维生素类药物分析 (2)精选PPT.ppt

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1、关于维生素类药物分析(2)第1页，讲稿共137张，创作于星期二基本要求基本要求一一、掌掌握握维维生生素素A A、维维生生素素B1B1、维维生生素素C C、维维生生素素E E的的化化学学结结构构、理理化化性性质质以以及及分分析析方方法法间间的的关关系系，专专属属反反应应、主主要要的的含含量量测测定定方方法与原理法与原理。二二、熟熟悉悉维维生生素素A A、维维生生素素B1B1、维维生生素素C C、维维生生素素E E的的有有关关物物质质、检查方法与原理检查方法与原理。三、了解维生素三、了解维生素D D的性质和分析特点。的性质和分析特点。第2页，讲稿共137张，创作于星期二概概述述维生素：维生素：是维

2、持人体正常代谢机能所是维持人体正常代谢机能所必需的一类活性物质必需的一类活性物质。人体不能合成维生素。人体不能合成维生素。第3页，讲稿共137张，创作于星期二VitA、D2、D3、E、K1等等脂溶性脂溶性水溶性水溶性VitB族族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。、叶酸、烟酸、泛酸等。分类分类按溶解度分按溶解度分第4页，讲稿共137张，创作于星期二公元前公元前35003500年年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来 的维的维A A。16001600年年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。1

3、7471747年年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C C。18311831年年-胡萝卜素被发现。胡萝卜素被发现。19051905年年-甲状腺肿大被碘治愈。甲状腺肿大被碘治愈。19111911年年-波兰化学家丰克为维生素命名。波兰化学家丰克为维生素命名。19151915年年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的19161916年年-维生素维生素B B被分离出来。被分离出来。19171917年年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断

4、定这种病是 缺乏维缺乏维D D引起的。引起的。维生素发展史维生素发展史第5页，讲稿共137张，创作于星期二19201920年年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素发现人体可将胡萝卜转化为维生素A A。19221922年年-维维E E被发现。被发现。19281928年年-科学家发现维科学家发现维B B至少有两种类型。至少有两种类型。19331933年年-维维E E首次用于治疗。首次用于治疗。19481948年年-大剂量维大剂量维C C用于治疗炎症。用于治疗炎症。19491949年年-维维B B3 3与维与维C C用于治疗精神分裂症。用于治疗精神分裂症。19541954年年-自由基与人体老化的关系被揭

5、开。自由基与人体老化的关系被揭开。19571957年年-Q10-Q10多酶被发现。多酶被发现。19691969年年-体内超级抗氧化酶被发现。体内超级抗氧化酶被发现。19701970年年-维维C C被用于治疗感冒。被用于治疗感冒。19931993年年-哈佛大学发表维生素哈佛大学发表维生素E E与心脏病关系的研究结果与心脏病关系的研究结果。第6页，讲稿共137张，创作于星期二主要的药理作用：主要的药理作用：干眼病、角膜软化症、皮肤干燥、夜盲等干眼病、角膜软化症、皮肤干燥、夜盲等主要来源：主要来源：自然界：鲛类无海鱼肝脏中提取的脂肪油自然界：鲛类无海鱼肝脏中提取的脂肪油目前主要采用人工合成。目前主要

6、采用人工合成。第一节第一节维生素维生素A第7页，讲稿共137张，创作于星期二结构与性质结构与性质一、一、123456789-H维生素维生素A A醇醇-COCH3维生素维生素A A醋酸酯醋酸酯-COC15H31维生素维生素A A棕榈酸酯棕榈酸酯R:具有共轭多烯侧链的环己烯具有共轭多烯侧链的环己烯第8页，讲稿共137张，创作于星期二l 易发生脱氢、脱水、聚合反应易发生脱氢、脱水、聚合反应为一个具有共轭多烯侧链的环己烯为一个具有共轭多烯侧链的环己烯（二）（二）l具有具有UV吸收吸收l 存在多种立体异构化合物存在多种立体异构化合物（一）（一）与与CHCl3、乙醚、环己烷等互溶，乙醇乙醚、环己烷等互溶，

7、乙醇中微溶。水中不溶。中微溶。水中不溶。第9页，讲稿共137张，创作于星期二鲸醇鲸醇VitA2VitA3第10页，讲稿共137张，创作于星期二l或有金属离子存在时氧化或有金属离子存在时氧化共轭多烯侧链共轭多烯侧链易被氧化易被氧化（二）（二）第11页，讲稿共137张，创作于星期二环氧化物环氧化物VitA醛醛VitA酸酸第12页，讲稿共137张，创作于星期二三氯化锑反应三氯化锑反应（一）（一）条件条件无水无醇无水无醇CHCl3鉴别试验鉴别试验二、二、第13页，讲稿共137张，创作于星期二蓝色蓝色紫红紫红第14页，讲稿共137张，创作于星期二max为为326nm一个吸收峰一个吸收峰UV法法（二）（二

8、）max为为350390nm三个吸收峰三个吸收峰第15页，讲稿共137张，创作于星期二去水去水VitA（VitA3）VitA第16页，讲稿共137张，创作于星期二第17页，讲稿共137张，创作于星期二USP显色剂显色剂磷钼酸磷钼酸规定斑点颜色和规定斑点颜色和Rf值值BP 对照品法对照品法 显色剂显色剂 三氯化锑三氯化锑TLC法法（三）（三）第18页，讲稿共137张，创作于星期二立体异构体立体异构体氧化降解产物氧化降解产物合成中间体合成中间体UV法法（一）（一）维生素维生素A A2 2维生素维生素A A3 3环氧化物环氧化物维生素维生素A A醛醛维生素维生素A A酸酸含量测定含量测定三三、第19

9、页，讲稿共137张，创作于星期二三点校正法（法定方法）三点校正法（法定方法）1.原理：原理：（1）杂质的吸收在）杂质的吸收在310340nm波长波长范围内呈一条直线，且随波长的范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；增大吸收度减小；（2）物质对光的吸收具有加和性。）物质对光的吸收具有加和性。第20页，讲稿共137张，创作于星期二2.波长的选择：波长的选择：（1）1VitA的的 max（328nm）（2）2 3分别在分别在 1的两侧各选一点的两侧各选一点第21页，讲稿共137张，创作于星期二测定对象测定对象VitA醋酸酯醋酸酯第一法第一法等波长差法等波长差法=12nm第22页，讲稿共137张

10、，创作于星期二第二法第二法等吸收比法等吸收比法测定对象测定对象VitA醇醇 1=325nm,2=310nm,3=334nm第23页，讲稿共137张，创作于星期二3.测定法测定法（1）基本步骤）基本步骤:l第一步第一步A的选择的选择选择依据：选择依据：所选所选A值中杂质的干扰已基本消除值中杂质的干扰已基本消除第24页，讲稿共137张，创作于星期二注意：注意：llC为混合样品的浓度为混合样品的浓度第二步第二步求求第25页，讲稿共137张，创作于星期二第三步第三步求效价求效价换算因数由纯品计算而得：换算因数由纯品计算而得：第26页，讲稿共137张，创作于星期二第27页，讲稿共137张，创作于星期二第

11、28页，讲稿共137张，创作于星期二第四步：求标示量第四步：求标示量第29页，讲稿共137张，创作于星期二l方法：方法：（2）第一法第一法维生素维生素A醋酸酯醋酸酯第30页，讲稿共137张，创作于星期二l判断判断是否在是否在326329nm之间之间在在326329nm之间之间改用第二法改用第二法是是否否l求算求算并与规定值比较并与规定值比较第31页，讲稿共137张，创作于星期二规定值规定值差值差值第32页，讲稿共137张，创作于星期二l判断差值是否超过规定值的判断差值是否超过规定值的有一个以上超有一个以上超过过无超过无超过l计算计算A328（校正）（校正）l用用A328计算计算第33页，讲稿共

12、137张，创作于星期二第34页，讲稿共137张，创作于星期二03%15%3%第二法第二法第二法第二法第35页，讲稿共137张，创作于星期二讨讨论论1.VA醋醋酸酸酯酯的的吸吸收收度度校校正正公公式式是是用用直直线线方方程程式式法法（即即代代数数法法）推推导导而而来来；VA醇醇的的吸吸收收度度校校正正公公式式是是用用相相似三角形法（几何法或称似三角形法（几何法或称6/7定位法）推导而来。定位法）推导而来。2.在在应应用用三三点点校校正正法法时时，除除其其中中一一点点在在最最大大吸吸收收波波长长处处测测定定外外，其其余余两两点点均均在在最最大大吸吸收收峰峰的的两两侧侧进进行行测测定定。在在测测定定

13、前务必要校正波长。测定的样品应不得少于两份。前务必要校正波长。测定的样品应不得少于两份。第36页，讲稿共137张，创作于星期二VitAD胶丸中胶丸中VitA的含量测定的含量测定精精密密称称取取本本品品(规规格格10000VitAIU/丸丸)装装量量差差异异项项下下（平平均均装装量量0.07985g/丸丸）的的内内容容物物0.1287g至至10ml烧烧杯杯中中，加加环环己己烷烷溶溶解解并并定定量量转转移移至至50ml量量瓶瓶中中，用用环环己己烷烷稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀；精精密密量量取取2.0ml，置置另另一一50ml量量瓶瓶中中，用用环环己己烷烷稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀。以以环环己

14、己烷烷为为空空白白，测测定定最最大大吸吸收收波波长长为为328nm，并并在在下下列列波波长处测得吸收度为长处测得吸收度为第37页，讲稿共137张，创作于星期二A300：0.374A316：0.592A328：0.663A340：0.553A360：0.228A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.834A360/A328：0.344求本品中维生素求本品中维生素A占标示量的百分含量？占标示量的百分含量？第38页，讲稿共137张，创作于星期二A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.

15、000A340/A328：0.834A360/A328：0.3440.5550.9071.0000.8110.299+0.010.010+0.02+0.04=A328(校正校正)=3.52(2A328-A316-A340)=3.52(20.6630.5920.553)=0.637第39页，讲稿共137张，创作于星期二A328(校正校正)A328(实测实测)A328(实测实测)100=0.6370.6630.663100=-3.92E1%1cm(328nm)=A328(校正校正)100ms/D=0.6371000.1287/1250=61.87第40页，讲稿共137张，创作于星期二供试品中维生素

16、供试品中维生素A A效价效价=E1%1cm(328nm)1900=61.871900=117553（IU/g）标示量标示量%=VA效价效价(IU/g)每丸内容物平均装量每丸内容物平均装量(g/丸丸)标示量标示量(IU/丸丸)100%=1175530.0798510000100%=93.9%第41页，讲稿共137张，创作于星期二适用于维生素适用于维生素A醇醇（等吸收比法）（等吸收比法）第一法无法消除杂质干扰时用此法第一法无法消除杂质干扰时用此法皂化法、皂化法、6/7A法法（3）第二法）第二法第42页，讲稿共137张，创作于星期二水溶性水溶性脂溶性脂溶性第43页，讲稿共137张，创作于星期二l判断

17、判断 max是否在是否在323327nm之间之间取未皂化样品采取未皂化样品采用色谱法纯化后用色谱法纯化后再测定再测定l计算计算是是否否第44页，讲稿共137张，创作于星期二l判断判断A300/A325是否大于是否大于0.73是是否否取未皂化样品取未皂化样品采用色谱法纯采用色谱法纯化后再测定化后再测定l计算计算A325(校正校正)第45页，讲稿共137张，创作于星期二第46页，讲稿共137张，创作于星期二03%3%第47页，讲稿共137张，创作于星期二三氯化锑比色法三氯化锑比色法优点优点简便简便快速快速max 618nm620nm标准曲线法标准曲线法缺点缺点呈色不稳定呈色不稳定（510s内）内）

18、水分干扰水分干扰与标准曲线温差与标准曲线温差1专属性差专属性差三氯化锑有腐蚀性三氯化锑有腐蚀性（二）（二）蓝色蓝色+3SbClVitA第48页，讲稿共137张，创作于星期二Ch.P.（2010）新增新增HPLC法作为维生素法作为维生素A的法定含的法定含量测定方法。本法适用于维生素量测定方法。本法适用于维生素A醋酸酯原料及其醋酸酯原料及其制剂中维生素制剂中维生素A的含量测定。的含量测定。Ch.P.（2010）规定维生素规定维生素AD软胶囊、维生素软胶囊、维生素AD滴滴剂用该法测定含量剂用该法测定含量。（三）（三）HPLC第49页，讲稿共137张，创作于星期二RP-HPLCRP-HPLC同时测定人

19、血清中同时测定人血清中Vit AVit A和和Vit EVit E含量含量色谱条件色谱条件l 色谱柱：色谱柱：C18C18l 流动相：甲醇流动相：甲醇-水水l 流速：流速：1.2ml/minl 检测波长与检测波长与AUFS：08min(330nm,0.25AUFS);8min后后(292nm,0.05AUFS)l 内标：内标：Vit A Vit A 酯酯Vit AVit E第50页，讲稿共137张，创作于星期二氨基嘧啶环氨基嘧啶环CH2噻唑环噻唑环(季铵碱季铵碱)HClCl-第二节第二节维生素维生素B1第51页，讲稿共137张，创作于星期二主要的药理作用：主要的药理作用：维持糖代谢及神经传导，

20、治疗多发性神经炎、维持糖代谢及神经传导，治疗多发性神经炎、肠道疾病等肠道疾病等主要来源：主要来源：种子外皮及胚芽中，米糠、麦麸、黄豆、种子外皮及胚芽中，米糠、麦麸、黄豆、酵母、瘦肉等酵母、瘦肉等第52页，讲稿共137张，创作于星期二（一）（一）溶解性溶解性1、易溶于水、易溶于水2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性（二）（二）UV共轭双键共轭双键max=246nm结构与性质结构与性质一、一、第53页，讲稿共137张，创作于星期二与生物碱与生物碱（三）（三）硫色素反应硫色素反应（四）（四）嘧啶环嘧啶环噻唑环噻唑环（五）氯化物特性（五）氯化物特性呈氯化物的反应，用呈氯化物的反应，用于鉴别。于鉴别。第54页

21、，讲稿共137张，创作于星期二ChP2010鉴别试验鉴别试验二、二、（一）（一）硫色素反应硫色素反应第55页，讲稿共137张，创作于星期二第56页，讲稿共137张，创作于星期二硫色素硫色素2H第57页，讲稿共137张，创作于星期二VitB1H+H+H+H+（二）（二）沉淀反应沉淀反应第58页，讲稿共137张，创作于星期二S元素反应元素反应Cl-反应反应（三）（三）其他反应其他反应()2 21 1PbSNaSVitBNO3PbNaOH第59页，讲稿共137张，创作于星期二三、三、含量测定含量测定电位滴定指示终点电位滴定指示终点（一）（一）非水溶液滴定法非水溶液滴定法第60页，讲稿共137张，创作

22、于星期二反应摩尔比为反应摩尔比为1：2第61页，讲稿共137张，创作于星期二UV法法（二）（二）第62页，讲稿共137张，创作于星期二片剂、注射剂片剂、注射剂=421（每片）相当于标示量的（每片）相当于标示量的%=A=ECL规格规格g/片片g/100mlgChPWEA%cmD10011%100标示量标示量平均片重平均片重 第63页，讲稿共137张，创作于星期二（每（每ml）相当于标示量的）相当于标示量的%=规格规格g/mlml%VEA%cm100110011 标示量标示量稀释倍数稀释倍数 第64页，讲稿共137张，创作于星期二（三）（三）硫色素荧光法硫色素荧光法原理原理1、荧光荧光硫色素硫色素

23、异丁醇异丁醇铁氰化钾铁氰化钾1 1VitBNaOH第65页，讲稿共137张，创作于星期二+NaOH+铁氰化钾铁氰化钾+异丁醇异丁醇+NaOH+异丁醇异丁醇Sd（空白）（空白）对照液对照液供试液供试液+NaOH+铁氰化钾铁氰化钾+异丁醇异丁醇+NaOH+异丁醇异丁醇b（空白）（空白）AC样样A-bC对对=S-dC样样=C对对A-bS-d方法方法2、第66页，讲稿共137张，创作于星期二特点特点3、（1）灵敏度高，线性范围宽）灵敏度高，线性范围宽（2）代谢产物不干扰，适用于）代谢产物不干扰，适用于体液分析体液分析第67页，讲稿共137张，创作于星期二L抗坏血酸抗坏血酸第三节第三节维生素维生素C第6

24、8页，讲稿共137张，创作于星期二主要的药理作用：主要的药理作用：防治坏血病、慢性铁中毒的治疗、用于治防治坏血病、慢性铁中毒的治疗、用于治疗肝硬化、急性肝炎和砷、汞、铅、苯等疗肝硬化、急性肝炎和砷、汞、铅、苯等慢性中毒时肝脏的损害。慢性中毒时肝脏的损害。主要来源：主要来源：各种新鲜蔬菜和水果各种新鲜蔬菜和水果第69页，讲稿共137张，创作于星期二1、易溶于水、易溶于水2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性结构与性质结构与性质一、一、（一）（一）溶解性溶解性第70页，讲稿共137张，创作于星期二烯二醇结构烯二醇结构二酮基结构二酮基结构烯二醇结构烯二醇结构（二）（二）还原性还原性第71页，讲稿共137张，

25、创作于星期二有活性有活性有活性有活性无活性无活性第72页，讲稿共137张，创作于星期二糖类的显色反应糖类的显色反应50结构与糖类相似结构与糖类相似（三）（三）具糖的性质具糖的性质第73页，讲稿共137张，创作于星期二C3OH的的pKa=4.17C2OH的的pKa=11.57酸性酸性（四）（四）一元酸一元酸第74页，讲稿共137张，创作于星期二L(+)抗坏血酸抗坏血酸活性最强活性最强手性手性C（C4、C5）（五）（五）光学活性光学活性*第75页，讲稿共137张，创作于星期二与碱反应与碱反应（六）（六）水解性水解性第76页，讲稿共137张，创作于星期二第77页，讲稿共137张，创作于星期二与氧化剂

26、的反应与氧化剂的反应（一）（一）鉴别试验鉴别试验二、二、去氢抗坏血酸去氢抗坏血酸OVitC第78页，讲稿共137张，创作于星期二1、与、与AgNO3反应反应2、与、与2，6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应(ChP2010)氧化型氧化型玫瑰红色玫瑰红色还原型还原型蓝色蓝色OH-(ChP2010)第79页，讲稿共137张，创作于星期二（玫瑰色玫瑰色）（无色）（无色）第80页，讲稿共137张，创作于星期二3.3.其他氧化剂的反应其他氧化剂的反应：亚甲蓝或高锰酸钾亚甲蓝或高锰酸钾 试剂褪色试剂褪色碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜 砖红色沉淀砖红色沉淀磷钼酸磷钼酸 钼蓝钼蓝第81页，讲稿共137张，创作于星期二糖类的

27、反应糖类的反应（二）（二）或盐酸或盐酸50吡咯吡咯USP第82页，讲稿共137张，创作于星期二第83页，讲稿共137张，创作于星期二（蓝色）（蓝色）(糠醛糠醛)（戊糖）（戊糖）50(吡咯吡咯)第84页，讲稿共137张，创作于星期二UV（三）（三）BP20100.01mol/LHCl第85页，讲稿共137张，创作于星期二 1.1.片剂、注射液溶液的澄清度与颜色：片剂、注射液溶液的澄清度与颜色：有色杂质有色杂质 分光光度法分光光度法 2.2.原料药中铁、铜离子：原子吸收分光光原料药中铁、铜离子：原子吸收分光光度法度法杂质检查杂质检查三、三、第86页，讲稿共137张，创作于星期二指示剂指示剂淀粉指示

28、液淀粉指示液原理原理1、碘量法碘量法（一）（一）含量测定含量测定四、四、第87页，讲稿共137张，创作于星期二H+第88页，讲稿共137张，创作于星期二取本品约取本品约0.2g，精密称定，加新，精密称定，加新沸过的冷水沸过的冷水100ml与稀醋酸与稀醋酸10ml使溶使溶解，加淀粉指示液解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴，立即用碘滴定液（定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝）滴定，至溶液显蓝色，在色，在30秒内不褪。每秒内不褪。每1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol/L)相当于相当于8.806mg的的C6H8O6方法方法2、第89页，讲稿共137张，创作于星期二（1）酸性环境）酸性环境HAC

29、（2）新沸冷新沸冷H2O减慢减慢VitC被被O2氧化速度氧化速度讨论讨论3、（3）立即滴定）立即滴定赶走水中赶走水中O2减少减少O2的干扰的干扰第90页，讲稿共137张，创作于星期二（4）附加剂干扰的排除）附加剂干扰的排除片剂片剂滑石粉滑石粉过滤过滤注射剂注射剂抗氧剂抗氧剂丙酮丙酮甲醛甲醛Na2SO3NaHSO3Na2S2O3Na2S2O5第91页，讲稿共137张，创作于星期二CHHOOaS3a S O+H2N H ON2252HO NH COS3a第92页，讲稿共137张，创作于星期二2，6-二氯靛酚钠滴定法法二氯靛酚钠滴定法法（二）（二）USPJP原理原理1、酚亚胺酚亚胺二氯靛酚二氯靛酚，

30、-6 62 2VitC第93页，讲稿共137张，创作于星期二自身指示终点法自身指示终点法方法方法2、第94页，讲稿共137张，创作于星期二（2）快速滴定）快速滴定2min内内（1）酸性环境）酸性环境HPO3-HAc稳定稳定VitC防止其他还原性物质干扰防止其他还原性物质干扰（3）剩余比色测定）剩余比色测定（定量过量）（定量过量）（测剩余染料）（测剩余染料）讨论讨论3、第95页，讲稿共137张，创作于星期二（4）缺点）缺点需经常标定需经常标定贮存贮存一周一周不稳定不稳定干扰多干扰多氧化力较强氧化力较强第96页，讲稿共137张，创作于星期二（三）（三）HPLC法分离法分离VitC常用方法及测定对象

31、常用方法及测定对象方法方法离子交换色谱法离子交换色谱法离子对色谱法离子对色谱法分配色谱法（正、反相）分配色谱法（正、反相）对象对象制剂、生物样品、果汁制剂、生物样品、果汁血、尿、组织、细胞等血、尿、组织、细胞等HPLC法法第97页，讲稿共137张，创作于星期二第四节第四节维生素维生素D维生素维生素D是一类抗佝偻病维生素的总称，目前已知是一类抗佝偻病维生素的总称，目前已知的维生素的维生素D类物质有类物质有10多种。多种。中国药典主要收载了维生素中国药典主要收载了维生素D2,D3原料药；维生素原料药；维生素D2胶丸和注射液；维生素胶丸和注射液；维生素D3注射剂。注射剂。第98页，讲稿共137张，创

32、作于星期二结构与性质结构与性质一、一、开环的甾体开环的甾体：具有甾类化合物的显色反应，：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。可用于鉴别。手性碳原子手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别。：具有旋光性，可用于鉴别。多烯多烯：可进行紫外检测。：可进行紫外检测。第99页，讲稿共137张，创作于星期二维生素维生素D2第100页，讲稿共137张，创作于星期二维生素维生素D3第101页，讲稿共137张，创作于星期二1.显色反应显色反应醋酐醋酐-硫酸反应硫酸反应D2黄黄红红紫紫绿绿D3黄黄红红紫、蓝绿紫、蓝绿绿绿三氯化锑反应三氯化锑反应橙红色渐变粉红橙红色渐变粉红三氯化铁反应三氯化铁反应橙黄色橙黄色二氯丙醇和

33、乙酰氯反应二氯丙醇和乙酰氯反应绿色绿色鉴别试验鉴别试验二、二、第102页，讲稿共137张，创作于星期二2.比旋度鉴别比旋度鉴别维生素维生素D D2 2维生素维生素D D3 3溶溶 剂剂 浓浓 度度 比旋度值比旋度值无水乙醇无水乙醇无水乙醇无水乙醇40mg/ml40mg/ml5mg/ml5mg/ml+102.5+102.5+107.5+107.5+105+105+112+112注意事项注意事项：应于容器开启：应于容器开启3030分钟内取样，分钟内取样，在溶液配制后在溶液配制后3030分钟内测定。分钟内测定。第103页，讲稿共137张，创作于星期二 3.3.区别反应：区别反应：以以96%96%乙醇

34、为溶剂，加乙醇和乙醇为溶剂，加乙醇和85%85%硫酸，硫酸，D D2 2显红色，在显红色，在570nm570nm处有最大吸收，处有最大吸收，D D3 3显黄色，显黄色，在在495nm495nm处有最大吸收。处有最大吸收。4.4.其他方法：其他方法：TLCTLC、HPLCHPLC、制备衍生物测熔点、制备衍生物测熔点第104页，讲稿共137张，创作于星期二维维生生素素D D2 2中中麦麦角角甾甾醇醇的的检检查查：加加洋洋地地黄黄皂皂苷苷溶溶液液，混混合合，放放置置18h18h不不得得发发生生浑浑浊或沉淀。浊或沉淀。前维生素前维生素D D的光照产物的光照产物杂质检查杂质检查三、三、第105页，讲稿共

35、137张，创作于星期二 中国药典采用中国药典采用正相高效液相色谱法正相高效液相色谱法测定维生素测定维生素D D的含量，的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯，该法定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯，该法分为分为三个方法三个方法。固定相：硅胶固定相：硅胶流动相：正己烷流动相：正己烷-正戊醇（正戊醇（997997：3 3）检测波长：检测波长：254nm254nm含量测定含量测定四、四、第106页，讲稿共137张，创作于星期二第一法第一法：用于无维生素：用于无维生素A A醇及其它杂质的干扰的情况，步醇及其它杂质的干扰的情况，步骤如下：骤如下：1 1系统适用性试验：测定重复性和分离

36、度。系统适用性试验：测定重复性和分离度。第107页，讲稿共137张，创作于星期二 2 2测定校正因子：测定校正因子：A A S S/m/m S S f f1 1=-=-A A r r/m/m r r f f2 2=（A A S S m m r r-f-f1 1 m m S S A A r1r1）/（A A r1 r1 m m S S）3 3含量测定：含量测定：m mi i=（f f1 1 A Ai1i1+f+f 2 2 A A i2i2）m m S S/A /A S S第108页，讲稿共137张，创作于星期二第二法第二法：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下：1

37、1皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙 醚、制备供试液醚、制备供试液A A。2 2净化：供试液净化：供试液A A经液相色谱分离，准确收集含有维经液相色谱分离，准确收集含有维 生素生素D D及前维生素及前维生素D D混合物的全部流出液，制混合物的全部流出液，制 备成供试液备成供试液B B。固定相：固定相：ODSODS 流动相：甲醇流动相：甲醇-乙腈乙腈-水（水（5050：5050：2 2）3 3含量测定：取供试液含量测定：取供试液B B按第一法测定。按第一法测定。第109页，讲稿共137张，创作于星期二第三法第三法：用于经第二法处理后仍有杂质的

38、干扰的情况。步：用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况。步骤如下：骤如下：1 1制备供试液：取供试液制备供试液：取供试液A A，净化，水浴加热，得供，净化，水浴加热，得供 试液试液C C。制备对照液：对照品储备液：稀释、加热。制备对照液：对照品储备液：稀释、加热。2 2含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样 对照液和供试液，按外标法定量。对照液和供试液，按外标法定量。第110页，讲稿共137张，创作于星期二苯并二氢吡喃醇苯并二氢吡喃醇第五节第五节维生素维生素E第111页，讲稿共137张，创作于星期二主要的药理作用：主要的药理作用：抗氧化剂、血管

39、扩张剂、抗凝血剂、改善脂抗氧化剂、血管扩张剂、抗凝血剂、改善脂代谢等。代谢等。主要来源：主要来源：麦芽、大豆、植物油、坚果类、芽甘蓝、绿麦芽、大豆、植物油、坚果类、芽甘蓝、绿叶蔬菜、菠菜叶蔬菜、菠菜第112页，讲稿共137张，创作于星期二名名称称R1R2相对活性相对活性-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*第113页，讲稿共137张，创作于星期二dl生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯第114页，讲稿共137张，创作于星期二结构与性质结构与性质一、一、苯环苯环+二氢吡喃环二氢吡喃环+饱和烃链饱和烃链1、UV2、乙酰化的酚羟基、乙酰

40、化的酚羟基易水解易水解O醌型化合物醌型化合物生育酚生育酚-+orOHHVitE杂质，需检查杂质，需检查第115页，讲稿共137张，创作于星期二O生育红生育红（一）（一）硝酸反应硝酸反应橙红色橙红色鉴别鉴别二、二、7515HNO3VitE生育酚生育酚第116页，讲稿共137张，创作于星期二（橙红色）（橙红色）生育红生育红生育酚生育酚HNO3强氧化剂强氧化剂第117页，讲稿共137张，创作于星期二三氯化铁联吡啶反应三氯化铁联吡啶反应（二）（二）第118页，讲稿共137张，创作于星期二生育酚生育酚对对-生育醌生育醌O弱氧化剂弱氧化剂第119页，讲稿共137张，创作于星期二血红色血红色第120页，讲稿

41、共137张，创作于星期二=41.045.5max=284nmmin=254nm0.01%无水乙醇中无水乙醇中UV法法（三）（三）ViE的紫外吸收光谱的紫外吸收光谱第121页，讲稿共137张，创作于星期二薄层板薄层板硅胶硅胶G展开剂展开剂环己烷环己烷-乙醚（乙醚（4：1）显色剂显色剂硫酸（硫酸（1055）VitE Rf=0.7-生育酚生育酚Rf=0.5-生育醌生育醌Rf=0.9TLC法法（四）（四）第122页，讲稿共137张，创作于星期二2.游离生育酚游离生育酚杂质检查杂质检查三、三、原理原理1.酸度酸度以以NaOHNaOH滴定液（滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）体积不得超过）体积不得

42、超过0.5mL0.5mL。第123页，讲稿共137张，创作于星期二（M生育酚生育酚=430.8）例例取取本本品品0.10g，加加无无水水乙乙醇醇5ml溶溶解解后后，加加二二苯苯胺胺试试液液1滴滴，用用硫硫酸酸铈铈液液（0.01mol/L）滴滴定定，消消耗耗硫硫酸酸铈铈液液（0.01mol/L）不得过）不得过1.0ml。第124页，讲稿共137张，创作于星期二2.15限量限量第125页，讲稿共137张，创作于星期二四、四、含量测定含量测定GC法（法定方法）法（法定方法）（一）（一）GC特点特点1、选择性好选择性好灵敏度高灵敏度高速度快速度快分离效能好分离效能好挥发性低、不稳挥发性低、不稳定、极性

43、强定、极性强衍衍生化易受样品蒸生化易受样品蒸气压限制气压限制第126页，讲稿共137张，创作于星期二载气载气N2固定相固定相硅酮（硅酮（OV-17）担体担体硅藻土或高分子多孔小球硅藻土或高分子多孔小球柱温柱温265检测器检测器氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标内标正三十二烷正三十二烷n500R2VitE测定的色谱条件测定的色谱条件2、内标法加校正因子内标法加校正因子第127页，讲稿共137张，创作于星期二内标法内标法供试液（样品供试液（样品+内标）内标）内标物内标物对照液（对照对照液（对照+内标）内标）是样品中不存在的物质是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近与被测组分峰靠近能与

44、各组分完全分离能与各组分完全分离与被测组分的量接近与被测组分的量接近第128页，讲稿共137张，创作于星期二校正因子：校正因子：第129页，讲稿共137张，创作于星期二WWKK%VitE%10012=稀释倍数稀释倍数稀释倍数稀释倍数样样对对实际工作中的计算方法实际工作中的计算方法第130页，讲稿共137张，创作于星期二样品：样品：dl生育酚生育酚固定相固定相：十八烷基硅烷键合硅胶：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：甲醇流动相：甲醇-水（水（49：1）检测波长：检测波长：292nm（二）（二）RP-HPLC法（外标法）法（外标法）JP用峰高计算含量：用峰高计算含量：W生育酚生育酚=W对对H对对H样样第

45、131页，讲稿共137张，创作于星期二（三）荧光分光光度法（三）荧光分光光度法恒波长同步荧光法测定血清中恒波长同步荧光法测定血清中ViE第132页，讲稿共137张，创作于星期二第六节第六节复方制剂中多种维生素的分析复方制剂中多种维生素的分析（自学）（自学）第133页，讲稿共137张，创作于星期二练习与思考练习与思考AA型题型题 1.1.维生素维生素B B1 1的鉴别方法是的鉴别方法是A.A.三氯化铁反应三氯化铁反应 B.B.硫色素反应硫色素反应 C.C.柯柏反应柯柏反应 D.D.与碱性酒石酸铜试液反应与碱性酒石酸铜试液反应 E.E.双缩脲反应双缩脲反应第134页，讲稿共137张，创作于星期二2

46、.2.维生素维生素E E中国药典中国药典规定的含量规定的含量 测定方法为测定方法为A.A.非水溶液滴定法非水溶液滴定法 B.B.旋光法旋光法 C.HPLCC.HPLC法法 D.D.紫外分光法紫外分光法 E.GCE.GC法法第135页，讲稿共137张，创作于星期二BB型题型题 A.A.亚消基铁氰化钠反应亚消基铁氰化钠反应 B.B.硫色素反应硫色素反应 C.C.硝酸反应硝酸反应 D.D.三氯化锑反应三氯化锑反应 E.E.硝酸银试液的反应硝酸银试液的反应 1.1.维生素维生素C C 2.2.维生素维生素E E 3.3.维生素维生素B B1 1 4.4.维生素维生素A AECBD第136页，讲稿共137张，创作于星期二感谢大家观看第137页，讲稿共137张，创作于星期二