种碱性样品形成很强的离子对；分析酸性物质常用四丁基季铵盐，如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐。2、有机相 甲醇：最常的有机相，洗脱能力相比乙腈稍低。对于乙腈分离不好的情况，使用甲醇较好。乙腈：常用的有机相，洗脱能力强，毒性相比甲醇大。四氢呋喃：使用频率较小。洗脱能力强。适用于一些特别的成分分析。异丙醇：主要用于清洗色谱柱，以及正反相的过度，粘度大，洗脱能力强。也常用于一些特殊成分分析。二氯甲烷：再生时使用，使用频率较小。【正相 LC】流动相种类 常用的正相色谱柱有：硅胶色谱柱、氨基色谱柱、苯基色谱柱

3、、氰基色谱柱等。有一些正相色谱柱可以使用水相，如氨基柱。其他的色谱柱避免使用水相。对于氨基柱，可以使用反相的相关流动相，保存的时候需要用异丙醇过度，最后保存在正己烷中。正相色谱柱流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。正相色谱与反相色谱的区别 本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。以下是详细说明：1、正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官

4、能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。2、反向色谱 反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保

5、留。常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。反相色谱切换正相色谱流程 1、先将色谱柱用相应的溶剂冲洗干净，然后将色谱柱拆下来密封保存。用双通将进样器与检测器连接。2、将贮液瓶内装入 300ml 的二次蒸馏水，将流速渐次提高到 2.0ml/min 冲洗系统 1.5h。注意观察泵压。3、将流速渐次降到 0ml/min，把二次蒸馏水更换为甲醇，将流速渐次提高到2.0ml/min冲洗系统1h。4、用同样的方法将甲醇更换为异丙醇、四氢呋喃，各冲系统 1h。5、最后将四氢呋喃更换为预先配制好的流动相冲系统 1h，同时将柱塞杆清洗系统内的 10%异丙醇更换为流动相，保持 50-60 滴/min 的速度清洗柱塞杆。再将双通更换为正相色谱柱，待色谱柱平衡好以后就可分析样品了。